用于治疗溶酶体贮积症相关的症状和病症的方法与流程

用于治疗溶酶体贮积症相关的症状和病症的方法
相关申请的交叉引用
1.本技术为国际申请，其要求2019年2月4日申请的申请号为62/800,996，2019年5月22日申请的申请号为62/851,433，2019年8月30日申请的申请号为62/894,167，2019年11月19日申请的申请号为62/937,618，2020年1月17日申请的申请号为62/962,647的美国临时申请的优先权和利益，其各自的内容以全文引用的方式并入本技术中。
技术领域
2.本发明关于使用式(i)的奎宁环(quinuclidine)化合物，可选择地与酶替代治疗组合，用于治疗或防止与溶酶体贮积症相关的特定症状和病症的方法。还包括患有例如法布瑞氏症(fabry disease)的病患中的疼痛例如腹痛，和皮肤病症例如血管角化瘤。


背景技术：

溶酶体贮积症
3.溶酶体贮积症(lsd)为一组约50种罕见遗传代谢疾病，是由于溶酶体功能的缺陷所造成。一般而言，患有lsd的病患因负责代谢基质的酶缺乏或缺陷，或由于供适当酶运作所需的酶活化因子缺乏，而在溶酶体中累积有害量的物质(即，物质贮积)。大多数的lsd是由于单一酶缺陷或缺乏所造成，通常为涉及脂质或糖蛋白代谢的酶。一些较常见的lsd包括高雪氏症(gaucher disease)、法布瑞氏症和尼曼匹克症(c型)(niemann
‑
pick disease,type c)。高雪氏症、法布瑞氏症和尼曼匹克症为鞘髓磷脂储积症的实例。这些疾病各自与一群直接或间接由潜在的遗传缺陷所造成的症状有关。因此，能否有效地以不同治疗方法来治疗与这些有关的症状或病症，常常难以预测。常见的跨越数种lsd的症状包括眼球扫视运动、认知功能不全和步态障碍，例如共济失调(ataxia)的改变。这些症状在高雪氏症(第3型)和尼曼匹克症(c型)中特别常见。法布瑞氏症和皮肤病症
3.法布瑞氏症是由于酶α
‑
半乳糖苷酶缺陷，使得酰基鞘氨醇三己糖(globotriaosylceramide)(gl
‑
3，亦称为gb3)堆积所造成。gl
‑
3堆积在血浆、组织和某些器官中。此疾病是由x
‑
性联隐性遗传突变所造成，因此男性可能具有严重的症状，而女性罹病范围可能从无症状至轻微或严重。一种常见的法布瑞氏症的症状为全身疼痛或局部疼痛。外围神经病变，明显的肾并发症亦为常见的，包括慢性肾疾病和肾衰竭。神经鞘脂质堆积在心肌中可能造成心脏肥大或限制型心肌病，以及心律异常，例如心搏过速和心动过缓(包括心脏传导完全阻断)。皮肤牵连包括形成血管角化瘤(小的，无痛丘疹)，及眼睛牵连可包括角膜浑浊(涡状角膜病变)和结膜及视网膜血管异常和白内障。
4.gl
‑
3堆积在皮肤和软组织造成法布瑞氏症最早症状，包括皮肤病灶(例如血管角化瘤)、肢端感觉异常和少汗症。参见lidove,o.et al.,dermatological and soft
‑
tissue manifestations of fabry disease:characteristics and response to enzyme replacement therapy,chap.24 in fabry disease:perspectives from 5years of fos
(mehta,a.et al.eds.,oxford pharmagenesis 2006)，可经由国家医学图书馆、ncbi bookshelf在线取得。这些症状通常始于孩童时期，多年之后发生严重器官损伤，其为此疾病晚期特征。皮肤包括数层：表皮、真皮和皮下组织，其各自具有许多的细胞类型。法布瑞氏症主要影响内皮血管。在浅真皮层的内皮细胞，恰好在无血管表皮的下方，为此疾病的主要目标。也会侵袭在神经束膜的神经滋养管内皮细胞。此外，gl
‑
3可能堆积在血管外围细胞、外分泌腺细胞和皮肤纤维母细胞的溶酶体中。
5.血管角化瘤为良性的血管皮肤病灶，其特征为上真皮中扩张的血管增生。其发生在gl
‑
3堆积于真皮内皮细胞时导致血管凸起及血管壁封闭不全，接着继发性扩张。这些为在患有法布瑞氏症病患中发现的主要皮肤病灶且可能开始出现在5岁至15岁之间的孩童(平均年龄13.5岁)。其出现在83％的男性和80％的女性的法布瑞氏症患者中。血管角化瘤随着年龄蔓延，开始在嘴唇、手和脚趾上浮现。其可能为分开或丛集并以带有平滑表皮表面的小的红至黑色丘疹出现。当疾病恶化时，病灶变大，达到直径10mm，并变成具有疣状表面的深红色至黑色。电子显微镜研究显示在血管内皮细胞、血管周边细胞、外分泌腺细胞、皮肤纤维母细胞和神经束膜中有电子密集的溶酶体包含物。
6.除了血管角化瘤，法布瑞氏症还与特异性多发性神经病变和汗腺浸润有关，通常造成法布瑞氏症的出汗异常。经典的症状为少汗症(出汗减少)和无汗症(缺汗)。这些症状可能对于生活质量有显著的影响，造成发热，以及热和运动的不耐受性。少汗症通过让患者不耐受热和运动而易有肢端感觉异常的倾向。泪腺减少眼泪产生和减低的唾液产生可能与法布瑞氏症患者的少汗症有关。
7.多汗症在法布瑞氏症患者中比少汗更罕见，且似乎在女性中比男性较常见。其可能是多汗症为一种发生在法布瑞氏症中外围神病变的表现。当皮肤和黏液腺受侵袭时，可能必须限制病患在温热环境的时间和进行体力活动的时间。
8.在患有法布瑞氏症的病患中，淋巴水肿似乎与淋巴管中糖脂质的堆积有关。在缺乏治疗下，法布瑞氏症的淋巴水肿可能并发丹毒，具有全身性感染的风险。导致淋巴水肿的严重的淋巴微血管病变，在法布瑞氏症患者中已有描述。然而，一项研究显示，发生在男性和女性法布瑞氏症病患的皮肤初始淋巴管中的严重的结构和功能改变，与是否有出现淋巴水肿无关。
9.肢端感觉异常也为法布瑞氏症最早的症状之一。其被认为是由于外围神经缺血，其次内皮神经束模细胞异常所致，且特征为手和脚刺痛、长期性灼痛或闷痛。可能发生持续数分钟至数天的失能性疼痛的急性发作。这些可能自发性发生但也可能由热、疾病、压力或运动所引发。疲劳、轻度发烧和关节痛可能与这些急性疼痛危机有关。法布瑞氏症和疼痛
10.就病患从事日常生或的正常活动的能力而言，疼痛为法布瑞氏症中一种使人衰弱的症状。法布瑞氏症常见的症状为全身疼痛、局限于四肢的疼痛或肠胃疼痛(例如腹痛)，其被认为是由于外围神经末端损伤及/或由于脂质堆积在微血管系统造成疼痛的血流阻塞。
11.酶替代治疗(ert)为目前在美国仅有核准以半合成酶agalsidaseβ(α
‑
半乳糖苷酶)用于法布瑞氏症的治疗之一。另外的酶agalsidaseα在欧洲已核准，但美国则尚未批准。在欧洲，小分子α
‑
半乳糖苷酶抑制剂米加司他(migalastat)[1
‑
脱氧半乳糖野生霉素(1
‑
deoxygalactonojirimycin)]也被核准用于治疗法布瑞氏症病患的亚群。在某些病患中，α
‑
半乳糖苷酶的缺陷是由于蛋白错误折叠所致，而非氨基酸序列的错误。对于此类的病患，已发现米加司他是与错误折叠的蛋白结合并使其复位向正确的构型
‑
但仅错误折叠之类的错误能接受此项矫正。
[0012]
ert因此仍为法布瑞氏症治疗的主流。ert在减轻与法布瑞氏症有关的疼痛上并非具有高效，且镇痛剂、抗痉挛剂和非类固醇类消炎药的额外治疗通常为必须。因此，对于同时有效管理法布瑞氏症的疼痛的法布瑞氏症治疗仍明显未满足需求。
[0013]
本技术中所述的奎宁环化合物具有作为酶葡萄糖神经酰胺合成酶(gcs)的抑制剂的活性。这些化合物已被公开一般可用于治疗溶酶体贮积症，例如法布瑞氏症、高雪氏症和尼曼匹克症。参见，例如wo 2012/129084和u.s.2016/0361301。
[0014]
在本领域中对于开发有效用于减轻或管理与法布瑞氏症有关的疼痛及皮肤病症的治疗剂有实际需求。


