绿原酸钠水合物及其应用的制作方法

1.本发明属于药物化学技术领域，尤其涉及一种绿原酸钠水合物及其应用。


背景技术：

2.绿原酸(chlorogenic acid)，又名咖啡单宁酸或咖啡鞣酸，是由咖啡酸(caffeic acid)与奎宁酸(金鸡纳酸，quinic acid)缩合形成缩酚酸，是植物体有氧呼吸代谢的产物。绿原酸化学名为5-氧-咖啡酰奎宁酸(5-o-caffeoylquinic acid)，分子式：c
16
h
18
o9，分子量：354.31，结构式如下所示。
[0003][0004]
绿原酸是一种重要的生物活性物质，现有技术公开了其具有多种用途：包括抗肿瘤，治疗自身免疫性疾病，抗氧化、抗衰老、抗肌肉骨骼老化，保护心血管：治疗心肌病等；虽然绿原酸具有很好的药理活性，但由于其稳定性较差，制备的注射剂需要在偏酸性的条件下才能维持稳定。中国专利cn201310366945.0公开了一种冻干粉针剂的制备方法，该制剂主要包括绿原酸、支架及与抗氧剂，采用磷酸盐作为缓冲液，ph值为3～3.5，较低，而且由于绿原酸在水中的溶解度仅为2％左右，导致该制剂在进行临床试验时注射体积较大，刺激性较高。


技术实现要素：

[0005]
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种绿原酸钠水合物及其应用，本发明提供的绿原酸钠水合物稳定性好、溶解度高、可减小注射给药体积、刺激性小，能够大大拓展绿原酸的临床应用。
[0006]
本发明提供了一种绿原酸钠一水合物。相比绿原酸，绿原酸钠一水合物具有较高的稳定性与溶解度，且在水中的ph值近中性，可较小注射给药体积，降低注射给药局部的刺激性，更加适合开发成注射剂。
[0007]
优选的，以cu-kα为辐射源，所述绿原酸钠一水合物的x-射线粉末衍射的衍射角2θ在6.883
±
0.1
°
、13.208
±
0.1
°
、13.858
±
0.1
°
、14.850
±
0.1
°
、18.803
±
0.1
°
、19.437
±
0.1
°
、20.831
±
0.1
°
、22.221
±
0.1
°
与23.337
±
0.1
°
中的至少3处具有特征峰。
[0008]
优选的，以cu-kα为辐射源，所述绿原酸钠一水合物的x-射线粉末衍射的衍射角2θ在14.850
±
0.1
°
处特征峰的相对强度为100％；在6.883
±
0.1
°
处特征峰的相对强度不低于60％；在13.858
±
0.1
°
处特征峰的相对强度不低于10％；在19.437
±
0.1
°
处特征峰的相对响度不低于10％；在23.337
±
0.1
°
处特征峰的相对强度不低于10％。
[0009]
优选的，以cu-kα为辐射源，所述绿原酸钠一水合物的x-射线粉末衍射2θ的特征峰
包括以下的至少三种：
[0010][0011]
优选的，以cu-kα为辐射源，所述绿原酸钠一水合物具有图1所示的x-射线粉末衍射图谱。
[0012]
优选的，所述绿原酸钠一水合物通过差示扫描量热分析包含两个吸热峰与一个放热峰；所述吸热峰位于130℃～135℃与240℃～245℃；放热峰位于245℃～250℃。
[0013]
优选的，所述吸热峰峰值为133.72℃与242.94℃；放热峰峰值为247.36℃。
[0014]
本发明还提供了一种绿原酸钠一水合物的制备方法，包括：：
[0015]
将绿原酸溶于醇类溶剂中，加入乙酸钠，搅拌反应析出固体，得到绿原酸钠一水合物。
[0016]
优选的，所述绿原酸与醇类溶剂的质量体积比为1g：(10～30)ml；搅拌反应的温度为0℃～50℃；搅拌反应的时间为1～5h。
[0017]
本发明还提供了一种注射剂，包括上述的绿原酸钠一水合物。
[0018]
本发明提供了一种绿原酸钠一水合物。与现有技术相比，本发明提供的绿原酸钠一水合物具有较高的稳定性、较高的纯度及溶解度，可减小注射给药体积，并且其在水中的ph值近中性，可降低注射给药局部的刺激性，更加适合开发成注射剂。
附图说明
[0019]
图1为本发明实施例1中制备得到的绿原酸钠一水合物的x-射线粉末衍射谱图；
[0020]
图2为本发明实施例1中制备得到的绿原酸钠一水合物的dsc谱图；
[0021]
图3本发明实施例1中制备得到的绿原酸钠一水合物的tg谱图。
具体实施方式
[0022]
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都
属于本发明保护的范围。
[0023]
