噻吩并吡唑类化合物，包含其的药物组合物及其用途的制作方法

1.本发明属于药物化学领域，涉及一种具有ups7抑制活性的噻吩并吡唑类化合物，包含其的药物组合物，及其医药用途。


背景技术：

2.泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system，ups)是一种细胞中基本的生理调控过程，通过一系列级联反应，蛋白质被泛素化修饰后，被蛋白酶降解。ups的异常与肿瘤、神经退行性疾病、病毒感染等疾病密切相关。目前主要针对ups系统中的蛋白酶、e1活化酶、e2结合酶、e3连接酶以及去泛素化酶(deubiquitinases，dubs)五类靶点来开发药物。
3.去泛素化酶能够特异性地切断在泛素碳末端的甘氨酸残基与靶蛋白间形成的异肽键，使泛素脱离靶蛋白，使得靶蛋白被免于降解、重新定位或者活化等。
4.目前人体内存在近100种dubs，其中泛素特异性蛋白酶(ubiquitin-specific proteases，usps)是dubs的最大家族成员，包括约85个成员，属于半胱氨酸蛋白酶家族中的一种异肽酶(wu and kumar,journal of medicinal chemistry,2018,61:422-443)。目前发现已经有超过40种usps家族成员与肿瘤的发生、发展相关。
5.usp7定位于细胞核，是ups中的一种关键性去泛素化酶，能够特异性地切断在泛素碳末端和靶蛋白间形成的异肽键，使泛素脱离靶蛋白，使得靶蛋白被免于降解、重新定位或者活化等(turnbull and ioannidis,nature,2017,550:481-486)。
6.usp7在人体组织分布广泛，在神经发育、细胞周期调控、表观遗传调控、dna损伤修复以及免疫反应中扮演重要角色。已有研究表明usp7在肝细胞癌、多发性骨髓瘤、结肠癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌等癌细胞中存在过度表达的情况，且这种过度表达与肿瘤侵袭和不良预后直接相关(pozhidaeva and bezsonova,dna repair,2019,76:30-39)。
7.usp7的底物种类丰富，且大多数为与细胞周期调控、免疫应答、细胞凋亡以及dna损伤修复等相关的蛋白，如mdm2、p53、ercc6、foxp3、pten和foxo4等(chauhan and tian,cancer cell,2012,22:345-358)。在一些肿瘤细胞中mdm2过度表达，usp7能保护mdm2免于泛素化，mdm2与p53蛋白结合之后促进p53蛋白泛素化并降解，促进肿瘤生长。
8.usp7亦可通过直接调控肿瘤抑制蛋白(例如p53、pten、foxo4、p114arf、p16ink4)和肿瘤促进蛋白(例如n-myc、rest)的表达，上调肿瘤相关因子(例如hif-1)表达，以及调控肿瘤相关信号通路(例如shh信号通路、wnt/β-catenin信号通路、雄激素受体信号通路、dna损伤修复信号通路)，而发挥促肿瘤作用(zhou and wang,medicinal chemistry,2018,14:3-18)。
9.此外，usp7还通过调控treg细胞上游信号分子(如转录因子foxp3和表观遗传调控因子tip60)，上调treg细胞活性(wang and wu,plos one,2017,12:1-23)，抑制teff细胞(cd8 t细胞)活性，从而发挥肿瘤免疫监视逃逸的作用。
10.开发usp7的抑制剂是肿瘤研究领域的热点之一。目前，针对usp7靶点全球范围内仍无药物上市，在研化合物全部处于临床前研究阶段。
11.虽然hybrigenics sa、forma therapeutics,inc.、les laboratoires servier、almac discovery limited等公司对usp7抑制剂均有相应研究并有相关专利公布，但本领域仍然亟需新的usp7抑制剂，特别是具有高活性以及其他优异性能的usp7抑制剂。


技术实现要素：

12.发明要解决的问题
13.本发明通过大量的研究，开发出了一种噻吩并吡唑类化合物及其对应的制备方法，该类化合物可以显著抑制ups7的活性，其作为ups7抑制剂可用于预防和/或治疗至少部分由ups7介导的疾病，尤其是肿瘤疾病(癌症)。
14.用于解决问题的方案
15.第一方面，本发明提供了一种具有式i结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，
[0016][0017]
其中，
[0018]
r0选自氢、卤素、氰基、c
1-6
烷基和c
1-6
卤代烷基；
[0019]
l1不存在或选自c
1-6
亚烷基、c
1-6
卤代亚烷基、c
3-8
亚环烷基和3-8元亚杂环烷基；
[0020]
r1选自氢、羟基、卤素、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、c
6-10
芳基、5-10元杂芳基、-nr
a
r
b
、其中，
[0021]
r
a
和r
b
各自独立地选自氢、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、-c(o)-c
1-6
烷基、-c(o)-c
3-8
环烷基、-c(o)-c
2-6
烯基、-s(o)
q-c
1-6
烷基、-s(o)
q-c
3-8
环烷基和-s(o)
q-c
2-6
烯基；其中，所述c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基和c
2-6
烯基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、-c
1-6
亚烷基-c(o)oh和-c(o)o-c
1-6
烷基；q选自1和2；
[0022]
b选自3-8元杂环烷基、3-8元杂环烯基和5-10元杂芳基；
[0023]
c选自c
3-8
环烷基、3-8元杂环烷基、c
4-6
环烯基、3-8元杂环烯基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基；
[0024]
d选自c
3-8
环烷基和3-8元杂环烷基；
[0025]
若存在，每一个r9和r
10
各自独立地选自氢、卤素、氰基、氧代基、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环烷基、羧基、-c(o)o-c
1-6
烷基和-c
1-6
亚烷基-c(o)oh；其中，所述c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基和3-8元杂环烷基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、羟基和氨基；
[0026]
z3、z4和z5各自独立地选自0、1、2、3、4、5和6；
[0027]
r2、r3、r4、r5和r6各自独立地选自氢、羟基、卤素、氰基、羧基、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷氧基；
[0028]
l2选自氧、硫、-n(r
11
)-、-c(o)-、-o-c
1-6
亚烷基-、-s-c
1-6
亚烷基-和c
1-6
亚烷基；其中，
[0029]
r
11
选自氢、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基和-c(o)-c
1-6
烷基；
[0030]
a选自c
3-8
环烷基、3-8元杂环烷基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基；
[0031]
若存在，每一个r7和r8各自独立地选自氢、羟基、卤素、氰基、-nr
c
r
d
、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环烷基、-c
1-6
亚烷基-oh、-c
1-6
亚烷基-o-c
1-6
烷基、-c(o)-n(c
1-6
烷基)2、-c(o)-c
1-6
烷基和-c(o)-c
1-6
卤代烷基，或者r7和r8及其所连接的原子共同形成c
3-8
环烷基或3-8元杂环烷基；其中，
[0032]
r
c
和r
d
各自独立地选自氢、c
1-6
烷基和-c(o)-c
1-6
烷基；
[0033]
z1和z2各自独立地选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。
[0034]
第二方面，本发明提供了具有式i结构的具体化合物，其包括：
[0035]
(1)3-((3-(5-氯-3-甲基-2-(哌啶-4-基氧基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0036]
(2)3-((3-(5-氯-3-甲基-2-(2-甲基哌啶-4-基氧基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0037]
(3)3-((3-(5-氯-3-甲基-2-(3-甲基哌啶-4-基氧基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0038]
(4)3-((3-(5-氯-3-甲基-2-(哌啶-4-基氨基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0039]