技术实现要素：

[0015]
本发明是关于根据式(i)的奎宁环化合物(化合物i)，或其医药学上可接受盐或前药，其中：r1选自氢、卤素(例如，氟)、氰基、硝基、羟基、硫基、氨基、c1‑6‑
烷基(例如，甲基或乙基)、c2‑6‑
烯基、c2‑6‑
炔基、c1‑6‑
烷氧基、c2‑6‑
烯氧基和c2‑6‑
炔氧基，其中该烷基、烯基、炔基、烷氧基、烯氧基或炔氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素、氰基、硝基、羟基、硫基或氨基的基团取代；r2和r3独立地选自c1‑3‑
烷基，其可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)卤素取代，或r2和r3共同形成环丙基或环丁基基团，可选择地经一或多个(例如，1或2个)卤素取代；r4、r5和r6各自独立地选自氢、卤素、硝基、羟基、硫基、氨基、c1‑6‑
烷基和c1‑6‑
烷氧基，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素、羟基、氰基和c1‑6‑
烷氧基的基团取代；及a为5
‑
或6
‑
元芳基或杂芳基基团，可选择地是经1、2或3个独立选自卤素、羟基、硫基、氨基、硝基、c1‑6烷氧基或c1‑6烷基的基团取代。
[0016]
在第一方面，本技术是于有此需要的受试者中提供用于治疗或防止疼痛，包括神经病变疼痛、肠胃疼痛(例如，腹痛)和周围神经病变的方法，该方法包括投予该受试者有效量的如本技术中所述的奎宁环化合物，例如，根据式i的化合物。
[0017]
在另外的方面，本技术进一步是提供本技术中所述的奎宁环化合物用于治疗或防止疼痛，包括神经病变疼痛、肠胃疼痛(例如，腹痛)和周围神经病变和皮肤病症(例如，血管角化瘤、肢端感觉异常、少汗症、无汗症、多汗症、淋巴水肿、及肢端感觉异常)的用途。在某
些实施方案中，在任何这些方面中，有此需要的受试者为患有法布瑞氏症、高雪氏症例如第3型或尼曼匹克症c型的受试者。
[0018]
本技术中所公开的化合物、组合物和方法的另外的特征和优势从下列发明详述将显而易见。
[0019]
发明详述虽然现在将参照制备和流程描述本技术的特定实施方案，但应了解，这些实施方案只是举例且仅为许多可代表本技术原理的应用的可能特定具体实施方案的小部份说明。受益于本技术，对于本领域技术人员，各种变化和修改应为明显的且视为在进一步于所附的权利要求中所定义的本技术的精神和范围内。定义
[0020]
除非另有定义，否则本技术中所用的所有的技术和科学术语具有与本技术所属领域中的本领域技术人员一般理解的意义。虽然任何类似或等同本技术中所述的方法和物质可用于施行或试验本发明，但示例的方法、装置和材料为现在所述。本技术中所引述的所有技术和专利公开案以全文引用的方式并入本技术中。在本技术中不应解释为承认本发明无权先于这些凭借先前发明的公开内容。
[0021]
除非另有指出，否则本技术的施行将应用常规的组织培养、免疫学、分子生物学、微生物学、细胞生物学和重组dna的技术，这些都在本领域的技术中。
[0022]
所有的数字标号例如ph、温度、时间、浓度、分子量，包括范围，为大约值，若适当，其变化( )或(
‑
)为0.1或1.0的增加量。应了解，虽然并不一定明确地陈述所有数字标号，其以术语“大约”处理。也应了解，虽然并不一定明确地陈述，但本技术中所述的试剂仅为示例且其同等物已为本领域所知。
[0023]
如本技术中所用，术语“可选择地经取代”指相当于“非取代或经
…
取代”的词语。
[0024]
如本技术中所用，词语“在治疗或防止的方法中”(例如在“治疗或防止疼痛的方法中”词语中)是指相当于“在..治疗或防止中”(例如在“疼痛的治疗或防止中”词语中)。
[0025]
除非内容另有明确指出，否则如本说明书和申请专利范围中所用，单数型“一(a，an)”和“此/该(the)”是包括复数型的参照物。例如，术语“细胞”包括复数个细胞，包括其混合物。除非有特别陈述或从上下文中显而易见，否则如本技术中所用，术语“或”应理解为包括在内。术语“包括”用于本技术中是指“包括但不限于”的词语，并可与其交换使用。
[0026]
如本技术中所用，术语“包括”希望是指包括所述元素的组合物和方法，但不排除其他。“基本上由...组成”当用于定义组合物和方法时，应指排除其他任何所述目的的组合的基本意义元素。因此，基本上由本技术中所定义的元素所组成的组合物不应排除来自分离和纯化方法的示踪污染物及医药学上可接受载剂，例如磷酸缓冲食盐水、防腐剂及其类似物。“由...组成”应指排除多于其他成份的示踪元素及用于投予本发明组合物的实质方法步骤或制造组合物或达到所希望的结果的方法步骤。由各自这些过渡术语所定义的具体实施方案在本发明的范围内。本技术中术语“包括”的用法希望涵盖“基本上由...组成”及“由...组成”。
[0027]“受试者”、“个体”或“病患”在本技术中交换使用且指脊椎动物，例如哺乳动物。哺乳动物包括(但不限于)鼠科、大鼠、兔、猿猴、牛、羊、猪、犬类、猫类、农用动物、运动动物、宠物、马、灵长类和人类。在一个具体实施方案中，该哺乳动物包括马、狗和猫。在某些具体实施方案中，该哺乳动物为人类，例如，患有特定疾病或病症，如高雪氏症(例如，gd
‑
3)或尼曼
匹克症c型的人类。
[0028]“投予”在本技术中定义为以一方式提供药剂或含有此药剂的组合物给予受试者使得该药剂在该受试者体内的方法。此投予可通过任何路径，包括(不限于)口服、经皮(例如阴道、直肠、口腔黏膜)，通过注射(例如皮下、静脉内、肠道外、腹膜内、注入cns)或通过吸入(例如经口或鼻部)。医药制备物当然是以适合各给药路径的形式来给予。
[0029]“治疗”疾病一般包括：(1)抑制疾病，即遏止或降低疾病发展或其临床症状；及/或(2)减轻疾病，即使疾病或其临床症状消退。
[0030]“防止”疾病一般包括在可能易罹患此疾病但尚未经历或出现该疾病症状的患者中使得此疾病的临床症状不发展。
[0031]
术语“罹患”当其与术语“治疗”有关时指已诊断出患有该疾病的病患或个体。术语“罹患”当其与术语“防止”有关时是指易患有此疾病的病患或个体。病患也可指因为其家族病史或因为有与此疾病相关的基因突变存在而处于疾病“罹患的风险”。处于疾病风险的病患是尚未发展出所有或某些疾病的特征病理。
[0032]“有效量”或“治疗上有效量”为足以产生有利的或所希望的结果的量。有效量可以一或多次投予、施用或剂量来给药。此递送是依照许多的变量而定，包括所使用的个别剂量单位的时间周期、治疗剂的生物可利用性及给药路径等。请了解，就任何特定受试者，特定的本发明治疗剂的特定剂量水平是依照各种因素而定，包括，例如所用的特定化合物的活性、该受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食、给药时间、排泄率、药物组合及所治疗的特定病症的严重度及给药形式。治疗剂量一般可经滴定使安全性和效力优化。典型地，来自活体外及/或活体内试验的剂量
‑
效用关系最初可提供病患给药的适当剂量的有用指南。一般而言，希望投予化合物的量其为有效达到相当于活体外发现的有效浓度的血清量。测定这些参数完全是在本领域的技术中。这些考虑，以及有效调配物和给药程序已为本领域所熟知且描述于标准教科书中。与此定义一致，如本技术中所用，术语“治疗上有效量”为在活体外、试管内或活体内足以治疗(例如改善)一或多项与本技术中所述的疾病或病症有关的症状的量(例如，在任何方法2及其后的方法或方法3及其后的方法)。
[0033]
如本技术中所用，术语“医药学上可接受赋形剂”是涵盖任何标准的医药赋形剂，包括载剂例如磷酸缓冲食盐水溶液、水，和乳液例如油/水或水/油乳液，及各种类型的湿化剂。医药组合物也可包括稳定剂和防腐剂。就载剂、稳定剂和佐剂的实例请参见remington’s pharmaceutical sciences(20th ed.,mack publishing co.2000)。
[0034]
如本技术中所用，术语“前药”指母药分子的药理学衍生物，其在生物体内需要自发性或酶性生物转化，以释放活性药物。例如，前药为本技术中所述的奎宁环化合物的变体或衍生物，其具有在特定代谢条件下可裂解的基团，当其裂解时，变成本技术中所述的奎宁环化合物，例如式i的化合物。这些前药，当其于生理条件下经过溶剂分解或经过酶降解时，在活体内则具有医药活性。本技术中的前药化合物，依照在生物体内释出活性药物的生物转化步骤次数以及存在前驱物形式的功能基数目，可称为单前药、双前药或三前药等。前药形式在哺乳动物生物体中通常提供溶解度、组织兼容性或延迟释放的优点。
[0035]
在本领域中一般已知的前药包括熟知的酸衍生物，例如，举例而言，通过酸化合物与适合的醇反应所制备的酯类，通过酸化合物与胺反应所制备的酰胺类，及碱性基团反应而形成酰化的碱衍生物等。其他的前药衍生物可与本技术中所公开的其他特质组合用以增
进生物可利用率。就此，本领域技术人员应了解，具有，例如游离氨基或羟基基团的当前所公开的特定化合物可转变成前药。前药包括具有氨基酸残基，或二或多个(例如二、三或四个)氨基酸残基的多肽链的化合物，其是经由本文所公开的化合物的肽键与游离的氨基、羟基或羧酸基团共价连接。氨基酸残基包括通常以三个字母符号来标示的20种天然生成的氨基酸且亦包括4
‑
羟基脯氨酸、羟基赖氨酸、锁链素(demosine)、异锁链素(isodemosine)、3
‑
甲基组氨酸、正缬氨酸、β
‑
丙氨酸、γ
‑
氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸和甲硫氨酸砜。前药还包括与任何本技术中所公开的上述取代基共价键结的具有碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺或烷基酯基团的化合物。
[0036]
如本技术中所用，术语“医药学上可接受盐”指当前所公开的化合物的医药学上可接受酸加成盐或医药学上可接受碱加成盐，其可在无生成任何实质上不希望的生物效应或与其中可能含有的医药组合物的任何其他组份产生任何有害交互作用下给药。
[0037]
如本技术中所用，术语“c1‑6‑
烷基”指基本上由1至6个碳原子及对应数目的氢原子所组成的饱和直链或支链游离基。示例的c1‑6‑
烷基基团包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基和异丁基。受益于本技术，其他的c1‑6‑
烷基基团对本领域技术人员为显而易见的。术语“c1‑3‑
烷基”、“c1‑4‑
烷基”等具有同等意义，即基本上由1至3个(或4个)碳原子及对应数目的氢原子所组成的饱和直链或支链游离基。
[0038]
如本技术中所用，术语“c2‑6‑
烯基”指基本上由2至6个碳原子及对应数目的氢原子所组成的不饱和直链或支链游离基，该游离基是包括至少一个碳
‑
碳双键。示例的c2‑6‑
烯基基团包括乙烯基、丙
‑1‑
烯基、丙
‑2‑
烯基、异丙烯基、丁
‑1‑
烯基、2
‑
甲基
‑
丙
‑1‑
烯基和2
‑
甲基
‑
丙
‑2‑
烯基。受益于本技术，其他的c2‑6‑
烯基基团对本领域技术人员为显而易见的。
[0039]
如本技术中所用，术语“c2‑6‑
炔基”指基本上由2至6个碳原子及对应数目的氢原子所组成的不饱和直链或支链游离基，该游离基包括至少一个碳
‑
碳三键。示例的c2‑6‑
炔基基团包括乙炔基、丙
‑1‑
炔基、丙
‑2‑
炔基、丁
‑1‑
炔基和3
‑
甲基
‑
丁
‑1‑
炔基等。受益于本技术，其他的c2‑6‑
炔基基团对本领域技术人员为显而易见的。
[0040]
如本技术中所用，术语“c1‑6‑
烷氧基”指基本上由1至6个碳原子(及对应数目的氢原子)和氧原子所组成的饱和直链或支链游离基。c1‑6‑
烷氧基基团经由氧原子相连接。示例的c1‑6‑
烷氧基基团包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基和异丁氧基。受益于本技术，其他的c1‑6‑
烷氧基基团对本领域技术人员为显而易见的。术语“c1‑3‑
烷氧基”、“c1‑4‑
烷氧基”及其类似基团具有同等意义，即基本上由1至3个(或4个)碳原子(及对应数目的氢原子)和氧原子所组成的饱和直链或支链游离基，其中该基团经由氧原子相连接。
[0041]
如本技术中所用，术语“c2‑6‑
烯氧基”指基本上由2至6个碳原子(及对应数目的氢原子)和氧原子所组成的不饱和直链或支链游离基，该游离基包括至少一个碳
‑
碳双键。c2‑6‑
烯氧基基团经由氧原子相连接。示例的c2‑6‑
烯氧基基团有乙烯氧基；受益于本技术，其他的基团对本领域技术人员为显而易见的。
[0042]
如本技术中所用，术语“c2‑6‑
炔氧基”指基本上由2至6个碳原子(及对应数目的氢原子)和氧原子所组成的不饱和直链或支链游离基，该游离基包括至少一个碳
‑
碳三键。c2‑6‑
烯氧基基团是经由氧原子相连接。示例的c2‑6‑
炔氧基基团为乙炔氧基；受益于本技术，其他的基团对本领域技术人员为显而易见的。
[0043]
如本技术中所用，术语“杂芳基”指具有5或6个原子(即环原子)其形成一个环的芳
香游离基，其中1至5个环原子为碳而其余的1至5个环原子(以及杂环原子)独立地由氮、硫和氧组成的组中选出。示例的5
‑
元杂芳基基团包括呋喃基、噻吩基、噻唑基(例如噻唑
‑2‑
基)、吡唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡咯基、三唑基、咪唑基、噁二唑基及噻二唑基。示例的6
‑
元杂芳基基团包括吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、嗒嗪基、1,2,4
‑
三嗪基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并异噁唑基和苯并咪唑基。受益于本技术，其他的杂芳基基团对本领域技术人员为显而易见的。一般而言，杂芳基基团典型地经由碳原子与主结构相连接。然而，本领域技术人员应能了解特定的其他原子，例如杂环原子可与主结构相连接。
[0044]
如本技术中所用，术语“芳基”指具有5或6个原子(即环原子)其形成一个环的芳香游离基，其中所有的环原子为碳。示例的芳基基团为苯基基团。
[0045]
如本技术中所用，术语“脂肪族”指含有碳和氢原子，例如含有1至9个碳原的非芳香化合物。脂肪族化合物可为直链或支链，可含有一或多个环结构，且可含有一或多个碳
‑
碳双键(其限制条件为该化合物不包含具有芳香特性的不饱和环结构)。示例的脂肪族化合物包括乙烷、丙烯、环丁烷和环己二烯。
[0046]
如本技术中所用，术语“卤基”和“卤素”指氟、氯、溴或碘。这些术语可交换使用并可指卤素游离基团或卤素原子本身。有鉴于其中此术语是用于本技术的上下文中，本领域技术人员应能容易确认鉴别。
[0047]
如本技术中所用，术语“氰基”指具有经由三键连接氮原子的碳原子的游离基。此氰基是经由其碳原子相连接。
[0048]
如本技术中所用，术语“硝基”指经由其氮原子相连接的
‑
no2基。
[0049]
如本技术中所用，术语“羟基”指经由其氧原子相连接的
‑
oh基。术语“硫基”指经由其硫原子相连接的
‑
sh基。
[0050]
如本技术中所用，术语“氨基”是指具有1个氮原子及1或2个氢原子的游离基。因此，术语“氨基”一般是指一级和二级氨。就此，如本技术中所用，三级氨是以通式rr’n
‑
代表，其中r和r’为可能相同或可能不同的碳基。然而，术语“氨基”一般于本技术中可用来描述一级、二级或三级氨，且有鉴于其中此术语是用于本技术的上下文中，本领域技术人员应能容易确认鉴别。
[0051]
如本技术中所用，术语“侧氧基”指经由双键相连接的氧自由基。当与此氧原子键结的原子为碳原子时，则此碳
‑
氧双键可以(c＝o)表示并可称为酮。
[0052]
在任何本技术中可变基定义中的化学基团列表叙述是包括任何单一基团或所列基团的组合的可变基定义。就本技术中的可变基或态样的具体实施方案的叙述包括任何单一实施方案或任何其他实施方案或其部份的组合。
[0053]
本技术中所提供的任何组合物或方法可与一或多种本技术中所提供的任何其他组合物和方法组合。
[0054]
本技术中使用下列缩写：br
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
广波讯号cdi
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
羰基二咪唑cns
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
中枢神经系统d
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二重峰dapi
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
4',6
‑
二脒基
‑2‑
苯基吲哚
dd
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
双二重峰dme
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲氧基乙烷dmem
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
杜氏伊格尔修饰培养基dmso
‑
d6
ꢀꢀꢀ
二甲基亚砜
‑
d6dmf
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二甲基甲酰胺dna
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脱氧核糖核酸dtbz
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
碳
‑
11二氢四苯喹嗪(carbon
‑
11dihydrotetrabenazine)edta
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙二胺四乙酸elisa
ꢀꢀꢀꢀꢀ
酶
‑
连接的免疫吸附分析et2o
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乙醚etmgbr
ꢀꢀꢀꢀ
乙基溴化镁etoac
ꢀꢀꢀꢀꢀ
乙酸乙酯gl1
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葡萄糖神经酰胺(glccer)gm1
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单唾液酸四己糖神经节苷脂gm3
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
单唾液酸二己糖神经节苷脂gsl
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鞘糖脂h&e
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苏木精和伊红染色hplc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
高压/高效液相层析hsa
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
人类血清白蛋白ipa
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异丙醇j
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偶合常数lcms
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
液相层析质谱m
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
多重峰ppm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
百万分之一rha
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
重组的人类白蛋白s
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单峰tbme
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
叔丁基甲基醚thf
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四氢呋喃tris
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三(羟基甲基)氨基甲烷tween20
ꢀꢀꢀ
聚山梨醇酯20tween80
ꢀꢀꢀ
聚山梨醇酯80wt
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野生型uplcms
ꢀꢀꢀꢀ
超高效液相层析质谱化合物
[0055]
本技术关于用于有关治疗或防止本技术中所讨论的疾病和病症的治疗方法中的奎宁环化合物。在所有其各种方面中，本发明是关于根据式(i)的奎宁环化合物(化合物1)，
或其医药学上可接受盐或前药，其中：r1选自氢、卤素(例如，氟)、氰基、硝基、羟基、硫基、氨基、c1‑6‑
烷基(例如，甲基或乙基)、c2‑6‑
烯基、c2‑6‑
炔基、c1‑6‑
烷氧基、c2‑6‑
烯氧基和c2‑6‑
炔氧基，其中该烷基、烯基、炔基、烷氧基、烯氧基或炔氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素、氰基、硝基、羟基、硫基或氨基的基团取代；r2和r3独立地选自c1‑3‑
烷基，可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)卤素取代，或r2和r3共同形成环丙基或环丁基基团，可选择地经一或多个(例如，1或2个)卤素取代；r4、r5和r6各自独立地选自氢、卤素、硝基、羟基、硫基、氨基、c1‑6‑
烷基和c1‑6‑
烷氧基，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素、羟基、氰基和c1‑6‑
烷氧基的基团取代；及a为5
‑
或6
‑
元芳基或杂芳基基团(例如，苯基或噻唑基)，可选择地经1、2或3个独立地选自卤素、羟基、硫基、氨基、硝基、c1‑6烷氧基和c1‑6烷基的基团取代。
[0056]
在本技术的任何方面的另外实施方案中，本技术进一步关于如下的化合物：1.1化合物1，其中r1选自氢、卤素、氰基、硝基、羟基、硫基、氨基、c1‑6‑
烷基、c1‑6‑
烷氧基，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素、氰基、硝基、羟基、硫基或氨基的基团取代；1.2化合物1，其中r1是选自氢、卤素、c1‑6‑
烷基、c1‑6‑
烷氧基，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素、氰基、硝基、羟基、硫基或氨基的基团取代；1.3化合物1，其中r1选自氢、卤素、c1‑4‑
烷基、c1‑4‑
烷氧基，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素、氰基、硝基、羟基、硫基或氨基的基团取代；1.4化合物1，其中r1选自氢、卤素、c1‑4‑
烷基、c1‑4‑
烷氧基，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个或1或2个)选自氰基、硝基、羟基、硫基或氨基的基团取代；1.5化合物1，其中r1选自氢、卤素和c1‑4‑
烷基，其中该烷基可选择地经一或多个(例如，1或2个)选自卤素、羟基、硫基或氨基的基团取代；1.6化合物1，其中r1选自氢、氟、甲基和乙基，其中该甲基或乙基可选择地经1或2个选自卤素、羟基、硫基或氨基的基团取代；1.7化合物1，其中r1选自氢和甲基，其中该甲基可选择地经1或2个卤素取代；1.8化合物1，其中r1为氢；1.9化合物1或任何1.1
‑
1.8，其中r1不与奎宁环部分的氮原子相连接；1.10化合物1或任何1.1
‑
1.9，其中r2和r3各自独立地为c1‑3‑
烷基，可选择地经一或
多个(例如，1、2或3个)卤素取代；1.11化合物1.11，其中r2和r3各自独立地为甲基或乙基，可选择地经1或2个卤素取代；1.12化合物1.11，其中r2和r3各自独立地选自甲基和乙基，可选择地经一或多个氟、例如，1、2或4个氟取代；1.13化合物1.11，其中r2和r3各自独立地为经0、1、2或3个氟取代的甲基；1.14化合物1.11，其中r2和r3各自为甲基或三氟甲基；1.15化合物1.11，r2和r3各自为甲基；1.16化合物1或任何1.1
‑
1.9，其中r2和r3共同形成环丙基或环丁基基团，可选择地经一或多个(例如，1或2个)卤素取代；1.17化合物1.16，其中r2和r3共同形成环丙基基团；1.18化合物1或任何1.1
‑
1.9，其中r2和r3各自为甲基，或r2和r3共同形成环丙基基团；1.19化合物1或任何1.1
‑
1.9，其中r4、r5和r6各自独立地选自氢、卤素、c1‑6‑
烷基和c1‑6‑
烷氧基，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素、羟基、氰基和c1‑6‑
烷氧基的基团取代；1.20化合物1或任何1.1
‑
1.9，其中r4、r5和r6各自独立地选自氢、卤素、c1‑3‑
烷基和c1‑3‑
烷氧基，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素、羟基、氰基和c1‑3‑
烷氧基的基团取代；1.21化合物1.19，其中r4、r5和r6各自独立地选自氢、卤素、c1‑3‑
烷基和c1‑3‑
烷氧基，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素、氰基和c1‑3‑
烷氧基的基团取代；1.22化合物1.19，其中r4、r5和r6各自独立地选自氢、卤素、c1‑3‑
烷基和c1‑3‑
烷氧基，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素和c1‑3‑
烷氧基的基团取代；1.23化合物1.19，其中r4、r5和r6各自独立地选自卤素、c1‑3‑
烷基和c1‑3‑
烷氧基，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素和c1‑3‑
烷氧基的基团取代1.24化合物1或任何1.19
‑
1.23，r4选自氢、卤素、c1‑3‑
烷基和c1‑3‑
烷氧基，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素和c1‑3‑
烷氧基的基团取代；1.25化合物1.24，r4选自卤素(例如，氟)、c1‑3‑
烷基(例如，甲基)和c1‑3‑
烷氧基(例如，甲氧基或乙氧基)，其中该烷基或烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素和c1‑3‑
烷氧基(例如，甲氧基或乙氧基)的基团取代；1.26化合物1.26，r4选自卤素(例如，氟)和c1‑3‑
烷氧基(例如，甲氧基或乙氧基)，其中该烷氧基可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素和c1‑3‑
烷氧基(例如，甲氧基或乙氧基)的基团取代；1.27化合物1.26，r4为氟或可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自卤素和c1‑3‑
烷氧基(例如，甲氧基)的基团取代的c1‑3‑
烷氧基(例如，乙氧基)；1.28化合物1.26，其中r4为氟或可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)c1‑3‑
烷氧
基(例如，甲氧基)取代的乙氧基，；1.29化合物1或任何1.19
‑
1.28，其中r6为氢；1.30化合物1或任何1.19
‑
1.28，其中r5和r6各自为氢；1.31化合物1或任何1.19
‑
1.28，r5和r6各自为氢，而r4为氟或c1‑3‑
烷氧基(例如，乙氧基)，可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)选自可选择地卤素和c1‑3‑
烷氧基(例如，甲氧基)的基团取代；1.32化合物1.31，其中r5和r6各自为氢，而r4为氟或可选择地经一或多个(例如，1、2或3个)c1‑3‑
烷氧基(例如，甲氧基)取代的乙氧基；1.33化合物1.32，其中r5和r6各自为氢，而r4为氟或经甲氧基取代的乙氧基(例如，2
‑
甲氧基乙氧基)；1.34化合物1.32，其中r4为氟或2
‑
甲氧基乙氧基；1.35化合物1或任何1.1
‑
1.34，其中r4、r5和r6至少一项不为氢；1.36化合物1或任何1.1
‑
1.35，其中r6为氢，而r4和r5位于与其相连接的苯环的2、4或6位置(即a取代基的邻位或对位)；1.37化合物1或任何1.1
‑
1.35，其中r6为氢，而r4和r5独立地位于与其相连接的苯环(就a取代基而言)的2和3位置(即，邻近的邻位和间位)、3和4位置(即，邻近的间位和对位)或3和5位置(即，间位)；1.38化合物1或任何1.1
‑
1.35，其中r6为氢，而r4和r5位于与其相连接的苯环的3和5位置(亦即，间位)(就a取代基而言)；1.39化合物1或任何1.1
‑
1.35，其中r5和r6为氢，而r4位于与其相连接的苯环的2、3或4位置(例如，a取代基的邻位、间位或对位)；1.40化合物1或任何1.1
‑
1.35，其中r5和r6为氢，而r4位于与其相连接的苯环的2或4位置(例如，a取代基的邻位或对位)；1.41化合物1或任何1.1
‑
1.35，其中r5和r6为氢，而r4位于与其相连接的苯环的4位置(例如，a取代基的对位)；1.42化合物1或任何1.1
‑
1.35，其中r4、r5和r6皆不为氢，且各r4、r5和r6独立地位于与其相连接的苯环的2、4或6位置(即，a取代基的邻位或对位)；1.43化合物1或任何1.1
‑
1.42，其中r4位于与其相连接的苯环的4位置(即，a取代基的对位)；1.44化合物1或任何1.1
‑
1.43，其中a为6
‑
元芳基基团、5
‑
元杂芳基基团(例如，在杂芳基环中含有1、2或3个选自n、o和s的杂原子)或6
‑
元杂芳基基团(例如，在杂芳基环中含有1、2或3个氮原子)；1.45化合物1.44，其中a为6
‑
元芳基基团或5
‑
元杂芳基基团(例如，在杂芳基环中含有1、2或3个选自n、o和s的杂原子)，可选择地其中该5
‑
元杂芳基基团含有1或2个选自n和s的杂原子(例如，一个n及/或一个s)；1.46化合物1.44或1.45，其中a选自由苯基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡咯基、三唑基、咪唑基、噁二唑基及噻二唑基组成的组；1.47化合物1.46，其中a选自由苯基、噻吩基、噻唑基、吡咯基和咪唑基组成的组；1.48化合物1.46，其中a选自由苯基和噻唑基组成的组，例如，2
‑
噻唑
‑4‑
基或4
‑
噻
唑
‑2‑
基；1.49化合物1或任何1.1
‑
1.48，其中a为未经取代1.50化合物1或任何1.1
‑
1.48，其中a经一或多个(例如，1、2或3个)独立地选自卤素、羟基、硫基、氨基、硝基、c1‑6烷氧基和c1‑6烷基(例如，甲基)的基团取代；1.51化合物1.50，其中a为经一个卤素(例如，氟)或c1‑6烷基(例如，甲基)取代的噻唑基；1.52化合物1.50，其中a为经1、2或3个独立地选自卤素(例如，氟)和c1‑6烷基(例如，甲基)取代的苯基；1.53化合物1.52，其中a为经1或2个氟或甲基基团取代的苯基；1.54化合物1或任何1.1
‑
1.53，其中与a取代基相连接的二个基团(即，苯基环(
‑
(c6h2r4r5r6))和
‑
c(r2r3)
‑
基团)位于彼此互为1,2
‑
、1,3
‑
或1,4
‑
关系的位置(即，邻位、间位或对位)；1.55化合物1.54，其中与a取代基相连接的二个基团位于彼此互为1,3
‑
关系的位置(即，间位)；1.56化合物1.54，其中与a取代基相连接的二个基团位于彼此互为1,4