本发明提供了一种绿原酸钠一水合物，即绿原酸钠盐的一水化合物。该绿原酸钠一水合物稳定性好、纯度高、重现性好。
[0024]
按照本发明，以cu-kα为辐射源，所述绿原酸钠一水合物的x-射线粉末衍射的衍射角2θ在6.883
±
0.1
°
、13.208
±
0.1
°
、13.858
±
0.1
°
、14.850
±
0.1
°
、18.803
±
0.1
°
、19.437
±
0.1
°
、20.831
±
0.1
°
、22.221
±
0.1
°
与23.337
±
0.1
°
中的至少3处具有特征峰，即绿原酸钠一水合物可通过上述特征峰中的3个峰或更多峰的任意组合物表示。
[0025]
优选的，以cu-kα为辐射源，所述绿原酸钠一水合物的x-射线粉末衍射的衍射角2θ在14.850
±
0.1
°
处特征峰的相对强度为100％；在6.883
±
0.1
°
处特征峰的相对强度优选不低于60％，更优选不低于65％；在13.858
±
0.1
°
处特征峰的相对强度优选不低于10％，更优选不低于11％；在19.437
±
0.1
°
处特征峰的相对强度优选不低于10％，更优选为不低于12％，再优选为不低于13％；在23.337
±
0.1
°
处特征峰的相对强度优选不低于10％，更优选为不低于12％，再优选为不低于13％。
[0026]
更优选的，以cu-kα为辐射源，所述绿原酸钠一水合物的x-射线粉末衍射2θ的特征峰包括以下的至少三种：
[0027][0028]
再优选地，以cu-kα为辐射源，所述绿原酸钠一水合物具有图1所示的x-射线粉末衍射图谱。
[0029]
按照本发明，所述绿原酸钠一水合物通过差示扫描量热(dsc)分析包含两个吸热峰与一个放热峰；所述吸热峰位于130℃～135℃与240℃～245℃；所述吸热峰峰值优选为133.72℃与242.94℃；放热峰位于245℃～250℃；放热峰峰值优选为247.36℃；所述差示扫描量热分析时的程序升温速率优选为5～15k/min，更优选为8～12k/min，再优选为10k/min。
[0030]
按照本发明，所述绿原酸钠一水合物通过热重分析在100℃前优选失重4.2％～4.6％，更优选为4.3％～4.5％，再优选为4.344％；所述热重分析的升温速率优选为5～10k/min，更优选为5k/min。
[0031]
本发明还提供了一种上述绿原酸钠一水合物的制备方法，包括：将绿原酸溶于醇类溶剂中，加入乙酸钠，搅拌反应析出固体，得到绿原酸钠一水合物。
[0032]
其中，本发明对所有原料的来源并没有特殊的限制，为市售即可。
[0033]
将绿原酸溶于醇类溶剂中；所述醇类溶剂优选为甲醇、乙醇、正丙醇与异丙醇中的一种或多种，更优选为甲醇、乙醇、正丙醇与异丙醇中的一种或两种，再优选为甲醇和/或乙醇；所述绿原酸与醇类溶剂的质量体积比优选为1g：(10～30)ml，更优选为1g：(15～25)ml，再优选为1g：(15～22.5)ml；所述绿原酸溶于醇类溶剂时的温度优选为0℃～50℃，更优选为10℃～40℃，再优选为20℃～30℃。
[0034]
然后加入乙酸钠；所述乙酸钠优选为固体乙酸钠；所述乙酸钠与绿原酸的质量比优选为(1～5)：(10～20)，更优选为(1.3～4.6)：(10～20)；在本发明提供的一些实施例中，所述乙酸钠与绿原酸的质量比优选为1.3：10；在本发明提供的另一些实施例中，所述乙酸钠与绿原酸的质量比优选为4.6：20。
[0035]
搅拌反应；所述搅拌反应的温度优选为0℃～50℃，更优选为10℃～40℃，再优选为20℃～30℃；所述搅拌反应的时间优选为1～5h，更优选为2～3h。
[0036]
搅拌反应后析出固体，优选过滤或离心分离，得到固体产物。
[0037]
得到的固体产物优选用醇类溶剂洗涤；所述醇类溶剂优选为甲醇、乙醇、正丙醇与异丙醇中的一种或多种，更优选为甲醇、乙醇、正丙醇与异丙醇中的一种或两种，再优选为甲醇和/或乙醇。
[0038]
洗涤后，优选干燥，得到绿原酸钠一水合物；所述干燥的温度优选为30℃～70℃，更优选为40℃～50℃。
[0039]
本发明提供的绿原酸钠一水合物可以以结晶或无定形产品的形式给药。它们可以通过例如沉淀、结晶、冷冻干燥、喷雾干燥或蒸发干燥的方法获得例如固体栓、粉末或薄膜的形式。微波或无线电频率干燥可用于实现上述目的。
[0040]
本发明还提供了一种注射剂，包括上述的绿原酸钠一水合物；与绿原酸相比，本发明提供的绿原酸钠一水合物溶解度大大提高，大于140mg/ml，在水中的ph值近中性(100mg/ml时，ph值为6.7)，可减小注射给药体积，降低注射给药局部的刺激性，更加适合开发成注射剂。
