野葛根提取物组合物及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于化妆品技术领域，尤其涉及野葛根提取物组合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.野葛(pueraria lobata(willd)ohwi)为豆科葛属植物，分布于辽宁、河北、河南、山东、安徽、四川、江西、云南、广西、广东等地。其根为常用中药之一，资源丰富、价格低廉，可用于表证发热，项背强痛，麻疹不透，热病口渴，阴虚消渴，热泻热痢，脾虚泄泻，具有特殊食用、药用和保健价值。野葛根中以葛根素、芒柄花素、大豆贰元、大豆贰、4'
‑
葡萄糖葛根素等异黄酮和多糖为主要活性成分。葛根异黄酮具有扩张血管、改善心脑血液循环、抗心律失常、抗氧化损伤、抗细胞凋亡、降糖降脂等药理作用，其中葛根素在心绞痛、脑梗塞、糖尿病等疾病的治疗中也取得了一定进展；葛根多糖在增强人体免疫力、抵抗衰老、活血抗栓、降血压和保肝护肾等方面有良好的疗效。
3.目前，对野葛根提取物的研究多采用乙醇为溶剂提取醇溶性葛根异黄酮，或采用水提醇沉的方式提取水溶性葛根多糖，由于葛根异黄酮和葛根多糖的溶解性不同，难以同时使用，导致野葛根提取物的功能无法充分发挥，因此，开发功效更为全面的野葛根提取物组合物及其在护肤品中的用途具有一定的应用前景。


技术实现要素：

4.为了开发功效更为全面的野葛根提取物组合物及其在护肤品中的应用，本发明通过优化溶剂体系、助溶剂体系及醇提物和水提物的配比，得野葛根提取物组合物。
5.本发明提出一种野葛根提取物组合物的制备方法，包括如下步骤：
6.s1：将野葛根水洗、干燥、粉碎、过筛，得野葛根粉；
7.s2：将上述野葛根粉加入乙醇水溶液中，超声提取，回流提取后，离心分离，得第一滤渣和第一滤液；
8.s3：将上述第一滤液减压蒸馏，收集蒸馏所得产物，真空干燥，得野葛根醇提物；
9.s4：将上述第一滤渣加入水中，煎煮提取，离心分离，得第二滤液；将第二滤液减压蒸馏，收集蒸馏所得产物，加入乙醇水溶液，静置过夜，得沉淀物；所述沉淀物用无水乙醇洗涤，真空干燥，得野葛根水提物；
10.s5：将上述野葛根水提物加入热水中，加入羟丙基环糊精，1，3
‑
丁二醇，混合，加入上述野葛根醇提物，搅拌使其完全溶解，冷却至室温，得野葛根提取物组合物。
11.进一步地，步骤s2中，野葛根粉与乙醇水溶液质量比为1：4～1：6；
12.超声提取的温度为30～50℃；
13.超声提取的时间为30～60分钟；
14.回流提取的时间为1～3小时。
15.进一步地，步骤s3中，真空干燥的温度为50～70℃。
16.进一步地，步骤s4中，水与s2中野葛根粉的质量比为4：1～6：1；
17.煎煮提取的时间为1～3小时；煎煮提取的温度为100℃；
18.步骤s4中，乙醇水溶液与步骤s2中野葛根粉的质量比为4：1～6：1；
19.真空干燥的温度为50～70℃。
20.进一步地，步骤s5中，野葛根水提物、野葛根醇提物、羟丙基环糊精、1，3
‑
丁二醇、热水的质量比为1～10：1～10：1～7：50～100：5～30。
21.本发明还提出上述任一制备方法制备得到的野葛根提取物组合物。
22.进一步地，所述野葛根提取物组合物含有野葛根水溶性提取物和醇溶性提取物。
23.本发明还提出上述野葛根提取物组合物在护肤品中的应用。
24.进一步地，所述护肤品以含水洗液、油包水或水包油乳液、油或油
·
醇洗液、阴离子或非离子两亲脂质的囊状分散体、含水凝胶、水
·
醇凝胶、醇凝胶或油
·
醇凝胶或气溶胶中至少一种形式存在。
25.进一步地，所述护肤品具有抗氧化、抗炎和抗衰老功能。
26.本发明具有以下优势：
27.本发明提出的野葛根提取物组合物的制备工艺，首先，分别制备野葛根的水提物和醇提物，然后，利用羟丙基环糊精和1，3
‑
丁二醇作为促溶剂和助溶剂，通过合适的配比，最后得到性质稳定且同时含有野葛根水溶性和醇溶性提取物的澄清的野葛根提取物的组合物。所述野葛根提取物组合物与单一成分相比具有更好的抗炎、抗紫外损伤、促进胶原生成和保湿效果，且效果显著优于野葛根醇溶性提取物和野葛根水溶性提取物，可用于制备各种护肤品。
附图说明
28.构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
29.图1是野葛根提取物组合物对志愿者皮肤改善情况；