‑
关系的位置(即，对位)；1.57任何的化合物1.54至1.56，其中a取代基为5
‑
元杂芳基基团且与a取代基相连接的二个基团中至少一个(即，苯环(
‑
(c6h2r4r5r6))或
‑
c(r2r3)
‑
基团)与杂芳基环的碳原子相连接，可选择地其中此二个基团与杂芳基环的碳原子相连接；1.58化合物1或任何1.1
‑
1.57，其中式i化合物可通过任何一或多个下列结构来表示：
1.59化合物1或任何1.1
‑
1.58，其中式i或任何的式ii至xii的化合物具有(s)构型；1.60化合物1或任何1.1
‑
1.58，其中式i或任何的式ii至xii的化合物具有(r)构型；1.61化合物1或任何1.1
‑
1.60，其中式i或任何的式ii至xii的化合物具有至少90％，例如，至少92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％的对映体过量(例如，(s)构型)；1.62化合物1或任何1.1
‑
1.58，其中式i或任何的式ii至xii的化合物为外消旋的(即大约50:50比例的对映体)或某些其他比例的对映体(例如，低于50:50或大于50:50)的混合物；1.63化合物1或任何1.1
‑
1.62，其中式i化合物选自由下列组成的组：
1.64化合物1或任何1.1
‑
1.63，其中该化合物选自由奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
氟
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑3‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯、(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯和(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4
’‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)
‑
[1,1
’‑
联苯]
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯；1.65化合物1或任何1.1
‑
1.63，其中该化合物为奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
氟
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑3‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯；1.66化合物1或任何1.1
‑
1.63，其中该化合物为奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯，例如(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯；1.67化合物1或任何1.1
‑
1.66，其中式i或任何的式ii至xii的化合物为游离碱形式；1.68化合物1或任何1.1
‑
1.66，其中式i或任何的式ii至xii的化合物为医药学上可接受盐形式；1.69化合物1.68，其中该盐形式为酸加成盐形式；1.70化合物1.69，其中该酸加成盐形式为选自下列的盐：盐酸盐、溴酸盐、碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酸式柠檬酸盐、
酒石酸盐、酒石酸氢盐、琥珀酸盐、羟基琥珀酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、延胡酸酸盐、葡萄糖酸盐、蔗糖酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐和双羟萘酸盐(pamoate)；1.71化合物1.70，其中该酸加成盐形式选自盐酸盐、羟基琥珀酸盐(例如，2
‑
羟基琥珀酸盐)和苹果酸盐；1.72化合物1.68，其中该盐形式为碱加成盐形式；1.73化合物1或任何1.1
‑
1.72，其中该化合物为(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯的苹果酸盐形式；1.74化合物1或任何1.1
‑
1.73，其中式i或任何的式ii至xii的化合物为如本技术中所述的前药形式；1.75化合物1或任何1.1
‑
1.74，其中式i或任何的式ii至xii的化合物为水合物、溶剂化物及/或多晶型物的形式。盐类
[0057]
本质上为碱性的当前所公开的化合物，例如，任何的化合物1或1.1
‑
1.75，一般能与各种无机及/或有机酸形成广泛的各种不同盐类。虽然这些盐类就投予动物和人类一般为医药学上可接受的，但其通常在实施上希望于开始时从反应混合物分离化合物作为医药学上不可接受的盐及然后将后者通过以碱性试剂处理，单纯地变回游离的碱化合物，及随后将游离碱转变成医药学上可接受的酸加成盐。这些碱化合物的酸加成盐可使用常规技术容易地制备，例如通过将碱化合物以实质上等量的所选的无机或有机酸于水性溶剂媒剂或于适合的有机溶剂中，例如甲醇或乙醇中处理。小心的蒸发溶剂后，得到想要的固体盐。带正电的当前所公开的化合物，例如含有四级铵，其也可与各种无机及/或有机酸的阴离子组份形成盐类。
[0058]
可用于制备奎宁环化合物的医药学上可接受盐类的酸为该等可形成无毒酸加成盐的酸，例如含有药理学上可接受阴离子的盐类，例如氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸盐或硫酸氢盐、磷酸盐或酸性磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐或酸性柠檬酸盐、酒石酸盐或酒石酸氢盐、琥珀酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、葡萄糖酸盐、蔗糖酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐和双羟萘酸盐[即1,1'
‑
亚甲基
‑
双
‑
(2
‑
羟基
‑3‑
萘甲酸盐)]。
[0059]
本质上为酸性的当前所公开的化合物，例如含有硫醇基团的化合物，一般能与各种无机及/或有机碱形成广泛的各种不同盐类。虽然这些盐类就投予动物和人类一般为医药学上可接受的，但其通常在实施上希望于开始时从反应混合物分离化合物作为医药学上不可接受的盐及然后将其通过以酸性试剂处理，单纯地变回游离的酸化合物，及随后将游离酸转变成医药学上可接受的碱加成盐。这些碱加成盐可使用常规技术容易地制备，例如通过将对应的酸性化合物以含有所希望的药理学可接受阳离子的水性溶液处理，及然后将生成的溶液，例如于减压下蒸发至干。另一种选择，其也可通过将这些酸性化物的低碳醇溶液与所想要的碱金属醇化物共同混合，及然后以如同之前的方式将所生成的溶液蒸发至干来制备。在任一情况下，可使用试剂的化学计量以确保反应完全及所希望的固体盐的最大产率。
[0060]
可用于制备奎宁环化合物的医药学上可接受碱加成盐类的碱为那些可形成无毒碱加成盐的碱，例如含有药理学上可接受阳离子的盐类，例如碱金属阳离子(例如钾和钠)、碱土金属阳离子(例如钙和镁)、铵或其他水溶性胺加成盐类例如n
‑
甲基葡萄糖胺(葡甲
胺)、较低碳烷醇铵及其他此类有机胺的碱。
[0061]
在一个实施方案中，该医药学上可接受盐为琥珀酸盐。在另外的实施方案中，该医药学上可接受盐为2
‑
羟基琥珀酸盐，例如(s)
‑2‑
羟基琥珀酸盐。在另外的实施方案中，该医药学上可接受盐为盐酸盐(即带有hcl的盐)。在另外的实施方案中，该医药学上可接受盐为苹果酸盐。前药
[0062]
本技术进一步包括化合物1和1.1
‑
1.75的前药。本技术中所公开的医药学上可接受前药为奎宁环化合物的衍生物，其在活体内可转变成本技术中所述的奎宁环化合物。本身可能具有某些活性的前药，当其经历例如于生理条件下溶剂分解或酶降解时，在活体内变成具医药活性。以本技术为基础，用于制备如本技术中所述的化合物前药的方法对于本领域技术人员应为显而易见的。
[0063]
在一个实施方案中，奎宁环化合物的氨基甲酸酯基团是经修饰。例如奎宁环化合物的氨基甲酸酯基团可通过添加水及/或一或二种脂肪族醇类加以修饰。在此情况下，氨基甲酸酯基团的碳
‑
氧双键采用可视为半缩醛或缩醛功能基。在一个实施方案中，此奎宁环化合物的氨基甲酸酯基团可通过加入脂肪族二元醇，例如1,2
‑
乙二醇加以修饰。
[0064]
在一个实施方案中，奎宁环化合物上的一或多个羟基、硫基或氨基基团是经修饰的。例如，奎宁环化合物上的一或多个羟基、硫基及/或氨基基团可经修饰形成酸衍生物，例如酯类、硫酯类(或硫醇酯类)及/或酰胺。这些酸衍生物可，例如通过将包括一或多个羟基、硫基或氨基基团的奎宁环化合物与乙酰化剂反应而形成。乙酰化剂的实例包括酸酐，例如乙酸酐、酸性氯化物例如苯甲基氯，及二碳酸酯例如二碳酸二叔丁酯。立体化学
[0065]
本技术进一步包括化合物1和1.1
‑
1.75的立体异构体及立体异构体的混合物。当前所公开的化合物的立体异构体(例如顺式和反式异构体)及所有的光学异构体(例如r
‑
和s
‑
对映异构体)以及外消旋、非对映异构体及这些异构体的其他混合物在本技术的范围内。
[0066]
在一个实施方案中，如本技术中所定义的奎宁环化合物的奎宁环
‑3‑
基基团具有r
‑
构型。因此，此奎宁环化合物可由选自式(ia)至(xiia)的化合物组成的组及其医药学上可接受盐类和前药：(ia)(iia)
(iiia)(iva)(va)(via)(viia)(viiia)
(ixa)(xa)(xia)(xiia)
[0067]
在另外的实施方案中，如本技术中所定义的奎宁环化合物的奎宁环
‑3‑
基基团具有s
‑
构型。因此，此奎宁环化合物可选自由式(ib)至(xiib)的化合物组成的组及其医药学上可接受盐类和前药：(ib)(iib)
(iiib)(ivb)(vb)(vib)(viib)(viiib)
(ixb)(xb)(xib)(xiib)
[0068]
在一个具体实施方案中，该奎宁环化合物为式(xb)的化合物或其医药学上可接受盐或前药。在另外的实施方案中，该奎宁环化合物为式(xiib)的化合物或其医药学上可接受盐或前药。
[0069]
在一个具体实施方案中，如本技术中所定义的奎宁环化合物的奎宁环
‑3‑
基基团以具有r
‑
和s
‑
构型的异构体的混合物形式存在。例如，此奎宁环化合物可为选自由下列组成的组的化合物的混合物：式(ia)和(ib)、(iia)和(iib)、(iiia)和(iiib)、(iva)和(ivb)、(va)和(vb)、(via)和(vib)、(viia)和(viib)、(viiia)和(viiib)、(ixa)和(ixb)、(xa)和(xb)、(xia)和(xib)，以及(xiia)和(xiib)的化合物，与其医药学上可接受盐类或前药。在一个具体实施方案中，此奎宁环化合物以外消旋混合物形式存在，例如奎宁环
‑3‑
基基团的r
‑
和s
‑
异构体以大约同等量存在。在另外的实施方案中，该奎宁环化合物以具有r
‑
和s
‑
构型的异构体的混合物存在，其中该r
‑
和s
‑
异构体以不同的量存在。在一个具体实施方案中，该s
‑
异构体是以至少约5％、10％、25％、40％、70％、80％、90％、95％、97％、98％或99％，例如约100％的对映体过量存在。在另外的实施方案中，此r
‑
异构体以至少约5％、10％、25％、
40％、70％、80％、90％、95％、97％、98％或99％，例如约100％的镜像对映体过量存在。
[0070]
以本技术为基础，制备富含对映异构体及/或对映异构上纯的奎宁环化合物的方法对于本领域技术人员应为显而易见的。
[0071]
当前所公开的化合物可以数种互变异构体的形式存在，包括烯醇和亚胺形式，以及酮和烯胺形式以及几何异构体和其混合物。互变异构体是以成组的互变异构体的混合物存在溶液中。在固体形式中，通常有一种互变异构体占优势。即使可能仅描述一种互变异构体，但所有的互变异构体在本技术的范围内。
[0072]
阻转异构体也在本技术的范围内。阻转异构体指可分离成旋转上受限的异构体的化合物。其他形式
[0073]
本技术进一步包括化合物1和1.1
‑
1.75的水合物、溶剂化物及多晶型物。本技术中所述的奎宁环化合物的医药学上可接受水合物、溶剂化物、多晶型物在本技术的范围内。本技术中所述的奎宁环化合物可为非晶形式及/或一或多种晶体形式。
[0074]
同位素标记的化合物也在本技术的范围内。如本技术中所用，“同位素标记的化合物”指当前所公开的化合物，包括其医药学上的盐类和前药，各自如本技术中所述，其中一或多个原子经具有原子量或质量数不同于一般自然界中所发现的原子量或质量数的原子所取代。可并入当前所公开的化合物中的同位素实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别例如2h、3h、
13
c、
14
c、
15
n、
18
o、
17
o、
31
p、
32
p、
35
s、
18
f和
36
cl。医学适应症
[0075]
本技术中所述的奎宁环化合物和包含它们的医药组合物可用于在患有例如法布瑞氏症的病患中治疗，特别是疼痛的治疗处理，包括神经病变疼痛、肠胃疼痛(例如，腹痛)和周围神经病变，以及皮肤病症，例如血管角化瘤。根据本技术中所述的方法所要治疗的受试者包括脊椎动物。
[0076]
在第一方面，本发明在有此需要的受试者中提供用于治疗或防止疼痛，包括神经病变疼痛、肠胃疼痛(例如，腹痛)和周围神经病变的方法(方法2)，该方法包括投予该受试者有效量的如本技术中所述的奎宁环化合物，例如，根据式i或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib或任何化合物1或1.1至1.75的化合物。还提供如本技术中所述的奎宁环化合物，例如，根据式i或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib的化合物或任何化合物1或1.1至1.75，在有此需要的受试者中供用于治疗或防止疼痛，包括神经病变疼痛、肠胃疼痛(例如，腹痛)和周围神经病变的方法中，例如，供用于方法2或任何2.1
‑
2.51。进一步提供如本技术中所述的奎宁环化合物，例如，根据式i或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib的化合物或任何化合物1或1.1至1.75在制造药品用于在有此需要的受试者中治疗或防止疼痛，包括神经病变疼痛、肠胃疼痛(例如，腹痛)和周围神经病变的方法中，例如制造供用于方法2或任何2.1
‑
2.51中的药品。
[0077]
在方法2的特定进一步的实施方案中，本技术提供：2.1.方法2，其中该方法包括投予该受试者有效量的根据式i或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib的化合物或任何化合物1或任何1.1至1.75；2.2.方法2，其中该方法包括投予该受试者有效量的化合物1或任何一或多种的化合物1.1至1.75；
2.3.方法2或任何2.1
‑
2.2，其中该方法包括投予该受试者有效量的包括根据式i或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib的化合物或任何化合物1或任何1.1至1.75的医药组合物；2.4.方法2或任何2.1
‑
2.2，其中该方法包括投予该受试者有效量的包括化合物1或任何一或多种化合物1.1至1.75的医药组合物；2.5.方法2.3或2.4，其中该医药组合物进一步包括至少一种如本技术中所述的医药学上可接受赋形剂；2.6.方法2或任何2.1
‑
2.5，其中该方法包括投予包含有效量的化合物或有效量的医药组合物的医药剂型；2.7.方法2.6，其中该剂型为口服剂型(例如，药片、胶囊、椭圆形药锭、片剂、糖衣锭、散剂、颗粒、膜片、口含锭或液体)；2.8.方法2.7，其中该剂型为可咀嚼片剂；2.9.方法2.6，其中该剂型为肠道外剂型(例如，其中医药组合物是经调配供注射用)；2.10.方法2.9，其中该注射为静脉、肌肉内、鞘内或皮下注射，可选择地为无菌注射；2.11.方法2.6，其中该剂型为局部或直肠剂型；2.12.方法2.6，其中该剂型鼻内剂型(例如，气雾剂)；2.13.方法2或任何2.1至2.12，其中该方法进一步包括同时投予第二活性剂，例如，如本技术中所述，在有此需要的病患中能治疗或防止疼痛的第二化合物；2.14.方法2.13，其中该第二活性剂以如奎宁环化合物相同医药组合物或剂型来给药；2.15.方法2.13或2.14，其中该第二活性剂为半乳糖苷酶抑制剂(例如，α
‑
半乳糖苷酶抑制剂，如米加司他)；2.16.方法2或任何2.1
‑
2.15，其中该受试者为哺乳动物；2.17.方法2.16，其中该受试者为灵长类动物；2.18.方法2.17，其中该受试者为人类；2.19.方法2或任何2.1
‑
2.18，其中该疼痛为外围疼痛，例如周围神经病变；2.20.方法2或任何2.1
‑
2.18，其中该疼痛为肠胃疼痛(例如，腹痛)；2.21.方法2或任何2.1
‑
2.18，其中该疼痛为全身疼痛；2.22.方法2或任何2.1
‑
2.21，其中该疼痛对镇痛剂的治疗具有抗性或无法完全以镇痛剂的治疗减轻；2.23.方法2或任何2.1
‑
2.21，其中该疼痛对非类固醇消炎药的治疗具有抗性或无法完全以非类固醇消炎药的治疗减轻；2.24.方法2或任何2.1
‑
2.23，其中该受试者患有法布瑞氏症；2.25.方法2.24，其中该法布瑞氏症不适合以米加司他治疗；2.26.方法2或任何2.1
‑
2.25，其中该受试者严重地缺乏或无α
‑
半乳糖苷酶活性(例如，小于正常值的1％，例如，如循环白血球中所测)；2.27.方法2或任何2.1
‑
2.25，其中该受试者经诊断具有gla基因突变(例如，半合
子雄性、纯合子雌性或杂合子雌性)，可选择地其中该突变为基因gla中的无意义密码子；2.28.方法2或任何2.1
‑
2.27，其中该受试者在组织中具有明显的gl
‑
3堆积(例如，在皮肤微血管内皮细胞或在血浆中)；2.29.方法2或任何2.1
‑
2.28，其中该受试者经历同时以酶替代治疗(ert)，例如，使用agalsidase
‑
α或agalsidase
‑
β治疗；2.30.方法2或任何2.1
‑
2.28，其中该受试者经历同时以α
‑
半乳糖苷酶抑制剂(例如，米加司他)治疗；2.31.方法2或任何2.1
‑
2.30，其中该受试者具有至少2μg/ml的血浆中葡萄糖神经酰胺(gl1)浓度，例如，血浆中至少3μg/ml或至少4μg/ml；2.32.方法2或任何2.1
‑
2.31，其中该受试者具有至少65ng/ml的血浆中葡糖鞘氨醇(lyso
‑
gl1)浓度，例如，血浆中至少70ng/ml或至少80ng/ml；2.33.方法2或任何2.1
‑
2.32，其中该受试者具有至少4μg/ml的血浆中gl3浓度，例如，血浆中至少6μg/ml或至少8μg/ml；2.34.方法2或任何2.1
‑
2.33，其中该受试者被投予每日剂量约1mg至约150mg的根据式i的化合物(或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib或任何化合物1或1.1至1.75)，例如，从5至50mg或从10至40mg或从10至30mg或从10至20mg或从20至30mg或从30至40mg或从40至50mg或从5至25mg或从20至50mg或从5至15mg或从15至30mg或约15mg或选自2、5、15、25、50、100或150mg；2.35.方法2或任何2.1
‑
2.34，其中该受试者为成年人类病患，例如，年龄从18至80岁，例如，从18至60岁或从18至40岁或从18至30岁或从18至25岁；2.36.方法2或任何2.1
‑
2.34，其中该受试者为人类儿科病患，例如，年龄从0至18岁，例如，从1至15岁或从1至5岁或从5至10岁或从10至15岁或从10至18岁；2.37.方法2或任何2.1
‑
2.36，其中该方法使得血浆中gl
‑
1浓度在治疗2周或4周或8周后，下降至少30％，例如，至少40％，至少50％或至少60％；2.38.方法2或任何2.1
‑
2.37，其中该方法使得血浆中gl
‑
3浓度在治疗2周或4周或8周后，下降至少20％，例如，至少30％，至少40％或至少50％；2.39.方法2或任何2.1
‑
2.38，其中该方法使得血浆中gl
‑
3浓度在治疗26周或52周或104周后，下降至少40％，例如，至少50％，至少60％或至少70％；2.40.方法2或任何2.1
‑
2.39，其中该方法使得血浆中lyso
‑
gl
‑
3浓度在治疗18周或26周或52周后，下降至少25％，例如，至少35％，至少45％或至少50％；2.41.方法2或任何2.1
‑
2.39，其中该方法使得血浆中gm3浓度在治疗2周或4周或8周后，下降至少25％，例如，至少30％，至少40％或至少50％；2.42.方法2或任何2.1
‑
2.39，其中该方法使得疼痛(例如，身体疼痛及/或肠胃疼痛(例如，腹痛))的严重度在26周或52周或156周内下降；2.43.方法2或任何2.1
‑
2.39，其中该方法使得皮肤中gl
‑
3量(例如，皮肤微血管内皮细胞)在26周或52周或156周内下降，例如，通过gl
‑
3包含物的范围所示；2.44.方法2或任何2.1
‑
2.43，其中根据式i的化合物(或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib或任何化合物1或1.1至1.75)或其医药学上可接受盐或前药，通过全身给药，例如经由肠道外路径或非肠道外路径来给药；
2.45.方法2.44，其中该给药路径为口服(经肠道)；2.46.方法2.44，其中该给药路径为肠道外，例如，通过注射，例如通过静脉注射；2.47.方法2或任何2.1
‑
2.46，其中该根据式i的化合物(或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib或任何化合物1或1.1至1.75)或其医药学上可接受盐或前药，通过局部投予来给药，例如，通过局部给药；2.48.方法2或任何2.1
‑
2.49，其中该化合物为(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯或奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
氟
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑3‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯；2.49.方法2.48，其中该化合物的剂量为口服给药15mg/天；2.50.方法2.49，其中该化合物的剂量为单一口服剂量15mg/天；2.51.方法2或任何2.1
‑
2.50，其中该受试者被投予单一每日剂量5mg、10mg、15mg或20mg的化合物，例如，(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯，可选择地以苹果酸盐的酸加成盐的型式。
[0078]
在第二方面，本发明提供在有此需要的受试者中用于治疗或防止由gl
‑
3堆积所造成的皮肤病症，包括血管角化瘤、少汗症、无汗症、多汗症、淋巴水肿及/或肢端感觉异常的方法(方法3)，该方法包括投予该受试者有效量的如本技术中所述的奎宁环化合物，例如，根据式i或任何ii
‑
xii，ia
‑
xiia或ib
‑
xiib的化合物或任何化合物1或1.1至1.75。也提供如本技术中所述的奎宁环化合物，例如，根据式i或任何ii
‑
xii，ia
‑
xiia或ib
‑
xiib的化合物或任何化合物1或1.1至1.75，在有此需要的受试者中供用于治疗或防止由gl
‑
3堆积所造成的皮肤病症，包括血管角化瘤、少汗症、无汗症、多汗症、淋巴水肿及/或肢端感觉异常的方法中，例如用于方法3或任何3.1
‑
3.53中。进一步提供如本技术中所述的奎宁环化合物，例如，根据式i或任何ii
‑
xii，ia
‑
xiia或ib
‑
xiib的化合物或任何化合物1或1.1至1.75，在制造药品供在有此需要的受试者中用于治疗或防止由gl
‑
3堆积所造成的皮肤病症，包括血管角化瘤、少汗症、无汗症、多汗症、淋巴水肿及/或肢端感觉异常的方法中的用途，例如，制造药品供用于方法3或任何3.1
‑
3.53。
[0079]
在特定进一步的方法3的实施方案中，本技术提供：3.1.方法3，其中该方法包括投予该受试者有效量的根据式i或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib的化合物或任何化合物1或任何1.1至1.75；3.2.方法3，其中该方法包括投予该受试者有效量的化合物1或任何一或多项的化合物1.1至1.75；3.3.方法3或任何3.1
‑
3.2，其中该方法包括投予该受试者有效量的包括根据式i或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib的化合物或任何化合物1或任何1.1至1.75的医药组合物；3.4.方法3或任何3.1
‑
3.2，其中该方法包括投予该受试者有效量的包括化合物1或任何一或多种化合物1.1至1.75的医药组合物；3.5.方法3.3或3.4，其中该医药组合物进一步包括至少一种如本技术中所述的医药学上可接受赋形剂；3.6.方法3或任何3.1
‑
3.5，其中该方法包括投予包含有效量的化合物或有效量的医药组合物的医药剂型；
3.7.方法3.6，其中该剂型为口服剂型(例如，药片、胶囊、椭圆形药锭、片剂、糖衣锭、散剂、颗粒、膜片、口含锭或液体)；3.8.方法3.7，其中该剂型为可咀嚼片剂；3.9.方法3.6，其中该剂型为肠道外剂型(例如，其中医药组合物经调配供注射用)；3.10.方法3.9，其中该注射为静脉内、肌肉内、鞘内或皮下注射，可选择地为无菌注射；3.11.方法3.6，其中该剂型为局部或直肠剂型；3.12.方法3.6，其中该剂型为鼻内剂型(例如，气雾剂)；3.13.方法3或任何3.1至3.12，其中该方法进一步包括同时投予第二活性剂，例如，如本技术中所述，在有此需要的病患中能治疗或防止疼痛的第二化合物；3.14.方法3.13，其中该第二活性剂以如奎宁环化合物相同医药组合物或剂型来给药；3.15.方法3.13或3.14，其中该第二活性剂为半乳糖苷酶抑制剂(例如，α
‑
半乳糖苷酶抑制剂，如米加司他)；3.16.方法3或任何3.1
‑
3.15，其中该受试者为哺乳动物；3.17.方法3.16，其中该受试者为灵长类动物；3.18.方法3.17，其中该受试者为人类；3.19.方法3或任何3.1
‑
3.18，其中该皮肤病症为血管角化瘤；3.20.方法3或任何3.1
‑
3.18，其中该皮肤病症为少汗症及/或无汗症；3.21.方法3或任何3.1
‑
3.18，其中该皮肤病症为淋巴水肿；3.22.方法3或任何3.1
‑
3.21，其中该皮肤病症为肢端感觉异常；3.23.方法3.22，其中该肢端感觉异常的疼痛对于以镇痛剂或以非类固醇消炎药的治疗具抗性或无法完全减轻；3.24.方法3或任何3.1
‑
3.23，其中该受试者患有法布瑞氏症；3.25.方法3.24，其中该法布瑞氏症不适合以米加司他治疗；3.26.方法3或任何3.1
‑
3.25，其中该受试者严重地缺乏或无α
‑
半乳糖苷酶活性(例如，小于正常值的1％，例如，如循环白血球中所测)；3.27.方法3或任何3.1
‑
3.25，其中该受试者经诊断具有gla基因的突变(例如，半合子雄性、纯合子雌性或杂合子雌性)，可选择地其中该突变为基因gla中的无意义密码子；3.28.方法3或任何3.1
‑
3.27，其中该受试者在皮肤及/或在血浆中具有明显的gl
‑
3堆积；3.29.方法3.28，其中该受试者在一或多种浅层皮肤血管的内皮细胞、深层皮肤血管的内皮细胞、深层皮肤血管的平滑肌细胞和神经束膜细胞中具有明显的gl
‑
3堆积；3.30.方法3或任何3.1
‑
3.29，其中该受试者经历同时以酶替代治疗(ert)，例如，使用agalsidase
‑
α或agalsidase
‑
β治疗；3.31.方法3或任何3.1
‑
3.29，其中该受试者经历同时以α
‑
半乳糖苷酶抑制剂(例如，米加司他)治疗；3.32.方法3或任何3.1
‑
3.31，其中该受试者具有至少2μg/ml的血浆中葡萄糖神经
酰胺(gl1)浓度，例如，血浆中至少3μg/ml或至少4μg/ml；3.33.方法3或任何3.1
‑
3.32，其中该受试者具有至少65ng/ml的血浆中葡糖鞘氨醇(lyso
‑
gl1)浓度，例如，血浆中至少70ng/ml或至少80ng/ml；3.34.方法3或任何3.1
‑
3.32，其中该受试者具有至少4μg/ml的血浆中gl3浓度，例如，血浆中至少6μg/ml或至少8μg/ml；3.35.方法3或任何3.1
‑
3.34，其中该受试者被投予每日剂量约1mg至约150mg的根据式i的化合物(或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib或任何化合物1或1.1至1.75)，例如，从5至50mg或从10至40mg或从10至30mg或从10至20mg或从20至30mg或从30至40mg或从40至50mg或从5至25mg或从20至50mg或从5至15mg或从15至30mg或约15mg或选自2、5、15、25、50、100或150mg；3.36.方法3或任何3.1
‑
3.35，其中该受试者为人类成年病患，例如，年龄从18至80岁，例如，从18至60岁或从18至40岁或从18至30岁或从18至25岁；3.37.方法3或任何3.1
‑
3.35，其中该受试者为人类儿科病患，例如，年龄从0至18岁，例如，从1至15岁或从1至5岁或从5至10岁或从10至15岁或从10至18岁；3.38.方法3或任何3.1
‑
3.36，其中该方法使得血浆中gl
‑
1浓度在治疗2周或4周或8周后，下降至少30％，例如，至少40％，至少50％或至少60％；3.39.方法3或任何3.1
‑
3.38，其中该方法使得血浆中gl
‑
3浓度在治疗2周或4周或8周后，下降至少20％，例如，至少30％，至少40％或至少50％；3.40.方法3或任何3.1
‑
3.39，其中该方法使得血浆中gl
‑
3浓度在治疗26周或52周或104周后，下降至少40％，例如，至少50％，至少60％或至少70％；3.41.方法3或任何3.1
‑
3.40，其中该方法使得血浆中lyso
‑
gl
‑
3浓度在治疗18周或26周或52周后，下降至少25％，例如，至少35％，至少45％或至少50％；3.42.方法3或任何3.1
‑
3.40，其中该方法使得血浆中gm3浓度在治疗2周或4周或8周后，下降至少25％，例如，至少30％，至少40％或至少50％；3.43.方法3或任何3.1
‑
3.40，其中该方法使得皮肤中，例如，如gl
‑
3包含物的范围所示gl
‑
3的水平(例如，皮肤微血管内皮细胞)在26周或52周或156周内下降，；3.44.方法3.43，其中在26周或52周或156周内，在浅层皮肤血管的内皮细胞、深层皮肤血管的内皮细胞、深层皮肤血管的平滑肌细胞和神经束膜细胞中的一或多处发现皮肤gl
‑
3量(例如，gl
‑
3包含物)下降；3.45.方法3或任何3.1
‑
3.44，其中该受试者在治疗前具有2分或更高的gl
‑
3皮肤评分(如实例中所述，以0至4分的量表所测)，而该方法使得在评分上至少下降1分，例如，下降1分或2分；及/或其中该受试者在皮肤细胞(例如，内皮细胞)中具有gl
‑
3包含物，其显示在治疗前为至少0.25(例如，至少0.27或0.3)的gl
‑
3包含物的细胞质容积比，而该方法使得gl
‑
3包含物的细胞质容积比下降至低于0.25(例如，低于0.23或低于0.20或低于0.19)。3.46.方法3或任何3.1
‑
3.45，其中该根据式i的化合物(或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib或任何化合物1或1.1至1.75)或其医药学上可接受盐或前药，通过全身给药，例如经由肠道外路径或非肠道外路径来给药；3.47.方法3.46，其中该给药路径为口服(经肠道)；3.48.方法3.46，其中该给药路径为非经肠，例如，通过注射，例如通过静脉注射；
