基于巯基乙酸/维生素B1的去甲肾上腺素传感器的制备方法与流程

基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器的制备方法
技术领域
1.本发明属于生物传感器技术领域，具体涉及一种基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器的制备方法。


背景技术：

2.去甲肾上腺素(na或ne)也称正肾上腺素，是人体内重要的神经递质，是肾上腺皮质释放的一种儿茶酚递质。na是抗休克的血管活性药，在临床上是感染性休克常用的活性药物之一，可以使感染性休克患者迅速复苏，降低死亡率。但是长期服用na会造成局部缺血性坏死、急性肾功能衰竭、停药后的血压下降等不良反应。因此能够简便、灵敏、快速的检测na浓度在临床与药物质量控制中有着重要意义。
3.目前检测na浓度的方法有分光光度法、高效液相色谱
‑
串联质谱联用法、色谱法、毛细管电泳法，但前面这几种方法大多样品处理步骤复杂、费时。在结构上na有两个相邻的酚羟基，有电化学的活性，可以用化学方法检测，电化学方法不仅成本低，而且操作简单、灵敏度高，引起了更多研究人员的关注。
4.电化学传感器是一种以离子导电为基础的分析检测装置，是由换能器以及感应元件组成的，电化学方法主要有循环伏安法、差分脉冲伏安法、线性扫描伏安法、方波伏安法、计时电流法等。电化学传感器成本低、选择性高、分析速度快、灵敏度高、操作简单、工作性能稳定、价格低廉、对样品的损伤程度低、抗干扰能力强等优点，在科研和生产中占据着较高的地位。
5.去甲肾上腺素在固体电极上具有较高的过电位，容易造成电极的钝化，采用化学修饰电极可降低过电位。自组装技术是一种在分子水平上形成理想界面的方法，是分子与分子之间在一定的条件下通过利用共价键分子之间的作用力从而自发连接成结构稳定的分子聚集体的过程，它可以在基体的表面形成可控、均一整齐、有序的分子层。电化学行为研究的关键是电极修饰，自组装技术修饰电极，是将基体电极浸入有表面活性的有机溶剂。
6.巯基乙酸(shch2cooh)又称硫代乙酸醇，用途十分的广泛，近年来很多人对巯基乙酸修饰金电极进行研究。李利军，蔡卓，高文燕，等.巯基乙酸修饰金电极电化学发光行为的研究及其对盐酸硫必利的测定[j].分析试验室，2010,29(8)：5
‑
8.中公开制备了巯基乙酸自组装膜修饰裸金电极，结果表明该电极有明显的增敏的作用。屈晶，连靠奇，康维钧，等.基于巯基乙酸自组装膜传感器的应用研究[j].化学传感器，2013,33(2):45
‑
48.中公开在巯基乙酸中通过自组装技术修饰金电极，结果发现，该电极表现出了良好的电催化作用，提高了溶液电信号的强度。
[0007]
维生素b1又被称为盐酸硫铵，是人体必需的维生素之一，它是一种水溶性的维生素，同时也是人体中不可或缺的重要辅酶，它可以抑制胆碱酯酶的活性，维持体内正常的糖代谢和神经的正常活动，促进胃肠蠕动等。缺乏维生素b1会引起脚气，食欲不振、情绪激动、烦躁，但是维生素b1人体摄入量过多的话，会出现心律失常、麻痹、头痛等症状。张军，邓培红，匡云飞，等.多巴胺在维生素b1修饰碳黑微电极上的电化学行为研究[j].分析化学，
2004，32(11)：1421
‑
1425中公开首次将维生素b1到了碳黑微电极，研究电化学行为，结果证明该电极灵敏度高。杨秋霞，李国宝，张颖.维生素b1自组装膜修饰金电极对多巴胺、尿酸的电催化作用[j].分析化学，2009，37(7)：1004
‑
1008.公开制备维生素b1自组装膜修饰金电极，实验结果发现，维生素b1提高了金电极的活性。
[0008]
目前还未发现由巯基乙酸与维生素b1共同制备生物传感器的有关报道。


技术实现要素：

[0009]
本发明的目的是提供一种基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器的制备方法，将巯基乙酸与维生素b1共同修饰到金电极上，使得金电极上形成了双分子层，得到的去甲肾上腺素电化学传感器的稳定性、专属性好与精密度好，灵敏度高。
