香蒲新苷在制备治疗炎症性肠病药物中的应用的制作方法

1.本发明创造属于香蒲新苷新用途领域，尤其是涉及中药单体香蒲新苷在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。


背景技术：

2.ibd是一种病因未明的肠道慢性非特异性炎性疾病，包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,uc)和克罗恩病(crohn’s disease,cd)。最常见的症状是腹泻，并伴有腹部绞痛、呕吐、便血、贫血、疲倦等。我国虽然在世界上属于ibd低发地区，但由于我国膳食结构和生活方式西化，致使其发生率在不少地区有程度不等的增加趋势。ibd的发生是一个复杂的过程，其病因和发病机制仍未明确，目前认为是基因、环境、免疫和微生物等多因素互相作用的结果。toll样受体(toll
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like receptors,tlrs)作为一种重要的模式识别受体，可以特异性识别病原体相关分子模式，构成机体免疫反应的第一道防线。ibd患者结肠组织中tlr2、tlr4和nf
‑
κb通路异常激活。临床上，ibd常用治疗手段包括氨基水杨酸类药物、糖皮质激素、免疫抑制剂和微生态制剂等，但存在有效率低、停药后易复发、长期应用副作用严重和药物经济学等方面的问题；手术治疗存在病人生活质量严重低下等问题。传统的中医中药具有毒副作用小的优点，因此，迫切需要从中医药中寻找其与人体相互作用的通路，加强中医药对ibd治疗的标准化、规范化、客观化研究，对于ibd的防治具有十分重要的意义。
3.香蒲新苷是从香蒲科植物(如狭叶香蒲,typha angustifolia l.)花粉中提取出的一种类黄酮成分，最初于1986年由中国医学科学院药物研究所发现并命名，其易溶于水，有利于在临床和科研中应用。香蒲科植物花粉(蒲黄)在我国已用于治疗淋证、血尿、痛经、子宫出血和损伤等。香蒲新苷则通过降低丙二醛、一氧化氮水平，增加超氧化物歧化酶水平发挥抗氧化作用；已被用于治疗痛经、脓肿、肾结石、腹泻、痢疾和出血状态等。此外，亦有研究表明香蒲新苷在抗炎、急性髓细胞白血病、动物心室重构和脑谷氨酸释放等方面发挥一定作用，但还没有将香蒲新苷应用至ibd的治疗中的先例。


