一种评价西洋参中物质量值传递规律的方法及筛选方法与流程

1.本发明涉及中药领域，具体涉及一种评价西洋参中物质量值传递规律的方法及筛选方法。


背景技术：

2.西洋参为五加科植物西洋参panax quinquefolium l.的根，其化学成分复杂，主要包括皂苷、蛋白质、脂肪、糖类、挥发油、甾醇、黄酮、维生素及微量元素等。其中，皂苷和糖类是研究得最多的两类化学成分。西洋参具有抗肿瘤、抗癌、降血压、降血脂、抗疲劳等多方面的药理活性。其中皂苷对中枢神经系统、心血管、糖尿病、癌症等疾病治疗和预防作用起主要作用，而西洋参多糖主要在提高免疫、抗肿瘤等方面具有显著疗效。因此对于西洋参研究可对皂苷及多糖等成分进行质量控制。
3.众所周知，中药制剂保留了中药化学成分多样化的特性，其有效性是多种化学成分共同作用的结果，在中药制剂中各种化学成分应保持一定的相对比例，某些成分过低则难以发挥药效，某些成分过高则有可能产生毒副作用，具有安全隐患；因此应控制化学成分的传递，应描述化学成分传递的量值趋势及量值范围。在工艺过程中要关注各个成分是否存在转化、降解等现象，控制化学成分的传递。当物质成分的量值传递较低，说明该成分在中药制剂中转移较差或者发生分解(即负转化)，若为主要活性成分，在生产中则需要进行控制，保证其临床药效；当物质传递量值传递明显过高时，说明该成分在中药制剂中得到富集或存在物质的正转化过程，则应重点监控，控制富集或正转化程度，保证其临床应用的安全性。因此了解物质量值传递是指导中药制剂的关键通路。
4.而对于西洋参中物质的量值传递规律而言，现有研究中通常是采用相似度、峰相对保留时间及峰数目等方式进行定性评价，或者采用传统的指标成分转移率进行定量评价。而采用指标成分转移率进行定量评价时需要具有对照品进行随行参照，对于无对照品参照的成分，并无法有效获取相应物质传递的量值情况，极大地限制物质传递规律的评价。


技术实现要素：

5.因此，本发明要解决的技术问题在于：克服现有技术中在无对照品参照的情况下，现行方法不能够有效用于西洋参中各种物质的量值传递规律的评价的问题；从而提供一种评价西洋参中物质量值传递规律的方法；该评价指标无需对照品，也能够有效对西洋参饮片制备得到的样品中的物质的量值传递规律进行评价，同时，本发明还公开了采用该评价方法对工艺参数进行筛选的方法。
6.一种评价西洋参中物质量值传递规律的方法，包括：
7.采用表示中药中物质量值传递规律的评价指标k值对西洋参饮片制备获得的样品的各物质的量值传递规律进行评价；
8.其中，k值的获取过程如下：
9.获取采用西洋参饮片制备得到的样品的干膏量；
10.获取西洋参饮片制备得到的饮片溶液的饮片浓度，样品制备得到的供试品溶液的供试品浓度，饮片溶液以及供试品溶液的指纹图谱或特征图谱，并根据获取的指纹图谱或特征图谱获得相应特征峰的饮片特征峰面积和供试品特征峰面积；
11.采用干膏量、饮片特征峰面积、样品特征峰面积、饮片浓度、供试品浓度采用以下计算公式计算即得；
[0012][0013]
同一物质在相同方法至少两个波长进行检测的情况下，选择最大吸收波长下的特征峰的峰面积进行k值的计算。
[0014]
所述指纹图谱或特征图谱的色谱条件为：
[0015]
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a，水为流动相b，按下表中规定的梯度洗脱程序进行梯度洗脱；检测波长为203nm；柱温25
‑
35℃；流速0.35
‑
0.45ml/min；理论板数均按人参皂苷rb1峰计算应均不低于10000；
[0016][0017]
所述饮片溶液的制备过程为：取西洋参饮片，精密称定，精密加水，回流，滤过，取续滤液，在续滤液中加入醇溶液，定容，称重，超声处理，放冷，摇匀，再称定重量，用醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即可；
[0018]
所述供试品溶液的制备过程为：取样品，精密称定，精密加入醇溶液，称重，超声处理，放冷，摇匀，再称定重量，用醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0019]
当k值小于0.3时，表示该特征峰所代表的物质不易转移或者发生负转化；k值大于1时，表示该特征峰所代表的物质富集或发生正转化；
[0020]
对k值小于0.3以及k值大于1的特征峰进行重点评价。
[0021]
