抗利妥昔单抗嵌合抗原受体及其用途的制作方法

技术特征：

1.一种编码包含与SEQ ID NO:9至少70％一致的抗CD19嵌合抗原受体(CAR)的多肽的经分离多核苷酸，其中所述多肽不包含利妥昔单抗(rituximab)结合位点，并且其中所述多核苷酸包含能够在哺乳动物T细胞中表达抗CD19嵌合抗原受体(CAR)的短EF1a启动子。

2.根据权利要求1所述的经分离多核苷酸，其中所述短EF1a启动子不包含由SEQ ID NO:15构成的内含子。

3.根据权利要求2所述的经分离多核苷酸，其中所述内含子包含SEQ ID NO:39的核酸序列。

4.根据前述权利要求中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述启动子包含SEQ ID NO:16的核酸序列，

5.根据前述权利要求中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述多肽还包含安全开关。

6.根据权利要求5所述的经分离多核苷酸，其中使用接头肽将所述安全开关连接到所述CD19 CAR。

7.根据权利要求5所述的经分离多核苷酸，其中使用T2A接头将所述安全开关连接到所述抗CD19 CAR。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述安全开关包含抗体结合位点。

9.根据权利要求5至7中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述安全开关包含突变的CD20模拟表位。

10.根据权利要求5至9中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述多肽包含CD34表位。

11.根据权利要求10所述的经分离多核苷酸，其中所述CD34表位是QBEND-10表位。

12.根据权利要求5至11中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述多肽还包含CD8铰链/跨膜结构域。根据前述权利要求中任一项所述的经分离多核苷酸，其包含与SEQ ID NO:1-7中的任一者至少约80％、85％、90％、95％、96％、98％、99％或100％一致的核酸序列。

13.根据前述权利要求中任一项所述的经分离多核苷酸，其编码与SEQ ID NO:8-14中的任一者至少约80％、85％、90％、95％、96％、98％、99％或100％一致的多肽。

14.一种载体，其包含根据前述权利要求中任一项所述的经分离多核苷酸。

15.根据权利要求15所述的载体，其中所述载体是逆转录病毒载体、DNA载体、质粒、RNA载体、腺病毒载体、腺病毒相关载体、慢病毒载体或其任何组合。

16.一种工程改造免疫细胞，其包含根据权利要求1至14中任一项所述的经分离多核苷酸，其中所述工程改造免疫细胞不表达利妥昔单抗结合位点。

17.一种工程改造免疫细胞，其包含根据权利要求14或16所述的载体，其中所述工程改造免疫细胞不表达利妥昔单抗结合位点。

18.根据权利要求17或18中任一项所述的工程改造免疫细胞，其中所述免疫细胞是T细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、NK细胞、表达TCR的细胞、树突状细胞或NK-T细胞。

19.根据权利要求19所述的工程改造免疫细胞，其中所述细胞是自体T细胞。

20.根据权利要求19所述的工程改造免疫细胞，其中所述细胞是同种异体T细胞。

21.根据权利要求17至21中任一项所述的工程改造免疫细胞，其中所述细胞包含与SEQ ID NO:3至少约80％、85％、90％、95％、96％、98％、99％或100％一致的多肽。

22.根据权利要求17至22中任一项所述的工程改造免疫细胞，其中所述细胞对利妥昔单抗具有抗性。

23.一种药物组合物，其包含根据权利要求17至23中任一项所述的工程改造免疫细胞。

24.一种治疗有需要的个体的疾病或病症的方法，其包含向所述个体投予根据权利要求17至23中任一项所述的工程改造免疫细胞或根据权利要求24所述的药物组合物。

25.根据权利要求25所述的方法，其中所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。

26.根据权利要求25或26所述的方法，其中所述个体已经用或目前正在用利妥昔单抗治疗。

27.一种制品，其包含根据权利要求17至23中任一项所述的工程改造免疫细胞或根据权利要求24所述的药物组合物。

技术总结
本文提供了编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸，其包含特异性结合到CD19并且对利妥昔单抗结合具有抗性的CD19抗原结合结构域；以及包含这些CD19特异性CAR的免疫细胞，例如CAR‑T细胞。本发明还提供了制造和使用这些CD19特异性CAR的方法，以及包含这些CD19特异性CAR的免疫细胞。

技术研发人员：T·C·珀特尔;B·J·萨苏;M·W·莱昂纳;
受保护的技术使用者：艾洛基治疗公司;
技术研发日：2020.04.24
技术公布日：2021.11.30