一种免疫分析仪光学系统校准方法与流程

1.本发明涉及体外诊断技术领域，特别涉及一种免疫分析仪光学系统校准方法。


背景技术：

2.体外诊断poct是一类极具潜力的检测技术，有快速简便、效率高、成本低、检验周期短、标本用量少等优点，已经被广泛应用于临床。poct作为一种新的发展方向近年来得到了快速的发展。
3.但因国内市场起步较晚，在它的产生和发展过程中存在需要改进的地方，统一的仪器光学系统会因元器件本身之间的差异、机械加工公差引起的差异或装调过程引起的差异导致非线性的光学模块的台间误差。
4.有鉴于此，实有必要开发一种免疫分析仪光学系统校准方法，用以解决上述问题。


技术实现要素：

5.针对现有技术中存在的不足之处，本发明的主要目的是，其利用拟合算法，计算出校准机与标准机之间的拟合曲线，把不同光学模块之间用于非线性关系引起的台间误差控制住可控范围之内。
6.为了实现根据本发明的上述目的和其他优点，提供了一种免疫分析仪光学系统校准方法，包括：
7.步骤1.制备缓冲液标准品：
8.制备10个不同校准点浓度的缓冲液标准品至缓冲液板中；
9.步骤2.制备校准检测卡：
10.配置配制兔igg包被缓冲液，将配制兔igg包被缓冲液包被至硝酸纤维素膜；将上样垫、吸水纸、硝酸纤维素膜装至pvc底板，分切为膜条；将膜条放置检测卡壳中；
11.步骤3.样本检测：
12.向免疫分析仪中录入缓冲液标准品的校准点信息；
13.利用免疫分析仪检测10个不同校准点浓度的缓冲液标准品，得到相对应的校准点荧光值；
14.步骤4.校准：
15.根据缓冲液标准品的校准点信息，得到10个缓冲液标准品的标准校准点荧光值，通过回归函数计算出标准情况下的f(x)方程；
16.根据样本检测结果，得到10个缓冲液标准品相对应的测试校准点荧光值，通过回归函数家算出检测情况下的g(x)方程；
17.获得校准方程y(x)＝f(x)
‑
g(x)；
18.根据校准方程对免疫分析仪光学系统进行校准；
19.步骤5.校准评估：
20.采用非校准点浓度的缓冲液进行测试，与标准机测试结果比对，准确度偏差在允
许偏差度内，校正合格。
21.进一步的，所述步骤1中采用的缓冲液标准品为用alexa fluor 647标记的羊抗兔抗体溶液。
22.进一步的，所述羊抗兔抗体溶液标记偶联比在1.4
‑
4之间。
23.进一步的，所述步骤2中硝酸纤维素膜宽度为3.9
‑
4.1mm。
24.进一步的，所述步骤2中硝酸纤维素膜每公分包被0.5ul的兔igg包被缓冲液。
25.进一步的，所述步骤2中兔igg包被缓冲液浓度为1.0mg/ml。
26.进一步的，所述步骤3中免疫分析仪检测缓冲液标准品步骤包括：
27.1)机械臂取tip耗材(移液器枪头)装至移液器；
28.2)移液器移动至缓冲夜板；
29.3)移液器吸取缓冲液标准品；
30.4)抛弃使用完的缓冲液板；
31.5)将检测卡移动到反应位；
32.6)移液器将缓冲液标准品移液至检测卡；
33.7)移动检测卡至检测位检测；
34.8)显示检测结果并存储；
35.9)抛弃检测卡；
36.10)抛弃tip耗材(移液器枪头)。
37.进一步的，所述步骤5中的允许偏差度为5％。
38.上述技术方案中的一个技术方案具有如下优点或有益效果：
39.本发明免疫分析仪光学系统校准方法，操作简单，检测速度快，原材料来源广泛易获得、成本低廉；
40.本发明其利用拟合算法，计算出校准机与标准机之间的拟合曲线，把不同光学模块之间用于非线性关系引起的台间误差控制住可控范围之内。
附图说明
41.图1为根据本发明一个实施方式提出的免疫分析仪光学系统校准方法中的缓冲液板100俯视图；
42.图2为根据本发明一个实施方式提出的免疫分析仪光学系统校准方法中膜条的结构视图；
43.图3为根据本发明一个实施方式提出的免疫分析仪光学系统校准方法中检测卡200的结构视图；