所述样品为中间产物、标准汤剂、中药配方颗粒或经方。
[0022]
采用上述的一种评价西洋参中物质量值传递规律的方法对工艺参数进行筛选的方法，其特征在于，包括：获取西洋参饮片的标准汤剂，获取标准汤剂中各个物质所对应的特征峰的k值；获取西洋参饮片的样品，获取样品中相应物质所对应的各个特征峰的k值，
[0023]
筛选出样品与标准汤剂中相同物质所对应的特征峰的k值最为接近的k值，该k值所对应的工艺参数即为最佳工艺。
[0024]
制备标准汤剂所用的西洋参饮片与制备样品所用的西洋参饮片为相同批次的西洋参饮片。
[0025]
所述物质包括人参皂苷rg1、人参皂苷re、人参皂苷rb1、人参皂苷rc和人参皂苷rd中的至少一种。
[0026]
所述西洋参标准汤剂的制备工艺为：取西洋参饮片，置于砂锅中，浸泡30分钟，一煎加入饮片量8倍水，500w煮沸后，200w煎煮60分钟，趁热过滤，迅速冷却，备用；二煎加饮片量6倍水，500w煮沸后，200w煎煮40分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液，50℃以下浓缩，浓缩至料液比约为1:1，冷冻干燥，即得。
[0027]
所述样品为西洋参的标准汤剂时，所述标准汤剂中人参皂苷rg1的k值为0.12
‑
0.35，人参皂苷re的k值为0.12
‑
0.36，人参皂苷rb1的k值为0.17
‑
0.50，人参皂rc的k值为0.15
‑
0.49，人参皂rd的k值为0.17
‑
0.56。
[0028]
本发明技术方案，具有如下优点：
[0029]
1.本发明提供了一种评价西洋参中物质量值传递规律的方法，具体为：采用k值对西洋参饮片中各物质的量值传递规律进行评价，该k值的变化趋势与有效成分的转移率的变化趋势一致，当k值大于1，表明该类成分至标准汤剂中得到富集或存在物质的正转化过程；当k值小于0.3时，表明该类成分至标准汤剂中不易转移或发生分解(即负转化)；该k值的获取无需成分对照品的引入，在缺少成分对照品的前提下也能够进行多成分分析，同时降低了多因子对于结果分析的影响，由于k值能够科学地分析西洋参饮片中的各物质的量值传递规律，因此，可以用于实现西洋参中药配方颗粒或其中间产物，或者含西洋参饮片的经方或者其中间产物中各类已知或未知物质的量值传递规律的评价，更好的保证西洋参配方颗粒或经方的临床应用的安全性。
[0030]
2.本发明进一步优化了色谱条件的筛选规则，具体的，同一物质在相同方法至少两个波长进行检测的情况下，选择最大吸收波长下的特征峰的峰面积进行k值的计算；并公开了具体的色谱条件，通过色谱条件的筛选，能够使西洋参中各物质的k值更加准确的表示出其量值传递规律，检测结果更加准确。
[0031]
3.本发明还提供了采用上述k值进行工艺参数质控的方法，具体包括：获取西洋参饮片的标准汤剂，获取标准汤剂中各个特征峰的k值；获取西洋参饮片制备得到的样品，获取样品中各个特征峰的k值，筛选出样品中与标准汤剂对应特征峰的k值最为接近的k值所对应的工艺参数即可；该方法可以有效筛选出与标准汤剂的物质基础更为接近的样品的工艺参数条件，使制备出的样品与标准汤剂的物质基础一致，进而能够保证样品与标准汤剂的一致性，提高临床应用的药效及安全性。
附图说明
[0032]
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0033]
图1是本发明中标准汤剂的特征图谱。
[0034]
图2是本发明中实施例3的特征图谱。
[0035]
图3是本发明中实施例4的特征图谱。
[0036]
图4是本发明中实施例5的特征图谱。
[0037]
图5是本发明的实施例6中色谱柱1的特征图谱。
[0038]
图6是本发明的实施例6中色谱柱2的特征图谱。
具体实施方式
[0039]
实施例1
[0040]
一种评价西洋参中物质量值传递规律的方法，具体的过程如下：
[0041]
1.1特征图谱方法
[0042]
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为15cm，柱内径为2.1mm，粒径为2.6μm；以乙腈为流动相a，以水为流动相b，按下表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm；柱温30℃；流速0.4ml/min；理论板数均按人参皂苷rb1峰计算应均不低于10000。
[0043]
表1梯度洗脱表
[0044][0045]