(5)3-((3-(5-氯-3-甲基-2-(哌啶-4-羰基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0040]
(6)3-((3-(5-氯-3-甲基-2-(哌啶-4-基甲基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0041]
(7)3-((3-(5-氯-2-(2,6-二甲基哌啶-4-基氧基)-3-甲基苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0042]
(8)3-((3-(5-氯-3-甲基-2-(1-甲基哌啶-4-基氧基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0043]
(9)3-((3-(5-氯-3-甲基-2-(6-甲基哌啶-3-基氧基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0044]
(10)3-((3-(5-氯-3-甲基-2-(奎宁-4-基氧基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0045]
(11)3-((3-(2-(1-氮杂双环[3.2.1]辛烷-5-基氧基)-5-氯-3-甲基苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0046]
(12)3-((3-(2-(3-氨基环戊基氧基)-5-氯-3-甲基苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0047]
(13)3-((3-(5-氯-2-(2,2-二甲基吡咯烷-3-基氧基)-3-甲基苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0048]
(14)3-((3-(5-氯-2-(4-甲氧基吡咯烷-3-基氧基)-3-甲基苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0049]
(15)3-((3-(5-氯-2-(1,4-二甲基吡咯烷-3-基氧基)-3-甲基苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；
[0050]
(16)3-((3-(2-((3-氨基环丁基)甲氧基)-5-氯-3-甲基苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮；和
[0051]
(17)3-((3-(5-氯-3-甲基-2-((3-甲基氮杂环丁-3-基)甲氧基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮。
[0052]
第三方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含上述具有式i结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，以及一种或多种药学上可接受的载体。
[0053]
第四方面，本发明提供了一种药品，其包含：
[0054]
a)上述具有式i结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，或者上述药物组合物；
[0055]
b)任选存在的包装和/或说明书。
[0056]
第五方面，本发明提供了上述具有式i结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，或者上述药物组合物，或者上述药品，其用作ups7抑制剂，用于预防和/或治疗至少部分由ups7介导的疾病或病症(尤其是癌症)，或者用于体外抑制ups7活性或体外抑制肿瘤细胞增殖。
[0057]
第六方面，本发明提供了上述具有式i结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，或者上述药物组合物，或者上述药品，用作ups7抑制剂的用途。
[0058]
第七方面，本发明提供了上述具有式i结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，或者上述药物组合物，或者上述药品，在制备用于预防和/或治疗至少部分由ups7介导的疾病或病症(尤其是癌症)的药物中的用途。
[0059]
第八方面，本发明提供了一种用于预防和/或治疗至少部分由ups7介导的疾病或病症(尤其是癌症)的方法，其包括下列步骤：将预防和/或治疗有效量的上述具有式i结构的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，或者上述药物组合物，或者上述药品，施用于对其有需求的个体。
[0060]
发明的效果
[0061]
本发明提供了一种结构新颖的噻吩并吡唑类化合物，其可以作为高效的ups7抑制剂，具有抗肿瘤活性。另外，上述化合物的合成方法温和，操作简单易行。
具体实施方式
[0062]
在进一步描述本发明之前，应当理解，本发明不限于文中所述的特定实施方案。还应该理解，除非另有定义，文中所用的所有术语的含义或意图与本领域技术人员通常所理
解的相同。虽然文中所用的术语的含义或意图对于本领域技术人员而言容易理解，但是为了更好地解释本发明的技术方案，仍作阐述如下。
[0063]
[术语定义]
[0064]
术语“包含(comprising)”、“包括(including)”、“具有(having)”、“涉及(involving)”或其任何其他变体旨在涵盖非排他性或开放式的包含内容。例如，包含一系列元素的组合物、方法或装置不一定仅限于已明确列出的元素，而是可能还包含其他未明确列出的元素或上述组合物、方法或装置所固有的元素。
[0065]
术语“药学上可接受的盐”是指对生物体基本上无毒性的，本发明的化合物的盐。药学上可接受的盐通常包括(但不限于)本发明的化合物与药学上可接受的无机/有机酸或无机/有机碱反应而形成的盐，此类盐又被称为酸加成盐或碱加成盐。
[0066]
术语“药学上可接受的酯”是指对生物体基本上无毒性的，在生物体体内水解成本发明的化合物或其盐的酯。药学上可接受的酯通常包括(但不限于)本发明的化合物与药学上可接受的羧酸或磺酸形成的酯，此类酯又被称为羧酸酯或磺酸酯。
[0067]
术语“异构体”是指因具有相同的原子数和原子类型而具有相同的分子量，但原子的空间排列或构型不同的化合物。
[0068]
术语“立体异构体”(或称“旋光异构体”)是指由于具有至少一个手性因素(包括手性中心、手性轴、手性面等)而导致具有垂直的不对称平面，从而能够使平面偏振光旋转的稳定异构体。由于本发明的化合物存在可能导致立体异构的不对称中心以及其他化学结构，因此本发明也包括这些立体异构体及其混合物。由于本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)包括不对称碳原子，因而能够以单一立体异构体形式、外消旋物、对映异构体和非对映异构体的混合物形式存在。通常，这些化合物能够以外消旋物的形式制备。然而，如果需要的话，可以将这类化合物制备或分离后得到纯的立体异构体，即单一对映异构体或非对映异构体，或者单一立体异构体富集化(纯度≥98％、≥95％、≥93％、≥90％、≥88％、≥85％或≥80％)的混合物。如下文中所述，化合物的单一立体异构体是由含有所需手性中心的旋光起始原料合成制备得到的，或者是通过制备得到对映异构体产物的混合物之后再分离或拆分制备得到的，例如转化为非对映异构体的混合物之后再进行分离或重结晶、色谱处理、使用手性拆分试剂，或者在手性色谱柱上将对映异构体进行直接分离。具有特定立体化学的起始化合物既可以商购得到，也可以按照下文中描述的方法制备再通过本领域熟知的方法拆分得到。术语“对映异构体”是指彼此具有不能重叠的镜像的一对立体异构体。术语“非对映异构体”或“非对映体”是指彼此不构成镜像的旋光异构体。术语“外消旋混合物”或“外消旋物”是指含有等份的单一对映异构体的混合物(即两种r和s对映体的等摩尔量混合物)。术语“非外消旋混合物”是指含有不等份的单一对映异构体的混合物。除非另外指出，本发明的化合物的所有立体异构体形式都在本发明的范围之内。
[0069]
术语“互变异构体”(或称“互变异构形式”)是指具有不同能量的，可通过低能垒互相转化的结构异构体。若互变异构是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(或称质子转移互变异构体)包括(但不限于)通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化、亚胺-烯胺异构化、酰胺-亚胺醇异构化等。除非另外指出，本发明的化合物的所有互变异构体形式都在本发明的范围之内。
[0070]
术语“多晶型物”(或称“多晶型形式”)是指化合物或复合物的固体晶体形式。本领
域技术人员可通过许多已知的方法获得分子的多晶型物。这些方法包括(但不限于)熔融重结晶、熔融冷却、溶剂重结晶、去溶剂化、快速蒸发、快速冷却、慢速冷却、汽相扩散和升华。另外，可用熟知的技术检测、分类和鉴定多晶型物，这些技术包括(但不限于)差示扫描量热法(dsc)、热重分析法(tga)、x射线粉末衍射法(xrpd)、单晶x射线衍射法(scxrd)、固态核磁共振(nmr)、红外光谱法(ir)、拉曼光谱法和扫描电镜术(sem)等。