44.图4为根据本发明一个实施方式提出的免疫分析仪光学系统校准方法中样本检测的检测步骤图；
45.图5为根据本发明一个实施方式提出的免疫分析仪光学系统校准方法中校准得出的校准曲线图；
46.图中：1
‑
第一缓冲液；2
‑
第二缓冲液；3
‑
第三缓冲液；4
‑
第四缓冲液；5
‑ꢀ
第五缓冲液；6
‑
第六缓冲液；7
‑
第七缓冲液；8
‑
第八缓冲液；9
‑
第九缓冲液； 10
‑
第十缓冲液；100
‑
缓冲液板100；200
‑
检测卡；211
‑
上样垫；212
‑
吸水纸； 213
‑
硝酸纤维素膜；214
‑
pvc底板；220
‑
检测卡壳；
具体实施方式
47.下面将结合本发明实施方式中的附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
48.在附图中，为清晰起见，可对形状和尺寸进行放大，并将在所有图中使用相同的附图标记来指示相同或相似的部件。
49.在下列描述中，诸如中心、厚度、高度、长度、前部、背部、后部、左边、右边、顶部、底部、上部、下部等用词是相对于各附图中所示的构造进行定义的，特别地，“高度”相当于从顶部到底部的尺寸，“宽度”相当于从左边到右边的尺寸，“深度”相当于从前到后的尺寸，它们是相对的概念，因此有可能会根据其所处不同位置、不同使用状态而进行相应地变化，所以，也不应当将这些或者其他的方位用于解释为限制性用语。
50.涉及附接、联接等的术语(例如，“连接”和“附接”)是指这些结构通过中间结构彼此直接或间接固定或附接的关系、以及可动或刚性附接或关系，除非以其他方式明确地说明。
51.根据本发明的一实施方式结合图1和图2的示出，可以看出，免疫分析仪光学系统校准方法包括：
52.实施例：
53.1.制备缓冲液：
54.1.1alexa fluor 647标记羊抗兔抗体，使用分光光度计检测标记偶联比在 1.4
‑
4之间，标记好羊抗兔理论浓度为2.0mg/ml；
55.1.2制备10个不同校准点浓度的缓冲液标准品：
56.第一缓冲液1：将已标记的2.0mg/ml羊抗兔溶液80倍稀释，将其浓度稀释为0.025mg/ml，得到第一缓冲液1，取6ml备用；
57.第二缓冲液2：将第一缓冲液1溶液3ml与3ml稀释液混合，将其浓度稀释为0.0125mg/ml,得到第二缓冲液2，取6ml备用；
58.第三缓冲液3：将第二缓冲液2溶液3ml与3ml稀释液混合，将其浓度稀释为6.25ug/ml,得到第三缓冲液3，取6ml备用；
59.第四缓冲液4：将第三缓冲液3溶液3ml与3ml稀释液混合，将其浓度稀释为3.125ug/ml,得到第四缓冲液4，取6ml备用；
60.第五缓冲液5：将第四缓冲液4溶液3ml与3ml稀释液混合，将其浓度稀释为1.5625ug/ml,得到第五缓冲液5，取6ml备用；
61.第六缓冲液6：将第五缓冲液5溶液3ml与3ml稀释液混合，将其浓度稀释为0.78125ug/ml,得到第六缓冲液6，取6ml备用；
62.第七缓冲液7：将第六缓冲液6溶液3ml与3ml稀释液混合，将其浓度稀释为0.390625ug/ml,得到第七缓冲液7，取6ml备用；
63.第八缓冲液8：将第七缓冲液7溶液3ml与3ml稀释液混合，将其浓度稀释为
0.1953125ug/ml,得到第八缓冲液8，取6ml备用；
64.第九缓冲液9：将第八缓冲液8溶液3ml与3ml稀释液混合，将其浓度稀释为0.0976563ug/ml,得到第九缓冲液9，取6ml备用；
65.第十缓冲液10：将第九缓冲液9溶液3ml与3ml稀释液混合，将其浓度稀释为0.0488282ug/ml,得到第十缓冲液10，取6ml备用；
66.1.3将10个不同浓度缓冲液标准品灌装至缓冲液板100中，每孔灌装60ul 缓冲液标准品(如图1所示)；
67.1.4使用封膜机封口，备用。
68.2.制备校准检测卡200
69.2.1配制兔igg包被缓冲液2ml，所述兔igg浓度为1.0mg/ml；
