一株产
β
‑
烟酰胺单核苷酸的植物乳杆菌及其应用
技术领域
1.本发明涉及微生物发酵技术领域，特别涉及一株产β
‑
烟酰胺单核苷酸的植物乳杆菌及其应用。
背景技术：
2.β
‑
烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide)：简称nmn，是一种在人体细胞能量生成中的重要物质，参与细胞内烟酰胺嘌呤二核苷酸(nad )的合成，nmn作为nad 的前体，能有效防治衰老引起的各种疾病，研究表明，nmn在延缓衰老，治疗帕金森等老年病，调节胰岛素分泌，调控mrna的表达等方面具有医疗保健效果。人为补充nmn可以修复脑损伤，改善胰岛功能，保护心脏免于缺血再灌注损伤，修复脑线粒体呼吸缺陷，对老年退行性疾病，视网膜退行性疾病等均具有一定治疗作用。但目前受限于合成工艺，nmn原料价格昂贵，限制了其作为药物的应用。目前，nmn的制备主要有化学合成法、微生物发酵法和体外酶转化法。其中，化学合成法技术最为成熟，但成本高且存在产生手性化合物以及食品安全问题；体外酶转化法需要使用酶转化反应的各种底物，底物所需成本较高；微生物发酵法只需使用烟酰胺作为反应底物，成本低，但目前使用的大肠杆菌发酵法和酵母发酵法获得的产品得率较低，无法达不到商业化生产的需求。
技术实现要素：
3.本发明所要解决的技术问题是：提供一种用于制备β
‑
烟酰胺单核苷酸的菌株及使用该菌株制备β
‑
烟酰胺单核苷酸的方法。
4.为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一株产β
‑
烟酰胺单核苷酸的植物乳杆菌，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)qct009，所述植物乳杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为cgmcc no.21881。
5.上述的植物乳杆菌在制备β
‑
烟酰胺单核苷酸中的应用。
6.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸，由上述的植物乳杆菌qct009制备得到的
7.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
8.将上述的植物乳杆菌qct009进行活化，将活化后的植物乳杆菌接种于产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基中进行培养，得到培养液；所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸。
9.本发明的有益效果在于：本发明提供的植物乳杆菌qct009可用于制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，且相较于现有的微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，如大肠杆菌发酵和酵母发酵，其得率更高，解决了目前微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸得率低的问题。
具体实施方式
10.为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
11.本发明最关键的构思在于：从纳豆表面筛选获得一种产β
‑
烟酰胺单核苷酸的菌株。
12.本发明提供一株产β
‑
烟酰胺单核苷酸的植物乳杆菌，采用下述方法培养获得：
13.选取品相新鲜良好的纳豆，加入适量无菌生理盐水在，在无菌环境下，使用无菌勺子(或无菌搅拌棒)反复搅拌，使纳豆表面微生物悬浮于无菌生理盐水中，然后取0.2ml悬浮有微生物的生理盐水于无菌固体平板培养基中，涂布均匀，于28℃培养箱培养2
‑
5天至培养皿表面长出单菌落，挑取单菌落于液体培养基中培养，培养结束后测培养基中的nmn含量，挑选最优菌株。培养的条件为：温度：28
‑
30℃；转速：0
‑
50rpm；培养时间：72
‑
240h。
14.固体平板培养基和液体培养基中均包括姬松茸提取物2
‑
5重量份、猴头菇提取物2
‑
10重量份、酵母粉1
‑
5重量份、低聚果糖0.2
‑
5重量份、烟酰胺0.1
‑
2重量份。
15.所述菌株qct009，保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期为：2021年03月09日；种名：植物乳杆菌；拉丁文名称：lactobacillus plantarum；菌株名：qct009；保藏编号：cgmcc no.21881。
16.植物乳杆菌qct009在制备β
‑
烟酰胺单核苷酸中的应用。
17.一种由上述的植物乳杆菌qct009制备得到的β
‑
烟酰胺单核苷酸。
18.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
19.将植物乳杆菌qct009进行活化，将活化后的植物乳杆菌接种于产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基中进行培养，得到培养液；所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸。
20.从上述描述可知，本发明的有益效果在于：本发明提供的植物乳杆菌qct009可用于制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，且相较于现有的微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，如大肠杆菌发酵和酵母发酵，其得率更高，解决了目前微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸得率低的问题。为β
‑
烟酰胺单核苷酸的产业化生产提供了可能。
21.进一步的，所述植物乳杆菌接的接种量为1
‑
5％。
22.进一步的，培养的条件为：温度：28
‑
30℃；转速：0
‑
50rpm；培养时间：72
‑
240h。
23.进一步的，所述产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基包括姬松茸提取物2
‑
5重量份、猴头菇提取物2
‑
10重量份、酵母粉1
‑
5重量份、低聚果糖0.2
‑
5重量份、烟酰胺0.1
‑
2重量份。
24.由上述描述可知，通过优化植物乳杆菌qct009发酵的条件后和培养基后，保证了其制备β
‑
烟酰胺单核苷酸的高得率。
25.实施例1：
26.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