[0041]
本发明还提供了一种药物制剂，包括绿原酸钠一水合物和药学上可接受的辅料。本发明的药物制剂可只包含绿原酸钠一水合物单独给药，也可联合其他药物给药。
[0042]
术语“药学上可接受的辅料”是指包括适合于所需的特定剂型的任意和所有溶剂、稀释剂或其他液体赋形剂、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。remington`s pharmaceutical sciences,sixteenth edition,e.w.maetin(mack publishing co.,easton,pa.,1980)公开了用于配制药学上可接受的组合物的各种载体和用于其制备的已知技术。除了任何常规载体介质与本发明化合物不相容以外，例如产生任何不可取得生物学效应或者以有害方式相互作用于药学上可接受的组合物的任何其他组分，它的使用涵盖在本发明的范围内。
[0043]
能够充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括，但不限于，离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；缓冲物质，例如：磷酸盐；甘氨酸；山梨酸或山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的偏苷油酯混合物；水；盐或电解质，例如：磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐；胶体
二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；聚丙烯酸酯；糖类，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓剂用蜡；油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇或聚乙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；无热原的水；等渗盐水；乙醇；以及其他无毒的可相容的润滑剂，例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁；根据制剂人员的判断，在组合物中也可以存在着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和香料、防腐剂和抗氧化剂。
[0044]
可按照常规制备方法将本发明提供的绿原酸钠一水合物配制为常规药物制剂；所述药物制剂的剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、乳剂、混浮剂、注射剂、滴剂、冻干粉针剂等。
[0045]
绿原酸钠一水合物与常用载体或稀释剂结合，其给药途径可以是口服、非肠胃给药或局部给药。
[0046]
口服给药应当包括吞咽，从而使得化合物能够进入胃肠道，也可以通过颊或舌下给药使化合物直接由嘴进入血流。
[0047]
适合口服给药的制剂包括固体制剂与液体制剂，固体制剂如片剂；含有微粒、液体或粉末的胶囊剂；锭剂(包括充满液体的锭剂)；咀嚼片剂；复微粒和纳米微粒；凝胶；固体溶液；脂质体；薄膜(包括粘膜粘着剂)；卵剂；喷雾剂；液体制剂包括混悬剂、溶液剂、糖浆剂与酏剂。这类制剂可用作软胶囊剂或硬胶囊剂的填充剂，并且通常含有载体如水、etoh、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素或者适宜的油，以及一种或多种乳化剂和/或助悬剂。液体制剂还可以通过固体从例如囊剂中配制而制备得到。
[0048]
本发明公开的化合物还可用于快速溶解、快速崩解剂型中。
[0049]
对于片剂剂型而言，除了药物之外，通常还含有崩解剂。崩解剂的实例包括羟乙酸淀粉纳、羧甲基纤维素纳、羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素纳、聚乙烯聚吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、微晶纤维素、低级烷基取代的羟丙基纤维素、淀粉、预凝胶淀粉和藻酸纳。
[0050]