30.图2是野葛根提取物组合物对炎症因子含量的影响；
31.图3是野葛根提取物组合物对sod活性的影响(*p<0.05，**p<0.01)；
32.图4是野葛根提取物组合物对mmps mrna表达的影响(*p<0.05，**p<0.01)。
具体实施方式
33.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
34.现有技术中，植物提取物一般为单独的水提物或单独的醇提物，由于不同成分的溶解性不同，很难实现水提物和醇提物在一个体系中稳定存在。并且，由于每种提取物中功能成分仅为水溶性的有效成分或者醇溶性的有效成分，功能相对较弱且单一。
35.本发明实施例提出一种野葛根提取物组合物的制备方法，包括如下步骤：
36.s1：将野葛根水洗、干燥、粉碎、过筛，得野葛根粉；
37.s2：将上述野葛根粉加入乙醇水溶液中，超声提取，回流提取后，离心分离，得第一
滤渣和第一滤液；
38.s3：将上述第一滤液减压蒸馏，收集蒸馏所得产物，真空干燥，得野葛根醇提物；
39.s4：将上述第一滤渣加入水中，煎煮提取，离心分离，得第二滤液；将第二滤液减压蒸馏，收集蒸馏所得产物，加入乙醇水溶液，静置过夜，得沉淀物；所述沉淀物用无水乙醇洗涤，真空干燥，得野葛根水提物；
40.s5：将上述野葛根水提物加入热水中，加入羟丙基环糊精，1，3
‑
丁二醇，混合，加入上述野葛根醇提物，搅拌使其完全溶解，冷却至室温，得野葛根提取物组合物。
41.本发明实施例提出的野葛根提取物组合物的制备方法，通过引入助溶剂，促溶剂等成分，使水溶性有效成分和醇溶性有效成分能够稳定的存在一个体系中。首先，制备野葛根醇提物和野葛根水提物，然后，加入羟丙基环糊精和1，3
‑
丁二醇，羟丙基环糊精可以提高醇提物的水溶性，而且能够提高细胞渗透性，促进活性成分的吸收，1，3
‑
丁二醇可作为醇提物的溶媒，并且具有保湿功效。本发明实施例提出的制备方法得到的组合物具有显著的抗炎、抗氧化、抗衰老功效，同时，可抗紫外损伤、促进胶原生成和保湿效果，可作为护肤品的功能性原料使用。
42.需要指出，本发明实施例中所述野葛根，其产地可以为河南、安徽、江苏等。
43.本发明一实施例中，所述步骤s2中，野葛根粉与乙醇水溶液的质量比为1：4～1：6。
44.本发明一实施例中，所述步骤s2中，超声提取的温度为30～50℃。超声提取的时间为30～60分钟。
45.本发明一实施例中，所述步骤s2中，回流提取的时间为1～3小时。乙醇水溶液中乙醇含量为75％～85％(体积比，ml/ml)。回流提取的次数至少为一次；优选的，回流提取的次数可以为两次。
46.本发明一实施例中，所述步骤s3中，真空干燥的温度为50～70℃。
47.本发明一实施例中，所述步骤s4中，水与所述步骤s2中野葛根粉的质量比为4：1～6：1。
48.本发明一实施例中，所述步骤s4中，煎煮提取的时间为1～3小时；煎煮提取的温度为100℃。
49.本发明一实施例中，所述步骤s4中，煎煮提取的次数至少为一次；优选的，煎煮提取的次数为两次。
50.本发明一实施例中，所述步骤s4中，乙醇水溶液与所述步骤s1中野葛根粉的质量比为4：1～6：1。
51.所述步骤s4中，乙醇水溶液中乙醇含量为75％～85％(体积比，ml/ml)。
52.所述步骤s4中，无水乙醇与沉淀物的质量比为1：1～3：1。
53.所述步骤s4中，真空干燥的温度为50～70℃。
54.本发明一实施例中，所述步骤s5中，热水的温度为65～75℃。
55.本发明一实施例中，步骤s5中，野葛根水提物、野葛根醇提物、羟丙基环糊精、1，3
‑
丁二醇、热水的质量比为1～10：1～10：1～7：50～100：5～30。优选的，野葛根水提物、野葛根醇提物、羟丙基环糊精、1，3
‑
丁二醇、热水的质量比为3～8：5～10：2～7：55～75：15～20。
56.具体地，步骤s5：将上述野葛根水提物加入热水中，加入羟丙基环糊精，溶解，1，3
‑
丁二醇，混合，加入上述所得野葛根醇提物。
57.本发明一实施例还提出上述任一所述的制备方法制备得到的野葛根提取物组合物。
58.进一步地，所述野葛根提取物组合物含有野葛根水溶性提取物和醇溶性提取物。
59.本发明一实施例还提出上述任一野葛根提取物组合物在护肤品中的应用。
60.具体地，所述护肤品以含水洗液、油包水或水包油乳液、油或油
·
醇洗液、阴离子或非离子两亲脂质的囊状分散体、含水凝胶、水
