BmSPI39的同型串联多聚体及其构建方法和应用与流程

技术特征：
1.bmspi39的同型串联多聚体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：s1，设计并合成串联多聚体引物bmspi39
‑
nde i
‑
bamh i
‑
f、bmspi39
‑
not i
‑
r、bmspi39
‑
bgl ii
‑
r和bmspi39
‑
l
‑
bgl ii
‑
r，以bmspi39
‑
p28为模板扩增获得目的基因片段，回收目的片段后与t载体连接，然后转入感受态细胞，培养后筛选阳性克隆，分别记为，nde i/bamh i
‑
spi39
‑
not i、nde i/bamh i
‑
spi39
‑
bgl
ꢀⅱ
、nde i/bamh i
‑
spi39l
‑
bgl
ꢀⅱ
；所述引物bmspi39
‑
nde i
‑
bamh i
‑
f的核苷酸序列如seq id no.1所示；所述引物bmspi39
‑
not i
‑
r的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述引物bmspi39
‑
bgl ii
‑
r的核苷酸序列如seq id no.3所示；所述引物bmspi39
‑
l
‑
bgl ii
‑
r的核苷酸序列如seq id no.4所示；s2，利用nde i和not i双酶切，将nde i/bamh i
‑
spi39
‑
not i从t载体上切下，连接到p28载体上，成功构建bmspi39单体的表达载体bmspi39
‑
monomer；s3，同尾酶法设计并构建了bmspi39同型串联多聚体的表达载体；所述bmspi39同型串联多聚体的表达载体包括bmspi39二聚体、bmspi39三聚体和bmspi39四聚体的表达载体；s4，将获得的bmspi39单体的表达载体和bmspi39同型串联多聚体的表达载体转入大肠杆菌中，并利用iptg对其进行诱导表达，然后通过离心收集菌体、超声破碎菌体细胞，离心获得表达有bmspi39单体蛋白和bmspi39同型串联多聚体蛋白的菌体上清，然后进行蛋白纯化。2.如权利要求1所述的bmspi39的同型串联多聚体的构建方法，其特征在于，s2中，所述bmspi39单体表达载体的构建过程具体为：用限制性核酸内切酶ndeⅰ和notⅰ分别对ndeⅰ/bamh
ⅰ‑
spi39
‑
notⅰ以及p28载体进行双酶切，在t4连接酶作用下进行连接，获得目的载体nde i/bamh i
‑
spi39
‑
not i
‑
p28，即bmspi39
‑
monomer表达载体，然后将其转化进大肠杆菌感受态细胞，进行培养、质粒提取，获得构建成功的bmspi39
‑
monomer质粒，即bmspi39单体的表达载体。3.如权利要求2所述的bmspi39的同型串联多聚体的构建方法，其特征在于，s3中，所述bmspi39二聚体表达载体的构建过程具体为：先用nde i、bgl
ꢀⅱ
内切酶对前面构建成功的重组t载体nde i/bamh i
‑
spi39
‑
bgl
ꢀⅱ
，nde i/bamh i
‑
spi39l
‑
bgl
ꢀⅱ
进行双酶切，再使用nde i和bamh i两种酶对已构建成功的bmspi39
‑
monomer进行双酶切，然后使用t4 dna连接酶分别将nde i/bamh i
‑
spi39
‑
bgl
ꢀⅱ
与bmspi39
‑
monomer以及nde i/bamh i
‑
spi39l
‑
bgl
ꢀⅱ
与bmspi39
‑
monomer进行连接，连接产物分别转化大肠杆菌感受态细胞，进行培养、质粒提取，获得构建成功的质粒bmspi39
‑
dimer和质粒bmspi39
‑
l
‑
dimer，即为bmspi39串联二聚体的表达载体。4.如权利要求3所述的bmspi39的同型串联多聚体的构建方法，其特征在于，s3中，所述bmspi39三聚体载体的构建过程具体为：用nde i、bgl
ꢀⅱ
内切酶对克隆在t载体上的nde i/bamh i
‑
spi39
‑
bgl
ꢀⅱ
，nde i/bamh i
‑
spi39l
‑
bgl
ꢀⅱ
进行双酶切，再使用nde i和bamh i两种酶对已构建成功的bmspi39
‑
dimer和bmspi39
‑
l
‑
dimer进行双酶切，然后使用t4 dna连接酶分别将nde i/bamh i
‑
spi39
‑
bgl
ꢀⅱ
与bmspi39
‑
dimer以及nde i/bamh i
‑
spi39l
‑
bgl
ꢀⅱ
与bmspi39
‑
l
‑
dimer进行连接，连接产物分别转化大肠杆菌感受态细胞，进行培养、质粒提取，获得构建成功的bmspi39
‑
trimer质粒和bmspi39
‑
l
‑
trimer质粒两种bmspi39三聚体
载体。5.如权利要求4所述的bmspi39的同型串联多聚体的构建方法，其特征在于，s3中，所述bmspi39四聚体载体的构建过程具体为：用nde i、bgl
ꢀⅱ
内切酶对克隆在t载体上的nde i/bamh i
‑
spi39
‑
bgl
ꢀⅱ
，nde i/bamh i
‑
spi39l
‑
bgl
ꢀⅱ
进行双酶切，再使用nde i和bamh i两种酶对已构建成功的bmspi39
‑
trimer和bmspi39
‑
l
‑
trimer进行双酶切，然后使用t4 dna连接酶分别将nde i/bamh i
‑
spi39
‑
bgl
ꢀⅱ
与bmspi39
‑
trimer以及nde i/bamh i
‑
spi39l
‑
bgl
ꢀⅱ
与bmspi39
‑
l
‑
trimer进行连接，连接产物分别转化大肠杆菌感受态细胞，进行培养、质粒提取，获得构建成功的bmspi39
‑
tetramer和bmspi39
‑
l
‑
tetramer载体。6.如权利要求5所述的bmspi39的同型串联多聚体的构建方法，其特征在于，s3中，所述bmspi39
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dimer质粒为不加linker的bmspi39二聚体载体，所述bmspi39
‑
l
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dimer质粒为加linker的bmspi39二聚体载体，所述bmspi39
‑
trimer载体为不加linker的bmspi39三聚体载体，所述bmspi39
‑
l
‑
trimer载体为加linker的bmspi39三聚体载体，所述bmspi39
‑
tetramer质粒为不加linker的bmspi39四聚体载体，所述bmspi39
‑
l
‑
tetramer质粒为加linker的bmspi39四聚体载体。7.如权利要求6所述的bmspi39的同型串联多聚体的构建方法，其特征在于，s4中，所述的大肠杆菌为bl21(de3)。8.如权利要求7所述的bmspi39的同型串联多聚体的构建方法，其特征在于，s4中，所述蛋白纯化方式为镍柱亲和层析纯化。9.由权利要求1
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8任一项所述的bmspi39的同型串联多聚体的构建方法制备得到的bmspi39同型串联多聚体，其特征在于，所述bmspi39同型串联多聚体包括bmspi39单体、bmspi39同型串联二聚体、bmspi39同型串联三聚体和bmspi39同型串联四聚体。10.权利要求9所述的bmspi39的同型串联多聚体在抗真菌中的应用。

技术总结
本发明涉及多聚体构建技术领域，具体公开了BmSPI39的同型串联多聚体及其构建方法和应用，通过设计并合成串联多聚体引物BmSPI39


技术研发人员：李游山 杨玺
受保护的技术使用者：陕西理工大学
技术研发日：2021.09.16
技术公布日：2021/12/13