[0010]
本发明所述的基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器的制备方法：以巯基乙酸修饰的金电极为载体，在其表面负载维生素b1，得到基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器。
[0011]
优选地，所述的基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器的制备方法，包括以下步骤：
[0012]
(1)制备巯基乙酸修饰的金电极
[0013]
将金电极置于铁氰化钾溶液中，利用循环伏安法扫描至稳定，之后浸泡于巯基乙酸溶液中，得到巯基乙酸修饰的金电极；
[0014]
(2)制备基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器
[0015]
将步骤(1)中巯基乙酸修饰的金电极浸入交联剂中进行活化，再将活化后的巯基乙酸修饰的金电极浸泡在维生素b1溶液中，取出晾干，得到基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器。
[0016]
其中：
[0017]
步骤(1)中，金电极先采用平均粒度为0.05μm的al2o3粉进行抛光，再置于铁氰化钾溶液中；所述的铁氰化钾溶液的浓度为1.9
×
10
‑2～2.1
×
10
‑2mol/l，铁氰化钾溶液中含有氯化钾，氯化钾的浓度为0.09～0.11mol/l。
[0018]
步骤(1)中，巯基乙酸溶液的浓度为0.09～0.11mol/l；浸泡温度为2～5℃，浸泡时间为20～26h。
[0019]
所述的巯基乙酸溶液的制备为：
[0020]
(1)将磷酸氢二钠固体与磷酸二氢钠固体分别定容后得到溶液a与溶液b，取溶液a与溶液b混合均匀，测定ph值，得到磷酸盐缓冲溶液；
[0021]
(2)量取巯基乙酸，采用步骤(1)得到的磷酸盐缓冲溶液进行稀释，得到巯基乙酸溶液。
[0022]
溶液a与溶液b的浓度均为0.19～0.21mol/l；溶液a与溶液b的体积用量比为1.86～2.00:98.00～98.14，测定ph值为5.49～5.52。
[0023]
步骤(2)中，交联剂为浓度0.019～0.021mol/l的n,n
’‑
二环己基碳二亚胺溶液，将n,n
’‑
二环己基碳二亚胺溶于氯仿中制得。
[0024]
步骤(2)中，维生素b1溶液的浓度为0.024～0.026mol/l。
[0025]
维生素b1溶液的制备为将维生素b1固体溶于磷酸盐缓冲溶液中制得；所述的磷酸
盐缓冲溶液的浓度为0.19～0.21mol/l。
[0026]
步骤(2)中，活化时间为1.5～2.5h；浸泡温度为2～5℃，浸泡时间为20～26h。
[0027]
本发明基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器的制备过程如下：
[0028][0029]
本发明的有益效果如下：
[0030]
本发明以巯基乙酸修饰的金电极为载体，在其表面负载维生素b1，得到基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器。本发明首先采用水溶性较高的巯基乙酸修饰金电极，通过形成au
‑
s键先将巯基乙酸修饰到金电极上，在金电极上形成第一分子层，得到巯基乙酸修饰的金电极；巯基乙酸修饰的金电极中羧基与au
‑
s键之间的分子间距短，有利于下一步进行维生素b1的修饰，也有助于传感器稳定性的提高；然后再利用n,n
’‑