70.2.2使用全自动划膜生产平台将兔igg包被缓冲液包被至硝酸纤维素膜 213，所述硝酸纤维素膜宽度为3.9
‑
4.1mm，所述硝酸纤维素膜213每公分包被0.5ul的兔igg包被缓冲液，60℃干燥2min；
71.2.3组装检测卡200，组装过程如下：
72.2.3.1材料准备：上样垫211，吸水纸212，已包被的硝酸纤维素膜213， pvc底板214，检测卡壳220；
73.2.3.2将上样垫211，吸水纸212，已包被的硝酸纤维素膜123三个物料组装至pvc底板214上组成膜条，所述膜条宽度为3.9
‑
4.1mm(如图2所示)；
74.2.3.3将膜条210放置检测卡壳220中(如图3所示)。
75.3.样本检测
76.3.1仪器开机，硬件自检；
77.3.2用户软件登录；
78.3.3装载tip耗材；
79.3.4装载校准缓冲液：录入校准缓冲液信息；
80.3.5用户软件中录入校准检测信息和检测数量；
81.3.6样本检测，重复完成检测10个不同梯度校准测试，得到对应的校准点荧光值；
82.免疫分析仪检测过程为，如图4所示：
83.3.6.1.机械臂取tip耗材(移液器枪头)装至移液器；
84.3.6.2.移液器移动至缓冲夜板；
85.3.6.3.移液器吸取缓冲液标准品；
86.3.6.4.抛弃使用完的缓冲液板100；
87.3.6.5.将检测卡200移动到反应位；
88.3.6.6.移液器将缓冲液标准品移液至检测卡200；
89.3.6.7.移动检测卡200至检测位检测；
90.3.6.8.显示检测结果并存储；
91.3.6.9.抛弃检测卡200；
92.3.6.10.抛弃tip耗材(移液器枪头)。
93.3.7重复完成检测10个不同校准点浓度的缓冲液标准品校准测试，得到对应的荧光值。
94.4.校准：
95.4.1.根据校准缓冲液信息，通过回归函数计算出f(x)方程：f(x)＝203.49x 2
‑
1424.5x 1996.4；
[0096][0097]
4.2.所有校准测试完成后，得到10个缓冲液的校准点浓度值，通过回归函数计算出g(x)方程：g(x)＝206.31x2‑
1411.1x 1953.6；
[0098][0099]
4.3两个方程相减，获得新的方程delta y(x)＝f(x)
‑
g(x)，如图5所示：
[0100]
y(x)＝2.8175x2‑
13.392x 42.885；
[0101][0102]
4.4y(x)即为免疫分析仪光学系统的校准曲线，根据校准曲线校准免疫分析仪的光学系统。
[0103]
本发明其利用拟合算法，计算出校准机与标准机之间的拟合曲线，把不同光学模块之间用于非线性关系引起的台间误差控制住可控范围之内。
[0104]
5.校准结果评价
[0105]
利用标准机并使用非校准点浓度的缓冲测试液进行测试比对复验，准确度偏差在允许偏差度以内认为合格，所述允许偏差度为5％；
[0106]
标准机测试结果g(x)y(x)校准后结果偏差
‑
41.9952.50
‑
94.30
‑
41.800.0010.36108.35
‑
97.8010.550.02152.13266.36
‑
107.03159.330.051062.871204.44
‑
151.341053.10
‑
0.013200.773535.21
‑
234.143301.070.036346.846785.58
‑
328.366457.220.02
[0107]
经测试发现选用的6个非校准品浓度的缓冲液进行荧光读数，发现与标准机偏差在允许偏差度范围内，校准合格。
[0108]
这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
[0109]
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。