27.将植物乳杆菌qct009进行活化，将活化后活化液按1％的接种量接种于200ml的产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基中进行培养，得到培养液；
28.培养的条件为：温度：28℃；转速：30rpm；培养时间：120h；
29.所述产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基由姬松茸提取物5g、猴头菇提取物5g、酵母粉3g、低聚果糖3g、烟酰胺1g和余量的无菌水组成；
30.所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸。
31.实施例2：
32.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
33.将植物乳杆菌qct009进行活化，将活化后活化液按1％的接种量接种于200ml的产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基中进行培养，得到培养液；
34.培养的条件为：温度：28℃；转速：50rpm；培养时间：72h；
35.所述产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基由姬松茸提取物4g、猴头菇提取物10g、酵母粉5g、低聚果糖5g、烟酰胺2g和余量的无菌水组成；
36.所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸。
37.实施例3：
38.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
39.将植物乳杆菌qct009进行活化，将活化后活化液按1％的接种量接种于200ml的产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基中进行培养，得到培养液；
40.培养的条件为：温度：28℃；转速：0rpm；培养时间：240h；
41.所述产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基由姬松茸提取物2g，猴头菇提取物2g，酵母粉1g，低聚果糖0.2g，烟酰胺0.1g和余量的无菌水组成；
42.所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸。
43.综上所述，本发明提供的植物乳杆菌qct009可用于制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，且相较于现有的微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，如大肠杆菌发酵和酵母发酵，其得率更高，解决了目前微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸得率低的问题。
44.以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
β
‑
烟酰胺单核苷酸的植物乳杆菌及其应用
技术领域
1.本发明涉及微生物发酵技术领域，特别涉及一株产β
‑
烟酰胺单核苷酸的植物乳杆菌及其应用。
背景技术：
2.β
‑
烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide)：简称nmn，是一种在人体细胞能量生成中的重要物质，参与细胞内烟酰胺嘌呤二核苷酸(nad )的合成，nmn作为nad 的前体，能有效防治衰老引起的各种疾病，研究表明，nmn在延缓衰老，治疗帕金森等老年病，调节胰岛素分泌，调控mrna的表达等方面具有医疗保健效果。人为补充nmn可以修复脑损伤，改善胰岛功能，保护心脏免于缺血再灌注损伤，修复脑线粒体呼吸缺陷，对老年退行性疾病，视网膜退行性疾病等均具有一定治疗作用。但目前受限于合成工艺，nmn原料价格昂贵，限制了其作为药物的应用。目前，nmn的制备主要有化学合成法、微生物发酵法和体外酶转化法。其中，化学合成法技术最为成熟，但成本高且存在产生手性化合物以及食品安全问题；体外酶转化法需要使用酶转化反应的各种底物，底物所需成本较高；微生物发酵法只需使用烟酰胺作为反应底物，成本低，但目前使用的大肠杆菌发酵法和酵母发酵法获得的产品得率较低，无法达不到商业化生产的需求。
技术实现要素：
3.本发明所要解决的技术问题是：提供一种用于制备β
‑
烟酰胺单核苷酸的菌株及使用该菌株制备β
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烟酰胺单核苷酸的方法。
4.为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一株产β
‑
烟酰胺单核苷酸的植物乳杆菌，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)qct009，所述植物乳杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为cgmcc no.21881。
5.上述的植物乳杆菌在制备β
‑
烟酰胺单核苷酸中的应用。
6.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸，由上述的植物乳杆菌qct009制备得到的
7.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
8.将上述的植物乳杆菌qct009进行活化，将活化后的植物乳杆菌接种于产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基中进行培养，得到培养液；所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸。
9.本发明的有益效果在于：本发明提供的植物乳杆菌qct009可用于制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，且相较于现有的微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，如大肠杆菌发酵和酵母发酵，其得率更高，解决了目前微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸得率低的问题。
具体实施方式
10.为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
11.本发明最关键的构思在于：从纳豆表面筛选获得一种产β
‑
烟酰胺单核苷酸的菌株。
12.本发明提供一株产β
‑
烟酰胺单核苷酸的植物乳杆菌，采用下述方法培养获得：