二环己基碳二亚胺使巯基乙酸修饰的金电极中的羧基和维生素b1的氨基反应，维生素b1的嘧啶环上的共轭双键能够降低氨基上氮原子的活化能，促进酰胺化反应，另外维生素b1的噻唑环上含有季铵碱结构，使得整个分子具有碱的特性，能够促进巯基乙酸修饰的金电极中的羧基与氨基的反应形成酰胺键，将维生素b1修饰到巯基乙酸修饰的金电极上，从而在第一分子层的表面形成了第二分子层，得到具有双分子层结构的去甲肾上腺素电化学传感器。
[0031]
本发明的去甲肾上腺素电化学传感器的分子结构中，噻唑环上的硫与金硫键上的硫对应，噻唑环上的氮与酰胺键上的氮对应，再加上嘧啶环上还存在对称的两个氮，使得本发明的去甲肾上腺素电化学传感器的结构对称性较好，根据传感器的循环伏安扫描图可知，其电流增大，可见位阻减小，有利于促进电子转移，且生物相容性提高，提高了传感器的寿命和重现性。
[0032]
本发明利用化学方法将巯基乙酸与维生素b1共同修饰到金电极上，使得本发明去甲肾上腺素电化学传感器的稳定性、专属性好与精密度好，灵敏度高。
附图说明
[0033]
图1是裸金电极、巯基乙酸修饰的金电极、巯基乙酸/维生素b1修饰的金电极的循环伏安扫描图；
[0034]
其中：a：巯基乙酸/维生素b1修饰的金电极；b：巯基乙酸修饰的金电极；c：裸金电极；
[0035]
图2是不同扫描速率下去甲肾上腺素电化学传感器的循环伏安扫描图；
[0036]
其中：a：0.30v/s；b：0.25v/s；c：0.35v/s；d：0.20v/s；e：0.15v/s；
[0037]
图3是缓冲溶液不同ph值下去甲肾上腺素电化学传感器的循环伏安扫描图；
[0038]
其中：a：ph为5.50；b：ph为6.50；c：ph为6.00；d：ph为5.00；e：ph为7.00；
[0039]
图4是缓冲溶液不同浓度下去甲肾上腺素电化学传感器的循环伏安扫描图；
[0040]
其中：a：0.20mol/l；b：0.15mol/l；c：0.10mol/l；d：0.05mol/l；e：0.25mol/l；
[0041]
图5是不同去甲肾上腺素(na)浓度下去甲肾上腺素电化学传感器的标准曲线图。
具体实施方式
[0042]
以下结合实施例对本发明做进一步描述。
[0043]
实施例1
[0044]
1、制备巯基乙酸修饰的金电极
[0045]
1.1配制铁氰化钾溶液
[0046]
称取铁氰化钾0.6585g和氯化钾0.7455g置于100ml烧杯中，加蒸馏水用玻璃棒搅拌并使其溶解，将其移至100ml的容量瓶中定容摇匀，制成约2.0
×
10
‑2mol/l的铁氰化钾溶液(内含0.1mol/l氯化钾)。
[0047]
1.2裸金电极预处理
[0048]
将金电极用平均粒度为0.05μm的al2o3粉在抛光布上抛光处理至镜面，用蒸馏水进行超声清洗15min，取出后自然晾干，再用无水乙醇进行超声清洗10min，取出用蒸馏水淋洗电极表面，并在2.0
×
10
‑2mol/l的铁氰化钾溶液(内含0.1mol/l氯化钾)中利用循环伏安法进行扫描，电位差在100mv之内。
[0049]
1.3磷酸盐缓冲溶液的配制
[0050]
a溶液(0.20mol/l)：精密称定磷酸氢二钠固体7.0980g置于烧杯中，加入蒸馏水搅拌使其迅速溶解，再转移至250ml的容量瓶中定容摇匀，制成溶液a。
[0051]
b溶液(0.20mol/l)：精密称定磷酸二氢钠固体5.9988g置于烧杯中，加入蒸馏水搅拌使其迅速溶解，再转移至250ml的容量瓶中定容摇匀，制成溶液b。
[0052]
取a溶液1.86ml，b溶液98.14ml混合并搅拌均匀，用校准过得ph计测定ph值，并将其ph调至5.50，得到0.20mol/l的磷酸盐缓冲溶液。
[0053]
1.4巯基乙酸修饰金电极
[0054]
量取巯基乙酸储备液，用0.20mol/l磷酸盐缓冲溶液(ph＝5.50)将巯基乙酸稀释，制成浓度为0.10mol/l的巯基乙酸溶液，并将预处理的裸金电极悬浮浸泡于该巯基乙酸溶液中，在4℃冰箱中放置24h，取出后用0.20mol/l磷酸盐缓冲溶液冲洗，自然晾干，即得巯基乙酸修饰的金电极，再放置于2.0
×
10
