m6ARNA甲基化基序在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用的制作方法

技术特征：
1.m6a rna甲基化基序在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的m6a rna甲基化基序在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述的m6a rna甲基化基序包括如下三组基序：a组：用于鉴定年轻细胞的基序，为如下序列的一种或多种组合：cugga，gugga，uugga，agcag，agcac，cuuccu，cuaccu；b组：用于鉴定复制性衰老细胞的基序，为如下序列的一种或多种组合：agagca，agagcg，gcagc，acagc，ucagc，uggaa，uggac；c组：用于鉴定早衰细胞的基序，为如下序列的一种或多种组合：ggagga，ggugga，cgagga，cgugga，gagaucg，aagaucg，cagcagc，cagcacc，gaaga，caaga，cugua，augua。3.根据权利要求2所述的m6a rna甲基化基序在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述细胞衰老诊断试剂盒通过分析细胞中m6arna甲基化图谱，从而诊断细胞衰老情况：1)当m6arna甲基化图谱显示细胞中含有a组所示基序的一种或多种组合时，判断细胞为年轻细胞；2)当m6arna甲基化图谱显示细胞中含有b组所示基序的一种或多种组合时，判断细胞为复制性衰老细胞；3)当m6arna甲基化图谱显示细胞中含有c组所示基序的一种或多种组合时，判断细胞为早衰细胞。4.根据权利要求2或3所述的m6a rna甲基化基序在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述的年轻细胞的定义为：群体倍增水平pdl小于或等于其寿命的50％的细胞；所述的复制性衰老细胞的定义为：群体倍增水平pdl大于或等于其寿命的90％的细胞；所述的早衰细胞为年轻细胞应激诱导的衰老细胞，应激因素包括但不限于氧化应激；其中，pdl的计算公式为n＝3.32(logn2
‑
logn1) x，n2为该代细胞收获的细胞总数，n1为上代接种的细胞数，x为上代细胞的pdl。5.根据权利要求2或3所述的m6a rna甲基化基序在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述的细胞衰老情况通过以下步骤诊断：(1)提取待测细胞总rna；(2)rna甲基化免疫共沉淀法富集m6a rna甲基化片段，洗脱，纯化，得到待测样品；(3)取待测样品进行m6a rna甲基化测序，获得m6arna甲基化图谱，根据图谱所显示的m6a rna甲基化基序类型，诊断细胞衰老情况。6.根据权利要求2或3所述的m6a rna甲基化基序在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述的衰老诊断试剂盒中含有rna提取试剂，m6a rna甲基化片段富集试剂，以及m6a rna甲基化测序和分析试剂中的一种或多种组合。7.根据权利要求2或3所述的m6a rna甲基化基序在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应
用，其特征在于：所述的细胞是随年龄增加而逐渐衰老的细胞。8.根据权利要求7所述的m6a rna甲基化基序在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述的细胞是人胚肺成纤维细胞。

技术总结
本发明公开了m6A RNA甲基化基序在制备细胞衰老诊断试剂盒中的应用，属于生物医学技术领域。本发明通过m6A RNA甲基化测序，以及对m6A RNA甲基化位点进行可视化分析，发现本发明展示的衰老细胞和年轻细胞的m6A RNA甲基化基序既有保守共有序列，又有其特异序列。这些特征可用于区分并鉴定不同程度衰老的细胞，也可用于鉴定外界不同应激诱发的细胞衰老的程度，可解决目前在衰老领域诊断标志物的欠缺问题，为细胞衰老及年龄相关疾患的早期诊断和早期预防提供参考依据。期预防提供参考依据。期预防提供参考依据。


技术研发人员：张文娟 林辉 张文姬 吴帆 彭欣悦 余素素 周铖 张露云
受保护的技术使用者：暨南大学
技术研发日：2021.09.07
技术公布日：2021/12/11