参照物溶液的制备：取人参皂苷rb1对照品适量，精密称定，加乙腈
‑
水(20:80)混合溶液制成每1ml含人参皂苷rb
1 0.5mg，摇匀，作为对照品参照物溶液。
[0046]
对照药材参照物溶液的制备：取西洋参对照药材约1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加水25ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，滤过，取续滤液10ml于20ml容量瓶中，加甲醇定容，超声(功率250w，频率40khz)30分钟，取出，放冷，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。
[0047]
供试品溶液的制备：取样品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0048]
饮片溶液的制备：采用与供试品溶液同批次的中药材饮片采用对照药材参照物溶液的制备方法进行制备获得。
[0049]
测定法精密吸取参照物溶液、饮片溶液、对照药材参照物溶液、供试品溶液各10μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
[0050]
其中，供试品溶液中的样品的为标准汤剂，该西洋参的标准汤剂制备工艺为：取西
洋参饮片，置于砂锅中，浸泡30分钟，一煎加入饮片量8倍水，500w煮沸后，200w煎煮60分钟，趁热过滤，迅速冷却，备用；二煎加饮片量6倍水，500w煮沸后，200w煎煮40分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液，浓缩(50℃以下)，浓缩至料液比约为1:1，冷冻干燥，即得。
[0051]
供试品特征图谱应呈现8个特征峰，如图4所示，并应与对照药材参照物色谱峰中的8个特征峰相对应，其中峰3应与对照品参照物峰保留时间相一致，以3号峰为s峰，计算各特征峰的相对保留时间，峰1、峰2相对保留时间应在规定值的
±
20％之内，其余峰相对保留时间应在规定值的
±
5％之内，规定值为0.45(峰1)、0.46(峰2)、1.00(峰s)、1.02(峰4)、1.07(峰5)、1.09(峰6)、1.13(峰7)、1.22(峰8)。其中，峰1为人参皂苷rg1；峰2为人参皂苷re；峰3为人参皂苷rb1；峰4为人参皂苷rc；峰6为人参皂苷rd。
[0052]
1.2 k值与含量转移率对比
[0053]
采用上述特征图谱方法对15批西洋参饮片及标准汤剂进行测定并获得的特征图谱数据，测定值包括特征峰峰面积、饮片浓度、供试品浓度及出膏率，并根据以下计算公式计算得到k值，并根据现有的对照品对相应特征峰进行含量转移率计算，检测结果如表2
‑
表3所示。上述特征峰峰面积、饮片浓度、供试品浓度及出膏率的计算方法均为采用常规检测和计算方法，在此不再赘述。
[0054][0055][0056]
表2西洋参k值与转移率对比结果
[0057][0058][0059]
表3
[0060][0061]
通过质谱分析，对11个特征峰进行结构推断，确定了9个特征峰为：峰1为人参皂苷rg1、峰2为人参皂苷re、峰3为人参皂苷rb1，峰4为人参皂rc，峰6为人参皂rd。
[0062]
由表2
‑
3可知，人参皂苷rg1的k值为0.12
‑
0.35，人参皂苷re的k值为0.12
‑
0.36，人参皂苷rb1的k值为0.17
‑
0.50，人参皂rc的k值为0.15
‑
0.49，人参皂rd的k值为0.17
‑
0.56。其中，人参皂苷rg1的转移率均值为0.15，k值均值为0.17；人参皂苷re的转移率均值为0.16，k值均值为0.18；人参皂苷rb1的转移率均值为0.18，k值均值为0.21；人参皂苷rc的转移率均值为0.25，k值均值为0.20；人参皂苷rd的转移率均值为0.30，k值均值为0.23。由于18批次标准汤剂与饮片检测条件存在一定差别，因此k值与含量转移率数值存在略微区别，但k值与含量转移率的趋势一致，表明在不需要使用对照品的前提下，k值能描述多种成分物质的变化趋势。
[0063]
实施例2
[0064]
利用实施例1中的一种评价西洋参中物质量值传递规律的方法进行工艺条件筛选的方法，具体如下：
[0065]
由于标准汤剂是配方颗粒的物质基础，因此以标准汤剂的物质成分变化规律作为配方颗粒的关键工艺属性，能够保证配方颗粒与标准汤剂的一致性。