‑2mol/l的铁氰化钾溶液(含0.1mol/l氯化钾)中利用循环伏安法进行表征。
[0055]
2、制备基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器
[0056]
2.1交联剂的配制
[0057]
精密称取0.2063g的n,n
’‑
二环己基碳二亚胺(简称dcc)置于100ml的烧杯中，加入氯仿并放置于超声仪中超声使其溶解，再转移至50ml容量瓶中定容摇匀，制成浓度为0.02mol/l的dcc溶液，并将制得的交联剂溶液置于冰箱中保存。
[0058]
2.2维生素b1溶液的配制
溶于100ml的烧杯中，再转移到100ml的容量瓶定容摇匀，制成浓度约为0.026mol/l的维生素b1溶液作为备用。
[0079]
2.3去甲肾上腺素电化学传感器的制备
[0080]
将上述的巯基乙酸修饰的金电极用0.21mol/l磷酸盐缓冲溶液淋洗，自然晾干后悬浮浸入0.021mol/l dcc溶液中活化2.5小时，再将活化好的巯基乙酸修饰的金电极浸泡在0.026mol/l的维生素b1溶液中，放置5℃的冰箱中20h，取出后用0.21mol/l磷酸盐缓冲溶液冲洗，自然晾干，即得基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器。
[0081]
实施例3
[0082]
1、制备巯基乙酸修饰的金电极
[0083]
1.1配制铁氰化钾溶液
[0084]
称取铁氰化钾0.6256g和氯化钾0.6710g置于100ml烧杯中，加蒸馏水用玻璃棒搅拌并使其溶解，将其移至100ml的容量瓶中定容摇匀，制成约1.9
×
10
‑2mol/l的铁氰化钾溶液(内含0.09mol/l氯化钾)。
[0085]
1.2裸金电极预处理
[0086]
将金电极用平均粒度为0.05μm的al2o3粉在抛光布上抛光处理至镜面，用蒸馏水进行超声清洗15min，取出后自然晾干，再用无水乙醇进行超声清洗10min，取出用蒸馏水淋洗电极表面，并在1.9
×
10
‑2mol/l的铁氰化钾溶液(内含0.09mol/l氯化钾)中利用循环伏安法进行扫描，电位差在100mv之内。
[0087]
1.3磷酸盐缓冲溶液的配制
[0088]
a溶液(0.19mol/l)：精密称定磷酸氢二钠固体6.7431g置于烧杯中，加入蒸馏水搅拌使其迅速溶解，再转移至250ml的容量瓶中定容摇匀，制成溶液a。
[0089]
b溶液(0.19mol/l)：精密称定磷酸二氢钠固体5.6990g置于烧杯中，加入蒸馏水搅拌使其迅速溶解，再转移至250ml的容量瓶中定容摇匀，制成溶液b。
[0090]
取a溶液1.87ml，b溶液98.13ml混合并搅拌均匀，用校准过得ph计测定ph值，并将其ph调至5.49，得到0.19mol/l的磷酸盐缓冲溶液。
[0091]
1.4巯基乙酸修饰金电极
[0092]
量取巯基乙酸储备液，用0.19mol/l磷酸盐缓冲溶液(ph＝5.49)将巯基乙酸稀释，制成浓度为0.09mol/l的巯基乙酸溶液，并将预处理的裸金电极悬浮浸泡于该巯基乙酸溶液中，在2℃冰箱中放置26h，取出后用0.19mol/l磷酸盐缓冲溶液冲洗，自然晾干，即得巯基乙酸修饰的金电极，再放置于1.9
×
10
‑2mol/l的铁氰化钾溶液(含0.09mol/l氯化钾)中利用循环伏安法进行表征。
[0093]
2、制备基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器
[0094]
2.1交联剂的配制
[0095]
精密称取0.1960g的n,n
’‑
二环己基碳二亚胺(简称dcc)置于100ml的烧杯中，加入氯仿并放置于超声仪中超声使其溶解，再转移至50ml容量瓶中定容摇匀，制成浓度为0.019mol/l的dcc溶液，并将制得的交联剂溶液置于冰箱中保存。
[0096]
2.2维生素b1溶液的配制
[0097]