技术实现要素：

4.有鉴于此，本发明创造旨在克服现有技术中的缺陷，提出香蒲新苷在制备治疗炎症性肠病药物中的应用。
5.为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：
6.香蒲新苷或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、对映异构体、立体异构体或互变异构体在制备预防和/或治疗炎症性疾病药物中的应用。
7.优选的，所述炎症性疾病为炎症性肠病及其相关疾病。
8.香蒲新苷在制备抑制nf
‑
κb通路的活化或降低炎症因子表达药物中的应用。
9.一种预防和/或治疗炎症性疾病药物，所述药物包含香蒲新苷或其药学上可接受的盐、溶剂化物、对映异构体、立体异构体或互变异构体。
10.优选的，所述药物还包含药学上可接受的辅料，所述辅料选自载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂或湿润剂。
11.优选的，所述炎症性疾病为炎症性肠病及其相关疾病。
12.本发明所述的“香蒲新苷”是一种类黄酮成分，分子式为：c
34
h
42
o
20
，分子量：770.69，结构式为：
[0013][0014]
本发明中所述的“药学上可接受的盐”指由药学上可接受的无毒性的酸或碱制备而来的盐，其中的酸或碱包括无机酸或碱或有机酸或碱。所述的无机酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸。所述的无机碱选自钙、镁、锂、钠、锌、铝或钾。所述的有机酸包括但不限于甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有机酸；以及脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。所述的有机碱包括但不限于二乙醇胺、三乙胺、乙胺丁醇、胆碱、普鲁卡因、赖氨酸等。
[0015]
本发明中所述的“溶剂化物”是指香蒲新苷或其药学上可接受的盐与至少一种溶剂分子通过非共价分子间作用力结合而形成的物质。常见的溶剂化物包括(但不限于)水合物、乙醇合物、丙酮合物等。
[0016]
相对于现有技术，本发明创造具有以下优势：
[0017]
本发明采用香蒲新苷处理dss诱导的c57bl/6j小鼠结肠炎模型，小鼠体重下降程度、疾病活动指数和脾重等炎症相关参数均得到改善，组织学染色发现小鼠肠道炎症受到抑制，病理学评分下降。进一步探究香蒲新苷发挥抗炎作用的具体机制，结果发现其能够抑制小鼠肠上皮细胞中的nf
‑
κb通路活化，降低小鼠肠上皮细胞炎症因子的表达。综上所述，该中药单体香蒲新苷可为今后制备ibd及其相关疾病的治疗药物提供新途径。
附图说明
[0018]
图1为香蒲新苷对结肠炎小鼠体重的影响；
[0019]
图2为香蒲新苷对结肠炎小鼠疾病活动指数的影响；
[0020]
图3为香蒲新苷对结肠炎小鼠脾重的影响；
[0021]
图4为香蒲新苷对结肠炎小鼠结肠长度影响；
[0022]
图5为香蒲新苷对结肠炎小鼠的结肠上皮组织病理影响图；
[0023]
图6为香蒲新苷对结肠炎小鼠的组织病理学评分图；
[0024]
图7为p65、磷酸化p65、iκbα以及磷酸化iκbα在结肠炎小鼠肠上皮细胞中的表达情况；
[0025]
图8为结肠炎小鼠肠上皮细胞炎症因子il
‑
1β的mrna的相对表达量；
[0026]
图9为结肠炎小鼠肠上皮细胞炎症因子il
‑
6的mrna的相对表达量；
[0027]
图10为结肠炎小鼠肠上皮细胞炎症因子ifn
‑
γ的mrna的相对表达量。
具体实施方式
[0028]
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明创造所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0029]
下面结合实施例来详细说明本发明创造。
[0030]
材料来源：
[0031]
c57bl/6j小鼠购自：北京华阜康生物科技股份有限公司；
[0032]
香蒲新苷(typ)购自：mce公司；
[0033]
2％葡聚糖硫酸钠(dss)购自：mp公司；
[0034]
实施例1香蒲新苷对溃疡性结肠炎小鼠疾病症状的影响
[0035]
将体重18
‑
20g左右的健康8周龄雌性c57bl/6j小鼠30只，随机分为3组，每组10只，即对照组(pbs组)，模型组(dss组)和香蒲新苷组(typ dss)组，待小鼠适应spf级环境1周后进行给药。对照组给予pbs灌胃，饮用正常水；将香蒲新苷(typ)溶于磷酸盐缓冲液(pbs)中，按照小鼠的体重，以40mg/kg的剂量灌胃8周龄雄性c57bl/6j小鼠，dss组和typ dss组小鼠采用2％葡聚糖硫酸钠(dss)进行结肠炎造模。dss溶液每两天更换一次。实验动物分组及给药方法见表1。
[0036]
表1动物实验设计
[0037][0038]