粘合剂通常用于赋予片剂以粘合特性。适宜的粘合剂包括微晶纤维素、凝胶、糖类、聚乙二醇、天然和合成树胶、聚乙烯吡咯烷酮、预凝胶淀粉、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。片剂还可以含有稀释剂，例如乳糖(单水合物、喷雾干燥的单水合物、无水等)、甘露醇、木糖醇、右旋糖、蔗糖、山梨醇、微晶纤维素、淀粉和磷酸氢钙二水合物。
[0051]
片剂还任选含有表面活性剂例如十二烷基硫酸纳和聚山梨醇醋80、以及助流剂例如二氧化硅和滑石。
[0052]
片剂通常还含有润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂酰富马酸纳、以及硬脂酸镁与十二烷基硫酸钠的混合物。其它成分可以包括防腐剂、抗氧化剂、芳香剂和着色剂。
[0053]
在本发明中，术语非肠胃给药包括静脉内、肌肉内、皮下、鼻腔内、直肠内、阴道内或腹膜内给药。非肠道给药制剂通常是含有赋形剂例如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选ph为3～9)的水溶液剂，但是对于某些应用，更适合将其制成无菌的无水溶液剂或者用于与适宜的媒介质例如无菌、无热原水联合使用的干燥形式。采用本领域技术人员熟知的常规制药技术可以方便地在无菌条件下通过冻干法完成非肠道给药制剂的制备。
[0054]
在本发明中绿原酸钠一水合物还可以局部给药，可以局部给药至皮肤或粘膜，既可以皮肤给药也可以透皮给药。用于该目的的典型制剂包括凝胶剂、水凝胶、洗剂、溶液剂、乳剂、软膏剂、扑粉、调味品、泡沫、薄膜、皮肤贴剂、糯米纸囊剂、植入剂、棉球、纤维、绷带和微乳剂，还可以使用脂质体。典型的载体包括醇、水、矿物油、液体石蜡、白凡士林、甘油和丙二醇。典型的制剂还可以含有穿透促进剂。
[0055]
在本发明中，绿原酸钠一水合物的给药形式优选注射给药或口服给药。
[0056]
其中，所述注射给药所用的制剂类型优选为注射剂或冻干粉针剂；所述注射剂的溶剂与冻干粉针剂所用的复溶剂为本领域技术人员熟知的水性溶性及与非水溶剂即可。所述水性溶剂最常用的为注射用水，也可以用0.9％氯化钠溶液或其他适宜的水溶液；非水性溶剂常用的为植物油，主要为注射用大豆油及其他非水溶剂乙醇、丙二醇、聚乙二醇和甘油等。
[0057]
本发明还提供了绿原酸钠一水合物的应用，绿原酸作为药品及保健品在抗肿瘤、治疗自身免疫性疾病、抗氧化、抗衰老、抗肌肉骨骼老化、保护心血管、增加骨髓细胞、治疗血小板减少症、贫血、治疗脾脏造血干细胞损伤、治疗骨髓纤维化、治疗荨麻疹、治疗银屑病、治疗骨硬化病、促进成纤维细胞增殖、保肝、治疗癫痫、治疗骨髓感染、治疗肌萎缩性脊髓侧索硬化症、治疗帕金森病、抗病毒、抗菌等方面的作用已被证实，本发明的绿原酸钠一水合物具有同样的生理活性以及比绿原酸更好的临床应用价值。
[0058]
因此，本发明还提供了绿原酸钠一水合物在制备抗氧化、清除自由基、提高中枢兴奋、扩张血管、保肝利胆、抗艾滋病毒或抗菌消炎药物或保健品中的应用。
[0059]
本发明还提供了绿原酸钠一水合物在制备治疗和/或预防肿瘤、炎性疾病或自身免疫性疾病的药物中的用途。
[0060]
本发明所述肿瘤包括实体瘤和非实体瘤；在本发明中所述肿瘤包括但不限于黑色素瘤、胰腺癌、结直肠癌、肺癌、肝癌、胃癌、喉癌、鼻咽癌、食道癌、多发性骨髓瘤、淋巴癌、白血病、膀胱癌、前列腺癌、胆管癌、宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌、皮肤癌等。
[0061]
本发明所述的自身免疫疾病包括但不限于系统性红斑狼疮、银屑病、类风湿性关节炎、硬皮病等。
[0062]
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种绿原酸钠水合物及其应用进行详细描述。
[0063]
以下实施例中所用的试剂均为市售。
[0064]
用于本发明的检测设备如下：
[0065]
粉末x-射线衍射分析：
[0066]
日本rigaku d/max-2550粉末x-射线衍射仪，测试条件：cu-kα辐射，管流150ma，管压40kv，扫描速度8
°
/分，步长0.02。
[0067]
差示扫描量热分析(dsc)
[0068]
瑞士mettler dsc1热分析仪，起始温度30℃；终止温度250℃；升温速率10k/min。
[0069]
热重分析(tg)
[0070]
测试仪器：瑞士mettler tga/dsc1热分析仪，参数设置：起始温度30℃；终止温度500℃；升温速率5k/min。