称取维生素b1固体0.7219g，用0.19mol/l磷酸盐缓冲溶液(ph＝5.49)将维生素b1溶于100ml的烧杯中，再转移到100ml的容量瓶定容摇匀，制成浓度约为0.024mol/l的维生
素b1溶液作为备用。
[0098]
2.3去甲肾上腺素电化学传感器的制备
[0099]
将上述的巯基乙酸修饰的金电极用0.19mol/l磷酸盐缓冲溶液淋洗，自然晾干后悬浮浸入0.019mol/l dcc溶液中活化2小时，再将活化好的巯基乙酸修饰的金电极浸泡在0.024mol/l的维生素b1溶液中，放置2℃的冰箱中26h，取出后用0.19mol/l磷酸盐缓冲溶液冲洗，自然晾干，即得基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器。
[0100]
本发明分别以实施例1中的裸金电极、巯基乙酸修饰的金电极、巯基乙酸/维生素b1修饰的金电极作为工作电极，铂丝为辅助电极、饱和甘汞电极为参比电极。采用三电极体系，在
‑
0.20v～0.60v时，将裸金电极、巯基乙酸修饰的金电极、巯基乙酸/维生素b1修饰的金电极分别浸泡在2.0
×
10
‑2mol/l的铁氰化钾(内含0.10mol/l氯化钾)溶液中，以阳电极为起始扫描方向进行扫描，利用循环伏安法进行表征，如图1所示。
[0101]
从图1中可以看出巯基乙酸修饰的金电极比裸金电极的峰电流大，说明该裸金电极经过巯基乙酸修饰后，电位差变小，电流响应变大，电极可逆性变好，这表明巯基乙酸已经成功修饰到金电极表面，巯基乙酸的修饰促进了电子转移。而巯基乙酸/维生素b1修饰的金电极比巯基乙酸修饰的金电极的电位差小，氧化还原峰电流响应大，说明巯基乙酸/维生素b1修饰后的金电极即本发明的基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器不仅促进了电子转移，还提高了电极的灵敏度。
[0102]
本发明对实施例1中的基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器的使用条件作出了以下研究：
[0103]
(1)扫描速率的选择
[0104]
依次改变扫描速率为0.15v/s、0.20v/s、0.25v/s、0.30v/s、0.35v/s分别测定4.0
×
10
‑4mol/l的na溶液(磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.20mol/l，ph＝5.50)，得到循环伏安图如图2所示，扫描速率在0.10v～0.60v范围时，随着扫描速率增高，对应的峰电流响应值变大，增大到0.35v/s时对应的峰电流响应值变小，因此本实验的最佳扫描速率为0.30v/s。
[0105]
(2)缓冲溶液的ph值的选择
[0106]
选定ph值分别为5.00、5.50、6.00、6.50、7.00的磷酸盐缓冲溶液配制4.0
×
10
‑4mol/l的去甲肾上腺素溶液，将基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器置于4.0
×
10
‑4mol/l的去甲肾上腺素的溶液中(磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.20mol/l)，在
‑
0.10v～0.60v电位之间，以0.30v/s描速率进行循环伏安扫描，如图3所示，发现维生素b1/巯基乙酸修饰的金电极在磷酸盐缓冲溶液ph为5.50时对应的电流值最大，因此本发明的磷酸盐缓冲溶液的最佳ph值为5.50。
[0107]
(3)缓冲溶液的浓度的选择
[0108]
选定浓度为0.05mol/l、0.10mol/l、0.15mol/l、0.20mol/l、0.25mol/l的磷酸盐缓冲溶液(ph＝5.50)，将基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器置于4.0