[0071]
术语“溶剂化物”是指由本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)与至少一种溶剂分子通过非共价分子间作用力结合而形成的物质。常见的溶剂化物包括(但不限于)水合物(包括半水合物、一水合物、二水合物、三水合物等)、乙醇合物、丙酮合物等。
[0072]
术语“同位素标记物”是指将本发明的化合物中的特定原子替换为其同位素原子而形成的衍生化合物。除非另外指出，本发明的化合物包括h、c、n、o、f、p、s、cl的各种同位素，如2h(d)、3h(t)、
13
c、
14
c、
15
n、
17
o、
18
o、
18
f、
31
p、
32
p、
35
s、
36
s和
37
cl。例如，
12
c可被
12
c、
13
c或
14
c替代；1h可被2h(d，氘)或3h(t，氚)替代；
16
o可被
18
o替代等。本发明包括结构中任意原子经其同位素替换后得到的同位素标记的化合物。
[0073]
术语“代谢物”是指本发明的化合物经代谢后形成的衍生化合物。关于代谢的进一步信息可参见goodman and gilman's:the pharmacological basis of therapeutics(9
th ed.)[m],mcgraw-hill international editions,1996。
[0074]
术语“前药”是指在施用于个体后能够直接或间接地提供本发明的化合物的衍生化合物。特别优选的衍生化合物或前药是在施用于个体时可以提高本发明的化合物的生物利用度的化合物(例如，更易吸收入血)，或者促进母体化合物向作用位点(例如，淋巴系统)递送的化合物。除非另外指出，本发明的化合物的所有前药形式都在本发明的范围之内，且各种前药形式是本领域熟知的。
[0075]
术语“各自独立地”是指结构中存在的取值范围相同或相近的至少两个基团(或环系)可以在特定情形下具有相同或不同的含义。例如，取代基x和取代基y各自独立地为氢、卤素、羟基、氰基、烷基或芳基，则当取代基x为氢时，取代基y既可以为氢，也可以为卤素、羟基、氰基、烷基或芳基；同理，当取代基y为氢时，取代基x既可以为氢，也可以为卤素、羟基、氰基、烷基或芳基。
[0076]
术语“烷基”是指直链或支链的饱和脂肪族烃基。例如，本发明中所使用的术语“c
1-6
烷基”是指具有1至6个碳原子的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正己基等)，其任选地被一个或多个(例如1至3个)本发明所描述的取代基取代(如被卤素取代时，该基团为“c
1-6
卤代烷基”，例如-cf3、-c2f5、-chf2、-ch2f、-ch2cf3、-ch2cl、-ch2ch2cf3等)。
[0077]
术语“亚烷基”是指二价的直链或支链的饱和脂肪族烃基，其所连接的两个基团或片段既可以连接同一个碳原子，又可以连接不同的碳原子。例如，本发明中所使用的术语“c
1-6
亚烷基”是指具有1至6个碳原子的亚烷基(例如亚甲基、1,1-亚乙基、1,2-亚乙基等)，其任选地被一个或多个(例如1至3个)本发明所描述的取代基取代(如被卤素取代时，该基团为“c
1-6
卤代亚烷基”，例如-cf
2-、-c2f
4-、-chf-等)。
[0078]
术语“环烷基”是指单环或多环(诸如双环)的脂肪族烃基(例如单环环烷基，诸如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基等；或双环环烷基，包括稠环、桥环或螺环，诸如双环[1.1.1]戊基、双环[2.2.1]庚基等)，其任选地被一个或多个(例如1至3
个)本发明所描述的取代基取代(例如氧代基)。例如，本发明中所使用的术语“c
3-8
环烷基”是指具有3至8个成环碳原子的环烷基(例如2-甲基环丙基)。
[0079]
术语“亚环烷基”是指二价的单环或多环(诸如双环)的脂肪族烃基，其所连接的两个基团或片段既可以连接同一个成环碳原子，又可以连接不同的成环碳原子，其任选地被一个或多个(例如1至3个)本发明所描述的取代基取代(例如氧代基)。例如，本发明中所使用的术语“c
3-8
亚环烷基”是指具有3至8个成环碳原子的亚环烷基(例如)。
[0080]
术语“杂环烷基”是指单环或多环(诸如双环)的脂肪族基团，其环中具有一个或多个碳原子(例如2、3、4、5、6、7、8或9个)和一个或多个(例如2、3或4个)各自独立地选自o、s、n、nh、s(o)和s(o)2的杂原子或杂原子团，其任选地被一个或多个(例如1至3个)本发明所描述的取代基取代(例如氧代基)。如果满足价键要求，杂环烷基可以通过环中的任意一个碳原子或杂原子连接至母体分子部分。例如，本发明中所使用的术语“3-8元杂环烷基”是指具有3至8个环原子(其中包含一个或多个杂原子或杂原子团)的杂环烷基(例如环氧乙烷基(oxiranyl)、氮杂环丙烷基(aziridinyl)、氮杂环丁烷基(azetidinyl)、氧杂环丁烷基(oxetanyl)、四氢呋喃基(tetrahydrofuryl)、吡咯烷基(pyrrolidinyl)、吡咯烷酮基(pyrrolidinonyl)、咪唑烷基(imidazolidinyl)、吡唑烷基(pyrazolidinyl)、吡咯烷基(pyrrolidinyl)、四氢吡喃基(tetrahydropyranyl)等)。
[0081]
术语“亚杂环烷基”是指二价的单环或多环(诸如双环)的脂肪族烃基，其环中具有一个或多个碳原子(例如2、3、4、5、6、7、8或9个)和一个或多个(例如2、3或4个)各自独立地选自o、s、n、nh、s(o)和s(o)2的杂原子或杂原子团，其所连接的两个基团或片段既可以连接同一个成环碳原子，又可以分别连接成环碳原子和成环杂原子(例如氮原子)，其任选地被一个或多个(例如1至3个)本发明所描述的取代基取代(例如氧代基)。例如，本发明中所使用的术语“3-8元亚杂环烷基”是指具有3至8个环原子(其中包含一个或多个杂原子或杂原子团)的亚杂环烷基(例如)。
[0082]
术语“烷氧基”是指通过氧原子连接至母体分子部分的如上所定义的“烷基”或“环烷基”(例如c
1-6
烷氧基、c
3-8
环烷氧基等，包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、环丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、环丁氧基、正戊氧基、异戊氧基、正己氧基或其异构体)。例如，本发明中所使用的术语“c
1-6
烷氧基”是指具有1至6个碳原子的烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、叔丁氧基等)，其任选地被一个或多个(例如1至3个)本发明所描述的取代基取代(如被卤素取代时，该基团为“c
1-6
卤代烷氧基”，例如-ocf3、-oc2f5等)。
[0083]
术语“芳基”是指具有共轭π电子系统的单环或稠合多环的芳香族烃基，其任选地被一个或多个本发明所描述的取代基取代(如被氧代基、c
1-6
烷基(甲基、乙基)或卤素(氟、氯、溴)取代)。例如，本发明中所使用的术语“c
6-10
芳基”是指具有6至10个碳原子的芳基(例如苯基、萘基等)。
[0084]
术语“杂芳基”是指具有共轭π电子系统的单环或稠合多环的芳香族基团，其环中具有一个或多个碳原子(例如1、2、3、4、5、6、9或10个碳原子)和一个或多个(例如2、3或4个)各自独立地选自o、s、n和nh的杂原子或杂原子团，其任选地被一个或多个本发明所描述的
取代基取代(如被氧代基、c
1-6
烷基(甲基、乙基)或卤素(氟、氯、溴)取代)。如果满足价键要求，杂芳基可以通过任意一个环原子连接至母体分子部分。例如，本发明中所使用的术语“5-10元杂芳基”是指具有5至10个环原子的杂芳基(例如噻吩基(thienyl)、呋喃基(furyl)、吡咯基(pyrrolyl)、噁唑基(oxazolyl)、噻唑基(thiazolyl)、咪唑基(imidazolyl)、吡唑基(pyrazolyl)、异噁唑基(isoxazolyl)、异噻唑基(isothiazolyl)、噁二唑基(oxadiazolyl)、三唑基(triazolyl)、噻二唑基(thiadiazolyl)、吡啶基(pyridinyl)、哒嗪基(pyridazinyl)、嘧啶基(pyrimidinyl)、吡嗪基(pyrazinyl)、三嗪基(triazinyl)或其苯并衍生物等)。
[0085]
术语“烯基”是指含有一个或多个碳-碳双键的直链或支链的脂肪族烃基，通常含有大约2至15个碳原子。例如，本发明中所使用的术语“c
2-6
烯基”是指含有2至6个碳原子的烯基(例如乙烯基、丙烯基、正丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、正辛烯基、正癸烯基等)，其任选地被一个或多个(例如1至3个)取代基取代(如卤素、烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、氰基、羟基、烷氧基、芳氧基、烷氧基烷基、烷硫基、氨基、烷基酰氧基、芳基酰氧基、环烷基酰氧基、羧基、烷氧基羰基等)。
[0086]
术语“环烯基”是指含有一个或多个碳-碳双键的单环或多环(诸如双环)的脂肪族烃基(例如单环环烯基，诸如环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基等)。例如，本发明中所使用的术语“c
