一种近红外响应的仿生纳米制剂及其制备方法与应用与流程

技术特征：
1.一种近红外响应的仿生纳米制剂，其特征在于：包括肝细胞模型的细胞膜和包裹在细胞膜内的纳米载体，所述纳米载体包括近红外响应的上转换纳米粒子和crispr/cas9，所述上转换纳米粒子表面修饰有亲和素蛋白，所述亲和素蛋白和crispr/cas9之间连接有生物素修饰的光解分子。2.如权利要求1所述的一种近红外响应的仿生纳米制剂，其特征在于：所述肝细胞模型为hbv复制肝细胞模型、hbv感染肝细胞模型、原代肝细胞模型中的一种。3.如权利要求1所述的一种近红外响应的仿生纳米制剂，其特征在于：所述近红外响应的上转换纳米粒子为核壳结构，ca
2
掺杂的nayf4:yb
3
/tm
3
为核，nayf4:yb/nd为壳。4.如权利要求1所述的一种近红外响应的仿生纳米制剂，其特征在于：所述生物素修饰的光解分子为pc生物素
‑
nhs酯。5.如权利要求1所述的一种近红外响应的仿生纳米制剂，其特征在于：所述crispr/cas9包括cas9蛋白和sgrna，所述sgrna对应的dna序列如seq id no.1
‑
3所示。6.一种近红外响应的仿生纳米制剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：1)构建crispr/cas9：设计合成sgrna，并将sgrna与cas9蛋白共孵育，制备crispr/cas9；2)制备纳米载体ucnps
‑
cas9：合成上转换纳米粒子，并对上转换纳米粒子进行亲水性改性和亲和素表面修饰，得到uncps
‑
avidin，之后与生物素修饰的光解分子进行连接反应形成纳米颗粒uncps
‑
avidin/pcb，将纳米颗粒uncps
‑
avidin/pcb与步骤1)制备的crispr/cas9共孵育，得到纳米载体ucnps
‑
cas9；3)制备仿生纳米制剂ucnps
‑
cas9@cm：提取hbv复制肝癌细胞模型的细胞膜，并将细胞膜与步骤2)制备的ucnps
‑
cas9混合，通过聚碳酸酯滤膜反复挤压，得到ucnps
‑
cas9@cm。7.如权利要求6所述的一种近红外响应的仿生纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤1)中，sgrna与cas9蛋白的摩尔质量比为1:1
‑
10:1，共孵育的时间为5
‑
15min，温度为37℃。8.如权利要求6所述的一种近红外响应的仿生纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤2)中，所述上转换纳米粒子表面包括油酸配体，所述亲水改性中用到的改性剂为聚丙烯酸，所述亲和素表面修饰的方法为：利用edc/nhs将亲和素连接在上转换纳米粒子的表面；所述连接反应的温度为37℃，时间为2h；uncps
‑
avidin中的avidin和生物素修饰的光解分子的质量比为1:4；所述共孵育的温度为4℃，时间为8
‑
12h。9.如权利要求6所述的一种近红外响应的仿生纳米制剂的制备方法，其特征在于：步骤3)中，所述聚碳酸酯滤膜的孔径为200nm或400nm。10.权利要求1
‑
5任一项所述的一种近红外响应的仿生纳米制剂在制备治疗肝炎药物中的应用。

技术总结
本发明提供了一种近红外响应的仿生纳米制剂。该仿生纳米制剂包括HBV肝细胞模型的细胞膜和包裹在细胞膜内的纳米载体，所述纳米载体包括近红外响应的上转换纳米粒子和CRISPR/Cas9，所述上转换纳米粒子表面修饰有亲和素蛋白，所述亲和素蛋白和CRISPR/Cas9之间连接有生物素修饰的光解分子。其解决了现有技术中存在的CRISPR/Cas9递送系统免疫原性高、靶向性低、运载负荷小且无法实现远程时空操作的问题。建立了一种低免疫原性、靶向性高、运载负荷大、生产合成简便的高效CRISPR/Cas9递送系统，以及对CRISPR/Cas9实施精准的远程时空操作。以及对CRISPR/Cas9实施精准的远程时空操作。


技术研发人员：王丹 陈柳先 袁睿 李承碧 罗艳秋 汤青霞 文飞 李滔
受保护的技术使用者：重庆市荣昌区人民医院
技术研发日：2021.09.30
技术公布日：2022/1/3