·
醇凝胶、醇凝胶或油
·
醇凝胶或气溶胶中至少一种形式存在。
61.具体地，所述护肤品具有抗氧化、抗炎、抗衰老功能。
62.下面将结合实施例详细阐述本发明。
63.实施例1(实验组1)ple1野葛根提取物的制备方法
64.s1：制备野葛根醇提物：将野葛根药材用清水洗净，干燥后粉碎过筛，得野葛根粉；
65.s2：制备野葛根醇提物：称取野葛根粉100g，加入500g 80％乙醇中，混合均匀，40℃超声提取45分钟，回流提取2小时，离心分离，得滤液和滤渣；
66.s3：将滤渣与500g 80％乙醇混合均匀，回流提取2小时，离心收集滤液，合并滤液后减压蒸馏，浓缩物60℃真空干燥，得野葛根醇提物。
67.s4：制备野葛根水提物：将醇提后的滤渣加入500g水中，混合均匀，100℃煎煮提取2小时，离心收集滤液，再将滤渣与500g水混合均匀，100℃煎煮提取2小时，离心收集滤液，合并滤液后减压蒸馏，再加入500g 80％乙醇，静置过夜，得到沉淀物，沉淀物用200g无水乙醇洗涤，60℃真空干燥，得野葛根水提物。
68.s5：称取野葛根水提物，加入70℃的热水中，加入羟丙基环糊精，溶解，再加入1，3
‑
丁二醇，混匀，然后加入野葛根醇提物，搅拌使其完全溶解，冷却至室温，得野葛根提取物组合物。按照表1实验组1所示配方制备野葛根提取物组合物。
69.实施例2(实验组2)ple2
70.同实施例1，不同之处在于，按照表1实验组2所示配方制备野葛根提取物组合物。
71.对比例1(对照组1)
72.同实施例1，不同之处在于，按照表1对比组1所示配方制备野葛根提取物组合物。
73.对比例2(对照组2)
74.同实施例1，不同之处在于，按照表1对比组2所示配方制备野葛根提取物组合物。
75.对比例3(对照组3)
76.同实施例1，不同之处在于，按照表1对比组3所示配方制备野葛根提取物组合物。
77.对比例4(对照组4)
78.同实施例1，不同之处在于，按照表1对比组4所示配方制备野葛根提取物组合物。
79.表1野葛根提取物组合物的配方
[0080][0081][0082]
需要指出：按照表1配方制备野葛根提取物组合物凝露，对比组3和对比组4所得凝露有沉淀析出，由于其体系稳定性较差，故只保留对比组1
‑
2和实验组1
‑
2野葛根提取物组合物凝露进行后续试验。
[0083]
试验例1野葛根提取物组合物的用于皮肤改善的功效研究
[0084]
a实验方法
[0085]
实验采用visia和antera3d两种皮肤检测分析仪器，在同等曝光条件及室内温湿度等环境下，由专人定期留取志愿者涂抹有效成分只含2％实验组1
‑
2和对比组1
‑
2所得野葛根提取物组合物凝露前后visia图像和antera 3d图像。通过visia和antera 3d，记录在使用凝露后，皮肤的红色区和棕色区指标的变化。以判断该原料成分是否能够有效舒缓修护肌肤、改善肤质，并且在整个实验过程中及时观察并汇总刺激等不良反应。
[0086]
(1)招募30～55岁志愿者共计44人，随机分为试验组1～4组，分别使用含实施例1(实验组1)、实施例2(实验组2)、对比例1(对比组2)和对比例2(对比组2)所得野葛根提取物组合物凝露；
[0087]
(2)每位志愿者于早晚洁面后，全脸涂抹凝露直至吸收，连续使用4周(志愿者在使用该产品前已被告知如有不适或过敏等症状则立即停用；并且使用测试样品期间禁止志愿者使用具有或可能具有同种功效的化妆品)；
[0088]
(3)每周采用visia皮肤检测仪和antera3d皮肤分析仪采集志愿者面部图像信息。皮肤检测前，清水洁面(需卸妆)，并静坐20min
‑
30min，至皮肤晾干；
[0089]
(4)仪器所在房间不透风，无阳光直射，室温在24
‑
26℃，湿度在40％左右；
[0090]
(5)数据统计分析。
[0091]
b实验结果
[0092]
对每位志愿者在使用凝露前后的各个指标进行评分(3分：显著改善；2分：中等改善；1分：轻微改善；0分：无改善)，并将评分对应的人数进行统计，结果见图1。实验组2显著改善的人数相对于其他组是最多的。
[0093]
相比于其他试验组，实验组2中肌肤改善的有效率及显著改善的有效率均为最高，分别达到90.9％，显著改善率达45.5％；其次为实验组1，显著改善人数明显高于对比组1和对比组2，对比组1和对比组2的效果较弱。以上数据表明，野葛根提取物水提物和醇提物的