4-6
环烯基”是指具有4至6个成环碳原子的环烯基，其任选地被一个或多个(例如1至3个)本发明所描述的取代基取代(例如氧代基)。
[0087]
术语“杂环烯基”是指单环或多环(诸如双环)的脂肪族基团，其环中具有一个或多个碳原子(例如2、3、4、5、6、7、8或9个)和一个或多个(例如2、3或4个)各自独立地选自o、s、n、nh、s(o)和s(o)2的杂原子或杂原子团，并且含有一个或多个碳-碳双键，其任选地被一个或多个(例如1至3个)本发明所描述的取代基取代(例如氧代基)。如果满足价键要求，杂环烯基可以通过环中的任意一个碳原子或杂原子连接至母体分子部分。例如，本发明中所使用的术语“3-8元杂环烯基”是指具有3至8个环原子(其中包含一个或多个杂原子或杂原子团)的杂环烯基。
[0088]
术语“氨基”是指
“-
nh
2”基团，其既可以是未取代的，也可以是被一个或多个本发明所描述的取代基取代的(例如-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-nh(c
1-3
烷基)、-n(c
1-3
烷基)2等)。除非另有说明，本发明中所使用的术语“氨基”还可以被氨基保护基团保护。适合的氨基保护基团包括乙酰基(ac)、叔丁氧羰基(boc)、苄氧羰基(cbz)等。
[0089]
术语“卤素”是指氟(f)、氯(cl)、溴(br)和碘(i)。
[0090]
术语“氰基”是指
“-
cn”基团。
[0091]
术语“羟基”是指
“-
oh”基团。
[0092]
术语“羧基”是指
“-
c(o)oh”基团。
[0093]
术语“氧代基”是指“＝o”基团。氧代基通常出现在除其以外还连接两个其他原子、原子团(基团)或结构片段的碳原子上，二者共同形成羰基。
[0094]
术语“羰基”是指
“-
c(＝o)
-”
或
“-
c(o)
-”
基团。
[0095]
术语“取代”是指所指定的基团中的一个或多个(例如1、2、3或4个)原子(例如氢原子)或原子团(例如三氟甲磺酸酯基)被其他原子或原子团代替，条件是所指定的基团在当前情况下满足价键要求并且在取代之后形成稳定的化合物。取代基和/或变量的组合仅当
该组合能够形成稳定的化合物时才是允许的。如果取代基被描述为“任选地被....取代”，则该取代基可以是未取代的，或是被取代的。如果第一取代基被描述为任选地被第二取代基列表中的一个或多个取代，则第一取代基中的一个或多个氢原子可以单独地或各自独立地被第二取代基列表中的一个或多个代替，或者未代替。
[0096]
当取代基的键显示为穿过环中连接两个原子的键时，则这样的取代基可连接至该环中的任一成环原子。
[0097]
术语“一个或多个”是指在合理条件下的1个或超过1个，例如2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
[0098]
[通式化合物]
[0099]
本发明提供了一种式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，
[0100][0101]
其中，
[0102]
r0选自氢、卤素、氰基、c
1-6
烷基和c
1-6
卤代烷基；
[0103]
l1不存在或选自c
1-6
亚烷基、c
1-6
卤代亚烷基、c
3-8
亚环烷基和3-8元亚杂环烷基；
[0104]
r1选自氢、羟基、卤素、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、c
6-10
芳基、5-10元杂芳基、-nr
a
r
b
、其中，
[0105]
r
a
和r
b
各自独立地选自氢、c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基、-c(o)-c
1-6
烷基、-c(o)-c
3-8
环烷基、-c(o)-c
2-6
烯基、-s(o)
q-c
1-6
烷基、-s(o)
q-c
3-8
环烷基和-s(o)
q-c
2-6
烯基；其中，所述c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基和c
2-6
烯基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、-c
1-6
亚烷基-c(o)oh和-c(o)o-c
1-6
烷基；q选自1和2；
[0106]
b选自3-8元杂环烷基、3-8元杂环烯基和5-10元杂芳基；
[0107]
c选自c
3-8
环烷基、3-8元杂环烷基、c
4-6
环烯基、3-8元杂环烯基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基；
[0108]
d选自c
3-8
环烷基和3-8元杂环烷基；
[0109]
若存在，每一个r9和r
10
各自独立地选自氢、卤素、氰基、氧代基、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环烷基、羧基、-c(o)o-c
1-6
烷基和-c
1-6
亚烷基-c(o)oh；其中，所述c
1-6
烷基、c
3-8
环烷基和3-8元杂环烷基各自独立地任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、羟基和氨基；
[0110]
z3、z4和z5各自独立地选自0、1、2、3、4、5和6；
[0111]
r2、r3、r4、r5和r6各自独立地选自氢、羟基、卤素、氰基、羧基、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷
基、c
3-8
环烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷氧基；
[0112]
l2选自氧、硫、-n(r
11
)-、-c(o)-、-o-c
1-6
亚烷基-、-s-c
1-6
亚烷基-和c
1-6
亚烷基；其中，
[0113]
r
11
选自氢、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基和-c(o)-c
1-6
烷基；
[0114]
a选自c
3-8
环烷基、3-8元杂环烷基、c
6-10
芳基和5-10元杂芳基；
[0115]
若存在，每一个r7和r8各自独立地选自氢、羟基、卤素、氰基、-nr
c
r
d
、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、3-8元杂环烷基、-c
1-6
亚烷基-oh、-c
1-6
亚烷基-o-c
1-6
烷基、-c(o)-n(c
1-6
烷基)2、-c(o)-c
1-6
烷基和-c(o)-c
1-6
卤代烷基，或者r7和r8及其所连接的原子共同形成c
3-8
环烷基或3-8元杂环烷基；其中，
[0116]
r
c
和r
d
各自独立地选自氢、c
1-6
烷基和-c(o)-c
1-6
烷基；
[0117]
z1和z2各自独立地选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。
[0118]
在本发明的一些实施方案中，在上述式i化合物中，r0选自氢、卤素、c
1-4
烷基和c
1-4
卤代烷基。
[0119]
在本发明的一些实施方案中，在上述式i化合物中，l1不存在或选自c
1-6
亚烷基和c
1-6
卤代亚烷基；优选地，l1不存在或选自c
1-4
亚烷基和c
1-4
卤代亚烷基。
[0120]
在本发明的一些实施方案中，在上述式i化合物中，r1选自选自其中，
[0121]
b选自3-8元杂环烷基和3-8元杂环烯基；
[0122]
c选自c
3-8
环烷基；
[0123]
d选自c
3-8
环烷基；
[0124]
若存在，每一个r9和r
10
各自独立地选自氢、卤素、氰基、氧代基、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基和羧基；其中，所述c
1-6
烷基任选被如下的一个或多个基团所取代：氢、羟基和氨基；
[0125]
z3、z4和z5各自独立地选自0、1和2。
[0126]
在本发明的一些实施方案中，在上述式i化合物中，r2、r3、r4、r5和r6各自独立地选自氢、卤素、氰基、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷氧基。
[0127]
在本发明的一些实施方案中，在上述式i化合物中，l2选自氧、硫、-n(r
11
)-、-c(o)-、-o-c
1-6
亚烷基-和c
1-6
亚烷基；其中，
[0128]
r
11
选自氢、c
1-6
烷基和c
1-6
卤代烷基。
[0129]
在本发明的一些实施方案中，在上述式i化合物中，a选自c
3-8
环烷基和3-8元杂环烷基。
[0130]
在本发明的一些实施方案中，在上述式i化合物中，若存在，每一个r7和r8各自独立地选自氢、羟基、卤素、氰基、-nr
c
r
d
、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基和3-8元杂环烷基，或者r7和r8及其所连接的原子共同形成c
3-8
环烷基或3-8元杂环烷基；优选地，若存在，每一个r7和r8各自独立地选自氢、羟基、卤素、氰基、-nr
c
r
d
、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基和c