3.49.方法3或任何3.1
‑
3.48，其中该根据式i的化合物(或任何ii
‑
xii、ia
‑
xiia或ib
‑
xiib或任何化合物1或1.1至1.75)或其医药学上可接受盐或前药，是通过局部投予来给药，例如，通过局部给药；3.50.方法3或任何3.1
‑
3.49，其中该化合物为(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯或奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
氟
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑3‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯；3.51.方法3.50，其中该化合物的剂量为口服给药15mg/天；3.52.方法3.51，其中该化合物的剂量为单一口服剂量15mg/天；3.53.方法3或任何3.1
‑
3.52，其中该受试者被投予单一每日剂量5mg、10mg、15mg或20mg的化合物，例如，(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯，可选择地以苹果酸盐的酸加成盐的型式。
[0080]
在某些本技术的实施方案中，受试者是经诊断具有特定疾病或病症及也经诊断具有特定基因突变，例如一种已知为所论及的疾病或病症的病因的基因突变，虽然通常不能证明此特定病患的疾病或病症由个人已诊断具有该特定的突变所致。如此方式所用，术语“经诊断具有特定的基因突变”是指受试者或病患经例如，以dna或rna测序、蛋白图谱分析或其他适合的方法检测并发现具有所论及的突变。然而，如下文的进一步论述，许多的基因疾病和病症可能具有多重的基因成因(例如，突变)，且病患可能具有多重的突变，其各自在某些环境可能足以造成此疾病或病症，无须进行证明特定突变造成了特定病患中的特定疾病或病症。
[0081]
如上所论述，肝糖储积症的特点之一为各种糖脂质或鞘糖脂异常堆积在身体的细胞中。此堆积为此疾病的可察觉症状的病因和疾病的标志，以及证明此疾病的存在及/或发展的诊断标记。如本技术所用，词语“明显的堆积”就血浆、皮肤或其他软组织中gl
‑
3、gl
‑
1和其他生物标记的测量而言，指超过该化合物的最大正常浓度的25％以上。在某些实施方案中，“明显的堆积”指超过该化合物的最大正常浓度的50％以上。
[0082]
根据方法2及其后的方法和方法3及其后的方法对于已诊断患有溶酶体贮积症，特别是法布瑞氏症，但尚未经历与此疾病状态有关的疼痛症状，或仅有出现此疾病的最早期皮肤症状的受试者，可能为有利的。根据方法2及其后的方法和方法3及其后的方法对于处于发生溶酶体贮积症，例如法布瑞氏的风险的受试者，由于，例如已知造成此疾病的受试者或受试者的家族谱系中的突变，也可能为有利的。因此，在本技术中所述的方法的某些实施方案中，此受试者经诊断为处于发生该疾病或病症的风险，且该方法防止或延迟在该受试者中疾病或病症的疼痛症状的发作及/或发生。在某些实施方案中，该受试者凭借具有如本技术中所述的基因中的突变，经诊断处于发生该疾病或症病的风险。医药组合物
[0083]
本技术还提供包括至少一种如本技术中所述的奎宁环化合物和至少一种医药学上可接受赋形剂的医药组合物，例如供用于根据本技术中所公开的方法中。医药学上可接受赋形剂可为任何本领域中已知的此赋形剂，包括那些描述于，例如remington's pharmaceutical sciences,mack publishing co.(a.r.gennaro edit.1985)中的赋形剂。当前所公开的化合物的医药组合物可通过本领域中已知的常规方法来制备，包括例如，将至少一种当前所公开的化合物与医药学上可接受赋形剂混合。
[0084]
因此，在一方面，本技术提供包括如本技术中所述的奎宁环化合物及医药学上可接受赋形剂的医药剂型，其中该剂型是经调配，当给药时(例如当口服给药时)用以提供足以治疗如本技术中所述的疾病或病症的量的该化合物(例如，以任何方法2及其后的方法或方法3及其后的方法)。
[0085]
本发明的医药组合物或剂型可包括药剂和另外的载剂，例如惰性或活性的化合物或组合物，例如可检测剂、标签、佐剂、稀释剂、粘合剂、稳定剂、缓冲剂、盐类、亲脂性溶剂、防腐剂、佐剂等。载剂也包括医药赋形剂和添加剂，例如蛋白质、胜肽、氨基酸、脂质和碳水化合物(例如糖类，包括单糖、双糖、三糖、四糖和寡糖；衍生的糖类，例如醛糖醇、醛糖酸，酯化糖类等；及多糖类或糖聚合物)，其可单独或组合存在，包括单独或1至99.99％重量比或体积比的组合。示例的蛋白质赋形剂包括血清白蛋白，例如人类血清白蛋白(hsa)、重组的人类白蛋白(rha)、明胶、酪蛋白等。也可能具缓冲能力作用的代表性氨基酸/抗体组份包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜碱、组氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、阿斯巴甜等。碳水化合物赋形剂也希望在本发明的范围内，其实例包括但不限于单糖例如果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、d
‑
甘露糖、山梨糖等；二糖，例如乳糖、蔗糖、海藻糖、纤维二糖等；多糖类，例如棉子糖、松三糖、麦芽糊精、右旋糖酐、淀粉等；及醛糖醇，例如甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、山梨糖醇(葡萄糖醇)和肌醇。
[0086]
可使用的载剂包括缓冲剂或ph调节剂；典型地，缓冲剂为从有机酸或碱所制备的盐。代表性的缓冲剂包括有机酸盐类，例如柠檬酸、抗坏血酸、葡萄糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或邻二甲酸的盐类；tris、氨丁三醇(tromethamine)盐酸盐或磷酸盐缓冲剂。另外的载剂包括聚合性赋形剂/添加剂，例如聚乙烯吡咯酮、ficolls(一种聚合糖)、葡萄糖结合剂(dextrates)(例如环状糊精，例如2
‑
羟丙基
‑
β
‑
环状糊精)、聚乙二醇、调味剂、抗微生物剂、甜味剂、抗氧化剂、抗静电剂、表面活性剂(例如聚山梨醇酯，如“tween 20”和“tween 80”)、脂质(例如磷脂质、脂肪酸)、类固醇(例如胆固醇)及螯合剂(例如edta)。
[0087]
本技术还提供医药组合物，及包括该组合物的试剂盒，其含有至少一种如本技术中所述的奎宁环化合物及至少一种另外的医药活性剂。这些医药组合物和试剂盒可经调整而得以同时、先后及/或分开投予此奎宁环化合物和另外的活性剂。例如，此奎宁环化合物和另外的活性剂可调配成分开的剂型，例如分开的片剂、胶囊、冻干物或液体，或其可调配于相同的剂型中，例如相同的片剂、胶囊、冻干物或液体中。当此奎宁环化合物和另外的活性剂调配于相同的剂型中时，此奎宁环化合物和另外的活性剂可实质上混合于片剂的中心内，或其可实质上存在此剂型的分散区中，例如相同片剂的不同层。在一实施方案中，此医药剂型包括另一种例如在患有、经诊断有或易罹患溶酶体贮积症，例如高雪氏症第3型或尼曼匹克症c型或疼痛的患者中，例如，在患有、经诊断有或易罹患溶酶体贮积症，例如如本技术中所述的法布瑞氏症中能治疗或防止核上凝视麻痹的药剂。
[0088]
在另一方面，本技术提供医药组合物，其包括：(i)如本技术中所述的奎宁环化合物；(ii)另一种活性剂；及(iii)医药学上可接受赋形剂。在另外的实施方案中，当以口服投予受试者时，此另外的活性剂为例如，在患有、经诊断有或易罹患溶酶体贮积症，例如如本技术中所述的法布瑞氏症的病患中能治疗或防止疼痛或皮肤病症(例如，血管角化瘤)的药剂。
[0089]
当前所公开的奎宁环化合物及医药组合物可用于动物或人类。因此，当前所公开的化合物可调配成医药组合物供口服、颊内、肠道外(例如静脉内、肌肉内或皮下)、局部、直肠或鼻内给药或为适合以吸入或吹入给药的形式。在特定的实施方案中，此奎宁环化合物或医药组合物经调配供全身性给药，例如经由非肠道外路径。在一实施方案中，此奎宁环化合物或医药组合物经调配供口服给药，例如固体形式。这些给药模式和制备适当医药组合物的方法已有描述，例如在gibaldi’s drug delivery systems in pharmaceutical care(1st ed.,american society of health
‑
system pharmacists 2007)中。
[0090]
医药组合物可使用，例如提供所希望的释放属性的不同比例的羟基丙基甲基纤维素，其他聚合物基质、微脂体及/或微球体调配，而得以提供缓慢、延长或控制释放其中的活性成份。医药组合物也可可选择地含有乳浊剂并可为仅释放此活性成份，或较佳地在胃肠道的特定部份，可选择地以延迟的方式，例如通过使用肠膜衣的组合物。包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。活性成份也可为微囊密封的形式，若适当，具有一或多种本领域熟知的医药学上可接受载剂、赋形剂或稀释剂(参见，例如remington’s)。根据本领域技术人员所熟知的方法，当前所公开的化合物可经调配供持续递送。这些调配物的实例可参见美国专利3,119,742；3,492,397；3,538,214；4,060,598；和4,173,626。
[0091]
在口服给药的固体剂型中(例如胶囊、片剂、药片、糖衣锭、散剂、颗粒等)，活性成份与一或多种医药学上可接受的载剂、赋形剂或稀释剂混合，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，及/或任何下列物质：(1)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、微晶纤维素、磷酸钙及/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、预糊化化玉米淀粉、聚乙烯吡咯酮、羟丙基甲基纤维素、蔗糖及/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、甘醇酸淀粉钠、马铃薯或树薯淀粉、海藻酸、特定的硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，例如石蜡；(6)吸收加速剂，例如四级铵化合物；(7)湿化剂，例如月桂基硫酸钠、乙酰醇和甘油单硬脂酸酯；(8)吸附剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石、氧化硅、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；和(10)调色剂。在胶囊、片剂和药片的情况下，医药组合物还可包含缓冲剂。类似形式的固体组合物也可使用软式和硬式
‑
填充明胶胶囊的填充剂，及赋形剂例如乳糖以及高分子量聚乙二醇等来制备。
[0092]
片剂可通过压制或模铸来制造，可选择地带有一或多种附属成份。压制片剂可使用粘合剂(例如明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如甘醇酸淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂及/或分散剂来制备。模铸片剂可通过以适合的机器将湿化的粉末活性成份与惰性液体稀释剂的混合物塑模来制造。这些锭剂和其他固体剂型，例如糖衣锭、胶囊、药片和颗粒，可可选择地刻痕或带有膜衣和外壳，例如肠衣和本领域中熟知的其他膜衣来制备。
[0093]
在实施方案中，医药组合物以液体形式口服给药。供活性成份口服给药的液体剂型包括医药学上可接受乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。口服给药的液体制备物可以干燥产物呈现供使用前以水或其它适合的媒剂重建。除了活性成份外，液体剂型可含有本领域中常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲基酯、丙二醇、1,3
‑
丁二醇、油类(例如棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和山梨醇酐的脂肪酸酯及其混合物。除了惰性稀释剂之外，液体医药组合物可包括佐剂，例如湿润剂、乳化剂
和悬浮剂、甜味剂、调味剂、色剂、香料和防腐剂等。悬浮液，除了活性成份之外可含有悬浮剂，例如(但不限于)乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨醇酐酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶及其混合物。适合的液体制备物可通过常规的方法以医药学上可接受添加剂来制备，例如悬浮剂(例如山梨醇糖浆、甲基纤维素或氢化食用油脂)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)；非水性媒剂(例如杏仁油、油性酯类或乙醇)；及/或防腐剂(例如对
‑
羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)。活性成份也可以大丸剂、舐剂或糊剂来给药。
[0094]
就颊内给药，此组合物可采以常规方法调配的片剂或糖锭的形式。
[0095]
在实施方案中，医药组合物以非口服的方式给药，例如以局部涂覆、经皮涂覆、注射等。在相关的实施方案中，这些医药组合物通过注射、输注或植入(例如静脉内、肌肉内、动脉内、皮下等)以肠道外给药。
[0096]
当前所公开的化合物可经调配供通过注射以肠道外给药，包括使用常规的导管技术或输注。注射用的调配物可以单位剂型呈现，例如以带有添加防腐剂的安瓿或以多剂量容器。组合物可采用诸如悬浮液、溶液或溶于油性或水性媒剂的乳液的形式，且可含有调配剂，例如本领域技术人员已知的悬浮剂、稳定剂及/或分散剂。另一种选择，活性成份可为散剂形式供使用前以适合的媒剂例如无菌无热源的水重建。
[0097]
医药组合物可直接投予中枢神经系统。因此，在特定的实施方案中，这些组合物是直接投予中枢神经系统以避开血脑屏障。在某些实施方案中，此组合物可经由直接脊椎注射来给药。在一些实施方案中，此组合物是通过脊椎内注射来给药。在某些实施方案中，此组合物是通过脑室内注射来给药。在一些实施方案中，此组合物是投予至大脑侧室。在实施方案中，此组合物是投予至两个大脑侧室。在另外的实施方案中，此组合物是经由海马内微注射来给药。这些组合物可以一次注射或以多次注射来给药。在其他的实施方案中，此组合物投予一个以上的位置(例如中枢神经系统中的二个位置)。
[0098]
这些医药组合物可为无菌注射液形式。这些医药组合物可通过，例如经由细菌截留过滤器过滤，或通过在使用前以可立即溶于无菌水或某些其他无菌可注射媒剂的无菌固体组合物的形式并入杀菌剂，来杀菌。就制备此组合物，是将活性成份溶于或悬浮于肠道外可接受的液体媒剂中。示例的媒剂和溶剂包括(但不限于)水、通过加入适量的盐酸、氢氧化钠或适合的缓冲剂调整适合ph的水、1,3
‑
丁二醇、林格氏液和等渗氯化钠溶液。该医药组合物也可含有一或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯、乙酯或正丙酯。为了改善溶解度，可加入助溶剂或增溶剂，或此溶剂可含10
‑
60％w/w的丙二醇或类似物。
[0099]
医药组合物可含有一或多种医药学上可接受无菌等渗水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液或可在使用前重建成无菌可注射溶液或分散液的无菌散剂。这些医药组合物可含有抗氧化剂；缓冲剂；抑菌剂；可帮助调配物与希望接受者的血液等渗的溶质；悬浮剂；增稠剂；防腐剂等。
[0100]
可用于本发明医药组合物中的适合的水性和非水性载剂包括水、乙醇、多醇类(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其适合的混合物、植物油，例如橄榄油和可注射有机酯类，例如油酸乙酯。例如，可通过使用涂膜物质，例如卵磷脂，就分散液的情况是通过维持所需的颗粒大小，及通过使用表面活性剂，保持适当的流动性。在某些实施方案中，为了延长活性成份的效用，希望减缓化合物从皮下或肌肉内注射的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或非晶物质的液体悬浮液来达成。活性成份的吸收率则是依照其溶解率而定，其因而可
依照晶体大小和晶型而定。另一种选择，延长肠道外给药的活性成份的吸收是通过将化合物溶解或悬浮于油媒剂中来达成。此外，延长可注射医药形式的吸收可通过纳入延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶来进行。
[0101]
控制释放的肠道外组合物可为水性悬浮液、微球体、微胶囊、磁性微球体、油溶液、油悬浮液、乳液的形式，或此活性成份可并入生物相容的载剂、脂质体、纳米粒子、植入或输注装置。用于制备微球体及/或微胶囊的物质包括(但不限于)生物可降解的/生物溶蚀性聚合物，例如聚乳糖(polyglactin)、聚
‑
(异丁基氰基丙烯酸酯)、聚(2
‑
羟乙基
‑
l
‑
谷氨酰胺)及聚(乳酸)。当调配控制释放肠道外调配物时，可使用的生物兼容载剂包括碳水化合物例如右旋糖苷，蛋白例如白蛋白、脂蛋白或抗体。用于植入物的物质可为非生物降解性的，例如聚二甲基硅氧烷，或生物可降解的例如聚(己内酯)、聚(乳酸)、聚(甘醇酸)或聚(原酸酯)。
[0102]
就局部给药，当前所公开的化合物可调配成软膏或乳霜。当前所公开的化合物亦可调配在直肠组合物中，例如栓剂或保留灌肠，例如含有常用栓剂基底如可可脂或其他甘油酯。
[0103]
就鼻内给药或以吸入给药，当前所公开的化合物可方便地以溶液或悬浮液的形式由病患挤压或抽吸的泵喷雾容器，或为加压容器或雾化器的气雾喷雾呈现，及使用适合的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适合的气体来常规递送。就加压气雾的情况，该剂量单位可通过提供递送计量的量的阀来测量。加压容器或雾化器可含有当前所公开的化合物的溶液或悬浮液。用于吸入器或吹入器中的胶囊和卡匣(例如以明胶所制)可经调配含有当前所公开的化合物和适合的散剂基底例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
[0104]
一般而言，本技术中所述的药剂和组合物以一有效量或足以在有此需要的受试者中治疗或防止核上凝视麻痹的量来给药。典型地，此剂量可在以例如年龄、身体状况、体重、性别、饮食、给药时间和其他临床因素为基础的范围内调整。决定有效量完全在本领域技术人员的能力范围内。
[0105]
本技术中已大体上描述，提供下列非限定实施例用以进一步说明本发明。
实施例
用于化学合成的通用步骤通用步骤a：以三光气形成氨基甲酸酯
[0106]
在胺盐酸盐(1当量)和三乙胺(3
‑
4当量)溶于thf的悬浮液中(浓度～0.2m)室温下加入三光气(0.35当量)。将反应混合物搅拌10min并加入小量的醚(1
‑
2ml)。将三乙铵盐过滤出，得到异氰酸酯溶于thf/醚的澄清溶液。
[0107]
在醇(1.5当量)溶于thf的溶液中(浓度～0.2m)室温下加入nah[60％,油](1.5当量)。将反应混合物搅拌15min并逐滴加入上述溶液(异氰酸酯溶于thf/醚)。以标准的后处理，用盐水中止反应。以etoac萃取溶液并将有机层以na2so4干燥，过滤及浓缩。在快速有机物分离提纯(combiflash，sio2滤心，chcl3和2n nh3的meoh溶液)上将粗物质纯化()，得到对应的氨基甲酸酯。通用步骤b：用有机铈烃化
[0108]
将cecl3(4当量)溶于thf的悬浮液(浓度～0.2m)在室温下搅拌1h。将悬浮液冷却至
‑
78℃并逐滴加入meli/醚[1.6m](4当量)。让有机铈复合物形成历时1h的时间并逐滴加入腈(1当量)溶于thf的溶液(浓度2.0m)。让反应混合物升至室温并搅拌18h。让溶液冷却至0℃并以水(～1ml)中止反应，接着加入50％氢氧化铵水溶液(～3ml)，直到沉淀形成及沉降在烧瓶底部。将混合物经由铁铝酸四钙石垫过滤并浓缩。以hcl/二噁烷的溶液[4.0m]处理该粗物质。将中间物芳基丙
‑2‑
胺盐酸盐在醚中湿磨并直接用于下个步骤。另一种选择，将粗的游离碱胺在快速有机物分离提纯(sio2滤心，chcl3和2n nh3的meoh溶液)上纯化，得到对应的芳基丙基胺。通用步骤c：铃木偶合
[0109]
在芳基卤化物(1当量)溶于dme/水[4:1]混合物的溶液(浓度～0.2m)中加入硼酸(2当量)、钯催化剂(0.1
‑
0.25当量)和碳酸钠(2当量)。将反应混合物于150℃微波25min。经由铁铝酸四钙石塞过滤及浓缩后，将粗产物在快速有机物分离提纯(sio2滤心，chcl3和2n nh3的meoh溶液)上纯化，得到对应的偶合加合物。
[0110]
另一种选择：在芳基卤化物(1当量)溶于甲苯/水[20:1]混合物的溶液(浓度～0.2m)中加入硼酸(1.3
‑
2.5当量)、钯催化剂(0.05
‑
0.15当量)、三环己基膦(0.15
‑
0.45当量)和磷酸钾(5当量)。将反应混合物于150℃微波25min。经由铁铝酸四钙石塞过滤及浓缩后，将粗产物在快速有机物分离提纯 (sio2滤心，chcl3和2n nh3的meoh溶液)上纯化，得到对应的偶合加合物。通用步骤d：环丙基化
[0111]
在
‑
70℃下搅拌中的芳基腈(1当量)和ti(oi
‑
pr)4(1.7当量)的混合物中逐滴加入etmgbr[3.0m的醚溶液](1.1当量)。让反应混合物升温至25℃并搅拌1h。于上述混合物中于25℃逐滴加入bf3·
et20(3当量)。添加后，将混合物另再搅拌2h，及然后以hci水溶液[2m]中止反应。然后将生成的溶液通过加入naoh水溶液[2m]碱化。以乙醚萃取有机物质。将有机层组合，以na2so4干燥，过滤及浓缩。将粗物质通过二氧化硅管柱层析纯化(以石油醚/etoac：10/1至1/1溶析)，得到对应的1
‑
芳基
‑
环丙胺。通用步骤e：使用铃木条件的二芳基偶合
[0112]
在经搅拌的芳基卤化物组分(1当量)溶于5:1(v/v)二噁烷/水(～0.15m)或5:1(v/v)n,n
‑
二甲基甲酰胺(～0.15m)的溶液中加入芳基硼酸酯或芳基硼酸组份(1
‑
1.5当量)、碳酸钠(2
‑
3当量)和[1,1'
‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)(0.05当量)。将混合物加热(90℃)至隔夜及然后经由铁铝酸四钙石塞过滤。以乙酸乙酯冲洗铁铝酸四钙石并将组合的滤液以盐水冲洗、干燥(na2so4)和浓缩。将残余物以快速层析于二氧化硅上纯化。通用步骤f：使用经由混合的酸酐/库尔提斯重排路径(curtius rearrangementroute)所产生的异氰酸酯形成氨基甲酸酯
[0113]
在经搅拌的羧酸组份(1当量)溶于四氢呋喃的溶液中(～0.1m)加入三乙胺(2当量)。将反应冷却(0℃)并以氯甲酸异丁酯(1.5当量)处理。于0℃、1小时后，加入叠氮化钠(2当量)的水溶液(～1m)并让反应升温至室温。搅拌至隔夜后，将反应以水稀释并以乙酸乙酯萃取。将组合的萃取液以碳酸氢钠水溶液和盐水清洗，干燥(na2so4)及浓缩。将粗的酰基叠氮化物进一步经由与甲苯共蒸发加以干燥，及然后以甲苯(～0.1m)处理。将经搅拌的溶液回流2
‑
2.5小时，冷却及以醇组份(1.25
‑
2当量)处理。将反应加热回流至隔夜及然后浓缩。
将残余物以乙酸乙酯或氯仿处理并以碳酸钠水溶液清洗、干燥(na2so4)及浓缩。将粗产物以快速层析于二氧化硅上使用氯仿/甲醇(较低极性氨基甲酸酯)或氯仿/甲醇/氨(较高极性氨基甲酸酯)溶剂梯度纯化。实施例1：合成奎宁环化合物1
‑
氮杂双环[2.2.2]辛
‑3‑
基[2
‑
(4'
‑
氟联苯
‑3‑
基)丙
‑2‑
基]氨基甲酸酯(化合物1)
[0114]
使用通用步骤c、1
‑
氮杂双环[2.2.2]辛
‑3‑
基[2
‑
(3
‑
溴苯基)丙
‑2‑
基]氨基甲酸酯(600mg,1.63mmol)、4
‑
氟苯基硼酸(457mg,3.27mmol)和乙酸钯(ii)，得到标题化合物为白色固体(373mg；60％)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.56(s,1h),7.52(dd,j＝5.4,8.4hz,2h),7.42
‑
7.38(m,3h),7.12(m,2h),5.18(5,1h),4.62(s,1h),2.66(m,6h),1.72(s,6h),2.01
‑
0.83(m,5h)ppm。
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ125.0,124.0,123.8,116.0,116.0,71.3,55.9,55.5,47.6,46.7,29.6,25.6,24.8,19.8ppm.纯度：98.0％uplcms(210nm)；滞留时间0.95min；(m 1)382.9.c
23
h
27
fn2o2·
0.37(chcl3)的分析理论值：c,65.86；h,6.47；n,6.57.实测值：c,65.85；h,6.69；n,6.49.(s)
‑
奎宁基
‑3‑
基2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基氨基甲酸酯(化合物2)
[0115]
在经搅拌的4
‑
氟硫代苯甲酰胺(8.94g,57.6mmol)溶于乙醇(70ml)的溶液中加入4
‑
氯乙酰基乙酸乙酯(7.8ml,58mmol)。将反应加热回流4小时，以另外一等份的4
‑
氯乙酰基乙酸乙酯(1.0ml,7.4mmol)处理并另再回流3.5小时。然后将反应浓缩并将残余物置于乙酸乙酯(200ml)和nahco3水溶液(200ml)之间分溶。将有机层与水层的反萃取液(乙酸乙酯，1x75ml)组合，干燥(na2so4)及浓缩。将生成的琥珀色油状物通过快速层析使用己烷/乙酸乙酯梯度纯化，得到2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)乙酸乙酯，为低熔点、近乎无色的固体(13.58g,89％)。
[0116]
在经搅拌的2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)乙酸乙酯(6.28g,23.7mmol)溶于dmf(50ml)的溶液中加入氢化钠[60％矿物油悬浮液](2.84g,71.0mmol)。将起泡沫的混合物搅拌15分钟，之后在冰浴上冷却并加入碘甲烷(4.4ml,71mmol)。将反应搅拌至隔夜，让冷却浴缓慢升温至室温。然后将混合物浓缩并将残余物置于乙酸乙酯(80ml)和水(200ml)之间分溶。以第二份的水(1x200ml)清洗有机层，干燥(na2so4)及浓缩。将生成的琥珀色油状物通过快速层析使用己烷/乙酸乙酯梯度纯化，得到2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯为无色油状物(4.57g,66％)。
[0117]
在经搅拌的2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯(4.56g,15.5mmol)溶于1：1：1thf/乙醇/水(45ml)的溶液中加入氢氧化锂单水合物(2.93g,69.8mmol)。将反应搅拌至隔夜，浓缩并再溶于水(175ml)。用乙醚(1x100ml)清洗溶液，通过加入1.0n hcl(80ml)的酸化，并以用乙酸乙酯(2x70ml)萃取。将组合的萃取液干燥(na2so4)及浓缩，得到2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸为白色固体(4.04g,98％)。将此物质用于下个步骤无纯化。
[0118]
在经搅拌和冷却(0℃)的2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸(4.02g,15.2mmol)溶于thf(100ml)的溶液中加入三甲基胺(4.2ml,30mmol)，接着加入氯甲酸异丁酯(3.0ml,23mmol)。将反应另再冷搅拌1小时，之后加入叠氮钠(1.98g,30.5mmol)在水(20ml)中的溶液。将反应搅拌至隔夜，让冷却浴缓慢地升温至室温。然后将混合物以水
(100ml)稀释并以乙酸乙酯(2x60ml)萃取。将组合的萃取物以nahco3水溶液(1x150ml)和盐水(1x100ml)清洗，干燥(na2so4)及浓缩。与甲苯(2x50ml)共蒸发后，将生成的白色固体置于甲苯(100ml)中处理并再回流4小时。然后加入(s)
‑3‑
奎核醇(3.87g,30.4mmol)并持续回流至隔夜。将反应浓缩并将残余物置于乙酸乙酯(100ml)和nahco3水溶液(150ml)之间分溶。以水(1x150ml)清洗有机层，干燥(na2so4)及浓缩。将生成的灰白色固体通过快速层析使用氯仿/甲醇/氨梯度纯化，得到标题化合物为白色固体(4.34g,73％)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.96
‑
7.88(m,2h),7.16
‑
7.04(m,3h),5.55(br s,1h),4.69
‑
4.62(m,1h),3.24
‑
3.11(m,1h),3.00
‑
2.50(m,5h),2.01
‑
1.26(m,11h)ppm.
13
c nmr(400mhz,cdcl3)δ166.4,165.1,163.8(d,j＝250.3hz),162.9,155.0,130.1(d,j＝3.3hz),128.4(d,j＝8.5hz),115.9(d,j＝22.3hz),112.5,71.2,55.7,54.2,47.5,46.5,28.0,25.5,24.7,19.6ppm.纯度：100％uplcms(210nm&254nm)；滞留时间0.83min；(m 1)390.(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(化合物3)
[0119]
使用通用步骤e和反应投入物2
‑
(4
‑
溴苯基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯及4
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)苯基硼酸，制备2
‑
(4'
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯为灰白色固体。在经搅拌的此化合物(3.01g,8.78mmol)溶于1：1：1(v/v/v)四氢呋喃/乙醇/水(45ml)的溶液中加入氢氧化锂单水合物(1.47g,61.4mmol)。将混合物加热回流至隔夜及然后浓缩。将残余物溶于水，以1n盐酸(65ml)处理并以乙酸乙酯萃取。将组合的有机层以盐水清洗，干燥(na2so4)及浓缩，得到2
‑
(4'
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸为白色固体(2.75g,100％)。根据通用步骤f将此中间物和(s)
‑
奎宁环
‑3‑
醇反应，产生标题化合物为无色玻璃状固体。1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.62
‑
7.29(m,7h),7.01(d,j＝8.9hz,2h),4.47
‑
4.37(m,1h),4.17
‑
4.08(m,2h),3.72
‑
3.62(m,2h),3.32(s,3h),3.09
‑
2.25(m,6h),2.05
‑
1.18(m,11h)ppm.
13
c nmr(100mhz,dmso
‑
d6)δ157.9,154.5,146.7,137.4,132.5,127.5,125.7,125.2,114.8,70.4,70.0,66.9,58.2,55.4,54.2,46.9,45.9,29.4,25.3,24.2,19.2ppm.纯度：100％,100％(210&254nm)uplcms；滞留时间：0.87min；(m h