[0066]
由实施例1中表2、3可知：西洋参标准汤剂峰1的k值范围为0.12
‑
0.35，峰2的k值范围为0.12
‑
0.36，峰3的k值范围为0.17
‑
0.50，峰4的k值范围为0.15
‑
0.49，峰5的k值范围为0.26
‑
0.50，峰6的k值范围为0.17
‑
0.56，峰7的k值范围为0.08
‑
0.31，峰8的k值范围为0.11
‑
0.51，各峰的k值范围较大。分析主要由于目前原料的质量差异较大导致，若以该范围值作为参照，会出现工艺偏差。鉴于原料质量差异问题不可避免，因此选择符合标准汤剂范围的同批次的中药材饮片制备得到的标准汤剂k值作为参照，对工艺研究进行质控，保证所得终产品与标准汤剂的一致性。
[0067]
西洋参作为名贵的滋补药材，具有补气养阴，清热生津之功效，现代研究认为，西洋参中的皂苷类成分既是其功效成分也是其主要活性物质。通过k值分析西洋参标准汤剂的8个特征峰的18批次k值除个别批次外都小于0.30，其中特征峰多为皂苷类成分。可知西洋参皂苷类成分转移的趋势基本一致，因此可以选择对人参皂苷rg1、re、rb1、rc、rd，进行控制，进而控制西洋参中皂苷类成分的转化。故确定西洋参的工艺关键控制成分为峰1(人参皂苷rg1)、峰2(人参皂苷re)、峰3(人参皂苷rb1)、峰4(人参皂苷rc)、峰6(人参皂苷rd)代表的成分。
[0068]
以同批次标准汤剂中的k值均值作为可接受转化程度的标准对生产工艺进行筛选，筛选出最佳工艺条件，在该工艺条件下制得三批西洋参配方颗粒，该三批次西洋参配方颗粒的工艺过程中的各中间产物以及最终的西洋参配方颗粒的峰1
‑
峰4和峰6的k值结果如下表4所示：
[0069]
表4西洋参工艺研究过程中k值变化
[0070]
[0071][0072]
由表4可知，3批西洋参配方颗粒在研究过程中的各峰量值传递的k趋势一致。通过k值确定的工艺关键控制点对颗粒制备过程进行质控后，峰1、峰2、峰3、峰4及峰6的k值均与相应批次标准汤剂k值接近，并均在标准汤剂范围内。可以确定制备得到的颗粒与标准汤剂药效物质基础一致性较好，因此，进一步确定上述三批次的工艺条件制备得到的颗粒均符合要求，综上可知：采用k值确定的工艺关键属性能够保证配方颗粒临床应用的药效及安全性。
[0073]
实施例3
[0074]
本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，具体如下：
[0075]
色谱柱柱温25℃；检测波长为203nm；流速0.42ml/min。
[0076]
其他检测条件与实施例1完全相同，检测结果如图2所示。
[0077]
实施例4
[0078]
本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，具体如下：
[0079]
色谱柱柱温35℃；检测波长为203nm；流速0.40ml/min。
[0080]
其他检测条件与实施例1完全相同，检测结果如图3所示。
[0081]
实施例5
[0082]
本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，具体如下：
[0083]
色谱柱柱温28℃；检测波长为203nm；流速0.38ml/min。
[0084]
其他检测条件与实施例1完全相同，检测结果如图4所示。
[0085]
实施例6
[0086]
本实施例与实施例1的区别在于，色谱柱条件不同，具体如下：
[0087]
色谱柱1：waters acquitybeh c18(2.1*150mm，1.7μm)
[0088]
色谱柱2：waters acquity uplc cortecs
‑
t3(2.1*150mm，1.6μm)。
[0089]
其他检测条件与实施例1完全相同，检测结果分别如图5和图6所示。
[0090]
采用上述实施例3
‑
6的检测条件检测得到特征图谱，根据该特征图谱采用本发明的计算方法计算得到k值，根据对比可知：实施例3
‑
6获取的k值与实施例1的k值差异不超过5％，因此，上述实施例3
‑
6的检测条件也满足检测要求。
[0091]
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对
于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。