1-6
卤代烷基，或者r7和r8及其所连接的原子共同形成c
3-8
环烷基或3-8元杂环烷基；其中，
[0131]
r
c
和r
d
各自独立地选自氢、c
1-6
烷基和-c(o)-c
1-6
烷基；
[0132]
z1和z2各自独立地选自0、1和2。
[0133]
在本发明的一些实施方案中，在上述式i化合物中，
[0134]
r0为氢；
[0135]
l1为c
1-6
亚烷基；
[0136]
r1选自其中，
[0137]
b选自3-8元杂环烷基和3-8元杂环烯基；
[0138]
c为c
3-6
环烷基；
[0139]
若存在，每一个r9各自独立地选自氧代基和c
1-6
卤代烷基；
[0140]
若存在，每一个r
10
各自独立地选自氢和c
1-6
烷基；
[0141]
r2、r3、r4、r5和r6各自独立地选自氢、卤素和c
1-6
烷基；
[0142]
l2选自-o-、-n(r
11
)-、-c(o)-、-o-c
1-6
亚烷基-和c
1-6
亚烷基；其中，
[0143]
r
11
选自氢和c
1-6
烷基；
[0144]
a选自c
3-8
环烷基和3-8元杂环烷基；
[0145]
若存在，每一个r7和r8各自独立地选自氢、氨基、c
1-6
烷基和c
1-6
烷氧基，或者r7和r8及其所连接的原子共同形成c
3-8
环烷基；
[0146]
z1、z2、z3和z4各自独立地选自0、1和2。
[0147]
在本发明的一些优选的实施方案中，在上述式i化合物中，
[0148]
r0为氢；
[0149]
l1为亚甲基；
[0150]
r1为其中，
[0151]
b为5元杂环烷基；
[0152]
c为环丙基；
[0153]
r9为氧代基；
[0154]
r
10
为c
1-6
烷基；
[0155]
z3和z4为2；
[0156]
r2、r3、r4、r5和r6各自独立地选自氢、卤素和c
1-6
烷基；
[0157]
l2选自-o-、-n(r
11
)-、-c(o)-、-o-c
1-6
亚烷基-和c
1-6
亚烷基；其中，
[0158]
r
11
选自氢和c
1-6
烷基；
[0159]
a选自c
4-5
环烷基和4-8元杂环烷基；
[0160]
若存在，每一个r7和r8各自独立地选自氢、氨基、c
1-6
烷基和c
1-6
烷氧基；
[0161]
z1和z2各自独立地选自0和1。
[0162]
在本发明的一些更优选的实施方案中，在上述式i化合物中，
[0163]
r0为氢；
[0164]
l1为亚甲基；
[0165]
r1为
[0166]
r2和r4为氢；
[0167]
r3为氯；
[0168]
r5和r6为甲基；
[0169]
l2选自-o-、-nh-、-c(o)-、-o-ch
2-和-ch
2-；
[0170]
a选自a选自
[0171]
在本发明的一些优选的实施方案中，上述式i化合物具有如式ii所示的结构，其中
[0172][0173]
r2、r3、r4、r5、r7、r8、l2、a、z1和z2如上文所定义。
[0174]
在本发明的另一些优选的实施方案中，上述式i化合物具有如式iii所示的结构，其中
[0175][0176]
r0、r1、r6、r7、r8、l1、l2、a、z1和z2如上文所定义。
[0177]
在本发明的另一些优选的实施方案中，上述式i化合物具有如式iv所示的结构，其中
[0178][0179]
r7、r8、l2、a、z1和z2如上文所定义。
[0180]
在本发明的一些更优选的实施方案中，上述式i化合物具有如式iv-1至式iv-5中的任意一种所示的结构，其中
[0181][0182]
r7、r8、a、z1和z2如上文所定义。
[0183]
另外，本发明还提供了如下化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，其结构及名称如下表所示：
[0184]
[0185]
[0186][0187]
[制备方法]
[0188]
本发明提供了上述式i化合物的制备方法。
[0189]
该制备方法包括下列步骤：
[0190][0191]
步骤一：化合物a与化合物b反应，得到化合物c；
[0192]
步骤二：化合物c经取代反应，得到化合物d；
[0193]
步骤三：化合物e与化合物f反应，得到化合物g；
[0194]
步骤四：化合物g与化合物d反应，得到化合物h；
[0195]
步骤五：化合物h经反应(例如还原反应)，得到化合物i；
[0196]
步骤六：化合物i经取代反应，得到化合物j；
[0197]
步骤七：化合物j与化合物k反应，得到式i化合物；
[0198]
其中，r0、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、z1、z2、l1、l2和a环的定义如式i中所述；x1、x2、x3和x4各自独立地选自卤素和三氟甲磺酰氧基，优选x1、x2、x3和x4各自独立地选自卤素；m选自硼酸基、c
1-6
烷基取代的硼酸基、被一个或多个甲基取代的五元氧杂硼烷基和c
1-6
烷基取代的锡基，优选m为三正丁基锡。
[0199]
在本发明的一些实施方案中，步骤一中所述反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自thf、dcm和dmf，优选thf。
[0200]
在本发明的一些实施方案中，步骤一中所述反应在pph3的存在下进行。
[0201]
在本发明的一些实施方案中，步骤一中所述反应在偶氮化合物的存在下进行，所述偶氮化合物选自diad、dead和addp，优选diad。
[0202]
在本发明的一些实施方案中，步骤一中所述反应在0℃～50℃条件下进行，优选在0℃～25℃条件下进行。
[0203]
在本发明的一些实施方案中，步骤二中所述取代反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自tol、thf和et2o，优选tol。
[0204]
在本发明的一些实施方案中，步骤二中所述取代反应在碱的存在下进行，所述碱选自n-buli、t-buli、lihmds和nahmds，优选n-buli。
[0205]
在本发明的一些实施方案中，步骤二中所述取代反应在金属试剂的存在下进行，所述金属试剂选自三丁基氯化锡、六正丁基二锡和三正丁基甲氧基锡，优选三丁基氯化锡。
[0206]
在本发明的一些实施方案中，步骤二中所述反应在-78℃～50℃条件下进行，优选在-40℃～25℃条件下进行。
[0207]
在本发明的一些实施方案中，步骤三中所述反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自醇类(例如甲醇、乙醇、异丙醇等)、ea、thf、acn、dmf、dmso和tol，优选甲醇。
[0208]
在本发明的一些实施方案中，步骤三中所述反应在碱的存在下进行，所述碱选自nah、t-buok、k2co3、cs2co3、meona、n-buli、dipea和et3n，优选meona。
[0209]
在本发明的一些实施方案中，步骤三中所述反应在-20℃～100℃条件下进行，优选在0℃～25℃条件下进行。
[0210]
在本发明的一些实施方案中，步骤四中所述反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自diox、tol、acn、dmf和thf，优选diox。
[0211]
在本发明的一些实施方案中，步骤四中所述反应在催化剂的催化下进行，所述催化剂选自pd(pph3)4、pd(oac)2、pd2(dba)3、pd(pph3)2cl2、pd(pph3)2cl2·
ch2cl2和pd(dppf)cl2，优选pd(pph3)4。
[0212]
在本发明的一些实施方案中，步骤四中所述反应在铜试剂存在下进行，所述铜试剂选自cui、cucl和cubr，优选cui。
[0213]
在本发明的一些实施方案中，步骤四中所述反应在-20℃～200℃条件下进行，优
选在80℃～150℃条件下进行。
[0214]
在本发明的一些实施方案中，步骤五中所述反应为还原反应。
[0215]
在本发明的一些优选的实施方案中，步骤五中所述还原反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自thf、dmf、dcm、tol、diox和acn，优选thf。
[0216]
在本发明的一些优选的实施方案中，步骤五中所述还原反应在还原试剂的存在下进行，所述还原试剂选自lialh4、dibal和nabh4，优选lialh4。
[0217]
在本发明的一些优选的实施方案中，步骤五中所述还原反应在-20℃～50℃条件下进行，优选在0℃～25℃条件下进行。
[0218]
在本发明的一些实施方案中，步骤六中所述取代反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自dcm、dmf、thf、et2o和tol，优选dcm。
[0219]
在本发明的一些实施方案中，步骤六中所述取代反应在卤代试剂的存在下进行，所述卤代试剂选自卤代烷烃、三卤代膦、三卤氧膦、氢卤酸和dcso，优选dcso。
[0220]
在本发明的一些实施方案中，步骤六中所述取代反应在-20℃～50℃条件下进行，优选在0℃～25℃条件下进行。
[0221]
在本发明的一些实施方案中，步骤七中所述反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自dmf、dcm、thf和tol，优选dmf。
[0222]