)439.5.1
‑
氮杂双环[2.2.2]辛
‑3‑
基[2
‑
(联苯
‑3‑
基)丙
‑2‑
基]氨基甲酸酯(化合物4)
[0120]
使用通用步骤c、1
‑
氮杂双环[2.2.2]辛
‑3‑
基[2
‑
(3
‑
溴苯基)丙
‑2‑
基]氨基甲酸酯(600mg,1.63mmol)、苯基硼酸(398mg,3.27mmol)和乙酸钯(ii)，得到标题化合物为白色固体(379mg,64％)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.61(s,1h),7.56(d,j＝7.4hz,2h),7.50
‑
7.38(m,4h),7.34(m,2h),5.16(s,1h),4.63(s,1h),3.39
‑
2.09(m,6h),1.72(s,6h),2.02
‑
0.73(m,5h)ppm.
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ154.8,147.8,141.6,129.0,129.0,128.6,127.5,125.8,125.0,124.0,71.6,71.3,55.9,55.5,47.6,46.8,31.5,30.2,30.0,29.5,25.6,24.8,19.8ppm.纯度：99％uplcms(210nm)；滞留时间0.84min；(m 1)365.0.c
23
h
28
n2o2·
0.29(chcl3)的分析理论值：c,70.02；h,7.14；n,7.01。实测值：c,70.02；h,7.37；n,6.84.(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基2
‑
(联苯
‑4‑
基)丙
‑2‑
基氨基甲酸酯(化合物5)
[0121]
使用通用步骤b，将溴苯腈(2.00g,11.0mmol)转变成对应的2
‑
(4
‑
溴苯基)丙
‑2‑
胺(1.20g,51％)为棕色油状物。
[0122]
使用通用步骤a，2
‑
(4
‑
溴苯基)丙
‑2‑
胺(1.0g,4.7mmol)和(s)
‑
奎宁环
‑3‑
醇，得到
(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基2
‑
(4
‑
溴苯基)丙
‑2‑
基氨基甲酸酯(1.0g,58％)为棕色油状物。
[0123]
使用通用步骤c、上述溴化物(200mg,0.540mmol)、苯基硼酸(133mg,1.10mmol)和[pdcl2(pddf)]ch2cl2，得到标题化合物为白色固体(70mg,35％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.60
‑
7.53(m,4h),7.47(d,j＝8.5hz,2h),7.42(t,j＝7.5hz,2h),7.33(t,j＝7.5hz,1h),5.26(br s,1h),4.64(m,1h),3.33
‑
3.15(m,1h),3.10
‑
2.45(m,5h),2.40
‑
1.80(m,2h),1.78
‑
1.58(m,7h),1.55
‑
1.33(m,2h)ppm.
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ154.5,146.1,140.8,139.5,128.7,127.2,127.1,127.1,125.2,70.9,55.5,55.1,47.4,46.4,31.1,29.5,25.3,24.5,19.5ppm.纯度：100％lcms(214nm&254nm)；滞留时间1.56min；(m 1)365.奎宁环
‑3‑
基1
‑
(联苯
‑4‑
基)环丙基氨基甲酸酯(化合物6)
[0124]
使用通用步骤d，溴苯腈(3.00g,16.5mmol)转变为对应的1
‑
(4
‑
溴苯基)环丙胺(1.80g,51％)为黄色固体。
[0125]
使用通用步骤a、1
‑
(4
‑
溴苯基)环丙胺(1.0g,4.7mmol)和奎宁环
‑3‑
醇，得到奎宁环
‑3‑
基1
‑
(4
‑
溴苯基)环丙基
‑
氨基甲酸酯(1.3g,75％)为白色半固体。
[0126]
使用通用步骤c、上述氨基甲酸酯(400mg,1.12mmol)、苯基硼酸(267mg,2.22mmol)和[pdcl2(pddf)]ch2cl2标题化合物为黏稠油状物(100mg,25％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.47(d,j＝7.5hz,2h),7.43(d,j＝8.0hz,2h),7.33(t,j＝7.5hz,2h),7.26
‑
7.15(m,3h),5.93(br s,0.6h),5.89(br s,0.4h),4.67(m,1h),3.20
‑
3.06(m,1h),2.88
‑
2.42(m,5h),1.98
‑
1.08(m,9h)ppm.
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ155.0,141.0,139.7,138.2,127.7,126.1,126.0,124.8,124.1,70.0,54.5,46.3,45.4,34.1,24.3,23.2,18.3,17.0ppm.纯度：100％lcmc(214nm&254nm)；滞留时间1.52min；(m 1)363.(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基1
‑
(4'
‑
氟联苯
‑4‑
基)环丙基氨基甲酸酯(化合物7)
[0127]
使用通用步骤c、(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基1
‑
(4
‑
溴苯基)环丙基氨基甲酸酯、4
‑
f
‑
苯基硼酸和[pdcl2(pddf)]ch2cl2，得到标题化合物为白色固体(45％)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.06
‑
7.83(d,1h),7.69
‑
7.66(m,2h),7.59
‑
7.55(m,2h),7.29
‑
7.22(m,4h),4.56
‑
4.54(m,1h),3.13
‑
2.32(m,6h),1.91
‑
1.19(m,9h)ppm.
13
c nmr(125mhz,dmso
‑
d6)δ163.2,161.2,156.4,143.7,136.9,128.9,128.8,126.8,125.6,116.2,116.0,70.7,55.8,47.4,46.4,34.8,25.7,24.6,19.6,18.7,18.6ppm.纯度：>97％lcms(214nm&254nm)；滞留时间1.96min；(m 1)381.2.(s)
‑1‑
氮杂双环[2.2.2]辛
‑3‑
基[1
‑
(2',4'
‑
二氟联苯
‑4‑
基)环丙基]氨基甲酸酯(化合物8)
[0128]
使用通用步骤c、(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基1
‑
(4
‑
溴苯基)环丙基氨基甲酸酯(0.446g,1.22mmol)、2,4
‑
二氟苯基硼酸(0.386g,2.44mmol)和pd(oac)2(0.015g,0.067mmol)，得到标题化合物为棕褐色固体(0.111g,23％)。1h nmr(cdcl3)δ7.43(dd,j＝8.4,1.6hz,2h),7.40
‑
7.33(m,1h),7.31(d,j＝7.7hz,2h),6.99
‑
6.81(m,2h),5.54(d,j＝48.0hz,1h),4.82
‑
4.65(m,1h),3.30
‑
3.07(m,1h),2.98
‑
2.44(m,5h),1.97(d,j＝32.7hz,1h),1.83(d,j＝10.3hz,1h),1.64(s,1h),1.52(s,1h),1.39(s,1h),1.31(d,j＝6.8hz,4h)ppm.
13
c nmr主要旋转异构体(cdcl3)δ162.2(dd,j＝12.8,249.1hz),159.8(dd,j＝11.8,251.0hz),156.9,156.0,142.6,133.1,131.3(m),128.9,125.6,124.9,111.5(dd,j＝3.9,21.2hz)104.4(dd,j＝25.2,29.4hz),72.1,71.6,55.7,47.4,46.5,35.7,35.3,25.5,24.6,24.4,
19.5,18.1ppm.纯度：lcms>99.3％(214nm&254nm)；滞留时间0.90min；(m 1)399.0.1
‑
氮杂双环[2.2.2]辛
‑3‑
基[1
‑
(4'
‑
甲氧基联苯
‑4‑
基)环丙基]氨基甲酸酯(化合物9)
[0129]
使用通用步骤c、奎宁环
‑3‑
基1
‑
(4
‑
溴苯基)环丙基氨基甲酸酯(0.485g,1.33mmol)、4
‑
甲氧基苯基硼酸(0.404g,2.66mmol)和pd(oac)2(0.016g,0.071mmol)，得到标题化合物为灰色固体(0.337mg,65％)。1h nmr(cdcl3)δ7.48(dd,j＝8.6,5.5hz,4h),7.29(d,j＝7.6hz,2h),6.96(d,j＝8.8hz,2h),5.58(d,j＝48.7hz,1h),4.83
‑
4.63(m,1h),3.84(s,3h),3.20(dd,j＝24.0,15.5hz,1h),2.97
‑
2.42(m,5h),1.97(d,j＝30.9hz,1h),1.81(s,1h),1.75
‑
1.33(m,3h),1.28(d,j＝6.8hz,4h)ppm.
13
c nmr主要旋转异构体(cdcl3)δ159.1,156.0,141.4,139.0,133.4,128.0,126.7,125.9,114.2,71.5,55.7,55.3,47.4,46.5,35.3,25.5,24.6,19.6,17.8ppm.纯度：lcms>97.1％(214nm&254nm)；滞留时间0.88min；(m 1)393.4.奎宁环
‑3‑
基2
‑
(5
‑
(4
‑
氟苯基)噻吩
‑3‑
基)丙
‑2‑
基氨基甲酸酯(化合物10)
[0130]
在经搅拌和冷却的(0℃)5
‑
溴噻吩
‑3‑
羧酸乙酯(13.30g,56.57mmol)溶于thf(100ml)的溶液中于20分钟期间逐滴加入甲基溴化镁的乙醚溶液[3.0m](55.0ml,165mmol)。2小时后，将反应溶液浓缩。将残余物置于nh4cl水溶液(200ml)中处理并以乙酸乙酯(2x100ml)萃取。将组合的萃取物干燥(na2so4)及浓缩。将生成的琥珀色油状物通过快速层析使用己烷/乙酸乙酯梯度纯化，得到2
‑
(5
‑
溴噻吩
‑3‑
基)丙
‑2‑
醇为淡琥珀色油状物(8.05g,64％)。
[0131]
在经搅拌的2
‑
(5
‑
溴噻吩
‑3‑
基)丙
‑2‑
醇(8.03g,36.3mmol)溶于二氯甲烷(80ml)的溶液加入叠氮钠(7.08g,109mmol)接着加入三氟乙酸(8.0ml；于5
‑
6分钟期间逐滴加入)。将此浓稠的悬浮液搅拌1.5小时，之后以水(350ml)稀释并以乙酸乙酯(1x200ml)萃取。将有机层以nahco3水溶液(1x250ml)清洗，干燥(na2so4)及浓缩，得到粗的叠氮产物。在经搅拌的此物质的thf(160ml)溶液中加入水(11ml)接着加入三苯基膦(23.8g,90.7mmol)。将反应搅拌2天，之后浓缩。将生成的残余物溶于乙酸乙酯(250ml)并以1n hcl水溶液(4x75ml)萃取。将组合的萃取物以浓nh4oh碱化并以乙酸乙酯(2x100ml)萃取。将这些萃取物轮流干燥(na2so4)及浓缩。将生成的琥珀色油状物通过快速层析使用二氯甲烷/甲醇/氨梯度纯化，得到2
‑
(5
‑
溴噻吩
‑3‑
基)丙
‑2‑
胺和三苯基膦氧化物的混合物(～70/30比率)为黏稠琥珀色油状物(1.32g,17％)。
[0132]
在经搅拌的3
‑
奎核醇(3.00g,23.6mmol)溶于thf(100ml)的溶液中加入氯甲酸4
‑
硝基苯基酯(5.94g,29.5)。搅拌4小时后，将沉淀滤出，以冲洗并于多孔玻璃上于室内真空下风干。将滤饼溶解于乙酸乙酯(150ml)并以nahco3水溶液(1x150ml)和水(2x150ml)清洗。将有机层干燥(na2so4)及浓缩，得到粗的4
‑
硝基苯基奎宁环
‑3‑
基碳酸酯产物，将其用于下个步骤无纯化。
[0133]
在经搅拌的2
‑
(5
‑
溴噻吩
‑3‑
基)丙
‑2‑
胺(0.366g,1.66mmol)溶于thf(10ml)的溶液中加入4
‑
硝基苯基奎宁环
‑3‑
基碳酸酯(0.571g,1.95mmol)和少量4
‑
(二甲基氨基)吡啶的颗粒。将混合物回流至隔夜，浓缩并置于乙酸乙酯(50ml)和nahco3水溶液(50ml)之间分溶。将有机层再次以nahco3水溶液(1x50ml)清洗，干燥(na2so4)及浓缩。将生成的脏黄色胶状物通过快速层析使用氯仿/甲醇/氨梯度纯化，得到奎宁环
‑3‑
基(1
‑
(5
‑
溴噻吩
‑3‑
基)环
丙基)氨基甲酸酯为灰白色固体(0.305g,49％)。
[0134]
使用通用步骤c、奎宁环
‑3‑
基(1
‑
(5
‑
溴噻吩
‑3‑
基)环丙基)氨基甲酸酯(0.227g,0.742mmol)、4
‑
氟苯基硼酸(0.208g,1.49mmol)、三环己基膦(0.021g,0.075mmol)、磷酸钾(0.866,4.08mmol)和乙酸钯(8.0mg,36μmol)，得到标题化合物为灰色固体(0.142g,49％)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.60
‑
7.45(m,2h),7.24
‑
7.19(m,1h),7.10
‑
6.97(m,3h),5.23(br s,1h),4.72
‑
4.61(m,1h),3.30
‑
3.04(m,1h),3.03
‑
2.25(m,5h),2.09
‑
1.02(m,11h)ppm.
13
c nmr(400mhz,cdcl3)δ162.3(d,j＝247.1hz),154.5,149.8,143.6,130.7,127.4(d,j＝8.1hz),121.8,118.9,115.8(d,j＝21.6hz),70.8,55.5,53.4,47.3,46.4,29.0,25.4,24.4,19.4ppm.纯度：95.8％uplcms(210nm&254nm)；滞留时间0.90min；(m 1)389.(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基2
‑
(3
‑
(4
‑
氟苯基)异噻唑
‑5‑
基)丙
‑2‑
基氨基甲酸酯(化合物11)
[0135]
在经搅拌的2
‑
(3
‑
(4
‑
氟苯基)异噻唑
‑5‑
基)丙
‑2‑
胺(1.21g,5.12mmol)溶于甲苯的溶液中加入光气的甲苯溶液[～1.9m](10.8ml,20.5mmol)。将反应加热回流二小时及然后浓缩。将残余物与甲苯(2x15ml)共蒸发，得到粗的异氰酸酯中间物为金色油状物。将此物质置于甲苯中(10ml)处理并以(s)
‑3‑
奎核醇(0.749g,5.89mmol)处理。将反应加热回流至隔夜及浓缩。将残余物通过快速层析使用氯仿/甲醇/氨梯度纯化，得到标题化合物为白色固体(0.971g,49％)。1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ8.09
‑
8.00(m,2h),7.87(br s,1h),7.75(s,1h),7.35
‑
7.25(m,2h),4.54
‑
4.45(m,1h),3.14
‑
2.92(m,1h),2.87
‑
2.17(m,5h),1.98
‑
0.98(m,11h)ppm.
13
c nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ180.1,165.6,162.6(d,j＝246.4hz),154.7,131.2(d,j＝3.0hz),128.7(d,j＝8.4hz),118.2,115.7(d,j＝21.8hz),70.6,55.3,52.8,46.9,45.9,29.9,25.2,24.2,19.2ppm.纯度：100％uplcms(210nm&254nm)；滞留时间0.82min；(m 1)390.(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基2
‑
(4
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑2‑
基)丙
‑2‑
基氨基甲酸酯(化合物12)
[0136]
在经搅拌的3
‑
氨基
‑3‑
硫代丙酸乙酯(20.00g,135.9mmol)溶于乙醇(120ml)的溶液中加入2
‑
溴
‑4’‑
氟苯乙酮(29.49g,135.9mmol)。将混合物回流1小时，浓缩并置于乙酸乙酯(300ml)和nahco3水溶液(400ml)之间分溶。将有机层与水层的反萃取物(乙酸乙酯,1x100ml)组合，干燥(na2so4)并浓缩。将生成的棕色固体通过快速层析使用己烷/乙酸乙酯梯度纯化，得到2
‑
(4
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑2‑
基)乙酸乙酯为灰白色固体(29.92g,83％)。
[0137]
在经搅拌和冷却的(
‑
78℃)2
‑
(4
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑2‑
基)乙酸乙酯(10.00g,37.69mmol)溶于thf(250ml)的溶液中在15分钟期间逐滴加入叔丁醇钾溶于thf的溶液[1.0m](136ml,136mmol)，接着加入18
‑
冠醚
‑
6(1.6ml,7.5mmol)。在
‑
78℃下另再30分钟后，于5分钟期间逐滴加入碘甲烷(8.5ml)。将反应另再冷搅拌2小时，之后倒入水(450ml)并以乙酸乙酯(2x150ml)萃取。将组合的萃取液以盐水(1x200ml)清洗，干燥(na2so4)及浓缩。将生成的棕色油状物通过快速层析使用使用己烷/乙酸乙酯梯度纯化，得到2
‑
(4
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑2‑
基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯为淡琥珀色油状物(8.64g,78％)。
[0138]
在经搅拌的2
‑
(4
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑2‑
基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯(0.900g,3.07mmol)溶于1：1：1thf/乙醇/水(15ml)的溶液中加入氢氧化锂单水合物(0.451g,10.7mmol)。搅拌至隔夜后，将反应浓缩并再溶解于水中(80ml)。以乙醚(1x50ml)清洗溶液，加入1n hcl(15ml)酸化并以乙酸乙酯(2x50ml)萃取。将组合的萃取液干燥(na2so4)及浓缩，得到2
‑
(4
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑2‑
基)
‑2‑
甲基丙酸为淡金黄色固体(0.808g,99％)。
[0139]
在经搅拌和冷却的(0℃)2
‑
(4
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑2‑
基)
‑2‑
甲基丙酸(0.784g,2.96mmol)溶于thf(25ml)的溶液中加入三乙胺(0.82ml,5.9mmol)，接着加入氯甲酸异丙酯(0.58ml,4.4mmol)。将反应另再冷搅拌1小时，之后加入叠氮钠(0.385g,5.92mmol)的水溶液(7ml)。将反应搅拌至隔夜后，让冷却浴缓慢升温至室温。然后以水(100ml)稀释混合物并以乙酸乙酯(2x60ml)萃取。将组合的萃取液以nahco3水溶液(1x150ml)和盐水(1x100ml)清洗，干燥(na2so4)及浓缩。与甲苯(2x30ml)共蒸发后，将生成的灰白色固体置于甲苯(25ml)中处理并回流4小时。然后加入(s)
‑3‑
奎核醇(0.753g,5.92mmol)并持续回流3小时。将反应浓缩并将残余物通过快速层析使用氯仿/甲醇/氨梯度纯化，得到标题化合物为白色固体(0.793g,69％)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.90
‑
7.81(m,2h),7.32(s,1h),7.14
‑
7.05(m,2h),5.76(br s,1h),4.72
‑
4.65(m,1h),3.26
‑
3.10(m,1h),3.03
‑
2.37(m,5h),2.05
‑
1.23(m,11h)ppm.
13
c nmr(400mhz,cdcl3)δ177.6,162.6(d,j＝248.4hz),154.8,153.6,130.8(d,j＝3.2hz),128.1(d,j＝8.1hz),115.9(d,j＝21.7hz),112.2,71.6,55.7,47.4,46.5,29.1,25.4,24.7,19.6ppm.纯度：100％uplcms(210nm&254nm)；滞留时间0.82min；(m 1)390.奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(化合物13)
[0140]
使用通用步骤f和反应投入物2
‑
(4'
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸(如实施例3中所述制备)和奎宁环
‑3‑
醇，产生标题化合物为无色玻璃状固体(23％)。nmr数据与实施例3的数据相符。纯度：100％、99.1％(210&254nm)uplcms；滞留时间：0.87min；(m h

