一种包含新型冠状病毒双抗原靶标序列组合的重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和疫苗的制作方法

技术特征：
1.一种包含新型冠状病毒双抗原靶标序列组合的重组新城疫病毒载体，所述双抗原靶标序列组合包括新型冠状病毒的s蛋白编码序列和s蛋白受体结合域rbd蛋白编码序列。2.根据权利要求1所述重组新城疫病毒载体，其特征在于，将所述新型冠状病毒的s蛋白编码序列插入新城疫病毒载体的p基因序列和m基因序列之间；将所述新型冠状病毒s蛋白受体结合域rbd蛋白编码序列插入新城疫病毒载体的p基因序列和m基因序列之间、m基因序列和f基因序列之间或hn基因序列和l基因序列之间。3.根据权利要求1或2所述重组新城疫病毒载体，其特征在于，所述s蛋白编码序列和rbd蛋白编码序列来源于相同或不同的新型冠状病毒流行株。4.根据权利要求3所述重组新城疫病毒载体，其特征在于，所述s蛋白编码序列包括完整的s蛋白编码序列或所述完整的s蛋白编码序列的变体。5.根据权利要求4所述重组新城疫病毒载体，其特征在于，所述变体包括对所述完整的s蛋白编码序列进行基因工程改造；所述基因工程改造的方法选自：突变、删除、重排和融合其他来源的蛋白多肽中一种或多种方法的组合；经所述基因工程改造后的s蛋白构象成为预融合状态更容易被抗原呈递细胞识别，或更多量地表达在细胞膜上，或经表达后分泌到细胞外并组合成易被抗原呈递细胞识别的多聚体。6.根据权利要求5所述重组新城疫病毒载体，其特征在于，所述突变包括将完整的s蛋白的k986和v987位氨基酸均突变为p，或将第682~685位氨基酸rrar突变为gsas，或将完整的s蛋白的k986、v987、f817、 a892、a899和a942位氨基酸均突变为p；或将s蛋白的c末端klhyt突变为alayt；所述删除包括在所述完整的s蛋白的c末端截短18 ~28个氨基酸;或删除s蛋白的跨膜区和胞内区序列；所述重排包括将s蛋白的主要抗原决定序列s1蛋白的ntd和rbd区域位置序列进行调换，形成rbd
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ntd蛋白；所述融合其他来源的蛋白多肽包括将s蛋白的胞外域与新城疫f蛋白的c端包含跨膜区和胞内区的氨基酸序列融合；或将rbd
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ntd蛋白n端添加信号肽序列，c端添加融合蛋白多肽序列。7.根据权利要求6所述重组新城疫病毒载体，其特征在于，所述重排所形成的rbd
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ntd蛋白，rbd和ntd区域通过蛋白linker连接。8.根据权利要求1或2所述重组新城疫病毒载体，其特征在于，所述rbd蛋白编码序列还包括经过基因工程改造的含有rbd蛋白编码序列的rbd系列重组蛋白编码序列。9.根据权利要求8所述重组新城疫病毒载体，其特征在于，所述基因工程改造包括：在rbd蛋白编码序列的n末端添加分泌信号肽序列，c末端添加融合蛋白多肽序列。10.一种利用权利要求1~9任一项所述重组新城疫病毒载体制备得到的疫苗株。11.根据权利要求10所述疫苗株，其特征在于，所述制备的方法包括病毒反向遗传学的方法。12.根据权利要求10或11所述疫苗株，其特征在于，所述疫苗株的结构包括：权利要求1~9任一项所述重组新城疫病毒载体的编码序列和/或展示在重组新城疫病毒粒子表面的s
蛋白或所述s蛋白的变体；所述s蛋白的变体由完整的s蛋白编码序列的变体编码得到。13.权利要求10~12任一项所述疫苗株在制备预防新型冠状病毒传播和感染疫苗中的应用。14.一种预防新型冠状病毒传播和感染的疫苗，其特征在于，所述疫苗包括权利要求10~12任一项所述疫苗株。

技术总结
本发明提供了一种包含新型冠状病毒双抗原靶标序列组合的重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和疫苗，涉及生物医药技术领域。本发明利用NDV载体，新型冠状病毒S蛋白基因和S蛋白受体结合域RBD基因作为抗原序列，将S蛋白基因和RBD基因共同插入NDV基因组内，利用病毒反向遗传学技术，拯救获得具有限制感染性NDV病毒载体疫苗株。该疫苗株可以被呼吸道细胞识别，产生粘膜免疫，并感染细胞，引起特异性免疫抗体水平升高。本发明双抗原靶标的引入，增强了疫苗株免疫原性的发挥，同时降低了疫苗株毒副作用的产生，免疫效果相对于单靶标抗原更具优势。势。势。


技术研发人员：宋家升 陈瑞婷 孙慧敏 毛水花 周孟云
受保护的技术使用者：浙江迪福润丝生物科技有限公司
技术研发日：2021.11.17
技术公布日：2022/1/4