在本发明的一些实施方案中，步骤七中所述反应在碱的存在下进行，所述碱选自nah、t-buok、cs2co3和k2co3，优选nah。
[0223]
在本发明的一些实施方案中，步骤七中所述反应在-20℃～50℃条件下进行，优选在0℃～25℃条件下进行。
[0224]
[药物组合物]
[0225]
术语“药物组合物”是指可以用作药物的组合物，其包含药物活性成分(api)(或治疗剂)以及可选的一种或多种药学上可接受载体，目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收，进而发挥生物活性。术语“药学上可接受的载体”是指与治疗剂一同给药的辅料，并且其在合理的医学判断的范围内适于接触人类和/或其它动物的组织而没有过度的毒性、刺激性、过敏反应或与合理的益处/风险比相应的其它问题或并发症。在本发明中可使用的药学上可接受的载体包括(但不限于)：a)稀释剂；b)润滑剂；c)粘合剂；d)崩解剂；e)吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂；f)乳化剂或分散剂；和/或g)增强化合物的吸收的试剂。
[0226]
本发明提供了一种药物组合物，其包含上述式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物。
[0227]
在一些实施方案中，上述药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的载体。
[0228]
上述药物组合物可以系统地作用和/或局部地作用。为此目的，它们可以通过适合的途径给药，例如通过胃肠外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、真皮内、经皮、直肠、颅内、腹膜内、鼻内、肌内、吸入途径或者医药领域技术人员熟知的所有方式施用。上述药物组合物可以与至少一种具有疾病或病症治疗效果的其他治疗剂联合给药。
[0229]
上述给药途径可以通过适合的剂型来实现。在本发明中可使用的剂型包括(但不限于)：片剂、胶囊剂、锭剂、硬糖剂、散剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、水性混悬剂、可注射溶液剂、酏剂、糖浆剂等。
[0230]
上述药物组合物可以包含0.01mg至1000mg的至少一种上述式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物。
[0231]
本发明还提供了上述药物组合物或其相应的制剂形式的制备方法，其包括将至少一种上述式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物与一种或多种药学上可接受的载体组合。
[0232]
[药品]
[0233]
术语“药品”是指包含治疗剂、任选的其他治疗剂和任选的包装和/或说明书的组合产品。
[0234]
本发明提供了一种药品，其包含：
[0235]
a)上述式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，或者上述药物组合物；
[0236]
b)任选存在的包装和/或说明书。
[0237]
上述药品可以包含0.01mg至1000mg的至少一种上述式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物。
[0238]
本发明还提供了上述药品的制备方法，其包括将上述式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，或者上述药物组合物，与任选存在的包装和/或说明书组合。
[0239]
[医药用途]
[0240]
本发明的化合物能够对ups7表现出较强的抑制作用，可以用作ups7抑制剂。因此，本发明提供了上述式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，或者上述药物组合物，或者上述药品，用作ups7抑制剂的用途。
[0241]
另外，本发明还提供了上述式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，或者上述药物组合物，或者上述药品，在制备用于预防和/或治疗至少部分由ups7介导的疾病或病症(尤其是癌症)的药物中的用途。
[0242]
术语“至少部分由ups7介导的疾病或病症”是指发病机理中至少包含一部分与ups7有关的因素的疾病，这些疾病包括(但不限于)癌症、神经退行性疾病(如阿尔茨海默氏症、帕金森氏症等)、糖尿病、骨和关节病、关节炎症性病症、骨质疏松症、免疫性病症、心血管疾病、局部缺血性疾病、病毒性感染和疾病、细菌性感染和疾病等。
[0243]
[治疗方法]
[0244]
本发明提供了一种用于预防和/或治疗至少部分由ups7介导的疾病(尤其是癌症)的方法，其包括下列步骤：将预防和/或治疗有效量的上述式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物(例如水合物)、立体异构体、互变异构体、多晶型物、同位素标记物、代谢物、前药或其混合物，或者上述药物组合物，或者上述药品，施用于对其有需求的个体。
[0245]
术语“有效量”是指能够诱发细胞、组织、器官或生物体(例如个体)产生生物或医
学反应，并且足以实现所需预防和/或治疗效果的剂量。可调整给药方案以提供最佳响应。例如，可单次给药，可随时间分剂量给药，或可根据实际情况按比例减少或增加剂量后给药。可以理解的是，对于任何特定个体，具体的给药方案应根据需要以及给药人员的专业判断而调整。另外，也要区分是预防性应用，还是治疗性应用。在预防性应用中，通常以相对长的间隔长期给予相对低的剂量。在治疗性应用中，则通常以相对短的间隔给予相对高的剂量，直至疾病的进展被延缓或停止，优选直至个体表现出症状的部分或完全改善。
[0246]
在本发明中，进行合适的体外或体内测定来确定化合物、药物组合物和/或药品的效果以及给药是否适用于治疗个体所患疾病或病症。这些测定的实例将在下文非限制性实施例中进行描述。通常，足以实现预防和/或治疗效果的化合物的有效量为约0.001mg/千克体重/天至约10,000mg/千克体重/天。在合适的情况下，有效量为约0.01mg/千克体重/天至约1,000mg/千克体重/天。在更普遍的情况下，有效量为每天、每两天或每三天约0.01～1,000mg/千克体重，优选约0.1～500mg/千克体重。示例性的治疗方案为每两天一次或每周一次或每月一次给药。
[0247]
术语“治疗”是指减轻或消除所针对的疾病或病症。如果受试者接受了治疗量的本发明的化合物或其药学上可接受的形式或者本发明的药物组合物，该受试者的至少一种指标和症状表现出可观察到的和/或可检测出的缓解和/或改善，则表明该受试者已被成功地“治疗”。可以理解的是，治疗不仅包括完全地治疗，还包括未达到完全地治疗，但实现了一些生物学或医学相关的结果。具体而言，“治疗”表示本发明的化合物或其药学上可接受的形式或者本发明的药物组合物可以实现下列效果中的至少一种：(1)在可能有疾病倾向，但尚未经历或显示疾病病理学或症状学的动物中防止疾病发生；(2)在正在经历或显示疾病病理学或症状学的动物中抑制疾病(即阻止病理学和/或症状学的进一步发展)；(3)在正在经历或显示疾病病理学或症状学的动物中改善疾病(即逆转病理学和/或症状学)。
[0248]
术语“施用(administrate/administrating/administration)”(或“给药”)是指将药物活性成分(比如本发明的化合物)或包含药物活性成分的药物组合物(例如本发明的药物组合物)应用于个体或其细胞、组织、器官、生物流体等部位，以便使药物活性成分或药物组合物与个体或其细胞、组织、器官、生物流体等部位接触的过程。常见的施用方式包括(但不限于)口服施用、皮下施用、肌内施用、腹膜下施用、眼部施用、鼻部施用、舌下施用、直肠施用、阴道施用等。
[0249]
术语“对其有需求”是指医生或其他护理人员对个体需要或者将要从预防和/或治疗过程中获益的判断，该判断的得出基于医生或其他护理人员在其专长领域中的各种因素。
[0250]
术语“个体”(或称受试者)是指人类或非人动物。本发明的个体包括患有疾病和/或病症的个体(患者)和正常的个体。本发明的非人动物包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物，例如鸟类、两栖类、爬行类等，和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。
[0251]
为了使本发明的目的和技术方案更加清楚，以下结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
[0252]
实施例中所使用的试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规
产品。未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行。本发明中所使用的术语“室温”是指20℃
±
5℃。在用于修饰某一数值或数值范围时，本发明中所使用的术语“约”是指包括该数值或数值范围以及该数值或数值范围的本领域技术人员可接受的误差范围，例如该误差范围为
±
10％、
±
5％、
±
4％、
±
3％、
±
2％、
±
1％、
±
0.5％等。
[0253]