)439.0.(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(3'
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(化合物14)
[0141]
将4
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)苯基硼酸换成3
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)苯基硼酸，使用实施例3中所述的反应程序制备2
‑
(3'
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸。根据通用步骤f将此中间物和奎宁环
‑3‑
醇反应，产生标题化合物为玻璃状无色固体。1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.63
‑
7.31(m,6h),7.24
‑
7.10(m,2h),6.92(dd,j＝8.2,1.9hz,1h),4.51
‑
4.34(m,1h),4.21
‑
4.08(m,2h),3.72
‑
3.64(m,2h),3.32(s,3h),3.09
‑
2.26(m,5h),2.04
‑
1.22(m,9h)ppm.
13
c nmr(100mhz,dmso
‑
d6)δ158.9,154.6,147.6,141.5,137.6,129.9,126.3,125.2,118.9,113.2,112.5,70.4,70.0,66.9,58.2,55.4,54.2,46.9,45.9,29.4,25.3,24.2,19.2ppm.纯度：100％,100％(210&254nm)uplcms；滞留时间：0.91min；15(m h

)439.4.奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑3‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(化合物15)
[0142]
将2
‑
(4
‑
溴苯基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯换成2
‑
(3
‑
溴苯基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯，使用实施例3中所述的反应程序制备2
‑
(4'
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑3‑
基)
‑2‑
甲基丙酸。根据通用步骤f将此中间物和奎宁环
‑3‑
醇反应，产生标题化合物为黄色固体。1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.62
‑
7.20(m,7h),7.03(d,j＝8.7hz,2h),4.48
‑
4.35(m,2h),4.18
‑
4.08(m,2h),3.72
‑
3.62(m,2h),3.32(s,3h),3.10
‑
2.19(m,6h),2.10
‑
1.10(m,11h)ppm.
13
c nmr(100mhz,dmso
‑
d6)δ158.0,154.6,148.8,139.5,133.1,128.5,127.7,123.8,123.2,122.7,114.8,70.4,69.9,67.0,58.2,55.3,54.5,47.0,45.9,29.4,25.3,24.2,19.2ppm.纯
度：97.4％,94.6％(210&254nm)uplcms；滞留时间：0.88min；(m h

)439.3.奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
(3
‑
甲氧基丙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(化合物16)
[0143]
在经搅拌的4
‑
碘苯酚(10.05g,45.68mmol)溶于乙腈(100ml)的溶液中加入碳酸钾(6.95g,50.2mmol)和1
‑
氯
‑3‑
甲氧基丙烷(6.4ml,57.1mmol)。将混合物加热回流至隔夜及然后浓缩。将残余物置于水中处理并以乙酸乙酯萃取。将组合的萃取液以碳酸氢钠水溶液清洗，干燥(na2so4)及浓缩。将粗物质通过快速层析于二氧化硅上使用己烷/乙酸乙酯溶析液纯化，得到1
‑
碘
‑4‑
(3
‑
甲氧基丙氧基)苯为无色油状物(4.39g,33％)。根据通用步骤e将此中间物和2
‑
甲基
‑2‑
(4
‑
(4,4,5,5
‑
四甲基
‑
1,3,2
‑
二氧杂硼杂环戊烷
‑2‑
基)苯基)丙酸乙酯反应，产生2
‑
(4'
‑
(3
‑
甲氧基丙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯。在经搅拌的此化合物(0.693g,1.94mmol)溶于1：1：1(v/v/v)四氢呋喃/乙醇/水(10ml)的溶液中加入氢氧化锂单水合物(0.326g,7.77mmol)。将混合物加热回流至隔夜及然后浓缩。将残余物溶于水，以1n盐酸(10ml)处理并以乙酸乙酯萃取。将组合的有机层以盐水清洗，干燥(na2so4)及浓缩，得到2
‑
(4'
‑
(3
‑
甲氧基丙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸为蜡状灰白色固体(0.630g,99％)。根据通用步骤f将此中间物和奎宁环
‑3‑
醇反应，产生标题化合物为玻璃状无色固体(62％)。1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.61
‑
7.29(m,7h),7.00(d,j＝8.8hz,2h),4.47
‑
4.36(m,1h),4.05(t,j＝6.4hz,2h),3.48(t,j＝6.3hz,2h),3.26(s,3h),3.10
‑
2.25(m,6h),2.04
‑
1.74(m,4h),1.65
‑
1.23(m,9h)ppm.
13
c nmr(100mhz,dmso
‑
d6)δ158.0,154.5,146.7,137.4,132.4,127.5,125.7,125.2,114.8,69.9,68.5,64.6,57.9,55.4,54.2,46.9,46.0,29.4,29.0,25.2,24.1,19.2ppm.纯度：97.7％,98.2％(210&254nm)uplcms；滞留时间：0.96min；(m h

)453.5.奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
(羟甲基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(化合物17)
[0144]
使用通用步骤e和反应投入物2
‑
(4
‑
溴苯基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯和4
‑
甲酰基苯基硼酸，制备2
‑
(4'
‑
甲酰基
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯为淡琥珀色固体。根据通用步骤f将此中间物和奎宁环
‑3‑
醇反应，产生奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
甲酰基
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯为泡沫状黄色固体。在经搅拌的此物质(0.755g,1.92mmol)溶于2：1(v/v)四氢呋喃/乙醇(15ml)的溶液中加入硼氢化钠(0.073g,1.93mmol)。45分钟后，以水稀释反应并以氯仿萃取。将组合的萃取液干燥(na2so4)及浓缩在二氧化硅上。以快速层析于二氧化硅上使用氯仿/甲醇/氨溶析液，得到标题化合物为白色固体(0.323g,43％)。1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.66
‑
7.29(m,9h),5.18(t,j＝5.7hz,1h),4.53(d,j＝5.7hz,2h),4.46
‑
4.37(m,1h),3.11
‑
2.19(m,6h),2.11
‑
1.10(m,11h)ppm.
13
c nmr(100mhz,dmso
‑
d6)δ154.7,147.3,141.5,138.4,137.7,127.0,126.2,126.1,125.3,70.0,62.6,55.4,54.2,46.9,45.9,29.4,25.3,24.2,19.2ppm.纯度：97.5％,99.1％(210&254nm)uplcms；滞留时间：0.73min；(m h

)395.奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
(2
‑
羟乙基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(化合物18)
[0145]
使用通用步骤e和反应投入物1
‑
(2
‑
(苯甲氧基)乙基)
‑4‑
溴苯和2
‑
甲基
‑2‑
(4
‑
(4,4,5,5
‑
四甲基
‑
1,3,2
‑
二氧杂硼杂环戊烷
‑2‑
基)苯基)丙酸乙酯，制备2
‑
(4'
‑
(2
‑
(苯甲氧
基)乙基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯为无色胶状物。在经搅拌的此化合物(1.34g,3.33mmol)溶于1：1：1(v/v/v)四氢呋喃/乙醇/水(18ml)的溶液中加入氢氧化锂单水合物(0.698g,16.6mmol)。加热回流至隔夜后，将反应浓缩并置于水和乙醚间分溶。将生成的乳液重复以0.2n氢氧化钠水溶液萃取(5x50ml)。每次皆将水层的澄清部分移出。然后将组合的水层以1.0n盐酸(80ml)处理并将生成的白色固体的悬浮液以乙酸乙酯萃取。将组合的有机层干燥(na2so4)及浓缩，得到2
‑
(4'
‑
(2
‑
(苯甲氧基)乙基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸为白色固体(1.20g,96％)。根据通用步骤f将此化合物和奎宁环
‑3‑
醇反应，产生奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
(2
‑
苯甲氧基乙基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯。在经搅拌的此物质(0.435g,0.806mmol)溶于甲醇的溶液中加入1.0n盐酸(1ml)和10％钯碳(50％水；0.087g)。将混合物于真空和通入数次氮之间循环，在最后排空后再填入氢。1.25小时后，经反应经由铁铝酸四钙石过滤并浓缩。将残余物置于碳酸钠水溶液中处理并以4：1(v/v)氯仿/异丙醇萃取。将组合的萃取液干燥(na2so4)及浓缩于二氧化硅上。以快速层析于二氧化硅上使用氯仿/甲醇/氨梯度，得到纯的标题化合物为无色固体。1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.85
‑
7.63(m,1h),7.63
‑
7.19(m,8h),4.78
‑
4.62(m,2h),3.71
‑
2.78(m,8h),2.76(t,j＝6.8hz,2h),2.26
‑
1.96(m,2h),1.96
‑
1.40(m,9h)ppm.
13
c nmr(100mhz,dmso
‑
d6)δ153.8,146.8,138.7,137.9,137.6,129.4,126.3,126.1,125.3,66.2,62.1,54.4,52.8,45.4,44.5,38.6,29.5,29.2,24.0,19.9,16.6ppm.纯度：100％,100％(210&254nm)uplcms；滞留时间：0.75min；(m h