[0071]
实施例1
[0072]
将20.0g绿原酸、400ml乙醇、50ml甲醇加入反应瓶中，20～30℃搅拌溶清，加入乙酸钠固体4.6g，20～30℃搅拌3h，过滤，100ml乙醇洗涤滤饼，40℃减压干燥得类白色粉末18.0g，即绿原酸钠一水合物。
[0073]
利用x-射线粉末衍射对实施例1中得到的绿原酸钠一水合物进行分析，得到其x-射线粉末衍射谱图，如图1所示。
[0074]
对实施例1中得到的绿原酸钠一水合物进行dsc分析，得到其dsc谱图如图2所示。由图2可知，绿原酸钠一水合物在dsc中存在两个吸热峰和一个放热峰，其中吸热peak峰值为133.72℃、242.94℃，放热peak峰值为247.36℃。
[0075]
对实施例1中得到的绿原酸钠一水合物进行tg分析，得到其tg谱图，如图3所示。由图3可知，100℃之前失重4.344％，结合水分测定结果5.26％，由此表明样品中含有一分子结晶水，理论含水量4.56％。
[0076]
取实施例1中得到的绿原酸钠一水合物溶于水中，制备得到100mg/ml的水溶液，测定其ph值为6.7。
[0077]
绿原酸、绿原酸钠一水合物在水中溶解性的测定(25℃)，称取一定量的原料，加入一定的水，考察完全溶解的溶剂体积，并计算溶解浓度，结果见下表：
[0078][0079]
由上表可见，绿原酸钠盐一水合物的溶解度比绿原酸提高了9倍(以c
16
h
18
o9计)。
[0080]
参照药物稳定性指导原则(2015年版中国药典四部通则9001)对实施例1中得到的绿原酸钠一水合物进行了影响因素试验，以考虑其稳定性，得到结果见表1。
[0081]
表1绿原酸钠一水合物的稳定性测试结果
[0082][0083]
试验结果表明，本发明绿原酸钠一水合物物理化学性质稳定，在影响因素试验有关物质，晶型未改变。
[0084]
实施例2
[0085]
将10.0g绿原酸、150ml乙醇加入反应瓶中，20～30℃搅拌溶清，加入乙酸钠固体1.3g，20～30℃搅拌4h，过滤，50ml乙醇洗涤滤饼，50℃减压干燥得类白色粉末17.6g，即绿原酸钠一水合物。
[0086]
利用x-射线粉末衍射对实施例2中得到的绿原酸钠一水合物进行分析，得到其x-射线粉末衍射谱图，按照本发明，以cu-kα为辐射源，所述绿原酸钠一水合物的x-射线粉末衍射的衍射角2θ在6.851
°
、13.162
°
、13.836
°
、14.817
±
0.1
°
、18.732
°
、19.413
°
、20.808
°
、22.205
°
与23.309
°
处具有特征峰，与实施例一的绿原酸钠一水合物具有相同的特征峰，晶型一致。
[0087]
对比例1
[0088]
将绿原酸10.0g，乙醇200.0ml投入500ml三口瓶中，搅拌溶清，体系为棕色溶液，缓慢滴加乙酸钠(2.31g，1.0eq)/甲醇(25.0ml)溶液，溶液有固体析出，滴加时间20min。滴毕，体系中有大量固体析出。降温体系至0℃，保持温度搅拌40min。体系搅拌较流畅，过滤，滤饼以30.0ml乙醇洗涤，滤饼仍有溶胀现象。将产品在40℃下真空干燥7h。得棕色硬颗粒状产品10.86g。该方法仍存在溶胀现象，放弃使用。
[0089]
实施例3：家兔肌肉注射绿原酸钠一水合物刺激性试验
[0090]
1.待测溶液的配制
[0091]
绿原酸溶液的配制：取绿原酸150mg，加入400mg甘露醇，加注射用水溶解，定容至10ml，过滤除菌即得15mg/ml绿原酸。
[0092]
绿原酸钠一水合物溶液的配制：取实施例1中得到的绿原酸钠一水合物150mg(以绿原酸计算)，加入400mg甘露醇，加注射用水溶解，定容至10ml，过滤除菌即得15mg/ml绿原
酸一水合物。
[0093]
2.试验步骤
[0094]
取雌性日本大耳白兔共3只，采用同体左右侧自身对比法，3只动物均左侧肌肉注射15mg/ml绿原酸钠一水合物，右侧肌肉注射15mg/ml绿原酸注射液。每天1次，连续给药7天，注射体积均为0.3ml。
[0095]
3.试验结果
[0096]
试验结果见表2，结果表明绿原酸钠一水合物肌肉注射给药刺激性较绿原酸小。
[0097]
表2局部刺激试验病理组织学观察结果
[0098][0099][0100]
注：“—”：未见明显异常(no significant lesion)；“ ”：轻微病变(slight)；“2 ”：轻度病变(mild)；“3 ”：中度病变(moderate)；“4 ”：重度病变(severe)。