在常规的合成法以及实施例和中间体合成例中，各缩写的含义如下表所示。
[0254]
缩写含义缩写含义dmfn,n-二甲基甲酰胺boc叔丁氧羰基tf三氟甲磺酰基thf四氢呋喃diad偶氮二甲酸二异丙酯dead偶氮二甲酸二乙酯dcm二氯甲烷dmso二甲基亚砜dipean,n-二异丙基乙胺pd2(dba)3三(二亚苄基丙酮)二钯pd(pph3)2cl2双(三苯基磷)二氯化钯pd(dppf)cl2[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯h小时pph3三苯基膦addp偶氮二甲酰二哌啶tol甲苯et2o乙醚n-buli正丁基锂t-buli叔丁基锂lihmds二(三甲基硅基)氨基锂nahmds二(三甲基硅基)氨基钠ea乙酸乙酯acn乙腈et3n三乙胺t-buok叔丁醇钾meona甲醇钠diox1,4-二氧六环pd(pph3)4四(三苯基膦)钯pd(oac)2醋酸钯dibal二异丁基氢化铝dcso二氯亚砜
ꢀꢀ
[0255]
以下实施例中记载的化合物的结构通过核磁共振(1h-nmr)和/或质谱(ms)来确定。
[0256]
核磁共振(1h-nmr)的测定仪器使用bruker 400mhz核磁共振仪，测定溶剂为氘代甲醇(cd3od)、氘代氯仿(cdcl3)、六氘代二甲基亚砜(dmso-d6)或氘代水(d2o)，内标物质为四甲基硅烷(tms)。
[0257]
以下实施例中的核磁共振(nmr)数据中的缩写代表的含义如下：
[0258]
s：单峰(singlet)、d：二重峰(doublet)、t：三重峰(triplet)、q：四重峰(quartet)、dd：双二重峰(double doublet)、qd：四二重峰(quartet doublet)、ddd：双双二重峰(double double doublet)、ddt：双双三重峰(double double triplet)、dddd：双双双二重峰(double double double doublet)、m：多重峰(multiplet)、br：宽峰(broad)、j：偶合常数、hz：赫兹、δ：化学位移。
[0259]
全部化学位移(δ)值以百万分之一(ppm)的单位给出。
[0260]
质谱(ms)的测定仪器使用agilent 6120b质谱仪，离子源为电喷雾离子源(esi)。
[0261]
本发明的实施例采用如下所示方法进行制备型薄层色谱(prep-tlc)纯化：
[0262]
采用烟台新诺化工有限公司生产的薄层层析硅胶板(厚度为1mm，规格为200
×
200mm，粘结剂为羧甲基纤维素钠)，检测仪器为zf-20d暗箱式紫外分析仪，检测波长为254nm和/或365nm。
[0263]
本发明的实施例采用如下所示方法进行制备型高效液相色谱(prep-hplc)纯化：
[0264]
方法a：
[0265]
色谱柱：waters sunfire prep c18obd 5μm 19
×
150mm；
[0266]
流动相a：乙腈；流动相b：水(含有0.05wt％甲酸)；
[0267]
时间(min)流动相a(v％)流动相b(v％)流速(ml/min)0.0010.090.02818.0090.010.028
[0268]
方法b：
[0269]
色谱柱：waters sunfire prep c18obd 5μm 19
×
150mm；
[0270]
流动相a：乙腈；流动相b：水(含有0.05wt％碳酸氢铵)；
[0271]
时间(min)流动相a(v％)流动相b(v％)流速(ml/min)0.0010.090.02818.0090.010.028
[0272]
[化合物制备及鉴定]
[0273]
实施例一：3-((3-(5-氯-3-甲基-2-(哌啶-4-基氧基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(化合物1)的合成。
[0274][0275]
步骤一：4-(2-溴-4-氯-6-甲基苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物1-2)的合成：
[0276]
将化合物1-1(8.80g，39.75mmol)、4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.00g，19.87mmol)、pph3(10.43g，39.75mmol)、干燥的thf(240ml)依次加入反应瓶中。在0℃下，滴加diad(7.8ml，39.75mmol)。滴毕，缓慢升至室温反应16h。减压浓缩反应液，经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝23/2，v/v)，得标题化合物5.45g。
[0277]
esi-ms:m/z 347.8,349.8[m-56 h]

。
[0278]
步骤二：4-(4-氯-2-甲基-6-(三丁基锡基)苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物1-3)的合成：
[0279]
在-40℃下，将n-buli的正己烷溶液(2.5mol/l，7.41ml)滴加到化合物1-2(5.00g，
12.35mmol)的tol(50ml)溶液中。反应0.5h后，滴加三丁基氯化锡(4.02ml，14.82mmol)。滴毕，缓慢升至0℃反应3h。加水(20ml)淬灭反应，ea萃取(3
×
25ml)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液后，经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝20/1，v/v)，得标题化合物6.31g。
[0280]1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ7.16-7.04(m,2h),4.11(brs,2h),3.99-3.90(m,1h),2.69(t,j＝11.9hz,2h),2.23(s,3h),1.89(d,j＝11.2hz,2h),1.59-1.48(m,7h),1.46(s,9h),1.45-1.39(m,1h),1.32(h,j＝7.3hz,6h),1.17-0.98(m,6h),0.89(t,j＝7.3hz,9h)。
[0281]
步骤三：3-碘-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-羧酸甲酯(化合物1-5)的合成：
[0282]
将化合物1-4(1.00g，3.25mmol)加入到甲醇(30ml)中。室温下，滴加meona的甲醇溶液(1ml，33wt％)，反应0.5h。再加入碘甲烷(0.61ml，9.74mmol)，反应2h后，补加碘甲烷(0.61ml，9.74mmol)，继续反应2h。减压浓缩反应液，经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷＝100％，v)，得标题化合物484mg。
[0283]1h-nmr(400mhz,cdcl3):δ7.89(s,1h),4.13(s,3h),3.92(s,3h)。
[0284]
esi-ms:m/z 322.9[m h]

。
[0285]
步骤四：3-(2-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基氧基)-5-氯-3-甲基苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-羧酸甲酯(化合物1-6)的合成：
[0286]
在反应瓶中依次加入化合物1-5(350mg，1.09mmol)、化合物1-3(802mg，1.30mmol)、cui(414mg，2.17mmol)、diox(17.5ml)，氮气保护下，加入pd(pph3)4(251mg，0.22mmol)，升温至110℃反应8h。停止加热，冷至室温。过滤，滤液减压浓缩后，经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3/1，v/v)，得标题化合物466mg。
[0287]
esi-ms:m/z 519.8,521.8[m h]

。
[0288]
步骤五：4-(4-氯-2-(5-(羟基甲基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)-6-甲基苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物1-7)的合成：
[0289]
将化合物1-6(400mg，0.77mmol)溶于thf(10ml)，在0℃下滴加lialh4的thf溶液(0.6ml，1.54mmol)。滴毕，继续反应1.5h。加水(1ml)淬灭反应，减压浓缩反应液，经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1，v/v)，得标题化合物314mg。
[0290]
esi-ms:m/z 491.8,493.8[m h]

。
[0291]
步骤六：4-(4-氯-2-(5-(氯甲基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)-6-甲基苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物1-8)的合成：
