ROS响应型线粒体靶向槲皮素脂质体及其制备方法和应用与流程

技术特征：
1.一种ros响应型线粒体靶向槲皮素脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：第1步、合成ros响应元件ros响应元件为di
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gpc，合成di
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gpc的步骤如下：(1)将羰二咪唑和c18
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cooh按照质量比3：4加入到二氯甲烷中，得到第一相溶液；(2)将1,8
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二氮杂二环[5.4.0]十一碳
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烯和甘油磷脂酰胆碱按照质量比1:1加入到二甲基亚砜中，得到第二相溶液；(3)第一相溶液和第二相溶液在30℃各搅拌1h后，将第一相溶液转移到第二相溶液中在30℃进一步反应24h，得到粗品；(4)用梯度洗脱硅胶柱层析法对粗品进行纯化，得到di
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gpc脂质；第2步、制备ros响应型槲皮素脂质体制备ros响应型槲皮素脂质体的步骤具体如下：(1)将大豆卵磷脂、di
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gpc、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇
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2000和槲皮素按照质量比17～18：5：5～6：1～2：1混合，得到药脂比为1:30的混合物，将混合物加入至圆底烧瓶中，并向圆底烧瓶中加入氯仿/甲醇混合溶剂，得到混合溶液，使用超声仪对混合溶液进行超声处理，得到黄色澄清的溶液；(2)将前一步制备得到的黄色澄清的溶液置于37℃的旋转蒸发仪上旋蒸，直至形成一层黄色薄膜，随后加入去超纯水，然后置于50℃的旋转蒸发仪上旋蒸水化，水化之后将所得溶液转移至干净西林瓶中，使用细胞破碎仪破碎，使较大的颗粒破碎为小颗粒，最终得到黄色透明液体；(3)将前一步制备得到的黄色透明液体分装到ep管中，并置于离心机中离心，得到纯度较高的槲皮素纳米脂质体，将ep管中的上清溶液转移到洗净的西林瓶中；(4)将装有上清溶液的西林瓶放入细胞破碎仪中，再次使用细胞破碎仪超声控制脂质体的粒径，最终得到黄色澄清脂质体溶液，即ros响应型槲皮素纳米脂质体溶液；第3步、向ros响应型槲皮素脂质体中添加线粒体靶向分子向ros响应型槲皮素脂质体中添加线粒体靶向分子的步骤具体如下：将聚乙二醇修饰的三苯基膦酸
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2000和上一步制备得到的ros响应型槲皮素脂质体按照2mg：3ml的比例放置于圆底烧瓶中，50℃水浴加热并磁转子不断搅拌2h，得到含有磷酸三苯酯分子的ros响应型线粒体靶向槲皮素脂质体。2.根据权利要求1所述的ros响应型线粒体靶向槲皮素脂质体的制备方法，其特征在于，在第1步中，所述c18
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cooh的合成方法如下：向质量浓度为25％的氢氧化钾甲醇溶液中加入巯基乙酸和溴代十八烷，室温下剧烈搅拌48h，然后用盐酸酸化至ph＝1，之后依次进行乙酸乙酯萃取、无水硫酸钠干燥和硅胶柱层析纯化，得到c18
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cooh。3.根据权利要求2所述的ros响应型线粒体靶向槲皮素脂质体的制备方法，其特征在于，所述巯基乙酸和溴代十八烷的摩尔比为1:1。4.根据权利要求2所述的ros响应型线粒体靶向槲皮素脂质体的制备方法，其特征在于，进行硅胶柱层析纯化时，洗脱液采用的是己烷/醋酸乙酯3:1，v/v。5.根据权利要求1所述的ros响应型线粒体靶向槲皮素脂质体的制备方法，其特征在于，在第1步中，用梯度洗脱硅胶柱层析法对粗品进行纯化时，洗脱液a采用的是二氯甲烷：
甲醇5:1，v/v；洗脱液b采用的是二氯甲烷：甲醇：水65:25:4，v/v/v。6.根据权利要求1所述的ros响应型线粒体靶向槲皮素脂质体的制备方法，其特征在于，在第2步中，在氯仿/甲醇混合溶剂中，氯仿与甲醇按照体积比3:1混合。7.一种ros响应型线粒体靶向槲皮素脂质体，其特征在于，由权利要求1至6任意一项所述方法制备而来。8.权利要求7所述的ros响应型线粒体靶向槲皮素脂质体在玻璃体注射治疗视网膜缺血再灌注损伤中的应用。9.一种ros响应型槲皮素脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将大豆卵磷脂、di
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gpc、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺
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聚乙二醇
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2000和槲皮素按照质量比17～18：5：5～6：1～2：1混合，得到药脂比为1:30的混合物，将混合物加入至圆底烧瓶中，并向圆底烧瓶中加入氯仿/甲醇混合溶剂，得到混合溶液，使用超声仪对混合溶液进行超声处理，得到黄色澄清的溶液；(2)将前一步制备得到的黄色澄清的溶液置于37℃的旋转蒸发仪上旋蒸，直至形成一层黄色薄膜，随后加入去超纯水，然后置于50℃的旋转蒸发仪上旋蒸水化，水化之后将所得溶液转移至干净西林瓶中，使用细胞破碎仪破碎，使较大的颗粒破碎为小颗粒，最终得到黄色透明液体；(3)将前一步制备得到的黄色透明液体分装到ep管中，并置于离心机中离心，得到纯度较高的槲皮素纳米脂质体，将ep管中的上清溶液转移到洗净的西林瓶中；(4)将装有上清溶液的西林瓶放入细胞破碎仪中，再次使用细胞破碎仪超声控制脂质体的粒径，最终得到黄色澄清脂质体溶液，即ros响应型槲皮素纳米脂质体溶液。10.一种ros响应型槲皮素脂质体，其特征在于，由权利要求9所述方法制备而来。

技术总结
本发明公开了一种基于ROS响应以及线粒体靶向的多功能槲皮素脂质体及其制备方法和应用。本发明使用ROS响应元件Di


技术研发人员：张竹红 赵来恩 黄艳梅 王晓杰 赵瑞康 李泽林 柳成龙
受保护的技术使用者：烟台大学
技术研发日：2021.09.15
技术公布日：2021/12/13