一种细胞上清中高产量抗体表达和纯化的方法与流程

技术特征：
1.一种细胞上清中高产量抗体表达和纯化的方法，其特征在于，其对目标抗体对应的杂交瘤细胞进行饥饿培养使杂交瘤细胞大量表达目标抗体，继而从饥饿培养后的培养基中提取目标抗体，最后对目标抗体进行纯化。2.根据权利要求1所述的一种细胞上清中高产量抗体表达和纯化的方法，其特征在于，所述的对目标抗体进行纯化是利用蛋白磁珠采用免疫沉淀法对目标抗体进行免疫吸附并富集纯化。3.根据权利要求2所述的一种细胞上清中高产量抗体表达和纯化的方法，其特征在于，其包括以下详细步骤：步骤s1扩增培养，对目标抗体对应的杂交瘤细胞进行正常扩增培养，至杂交瘤细胞扩增到传代密度；步骤s2饥饿培养，向杂交瘤细胞中加入不含主要营养物质的培养基后继续培养，至细胞存活率低于50％，收集培养基的上清液；步骤s3免疫沉淀富集，向步骤s2收集到的上清液中添加包被有特异性蛋白抗原的蛋白磁珠，使目标抗体结合到蛋白磁珠上，收集蛋白磁珠；步骤s4，对步骤s3收集到的蛋白磁珠使用冲洗溶液进行冲洗，将蛋白磁珠上非特异性结合的物质冲走，收集蛋白磁珠；步骤s5，对步骤s4收集到的蛋白磁珠使用洗脱液进行洗脱，将特异性结合的目标抗体从蛋白磁珠上洗脱，收集洗脱液，对洗脱液进行浓缩。4.根据权利要求3所述的一种细胞上清中高产量抗体表达和纯化的方法，其特征在于，所述的主要营养物质是胎牛血清。5.根据权利要求3所述的一种细胞上清中高产量抗体表达和纯化的方法，其特征在于，所述的蛋白磁珠是包被有蛋白a或蛋白g的蛋白磁珠。6.根据权利要求3所述的一种细胞上清中高产量抗体表达和纯化的方法，其特征在于，所述的步骤s1扩增培养中的培养基内添加有抑制非目标抗体对应的杂交瘤细胞生长的抑制物质；所述的步骤s2饥饿培养中的培养基内不添加有抑制非目标抗体对应的杂交瘤细胞生长的抑制物质。7.根据权利要求6所述的一种细胞上清中高产量抗体表达和纯化的方法，其特征在于，所述的抑制物质包括抗生素。

技术总结
本发明提供一种细胞上清中高产量抗体表达和纯化的方法，属于抗体制备领域，通过饥饿培养的方式来增加体外培养杂交瘤细胞培养基中单克隆抗体的含量，通过较为简单高效的抗体纯化处理后，可以得到相较于传统培养方式3倍抗体量和纯度达到90％的单克隆抗体，可以大大缩减抗体生产成本，并扩大该方法在科研学术领域的进一步应用。域的进一步应用。域的进一步应用。


技术研发人员：阮宏强 李紫艺 张鹏
受保护的技术使用者：上海中科新生命生物科技有限公司
技术研发日：2021.09.30
技术公布日：2022/1/3