[0292]
将化合物1-7(150mg，0.30mmol)溶于dcm(3ml)中，冷至0℃后，加入dcso(0.04ml，0.61mmol)，继续搅拌0.5h。减压浓缩反应液，得标题化合物150mg。
[0293]
esi-ms:m/z 509.6,511.7[m h]

。
[0294]
步骤七：4-(4-氯-2-(5-((6,6-二甲基-2,4-二氧代-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-3-基)-6-甲基苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物1-9)的合成：
[0295]
将6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(82mg，0.59mmol)溶于dmf(1.5ml)中，冷至0℃后，加入nah(23mg，0.59mmol，60％)，反应0.5h。再滴加化合物1-8(150mg,0.29mmol)的dmf(1.5ml)溶液，滴毕，升至室温反应4.5h。加水淬灭反应，用ea(2ml)稀释，用水(3
×
5ml)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，经制备型高效液相色谱
纯化(方法a)，制备液减压浓缩，冷冻干燥，得标题化合物129mg。
[0296]
esi-ms:m/z 612.8,614.8[m h]

。
[0297]
步骤八：3-((3-(5-氯-3-甲基-2-(哌啶-4-基氧基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(化合物1)盐酸盐的合成：
[0298]
在反应瓶中加入化合物1-9(100mg，0.13mmol)，再加入盐酸/乙酸乙酯溶液(2ml，4mol/l)，室温反应1h。减压浓缩反应液后，经制备型高效液相色谱分离纯化(方法a)，制备液减压浓缩，制备液加入盐酸(0.5ml，1mol/l)，冷冻干燥，得标题化合物盐酸盐68mg。
[0299]1h-nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.68(brs,1h),8.33(brs,1h),7.52(d,j＝2.5hz,1h),7.41(d,j＝2.6hz,1h),7.10(s,1h),4.65(s,2h),3.90(s,3h),3.79(dt,j＝7.7,4.1hz,1h),2.87-2.60(m,4h),2.57(s,2h),2.34(s,3h),1.73-1.59(m,2h),1.44-1.28(m,2h),1.16(s,3h),0.99(s,3h)。
[0300]
esi-ms:m/z 513.0,515.0[m h]

。
[0301]
实施例二：3-((3-(5-氯-3-甲基-2-(1-甲基哌啶-4-基氧基)苯基)-2-甲基-2h-噻吩并[3,2-c]吡唑-5-基)甲基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,4-二酮(化合物8)的合成。
[0302][0303]
在反应瓶中加入化合物1的盐酸盐(26mg，0.05mmol)，用乙腈(1ml)溶解。滴加甲醛水溶液(0.05ml，37-40％purity)，室温反应20分钟后，加入氰基硼氢化钠(9mg，0.14mmol)，室温反应3h。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，ea萃取(3
×
2ml)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液后，经制备型高效液相色谱分离纯化(方法b)，制备液冷冻干燥，得标题化合物14mg。
[0304]1h-nmr(400mhz,cd3od):δ7.38(d,j＝2.4hz,1h),7.22(d,j＝2.6hz,1h),7.03(s,1h),4.69(s,2h),3.88(s,3h),3.54(brs,1h),2.44(s,2h),2.34(s,3h),2.33-2.11(m,2h),2.06(s,3h),1.89(brs,2h),1.51(brs,2h),1.43(brs,2h),1.20(s,3h),1.04(s,3h)。
[0305]
esi-ms:m/z 527.2,529.1[m h]

。
[0306]
[药理活性测试]
[0307]
试验例一：usp7(蛋白酶)体外酶学活性抑制试验。
[0308]
1、试验系统：
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蛋白酶：his6-usp7(bostonbiochem)；
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底物：泛素-罗丹明110(bostonbiochem)；
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缓冲液：5
×
usp7分析缓冲液(bps)。
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2、试验参数：
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usp7浓度：3nm；
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泛素-罗丹明110浓度：100nm；
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缓冲液体系：1.25
×
usp7分析缓冲液；0.06％bsa；1mm dtt；ddh2o；
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反应温度：25℃；
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化合物和酶孵育时间：20min；
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酶动力学反应时间：20min；
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酶标仪参数：bmg pherastar fs荧光酶标仪，激发波长485nm，发射波长520nm。
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3、试验方法：
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按照试剂盒说明书进行试验，步骤如下：
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测试组：将待测化合物和蛋白酶usp7的混合物在缓冲液体系下25℃孵育20min，加入底物泛素-罗丹明110启动反应，采用酶动力学方法，读取各孔的荧光值。
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阴性组：用0.2％dmso水溶液代替待测化合物，实验方法与测试组相同。
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空白组：用0.2％dmso水溶液代替待测化合物，并且不加蛋白酶usp7，实验方法与测试组相同。
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4、数据处理：
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计算各浓度组的相对抑制活性，抑制率(％)＝100％-(测试组的荧光值-空白组的荧光值)/(阴性组的荧光值-空白组的荧光值)
×
100％。按照四参数模型拟合曲线，计算化合物的半数抑制浓度(ic
50
)。
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5、试验结果：
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按照上述方法测定本发明的化合物对usp7活性的抑制，结果如表1中所示。
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表1.usp7酶活抑制试验结果
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实施例编号ic
50
(nm)113.39
±
0.04236.26
±
2.52
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在usp7酶活抑制试验中，本发明的化合物表现出极强的抑制活性。
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除本文中描述的那些实施方案外，根据前述描述，本发明的多种修改对本领域技术人员而言会是显而易见的。这样的修改也意图落入所附权利要求书的范围内。本发明中所引用的各参考文献(包括所有专利、专利申请、期刊文章、书籍及任何其它公开)均以其整体援引加入本文。