组合物效果优于单纯的水提物和醇提物。
[0094]
试验例2野葛根提取物组合物对紫外诱导的皮肤损伤的保护作用研究
[0095]
1野葛根提取物组合物对炎症因子表达的影响
[0096]
a实验方法
[0097]
巨噬细胞raw264.7接种于12孔板内，37℃，5％co2培养箱培养24小时后，加入适当浓度脂多糖(lps)作用4小时诱导炎症反应，合适浓度的实施例1所得野葛根提取物组合物于lps加入前2小时加入。lps作用4小时后，收集细胞并提取蛋白，然后利用elisa试剂盒检测il
‑
1、il
‑
6和il
‑
8含量，结果见图2。
[0098]
b实验结果
[0099]
野葛根提取物组合物提前干预治疗保护组中il
‑
1、il
‑
6和il
‑
8表达含量显著低于lps组，证明野葛根提取物组合物可以有效抑制炎症因子分泌，进而降低炎性衰老发生概率。并且，实验组2(ple2)的效果优于实验组1(ple1)的效果。
[0100]
2野葛根提取物组合物对超氧化物歧化酶活性的影响
[0101]
a实验方法
[0102]
hsf细胞以50％的密度接种于12孔板内，37℃，5％co2培养箱过夜培养。设置对照组、uv
‑
b模型组和给药组，给药组野葛根提取物组合物分别用50μg/ml、100μg/ml两个浓度梯度处理细胞6小时。对uv
‑
b模型组和给药组进行70mj/cm2的uv
‑
b辐射，诱导细胞氧化应激，而不影响细胞活力。更换新鲜培养液，继续培养14小时后，使用总sod检测试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶水平，并在450nm处测量吸光度值，对结果做统计分析。
[0103]
按照公式以下公式计算样品中sod活力：
[0104]
抑制百分率＝(a空白对照1－a样品)/(a空白对照1－a空白对照2)
×
100％
[0105]
待测样品中sod酶活力单位＝抑制百分率/(1－抑制百分率)units
[0106]
b实验结果
[0107]
野葛根提取物组合物对紫外诱导hsf细胞sod活性的影响如图3所示。与模型组相比，给药组的sod活性均有提高，ple 2组的野葛根提取物组合物处理细胞后，对sod的活性表现出极强的保护作用。该结果证明野葛根提取物组合物能够增强sod酶活，缓解uv
‑
b对细胞sod活性的抑制作用，表明实验组1(ple1)和实验组2(ple2)具有抗氧化作用，ple2效果更好。
[0108]
3野葛根提取物组合物对基质金属蛋白酶mmp1/3/9mrna表达的影响
[0109]
a.实验方法
[0110]
hsf细胞以50％的密度接种于10cm细胞培养皿内，37℃，5％co2培养箱过夜培养。设置uv
‑
b模型组和给药组，给药组野葛根提取物组合物100μg/ml处理细胞6小时。利用紫外线灯作为uv
‑
b源，对uv
‑
b模型组和给药组进行70mj/cm2的uv
‑
b辐射。更换新鲜培养液，继续培养14小时。使用trizol法提取细胞总rna，逆转录合成cdna，superrealpremix plus(sybr green)试剂盒进行定量聚合酶链式反应，检测mmps mrna的表达量。
[0111]
基质金属蛋白酶(mmps)具有降解细胞外基质(ecm)各种成分的功能，根据作用底物以及片断同源性，将mmps分为6类，为胶原酶、明胶酶、基质降解素、基质溶解素、furin活化的mmp和其他分泌型mmps。胶原酶能特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构，与衰老和肿瘤侵袭转移密切相关。mmp
‑
9即是一种糖化的ⅳ型胶原酶；mmp
‑
3则能作用于pg、ln、fn、
ⅲ
型和ⅳ型胶原及明胶；mmp
‑
1能够被mmp
‑
3激活，在各种刺激下高表达。
[0112]
b.实验结果
[0113]
野葛根提取物组合物对mmps mrna表达的影响如图4所示，其可以显著降低基质金属蛋白酶mmp
‑
1、mmp
‑
3、mmp
‑
9的mrna的表达，表明实验组1(ple1)和实验组2(ple2)的野葛根提取物组合物可以通过抑制基质金属蛋白酶的表达，抑制胶原的降解过程，从而发挥抗衰老的作用。并且ple2组效果更好。
[0114]
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。