)409.奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
(3
‑
甲氧基丙氧基)苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(化合物19)
[0146]
在经搅拌的4
‑
甲氧基硫代苯甲酰胺(9.99g,59.7mmol)溶于乙醇(75ml)的悬浮液中加入4
‑
氯乙酰乙酸乙酯(8.1ml,60mmol)。将混合物加热回流4小时，之后冷却，加入另外的4
‑
氯乙酰乙酸乙酯(0.81ml,6.0mmol)并重新回流。再加热4个多小时后，将反应浓缩并置于乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液间分溶。将有机层与另外的乙酸乙酯萃取物组合，干燥(na2so4)及浓缩。将粗产物通过快速层析纯化于二氧化硅上使用己烷/乙酸乙酯梯度纯化，得到2
‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)噻唑
‑4‑
基)乙酸乙酯为淡琥珀色油状物(14.51g,87％)。在经搅拌的此化合物(14.48g,52.2mmol)溶于n,n
‑
二甲基甲酰胺(125ml)的溶液中于15分钟期间分次加入氢化钠(60％矿物油悬浮液；6.27g,157mmol)。将生成的红色悬浮液冷却(0℃)及于10分钟内逐滴以碘甲烷(9.80ml,157mmol)处理。移除冷却浴并让反应搅拌4小时，之后浓缩及将残余物置于乙酸乙酯和水之间分溶。将有机层以水清洗二次以上，干燥(na2so4)及浓缩。将残余物通过快速层析于二氧化硅上使用己烷/乙酸乙酯梯度纯化，得到2
‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)噻唑
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸乙酯为淡琥珀色油状物(14.12g,89％)。在经搅拌的此中间物(14.12g,46.24mmol)溶于二氯甲烷(250ml)的溶液中于5分钟期间逐滴加入三溴化硼(11.0ml,116mmol)。搅拌至隔夜后，通过缓慢加入甲醇(～20ml)中止反应及然后浓缩。将残余物置于甲醇(250ml)及浓硫酸(7.0ml)中处理。将此经搅拌的溶液加热回流2小时，浓缩并置于乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液间分溶。将有机层与水层的第二乙酸乙酯萃取物组合，干燥(na2so4)及浓缩，得到2
‑
(2
‑
(4
‑
羟基苯基)噻唑
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸甲酯为白色固体(12.56g,98％)。在经搅拌的1
‑
溴
‑3‑
甲氧基丙烷(1.66g,10.8mmol)溶于丙酮(30ml)的溶液中加入酚中间物(2.00g,7.21mmol)和碳酸钾(1.25g,9.04mmol)。将混合物加热回流置隔
夜，过滤及浓缩。将残余物通过快速层析于二氧化硅上使用己烷/乙酸乙酯梯度纯化，得到2
‑
(2
‑
(4
‑
(3
‑
甲氧基丙氧基)苯基)噻唑
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸甲酯为微琥珀色胶状物(2.47g,98％)。在经搅拌的此化合物(2.45g,7.01mmol)溶于1：1：1(v/v/v)四氢呋喃/乙醇/水(45ml)的溶液中加入氢氧化锂单水合物(1.47g,35.0mmol)。搅拌至隔夜后，将反应浓缩并置于水和乙醚间分溶。以1.0n盐酸(40ml)处理水层并以乙酸乙酯萃取。将组合的萃取液干燥(na2so4)及浓缩，得到2
‑
(2
‑
(4
‑
(3
‑
甲氧基丙氧基)苯基)噻唑
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸为白色固体(2.19g,40 93％)。根据通用步骤f将此化合物和奎宁环
‑3‑
醇反应，产生标题化合物为软的微琥珀色固体。1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.82(d,j＝8.9hz,2h),7.36(br s,1h),7.24(br s,1h),7.03(d,j＝8.9hz,2h),4.49
‑
4.41(m,1h),4.07(t,j＝6.4hz,2h),3.48(t,j＝6.4hz,2h),3.26(s,3h),3.09
‑
2.26(m,6h),2.02
‑
1.91(m,2h),1.91
‑
1.03(m,11h)ppm.
13
c nmr(100mhz,dmso
‑
d6)δ165.8,162.4,160.0,154.6,127.5,126.1,114.9,112.1,70.1,68.4,64.8,57.9,55.4,53.5,46.9,45.9,28.9,28.3,25.2,24.2,19.2ppm.纯度：100％,100％(210&254nm)uplcms；滞留时间：0.87min；(m h

)460.奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(化合物20)
[0147]
在经搅拌的2
‑
溴乙基甲基醚(1.88g,13.5mmol)溶于丙酮的溶液中加入2
‑
(2
‑
(4
‑
羟基苯基)噻唑
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸甲酯(如实施例19所述制备，2.00g,7.21mmol)和碳酸钾(1.56g,11.3mmol)。加热回流至隔夜后，以另外的2
‑
溴乙基甲基醚(1.88g,13.5mmol)和碳酸钾(1.56g,11.3mmol)处理混合物。将反应加热回流第二晚，过滤及浓缩。将残余物通过快速层析于二氧化硅上使用己烷/乙酸乙酯梯度纯化，得到2
‑
(2
‑
(4
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)苯基)噻唑
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸甲酯为白色固体(2.71g,90％)。在经搅拌的此化合物(2.71g,8.08mmol)溶于1：1：1(v/v/v)四氢呋喃/乙醇/水(50ml)的溶液中加入氢氧化锂单水合物(1.70g,40.5mmol)。搅拌至隔夜后，将反应浓缩并置于水和乙醚间分溶。以1.0n盐酸(41ml)处理水层并以乙酸乙酯萃取。将组合的萃取液干燥(na2so4)及浓缩，得到2
‑
(2
‑
(4
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)苯基)噻唑
‑4‑
基)
‑2‑
甲基丙酸为白色固体(2.57g,99％)。根据通用步骤f将此化合物和奎宁环
‑3‑
醇反应，产生标题化合物为化合物为淡琥珀色固体。1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.82(d,j＝8.8hz,2h),7.36(br s,1h),7.24(br s,1h),7.04(d,j＝8.8hz,2h),4.49
‑
4.41(m,1h),4.19
‑
4.12(m,2h),3.71
‑
3.65(m,2h),3.32(s,3h),3.11
‑
2.87(m,1h),2.86
‑
2.19(m,5h),1.92
‑
1.16(m,11h)ppm.
13
c nmr(100mhz,dmso
‑
d6)δ165.7,162.9,159.9,154.6,127.5,126.2,114.9,112.2,70.3,70.1,67.1,58.2,55.4,53.5,46.9,45.9,28.3,25.2,24.3,19.2ppm.纯度：100％,100％(210&254nm)uplcms；滞留时间：0.85min；(m h

)446.奎宁环
‑3‑
基2
‑
(5
‑
(4
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)苯基)吡啶
‑2‑
基)丙
‑2‑
基氨基甲酸酯(化合物21)
[0148]
使用通用步骤e和反应投入物5
‑
溴氰基吡啶(bromopicolinonitrile)和2
‑
(4
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)苯基)
‑
4,4,5,5
‑
四甲基
‑
1,3,2
‑
二氧杂硼杂环戊烷，制备5
‑
(4
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)苯基)氰基吡啶。将三氯化铈(8.05g,21.6mmol)载入烧瓶中并于真空下通过加热(170℃)干燥3小时。将此固体置于四氢呋喃(20ml)中处理并剧烈搅拌30分钟。经此悬浮液冷却至
‑
78℃并逐滴以3.0m的甲基锂的乙醚溶液(7.2ml,21.6mmol)处理。添加后，将反应于
‑
78
℃搅拌1小时，之后加入上述芳基硼酸酯(1.83g,7.20mmol)溶于四氢呋喃(20ml)的溶液。将混合物维持在
‑
78℃历时2小时及然后允许加热至室温。同时，加入氢氧化铵水溶液(10ml)淬灭该反应及经由铁铝酸四钙石塞过滤。以乙酸乙酯萃取滤液，将组合的萃取液以盐水清洗，干燥(na2so4)及浓缩。将残余物通过快速层析于二氧化硅上使用乙酸乙酯溶析液纯化，得到2
‑
(5
‑
(4
‑
(2
‑
甲氧基乙氧基)苯基)吡啶
‑2‑
基)丙
‑2‑
胺为黄色固体(0.800g,39％)。在经搅拌的此中间物(0.500g,1.75mmol)溶于水(10ml)和浓盐酸(0.44ml)的悬浮液中加入甲苯(10ml)。将混合物冷却(0℃)并同时于1小时期间以三光气(0.776g,2.62mmol)溶于甲苯(10ml)和碳酸氢钠(2.2g,26mmol)溶于水(20ml)的溶液处理。添加后，将反应另再搅拌30分钟，之后移出上层甲苯层并干燥(na2so4)。同时，将一经搅拌的奎宁环
‑3‑
醇(0.445g,3.64mmol)溶于四氢呋喃(10ml)的溶液以氢化钠(60％矿物油悬浮液；0.154g,3.85mmol)处理。将此混合物搅拌5分钟及然后加入粗异氰酸酯溶于甲苯的溶液。将反应搅拌10分钟，加入盐水(5ml)中止反应并以乙酸乙酯萃取。将组合的萃取液干燥(na2so4)及浓缩。将残余物通过快速层析于逆相二氧化硅上纯化，得到标题化合物为淡黄色固体(0.100g,13％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.70
‑
8.70(d,j＝2.0hz,1h),7.83
‑
7.81(m,1h),7.49
‑
7.47(d,j＝9.0hz,2h),7.45
‑
7.43(d,j＝8.0hz,1h),7.03
‑
7.01(d,j＝8.5hz,2h),6.63(br s,1h),4.68
‑
4.66(m,1h),4.16(t,j＝5.0hz,2h),3.77(t,j＝5.0hz,2h),3.45(s,3h),3.19
‑
2.70(m,6h),2.15
‑
1.89(m,2h),1.76(s,6h),1.73
‑
1.36(m,3h)ppm.
13
c nmr(125mhz,cdcl3)δ162.7,158.9,154.9,145.9,134.8,134.3,130.1,128.1,119.2,115.2,71.0,70.8,67.4,59.2,55.9,55.7,47.4,46.5,46.4,27.9,25.4,24.6,19.5ppm.纯度：>99％(214&254nm)lcms；滞留时间：1.32min；(m h

)440.2.奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
(3
‑
氰基丙氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(化合物22)
[0149]
在经搅拌的4
‑
溴苯酚(17.1g,98.8mmol)溶于乙腈(150ml)的溶液中加入1
‑
溴丁腈(12.3ml,124mmol)和碳酸钾(15.0g,109mmol)。将混合物加热回流至隔夜，冷却并浓缩。将残余物置于水中处理并以乙酸乙酯萃取。将组合的萃取液干燥(na2so4)及浓缩并将粗物质通过快速层析于二氧化硅上使用己烷/乙酸乙酯溶析液纯化，得到4
‑
(4
‑
溴苯氧基)丁腈为白色固体(20.8g,88％)。在经搅拌的此产物溶于n,n
‑
二甲基甲酰胺(100ml)的溶液中加入双(频哪醇合)二硼(4.60g,18.1mmol)、乙酸钾(7.41g,75.5mmol)和[1,1'
‑
双(二苯基膦基)二茂铁]
‑
二氯化钯(ii)与二氯甲烷的复合物(0.616g,1.04mmol)。将混合物加热回流至隔夜及然后浓缩。将残余物置于乙酸乙酯中处理并以水和盐水清洗。将有机层干燥(na2so4)及浓缩并将粗产物通过快速层析于二氧化硅上使用己烷/乙酸乙酯溶析液纯化，得到4
‑
(4
‑
(4,4,5,5
‑
四甲基
‑
1,3,2
‑
二氧杂硼杂环戊烷
‑2‑
基)苯氧基)丁腈为白色固体(3.43g,79％)。根据通用步骤e将此产物和奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4
‑
溴苯基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(使用通用步骤f通过奎宁环
‑3‑
醇和2
‑
(4
‑
溴苯基)丙
‑2‑
胺的反应所制备)反应，产生标题化合物为白色固体。1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.67
‑
7.26(m,7h),7.02(d,j＝8.8hz,2h),4.50
‑
4.33(m,1h),4.08(t,j＝6.0hz,2h),3.14
‑
2.18(m,8h),2.04(quin,j＝6.7hz,2h),1.94
‑
1.70(m,11h)ppm.
13
c nmr(100mhz,dmso
‑
d6)δ157.7,154.5,146.8,137.4,132.7,127.6,125.7,125.2,120.2,114.9,70.0,65.8,55.4,54.2,46.9,45.9,29.4,25.3,24.7,24.2,19.2,13.4ppm.纯度：100％,98.9％(210&254nm)uplcms；滞留时间：0.88min；(m h

)448.6.
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4'
‑
(氰基甲氧基)
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(化合物23)
[0150]
使用通用步骤e和反应投入物奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(4
‑
溴苯基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯(使用通用步骤f通过奎宁环
‑3‑
醇和2
‑
(4
‑
溴苯基)丙
‑2‑
胺的反应所制备)及4
‑
(氰基甲氧基)苯基硼酸，制备标题化合物为淡琥珀色固体。1h nmr(400mhz,dmso
‑
d6)δ7.65(d,j＝8.2hz,2h),7.60
‑
7.31(m,5h),7.15(d,j＝8.9hz,2h),5.21(s,2h),4.53
‑
4.30(m,1h),3.18
‑
2.19(m,6h),2.05
‑
1.18(m,11h)ppm.
13
c nmr(100mhz,dmso
‑
d6)δ155.8,154.6,147.2,137.2,134.4,127.8,126.0,125.3,116.7,115.3,70.0,55.4,54.2,53.5,46.9,45.9,29.4,25.2,24.2,19.2ppm.纯度：100％,100％(210&254nm)uplcms；滞留时间：0.85min；(m h