13.选取品相新鲜良好的纳豆，加入适量无菌生理盐水在，在无菌环境下，使用无菌勺子(或无菌搅拌棒)反复搅拌，使纳豆表面微生物悬浮于无菌生理盐水中，然后取0.2ml悬浮有微生物的生理盐水于无菌固体平板培养基中，涂布均匀，于28℃培养箱培养2
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5天至培养皿表面长出单菌落，挑取单菌落于液体培养基中培养，培养结束后测培养基中的nmn含量，挑选最优菌株。培养的条件为：温度：28
‑
30℃；转速：0
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50rpm；培养时间：72
‑
240h。
14.固体平板培养基和液体培养基中均包括姬松茸提取物2
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5重量份、猴头菇提取物2
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10重量份、酵母粉1
‑
5重量份、低聚果糖0.2
‑
5重量份、烟酰胺0.1
‑
2重量份。
15.所述菌株qct009，保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期为：2021年03月09日；种名：植物乳杆菌；拉丁文名称：lactobacillus plantarum；菌株名：qct009；保藏编号：cgmcc no.21881。
16.植物乳杆菌qct009在制备β
‑
烟酰胺单核苷酸中的应用。
17.一种由上述的植物乳杆菌qct009制备得到的β
‑
烟酰胺单核苷酸。
18.一种β
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烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
19.将植物乳杆菌qct009进行活化，将活化后的植物乳杆菌接种于产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基中进行培养，得到培养液；所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸。
20.从上述描述可知，本发明的有益效果在于：本发明提供的植物乳杆菌qct009可用于制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，且相较于现有的微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，如大肠杆菌发酵和酵母发酵，其得率更高，解决了目前微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸得率低的问题。为β
‑
烟酰胺单核苷酸的产业化生产提供了可能。
21.进一步的，所述植物乳杆菌接的接种量为1
‑
5％。
22.进一步的，培养的条件为：温度：28
‑
30℃；转速：0
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50rpm；培养时间：72
‑
240h。
23.进一步的，所述产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基包括姬松茸提取物2
‑
5重量份、猴头菇提取物2
‑
10重量份、酵母粉1
‑
5重量份、低聚果糖0.2
‑
5重量份、烟酰胺0.1
‑
2重量份。
24.由上述描述可知，通过优化植物乳杆菌qct009发酵的条件后和培养基后，保证了其制备β
‑
烟酰胺单核苷酸的高得率。
25.实施例1：
26.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
27.将植物乳杆菌qct009进行活化，将活化后活化液按1％的接种量接种于200ml的产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基中进行培养，得到培养液；
28.培养的条件为：温度：28℃；转速：30rpm；培养时间：120h；
29.所述产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基由姬松茸提取物5g、猴头菇提取物5g、酵母粉3g、低聚果糖3g、烟酰胺1g和余量的无菌水组成；
30.所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸。
31.实施例2：
32.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
33.将植物乳杆菌qct009进行活化，将活化后活化液按1％的接种量接种于200ml的产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基中进行培养，得到培养液；
34.培养的条件为：温度：28℃；转速：50rpm；培养时间：72h；
35.所述产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基由姬松茸提取物4g、猴头菇提取物10g、酵母粉5g、低聚果糖5g、烟酰胺2g和余量的无菌水组成；
36.所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸。
37.实施例3：
38.一种β
‑
烟酰胺单核苷酸的制备方法，包括以下步骤：
39.将植物乳杆菌qct009进行活化，将活化后活化液按1％的接种量接种于200ml的产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基中进行培养，得到培养液；
40.培养的条件为：温度：28℃；转速：0rpm；培养时间：240h；
41.所述产β
‑
烟酰胺单核苷酸培养基由姬松茸提取物2g，猴头菇提取物2g，酵母粉1g，低聚果糖0.2g，烟酰胺0.1g和余量的无菌水组成；
42.所得培养液经破胞后分离纯化得到β
‑
烟酰胺单核苷酸。
43.综上所述，本发明提供的植物乳杆菌qct009可用于制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，且相较于现有的微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸，如大肠杆菌发酵和酵母发酵，其得率更高，解决了目前微生物发酵制备β
‑
烟酰胺单核苷酸得率低的问题。
44.以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
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