×
10
‑4mol/l的去甲肾上腺素溶液中(用ph＝5.50的不同浓度磷酸盐缓冲溶液溶解，定容)，再用0.30v/s的扫描速率进行循环伏安扫描，得循环伏安图，如图4所示，随着磷酸盐缓冲溶液浓度的增大，去甲肾上腺素的电流响应越来越大，在0.20mol/l磷酸盐缓冲溶液中电流响应达到最大，而随着磷酸盐缓冲溶液的浓度继续增大至0.25mol/l时电流响应变小，电极灵敏度变低，因此本发明的最佳磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.20mol/l。
[0109]
本发明还对实施例1中的基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器的方法学进行了以下研究：
[0110]
(1)不同去甲肾上腺素(na)浓度下基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器的氧化峰电流
[0111]
用0.20mol/l的磷酸盐缓冲溶液(ph＝5.50)配制1.0
×
10
‑2mol/l的去甲肾上腺素储备溶液，再用磷酸盐缓冲溶液稀释配制去甲肾上腺素溶液的浓度分别为2.0
×
10
‑4mol/l、4.0
×
10
‑4mol/l、6.0
×
10
‑4mol/l、8.0
×
10
‑4mol/l、1.0
×
10
‑3mol/l。依次测得电流大小为2.617μa、5.988μa、9.706μa、12.427μa、15.887μa，以去甲肾上腺素浓度(10
‑4mol/l)为横坐标，去甲肾上腺素电化学传感器电流(μa)为纵坐标，绘制标准曲线，如图5所示。
[0112]
由图5可知，去甲肾上腺素电化学传感器的电流随着去甲肾上腺素溶液浓度的增大而增大，线性方程为i＝1.649c
‑
0.5687，相关系数r2为0.9982，去甲肾上腺素电化学传感器在去甲肾上腺素浓度为2.0
×
10
‑4mol/l～1.0
×
10
‑3mol/l的范围内呈良好的线性关系。
[0113]
(2)基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器的精密度测定
[0114]
用同一基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器在最佳条件下(扫描速率为0.30v/s、磷酸盐缓冲溶液ph值为5.50、磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.20mol/l)对浓度为4.0
×
10
‑4mol/l的na溶液进行平行测定5次电流，测得电流结果如表1，分别为6.001μa、5.977μa、5.969μa、5.971μa、5.942μa，由以上数据计算相对标准偏差(rsd)的值为0.35％，说明该去甲肾上腺素电化学传感器的精密度良好。
[0115]
表1精密度测定结果
[0116][0117]
(3)基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器的稳定性测定
[0118]
将制得的去甲肾上腺素传感器，在最佳条件下(扫描速率为0.30v/s、磷酸盐缓冲溶液ph值为5.50、磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.20mol/l)检测浓度为4.0
×
10
‑4mol/l的na标准溶液，分别放置不同时间(1h、12h、18h、24h、36h)检测其电流值，数据如表2，计算rsd值为1.58％，说明稳定性良好。
[0119]
表2稳定性测定结果
[0120][0121]
(4)基于巯基乙酸/维生素b1的去甲肾上腺素传感器的抗干扰性的测定
[0122]
在检测重酒石酸去甲肾上腺素的含量时，抗坏血酸可能会对去甲肾上腺素含量的检测产生干扰，所以选择l