在开始给药造模后，每天对小鼠进行称重并计算体重变化率，注意观察小鼠的一般情况。此外，每天对小鼠大便性状及潜血情况进行评估。利用小鼠的体重下降百分比、粪便性状和潜血情况进行评分，三者之和为结肠炎小鼠的疾病活动指数评分(disease activity index,dai score)。具体评分细则见表2。
[0039]
表2疾病活动指数评分表
[0040][0041]
各组小鼠的体重变化见图1，与dss组相比，香蒲新苷可改善dss诱导的小鼠结肠炎模型的体重下降(*p<0.05)；各组小鼠的疾病活动指数见图2，与dss组相比，香蒲新苷可显著减轻dss诱导的小鼠结肠炎模型的疾病活动指数(***p<0.001)；各组小鼠的脾重见图3，可见，dss组小鼠的脾重与pbs组相比显著增加(***p<0.001)，与dss组相比，香蒲新苷组小鼠的脾重明显降低(**p<0.01)。
[0042]
在给药后第7天，给予小鼠吸入二氧化碳安乐死。开腹留取各组小鼠的脾脏并称重，留取结直肠并测量其长度。用冰pbs缓冲液冲净肠内容物后将结肠沿纵向铺平于载玻片上，一半组织剪碎后置于无rna酶冻存管中，快速放入
‑
80℃冰箱保存，用于后续realtime
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pcr和western blot实验。剩余一半组织置于10％甲醛中固定，经脱水透明、浸蜡包埋、切片展片和脱蜡染色后制备成病理切片。通过病理切片观察实验小鼠结肠组织的形态学变化，并分别从炎症情况、黏膜损伤、隐窝损伤、病理学损伤范围等四个指标进行评分，四个指标之和即为组织病理学评分。具体评分细则见表3。
[0043]
表3组织病理学评分标准
[0044][0045]
各组小鼠的结肠长度见图4，dss组小鼠的结肠长度与pbs组相比明显缩短(***p<0.001)。与dss组相比，香蒲新苷组结肠炎小鼠的结肠缩短程度得到显著性缓解(***p<0.001)。
[0046]
各组小鼠的结肠病理切片结果见图5，组织病理学评分见图6。pbs组小鼠的结肠黏膜层上皮结构完整，为单层的柱状上皮细胞，形态结构正常，固有层肠腺数量丰富，可见较多杯状细胞，肌层染色均匀，肌纤维形态正常，未见明显炎症。dss组小鼠的结肠组织出现大面积的溃疡，上皮结构破坏，隐窝消失，结肠组织中炎性细胞(中性粒细胞、淋巴细胞等)大量浸润；黏膜下层明显水肿，结缔组织排列疏松并伴有淋巴细胞浸润，组织病理学评分显著高于对照组(***p<0.001)。香蒲新苷组小鼠的结肠组织可见局部溃疡，面积较小，可见轻度的隐窝消失及上皮结构破坏，伴有少量的炎性细胞浸润，黏膜下层炎症累及较少，肌层结构基本正常，组织病理学评分较dss组显著下降(*p<0.05)。该实验结果表明香蒲新苷能够有
效预防和改善溃疡性结肠炎小鼠的组织病理学损伤。
[0047]
各组实验小鼠结肠组织的nf
‑
κb通路的蛋白水平见图7。与pbs组小鼠相比，dss组和香蒲新苷组小鼠的iκbα和p65的总蛋白水平未发生变化。dss组小鼠结肠组织中磷酸化iκbα和磷酸化p65的水平较对照组明显增加。与dss组相比，香蒲新苷组小鼠磷酸化iκbα和磷酸化p65的水平明显下降。该实验结果表明香蒲新苷能够有效抑制溃疡性结肠炎小鼠的nf
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κb通路激活。
[0048]
各组实验小鼠结肠组织的炎症因子il1β表达水平见图8，炎症因子il6表达水平见图9，炎症因子ifn
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γ表达水平见图10。与pbs组相比，dss组小鼠结肠组织中炎症因子il1β(**p<0.01)、il6(**p<0.01)和ifn
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γ(***p<0.001)的mrna表达水平明显增加。而与dss组相比，香蒲新苷组小鼠结肠组织中炎症因子il1β(*p<0.05)、il6(**p<0.01)和ifn
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γ(**p<0.01)的mrna表达水平显著降低。该实验结果表明香蒲新苷能够有效抑制溃疡性结肠炎小鼠的炎症因子转录水平。
[0049]
本发明经过实验证实，香蒲新苷显示出显著的抗溃疡性结肠炎的活性。香蒲新苷可改善dss诱导的小鼠结肠炎模型的体重下降，减轻疾病活动指数和降低小鼠脾重，显著性改善结肠炎模型实验小鼠的结肠炎症状，并能够抑制溃疡性结肠炎小鼠肠道nf
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κb通路的激活和炎症因子的转录水平，能够用于制备抗溃疡性结肠炎药物。
[0050]
以上所述仅为本发明创造的较佳实施例而已，并不用以限制本发明创造，凡在本发明创造的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明创造的保护范围之内。