‑
抗坏血酸作为干扰剂。精密称量0.0350g的抗坏血酸及0.0070g去甲肾上腺素，用0.20mol/l磷酸盐缓冲溶液(ph＝5.50)溶于100ml的烧杯中，用玻璃棒搅拌使其溶解，并转移到100ml的棕色容量瓶中充分摇匀定容。在
‑
0.20v～0.60v电位之间，扫描速率为0.30v/s时，用去甲肾上腺素电化学传感器进行检测，电流为5.863μa，与未加入l
‑
抗坏血酸的检测电流5.960μa相比，结果相近，说明抗坏血酸对此电极没有干扰，因此判定该去甲肾上腺素电化学传感器具有一定的抗干扰性。
[0123]
(5)加样回收试验
[0124]
取重酒石酸去甲肾上腺素20mg/10ml，混匀，量取重酒石酸去甲肾上腺素1.02ml，置于50ml容量瓶，用0.20mol/l磷酸盐缓冲溶液(ph＝5.50)稀释定容摇匀，作为空白溶液。用去甲肾上腺素电化学传感器进行测定，测得该溶液电流值为2.818μa，根据测得的电流值带入标准曲线线性方程i＝1.649c
‑
0.5687，求出对应的na浓度为2.05
×
10
‑4mol/l，计算出去甲肾上腺素质量m＝cvm＝2.05
×
10
‑4×
50
×
10
‑3×
169.18＝0.0017g。
[0125]
量取已知浓度的重酒石酸去甲肾上腺素约1.02ml，置于50ml容量瓶中，平行六份，为供试品；分别量取去甲肾上腺素标准品0.0014g、0.0017g、0.0020g各两份(相当于含量测定的80％、100％、120％)，溶于放置供试品的容量瓶中，用0.2mol/l的磷酸盐缓冲溶液(ph＝5.50)稀释定容于50ml容量瓶。用去甲肾上腺素传感器进行测定，分别测得的电流值为5.667μa、5.711μa、6.088μa、6.126μa、6.675μa、7.205μa，根据测得的电流值带入标准曲线线性方程：i＝1.649c
‑
0.5687，求出对应的na浓度，根据对应的na浓度求出溶液中na的含量，带入回收率公式：p为加样回收率，m1为试样中na的质量、m2为加入的na标准品的质量、m3为加入一定量na后得到的na的质量。数据如表3。
[0126]
表3加样回收实验结果
[0127][0128]
由上表可知，六份测定回收率平均值为102.71％，符合回收率应该在90％到108％之间的要求。
[0129]
(6)实际样品测定
[0130]
取重酒石酸去甲肾上腺素20mg/10ml，摇匀，移取1.00ml该药液于25ml容量瓶中，用0.20mol/l磷酸盐(ph＝5.50)缓冲溶液稀释至刻度摇匀，制成一定浓度的重酒石酸去甲肾上腺素溶液，该溶液浓度在标准曲线范围内。移取10ml该去甲肾上腺素溶液于样品池中，用该去甲肾上腺素电化学传感器在
‑
0.20v～0.60v电位之间，以最佳扫描速率下进行循环伏安扫描。在待测溶液中扫描三次，分别测出电流值为3.645μa、3.104μa、3.316μa，计算平均电流为3.355μa，根据得出的电流信号带入线性方程i＝1.649c
‑
0.5687，求出该去甲肾上腺素的浓度2.38
×
10
‑4mol/l，根据浓度求出样品测量值m
测
＝0.0200，样品标准值m
标
＝0.0200，计算得此规格的na的含量为100.00％在2020版《中国药典》中重酒石酸去甲肾上腺素标示量90.0％～115.0％范围内。
[0131]
综上所述，本发明利用巯基乙酸、维生素b1修饰金电极可以促进电子的传递，提高电极的电流响应。通过优化实验，选取了最佳实验条件，即磷酸盐缓冲溶液(pbs)浓度为0.20mol/l、磷酸盐缓冲溶液(pbs)的ph值为5.50以及扫描速率为0.30v/s。通过方法学考察实验的进行，确定了该去甲肾上腺素电化学传感器的线性响应范围为2.0
×
10
‑4mol/l～1.0
×
10
‑3mol/l，其相关系数r2为0.9982，在一定范围内电流大小与去甲肾上腺素的浓度成正比，而且精密度、稳定性、专属性都较好。