)420.3.实施例2：制备(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯游离碱步骤1：以碘甲烷二甲基化
[0151]
将3n rb烧瓶装上温度计、添加漏斗及氮入料口。将烧瓶通入氮气及秤取叔丁醇钾(mw 112.21,75.4mmol,8.46g,4.0当量,白色粉末)并经由粉末漏斗加到烧瓶中，接着加入thf(60ml)。大部分的叔丁醇钾溶解，得到混浊溶液。将混合物以冰水浴冷却至0
‑
2℃(内部温度)。在分开的烧瓶中，将起始的酯(mw 265.3,18.85mmol,5.0g,1.0当量)溶于thf(18ml 2ml作为清洗液)并转置到添加漏斗。将此溶液于25
‑
30min的时间内逐滴加到冷却的混合物中，添加期间将内部温度保持在5℃以下。将反应混合物冷却回到0
‑
2℃。以分开的烧瓶，制备碘甲烷(mw 141.94,47.13mmol,6.7g,2.5当量)的thf溶液(6ml)并转置到添加漏斗。然后将含有碘甲烷溶液的烧瓶以thf(1.5ml)冲洗，然后将其转置于已含有澄清无色碘甲烷的thf溶液的添加漏斗中。将此溶液于30
‑
40min的时间内小心地逐滴加到深棕色的反应混合物中，添加期间一直将内部温度保持在10℃以下。添加完成后，将轻微混浊的混合物另再搅拌1h，于此期间内部温度降至0
‑
5℃。于0
‑
5℃搅拌1小时后，将反应混合物于5
‑
7min的时间内逐滴加入5.0m hcl水溶液(8ml)中止反应。在此添加期间内部温度维持在20℃以下。添加后，加入水(14ml)并将混合物搅拌2
‑
3min。停止搅拌并使其分离成两层。然后将两层转置于250ml 1n rb烧瓶并于真空下尽可能的蒸发thf，得到thf/产物和水的双相层。让两层分离。将步骤1产物的thf溶液用于下个反应。步骤2：以lioh单水合物水解乙基酯
[0152]
将粗酯的thf溶液加到反应烧瓶中。分开地，称取lioh.h2o(mw 41.96,75.0mmol,3.15克,2.2当量)于100ml烧杯中，于其中加入搅拌棒。加入水(40ml)并搅拌混合物直到所有的固体溶解，得到澄清的无色溶液。然后将此水溶液加到含有酯的四氢呋喃(thf)溶液的250ml rb烧瓶中。将冷凝器连接到烧瓶的瓶颈并在冷凝器上方连接氮气入料口。将混合物加热回流16小时。16小时后，停止加热并将混合物冷却至室温。真空蒸发thf得到棕色溶液。将一等份的棕色水溶液以hplc和lc/ms进行乙基酯完全水解的分析。加入水(15ml)并将此碱性水溶液以tbme(2x40ml)萃取以移除叔丁基酯。将此碱性水溶液层以冰水浴冷却至0
‑
10℃并于搅拌下逐滴加入浓hcl酸化至ph～1。在此胶状固体的酸性水溶液中加入tbme(60ml)并震荡混合物及然后剧烈搅拌以便将所有的酸溶解至tbme层。将这两层转置于分液漏斗并将tbme层分离出。以tbme(40ml)再萃取淡黄色的酸性水溶液并将tbme层分离及与前面的tbme层组合。将酸性水层丢弃。将组合的tbme层于无水na2so4上干燥，过滤并真空蒸发以移除tbme并得到粗酸为橙色/深黄色油状物，其在高真空下固化成脏黄色固体。将此粗酸称重并通过于庚烷/tbme(3：1,5ml/g的粗物质)中加热结晶，得到的酸为黄色固体。步骤3：以nh2oh.hcl形成异羟肟酸
[0153]
称取羧酸(mw 265.3,18.85mmol,5.0g,1.0当量)并于氮气下转置于25ml 1n rb烧瓶。加入thf(5.0ml)且此酸很快溶解，得到澄清深黄色至棕色溶液。将此溶液以冰浴冷却至0
‑
2℃(浴温)并于10
‑
15分钟期间内小量缓慢加入n,n
’‑
羰基二咪唑(cdi；mw 162.15,20.74mmol,3.36g,1.1当量)。移除冰浴并将溶液于室温搅拌1h。搅拌1h后，再次以冰水浴将溶液冷却至0
‑
2℃(浴温)。于3
‑
5分钟期间内小量缓慢加入固体羟基胺盐酸盐(nh2oh.hcl；mw 69.49,37.7mmol,2.62g,2.0当量)，因为此添加为放热。添加完成后，于2分钟期间内逐滴将水(1.0ml)加到非均质的混合物中并将反应混合物于0
‑
10℃于冰水浴中搅拌5分钟。移除冷却浴并将反应混合物于氮气室温下搅拌至隔夜历时20
‑
22h。溶液变成澄清因为所有的nh2oh.hcl都溶解。20
‑
22h后，将一等份的反应混合物以高压液相层析(hplc)分析。然后于真空下蒸发thf并将残余物置于二氯甲烷(120ml)和水(60ml)中处理。将混合物转置于分液漏斗，将其震荡并使其分离成两层。将水层丢弃并以1n盐酸(hcl；60ml)清洗二氯甲烷层。将
酸层丢弃。将二氯甲烷层以无水na2so4,干燥，过滤并于真空蒸发溶剂，得到粗的异羟肟酸，将其于高真空下干燥至隔夜为淡黄色固体。继续步骤3：将异羟肟酸转变成环状中间物(未分离)
[0154]
将粗的异羟肟酸(mw 280.32,5.1g)转置于带有氮气入料口的250ml 1n rb烧瓶中。加入搅拌棒接着加入乙腈(50ml)。此固体不溶于乙腈。将此黄色非均质混合物于氮气下搅拌2
‑
3分钟并在室温下一次性加入cdi(mw 162.15,20.74mmol,3.36g,1.1当量)。没有观察到放热。此固体立即溶解并将此澄清黄色溶液于室温搅拌2
‑
2.5h。2
‑
2.5h后，将一等份以hplc和lc/ms分析，其显示异羟肟酸转变成想要的环状中间物。
[0155]
然后于真空蒸发乙腈，得到粗的环状中间物为淡红色浓稠油状物。将此油状物置于甲苯(60ml)中处理并将此淡红色的混合物加热回流2小时，在此期间环状中间物释放co2并重排形成异氰酸酯(参见下文)。继续步骤3：将异氰酸酯转变成游离碱
[0156]
将反应混合物冷却至50
‑
60℃并一次性将固体(s)
‑
( )
‑
奎核醇(mw 127.18,28.28mmol,3.6g,1.5当量)加到混合物中。将混合物再加热回流18h。18h后，将一等份以hplc和lc/ms分析，其显示异氰酸酯完全转变成想要的产物。将反应混合物转置于分液漏斗并加入甲苯(25ml)。以水(2x40ml)清洗混合物并将水层分离。将组合的水层以甲苯(30ml)
再萃取并将水层丢弃。将组合的甲苯层以1n hcl(2x60ml)萃取并丢弃甲苯层(含有o
‑
酰基杂质)。将组合的hcl层转置于500ml配置有搅拌棒的艾氏烧瓶中。将搅拌中的澄清黄色/淡红橙色溶液通过逐滴添加50％w/w naoh水溶液，碱化至ph10
‑
12。想要的游离碱从溶液沉淀出，为脏黄色胶状固体，其陷在搅拌棒上。于此混合物中加入乙酸异丙酯(100ml)并当胶状固体进入乙酸异丙酯时，将混合物剧烈搅拌5分钟。停止搅拌并使其分离成两层。将黄色乙酸异丙酯层分离并以乙酸异丙酯(30ml)再萃取碱性水层。将碱性水层丢弃并将组合的乙酸异丙酯层以无水na2so4干燥，过滤至预先秤重的rb烧瓶中并真空蒸发溶剂，得到粗的游离碱，将其于高真空下干燥至隔夜为米黄色至黄褐色的固体。继续步骤3：粗游离碱的再结晶
[0157]
将米黄色至黄褐色的粗游离碱称重并从庚烷/乙酸异丙酯(3：1,9.0ml的溶剂/每克粗游离碱)再结晶。将适量的庚烷/乙酸异丙酯沿着搅拌棒加到粗游离碱中并将混合物加热回流10min(游离碱起初为部份可溶的但当加热回流时溶解成澄清淡红的橙色溶液)。移除热源且当白色沉淀形成时，以搅拌让混合物冷却至室温。在室温搅拌3
‑
4h后，于管真空下使用布氏漏斗将沉淀滤出，以庚烷(20ml)清洗并于管真空下于布氏漏斗上干燥至隔夜。将沉淀转置于结晶盘并于真空烘箱中以55℃干燥至隔夜。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.04
–
7.83(m,2h),7.20
–
6.99(m,3h),5.53(s,1h),4.73
–
4.55(m,1h),3.18(dd,j＝14.5,8.4hz,1h),3.05
–
2.19(m,5h),2.0
–
1.76(m,11h)ppm.
13
c nmr(100mhz,cdcl3)δ166.38,165.02,162.54,162.8
‑
155.0(d,c
‑
f),130.06,128.43,128.34,116.01,115.79,112.46,71.18,55.70,54.13,47.42,46.52,27.94,25.41,24.67,19.58ppm.实施例3：制备晶体形式的(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯盐类
[0158]
(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯的晶体盐类可从如实例23描述所制备的游离碱来形成。
[0159]
例如，将(s)
‑
奎宁环
‑3‑
基(2
‑
(2
‑
(4
‑
氟苯基)噻唑
‑4‑
基)丙
‑2‑
基)氨基甲酸酯的游离碱(约50mmol)于室温溶于ipa(140ml)并过滤。将滤液加到配置有上方搅拌器和氮气入料/出料口的1l r.b.烧瓶中。将l
‑
苹果酸(约50mmol)于室温溶于ipa(100 30ml)并过滤。将滤液加到上述的1公升烧瓶中。将生成的溶液在氮气下于室温搅拌(有或无晶种)4至24小时。在此期间结晶形成。过滤收集产物并以小量的ipa(30ml)清洗。将晶体固体于真空烘箱中以55℃干燥72小时，得到想要的苹果酸盐。
[0160]
其他盐类，例如带有琥珀酸或hcl的酸加成盐的晶体形式，可以类似的方法来制备。实施例4：活体外gcs抑制(化合物2和类似物)
[0161]
葡萄糖神经酰胺合成酶活性的抑制可以一或多种分析来测量。第一种分析为微粒体分析，其是通过hplc直接测量神经酰胺转变成葡萄糖神经酰胺。在微粒体分析中，微粒体为一种葡萄糖神经酰胺合成酶活性的来源。第二种分析为以细胞为基础的表型分析，其是通过抗体媒介的免疫荧光监测下游脂质gm3的细胞表面表达。特定的方法提供如下。葡萄糖神经酰胺合成酶活性微粒体分析：
[0162]
一种使用微粒体作为葡萄糖神经酰胺合成酶活性来源的酶分析。将荧光神经酰氨基质递送至膜结合酶为带有白蛋白的复合物。反应后，将神经酰胺和葡萄糖神经酰胺分离
并通过逆相hplc以荧光检测来定量。酶活性使用荧光标记的基质并以微粒体做为葡萄糖神经酰胺合成酶的来源加以评估。c6‑
nbd
‑
神经酰胺与白蛋白复合供递送至微粒体，将其根据下述的程序分离。储存液中c6‑
nbd
‑
神经酰胺的最终浓度为0.5mm；bsa的最终浓度为0.5mm。通过逆相hplc以荧光检测进行基质和产物(葡萄糖神经酰胺)的分离及定量。从a375人类黑色素瘤细胞制备微粒体；
[0163]
从a375人类黑色素瘤细胞分离微粒体。通过胰蛋白酶化收取800万至1000万个细胞并以冰冷的pbs冲洗。将细胞再悬浮于含有蛋白酶抑制剂的冰冷的解离缓冲液中。将细胞解离液于冰上使用探针超音波破碎仪进行超音波处理。超音波处理后，将细胞解离液通过在4℃以10,000g离心10分钟从碎片中分离。将上清液移出及通过在4℃以100,000g另再离心1小时使其澄清。然后将团块再悬浮于解离缓冲液中，分成等分及在使用前储存于
‑
80℃。葡萄糖神经酰胺合成酶分析
[0164]
为测定葡萄糖神经酰胺合成酶抑制作用，将2x的km的基质(荧光神经酰胺和udp
‑
葡萄糖，分别为3μμ和4μμ)和微粒体(1：50稀释)以1：1组合并于室温盘式震荡器上在黑暗中培养1小时。通过加入150μl的100μμc8‑
神经酰胺溶于50％异丙醇水溶液的溶液，停止反应；于hplc上(带有荧光检测器)分析10μl的最终混合物。移动相为添加1％甲酸的81％甲醇/19％水，流速为0.5ml/min。以λ
ex
＝470nm和λ
em
＝530nm检测荧光。在这些条件下，nbd
‑
c6‑
glucer具有大约1.7min的滞留时间及在约2.1min后有来自管柱的nbd
‑
c6‑
cer溶析液。将两种波峰相互分离并与基线分离并通过hplc软件自动整合。使用基质转变为产物的百分比作为抑制剂检测的读出值。gm3荧光
‑
连接免疫吸附分析(flisa)：
[0165]
此项为一表型分析，其测量在以试验化合物治疗后，b16小鼠黑色素瘤或c32人类黑色素瘤细胞中的gm3表达。细胞表面gm3表达是通过抗体媒介的荧光来测定。
[0166]
以培养基稀释化合物并置入384孔盘中的dmso中。以分别每孔20,000个细胞/ml和62,500个细胞/ml的密度分析b16和c32细胞。各滴定曲线含有10个点，其在各试验中以双重复来分析。将各盘于37℃,5％co2培养48小时，及然后以tbs冲洗一次。将抗
‑
gm3抗体加入每个孔槽中及然后将各盘于室温另再培养1小时。随后将各盘冲洗二次并以标记的第二抗体另再培养1小时。在最终培养后，将各盘冲洗二次并于荧光分析仪上以λ
ex
＝d640/20nm和λ
em
＝657nm检测荧光。分析结果
[0167]
在这些分析中，特定示例化合物的个别分析结果如下表所示。微粒体分析的结果以“gcs ic
50”表示，其代表造成葡萄糖神经酰胺合成酶活性50％抑制作用的化合物浓度。以细胞为基础的分析结果就b16分析和c32分析分别以“gm3 b16 ic
50”或“gm3 c32 ic
50”表示。这些数值代表造成50％抑制gm3表达在细胞表面的化合物浓度。
[0168]
这些比较的结果验证了根据本技术的化合物具有与gcs抑制剂相当的活体外活性，且因此，预期展现类似的活体内利益。实施例5：化合物2在gd
‑
3病患中的临床研究
[0169]
在患有高雪氏症第3型以伊米苷酶稳定疾病的成人病患中开始化合物2结合伊米苷酶(imiglucerase)的156
‑
周、多部份、开放性、多国的安全性、耐受性、药物动力学、药效动力学和探索效用的研究。
[0170]
本研究纳入在招收前具有gd3的临床诊断及已记载缺乏酸性β
‑
葡萄糖苷酶活性已
接受ert治疗至少3年及施用伊米苷酶(思而赞(cerezyme))稳定的每月给药至少6个月的年龄18岁或更大的病患。病患必须达到下列gd治疗目标：女性的血红素量≥11.0g/dl及男性≥12.0g/dl；血小板数≥100000/mm3；脾体积<正常的10倍(mn)或全脾切除(其限条件为脾切除需发生在随机分配前>3年)；肝体积<1.5mn；及在最近一年内无骨危险期及无有症状的骨疾病，例如归因于骨坏死及/或病理性骨折的骨骼疼痛。病患必须具有其特征为水平眼球扫视运动异常的gd3特征性眼球运动失用(核上凝视麻痹)。(a)26
‑
周的期中分析
[0171]
当5位病患已完成26周的(1)于各病患建立疗法下的伊米苷酶(来自sanofi genzyme的思而赞(cerezyme))，及(2)化合物2以15mg/天的单一剂量口服给药的同时治疗时，则进行一期中分析。在研究期间，评估病患的安全性和耐受性、csf和血浆生物标记(葡萄糖神经酰胺gl
‑
1；葡萄糖基鞘氨醇lyso
‑
gl1)、药物动力学、全身性疾病的标记(以核磁共振成像(mri)测量脾脏和肝脏体积，血小板数、血红素水平)、间质性肺疾病的指标(高分辨率肺部计算机断层扫瞄(ct))和水平的眼球扫视运动进行评估。
[0172]
在基线时，如使用修订的严重度评分量表工具所测(msst；davies,et al.,2011)，四位病患具有轻微神经问题及1位具有中度神经问题。以胸部ct为基准，所有的病患皆显现间质性肺疾病的证据。一位病患以10.6g/dl的血浆血红素水平证明具有贫血。
[0173]
所有的病患据报告皆无严重的或持续的治疗中出现的不良事件。最常提报的事件为头痛和背痛，且这些在持续时间上仅视为轻度至中度和过渡性(可能与csg检测所进行的脊椎穿刺有关)。
[0174]
如下表所验证，发现在所有的病患中化合物2有效地通过血
‑
脑屏障：脑屏障：
[0175]
在26周所看到的化合物2的csf浓度的较高变化归因于其中一位病患(病患5)在第12至26周不明原因的暴露下降。因为样本收集错误，所以将病患1从第26周csf测定排除。
[0176]
已发现在26周时，血浆和csf中生物标记gd
‑
3有显著改善。在基线时，csf中的平均(
±
sd)gl
‑
1浓度为7.1
±
2.8ng/ml(范围4.4
–
11.1ng/ml)，而在csf中平均(
±
sd)lyso
‑
gl
‑
1浓度为39.3
±
22.9pg/ml(范围20.1
–
67.6pg/ml)。就比较上，健康的csf中gl
‑
1浓度为4.5
–
5.9ng/ml，而健康的csf中lyso
‑
gl
‑
1水平低于5.0pg/ml。在4周和26周时，发现个别的csf生
物标记下降如下(显示的为与基线csf浓度相比的下降百分比)：
[0177]
间质性肺疾病的严重度的特征为，如高分辨率ct在四个肺部区域(主动脉弓、气管隆突、下部区l3和下部区l4)所测，受到ild侵袭的肺体积百分比。将病患分级为具有严重ild(51
‑
100％的肺体积受侵袭)、中度ild(26
‑
50％的肺体积受侵袭)、轻度ild(1
‑
25％的肺体积受侵袭)或正常(0％的肺体积显现ild)。在基线时所有的病患显现ild，而在治疗26周后，5位病患中有4位显现ild复原(病患5显现轻微的ild恶化)：后，5位病患中有4位显现ild复原(病患5显现轻微的ild恶化)：
[0178]
所有的病患皆显现无全身性恶化。两位病患显示脾体积下降10％或更多。血红素
水平并无临床上有意义的变化。平均上，血小板计数从基线到第26周上升17％，而具有最低基线血小板数的三位病患在第26周显示个别增加23
‑
42％。个别病患的血小板计数的数据显示于下表中(以109个血小板/l表示)：
[0179]
在全部5位病患中进行水平和垂直眼球扫视运动的量化(分别为hsem和vsem)。在五位病患中，水平向右15
°
瞬动的平均峰值速度在基线时为50.8
°
/s( /
‑
8.1
°
/s)而在第26周时为47.5
°
/min( /
‑
12.6
°
/s)；水平向左15
°
瞬动的平均pv在基线时为44.7
°
/s( /
‑
17.9
°
/s)而在第26周时为32.3
°
/s( /
‑
15.9
°
/s)。较慢的速度意味着更显著程度的神经障碍。平均向右30
°
瞬动的水平pv在基线时为77.7
°
/s( /
‑
16.4
°
/s)而在第26周时为68.1
°
/min( /
‑
24.7
°
/s)；平均向左30
°
瞬动的水平pv在基线时为58.7
°
/s( /
‑
21.5
°
/s)而在第26周时为49.9
°
/s( /
‑
8.5
°
/s)。正常的15
°
and 30
°
水平瞬动的范围先前报告为>200
°
/s和>400
°
/s(bremova
‑
ertl et al,2018)。总而言之，在26
‑
周治疗期间内在hsem中并未观察到临床上有意义的变化。如同hsem，vsem测量值在基线和26周之间为稳定的。
[0180]
在第4和26周定量gd3病患的血浆、血清及/或csf中四种探索的生物标记：测量csf和血清中的壳三糖苷酶(chitotriosidase)(chito；一种已知在gd病患中会升高的酶)；测量csf和血浆中的gm3(一种已知在gd病患中会升高的鞘糖脂标记物)；以及测量csf中的糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白b(gpnmb；据报导为一种神经病变gd3的生物标记物。结果如下表所示为与基线相比在第4周和第26周就各参数的百分比变化：
(b)52
‑
周的期中分析
[0181]
当前面的6位病患达成52
‑
周的治疗时，如上面(a)章节中所述，进行第二期中分析。此分析包括如(a)章节中所述病患1
‑
5以及一位新的病患6。所有六位病患皆具有l444p(1448t/c)纯合子高雪氏症表型。
[0182]
在52周，所有的病患仍登记在本研究中。在六位病患中提出总计30件治疗中出现的不良事件，其全部为轻度或中度的严重度，且皆不认为与化合物2或伊米苷酶的治疗有关。这些事件主要为头痛和背痛，可能与腰椎穿刺有关。
[0183]
化合物2的血浆和csf浓度分析显示大多与在第26周所得到的数值相当。然而发现病患5在第26周具有大约50％较低的血浆和csf中的化合物2浓度，且在第52周则检测不到浓度。相信是由于依从性或剂量错误，因此重复分析而不纳入病患5的第26和52周的数据。数据支持在第4周或之前在血浆和csf中达到稳态的化合物2浓度的结果：
[0184]
在第52周，数据进一步显示血浆和csf中gd
‑
3生物标记持续显著的改善。结果与在第26周所得到的结果相类似。在整体六位gd3病患中，血浆和csf的gl
‑
1及lyso
‑
gl
‑
1浓度是如下：
[0185]
因此，在第52周时相较于基线，血浆和csf浓度变化如下： lyso
‑
gl
‑
1(变化％)gl
‑
1(变化％)血浆浓度
–
56.7％
–
71.6％csf浓度
–
55.9％
–
55.4％
[0186]
此外，定量gd3病患的csf中的探索性生物标记物：神经酰胺(gl
‑
1的前体)、壳三糖苷酶(chito)、gm3和gpnmb。治疗52周后，在csf中并不观察到神经酰胺、chito或gpnmb浓度的显著变化。六位病患中有四位基线时具有可测量的gm3浓度，且发现这些病患各自在第4周、第26周和第52周时于csf中已检测不到gm3。
[0187]
在第52周，在全部6位病患中，以如(a)章节中所述的类似方法进行水平和垂直眼球扫视运动的量化。然而，可确定使用导致噪音的方法(例如，因眨眼或头转动所致)可能会在结果中导入偏差。因此修改导致噪音的方法，并开发一套控制标准来评估由眼动判读仪所得到的数据组的有效性。就重新评估26
‑
周眼球扫视运动数据及评估52
‑
周的数据上，发现噪音级等太高使得无法从数据中引出任何结论。
[0188]
此外，在第52周时，6位病患中有5位在共济失调上显现改善。通过共济失调的评价和等级评定的量表(sara；schmitz
‑
h
ü
bsch et al.[2006])来评估基线时和整个研究的共
济失调程度，该量表是以0
‑
40分来评估8个不同属性的小脑共济失调。此8种属性为步态、姿势、坐、言语障碍、手指追踪、鼻
‑
手指试验、快速手翻转运动及脚跟
‑
胫骨滑行。全部6位病患的sara共济失调评分结果如下表所示：的sara共济失调评分结果如下表所示：
[0189]
如表中所示，6位病患中有5位在基线时为轻度共济失调，平均的sara积分为2.8(sd＝1.2)。在基线时最常见的缺陷为步态障碍。由于病患5中化合物2的低暴露量及该病患实质上正常的基线共济失调得分(仅0.5)而将此患病排除，然后5位病患中有4位在第52周时显示共济失调改善(平均改善＝
–
0.9；sd＝3.2)。病患4具有增加的共济失调得分，其中在基线的得分为3而在第52周为7.5。应注意，此明显的恶化几乎全是由于“姿势”评分参数的变化所致(在基线和第26周姿势得分＝1；在第52周＝5)且该病患在检验时抱怨左膝疼痛。此外，在检验之前该受试者的左脚姆趾已受伤；此伤在检验后11天被认为已解决。排除病患4的这些离群效应，经化合物2治疗造成第26周的平均sara得分显著下降，其在第52周进一步轻微改善。
[0190]
轨迹追踪测验(tmt)是用来评估病患的认知功能。tmt为最广泛使用的神经心理学试验之一且包括在多数试验题组中。tmt为一种评估一般智力和认知功能不全的诊断工具(tombaugh et al.[2004]；cavaco et al.[2013])。在tmt的a部分中，要求受试者以递增的顺序连接一组数字。此项任务为视觉搜寻和一般目视及运动运作速度的组合。b部分呈现数字和字母交替的序列。当将其以递增方式但为交替顺序连接时，受试者必须主动地在两类别间切换。因此，此项任务被认为包括执行功能成份，因为当连接这些符号时，受试者必须在各类别间主动切换(macpherson et al.[2017])。
[0191]
tmt
‑
a主要评估感知的和心理运动速度。tmt
‑
b更特定地是评估心理弹性和变换能力。tmt b减掉tmt a分数是用来移除可归因于tmt a的书写运动和视觉扫描成份的变量。此项所衍生的得分反映tmt b的独特任务要求。
[0192]
在一小区居民年龄18
–
89岁(n＝911)的tmt a和tmt b的规范性数据研究中，在18
‑
24岁的群组中(n＝155)，平均(sd)值就tmt a为22.9(6.9)而tmt b为49(12.7)(tombauch et al.[2004])。相反的，在本研究中病患完成轨迹a和轨迹b所花费的平均时间分别为67.8秒(sd＝60.3s)和193.8秒(sd＝197.0)。在基线时，完成轨迹b减去轨迹a所花费的平均时间
差为126.0秒(sd＝142.9秒)。此项显示在本研究中gd
‑
3病患在基线时展现某种程度的认知功能不全。
[0193]
在第52周，完成轨迹a所花费的平均时间为56.5秒(sd＝55.2秒)而轨迹b为122.7秒(sd＝91.8秒)。6位病患中有4位在完成轨迹a所花费的时间上展现下降而6位病患中有6位在完成轨迹b所花费的时间上展现下降。由于在病患5中低量的化合物2暴露，因此排除此病患，5位病患中有4位展现tmt
‑
a下降以及5位病患中有5位展现tmt
‑
b下降。
[0194]
在第52周，6位病患中有5位展现(tmt b
–
tmt a)时间下降。个别的结果如下表所示。
[0195]
在52周，完成轨迹b所花费的时间减去轨迹a的平均差为66.2秒(sd＝54.3)。排除病患5，在第52周5位病患中有4位在轨迹b减去轨迹a上展现改善，其中平均改善为
–
71.4秒(
–
31.6％)(sd 99.3秒(37.6％))。
[0196]
使用功能性磁共振造影(fmri)进一步评估神经功能。因为在第52周会议时没有收集到fmri数据而排除病患2。在基线筛选、第26周和第52周访察时进行静息状态的fmri筛选会议。来自4位受试者(病患1、3、4和5)的连接性评价进入第二期分析为“依从”组。如上述，由于可能对于研究用药不依从，而将病患5隔除。如别处(smith et al.[2009])所述进行分析。
[0197]
发现“依从”组的受试者在更广泛脑部区域的分布位置之间比非依从组展现增进的连接性，其中在后侧和前侧之间强度渐增为最显著的特点。在解剖学层面上，依从组的受试者在枕骨
‑
顶骨结构和额部、颞部及边缘靶标之间展现广泛和坚实的强化连接。病患5中连结的变化更适度且限制在空间上近端结构内。在功能的层面上，在每位病患中(病患5除外)皆可看到默认模式和内侧额叶网络之间增强的连接。此项显示这些不同网络内的讯号变得更凝聚，使得脑活动可以在认知储备(后部)和较高阶执行功能(前部)之间更有效转移。静息状态网络(rsn)2和3(“认知
‑
语言
‑
正确拼字”和“认知
‑
空间”)至rsn 8和9(执行和左额顶)的一致互应映射也是明显的。连接性变化的空间分布对病患5更为重要，其主要反映额内侧和额顶网络之间的重叠。这两项透视显示完全遵守治疗协议的病患在脑后部和前部之间发展更佳的凝聚，使得整个脑部变得更易于有效的信息转移。其中明显的，病患5的
改变的连接出现在前脑区域的较窄位置内并代表治疗利益的较低完整性的证据。
[0198]
这些结果汇整于下表中。进行不同的脑部解剖学区域间的链接的空间分析用以定义退化的体素(voxelwise)平均强度的相关系数来进行。这些结果显示在病患1、3、4和6中默认模式(静息)网络和执行功能网络间的链接增加，但在病患5中则下降。
[0199]
另外发现，两位病患在第52周经历脾体积下降及平均血小板浓度平均值上增加9.3％(范围
–
8.2％至 45.3％)，所有的病患维持在大于120x109/l血小板数的治疗目标。平均血小板浓度增加主要是6位病患中有3位是增加的。在血红素量上并无临床上有意义的变化。实施例6：在健康人类志愿者中化合物2的药物动力学
[0200]
进行两个第1期临床研究用以评估化合物2在有或无食物的存在下于健康人类志愿者中的药物动力学、药效动力学、安全性和耐受性。化合物2也称为venglustat。研究1
[0201]
研究1为在健康成年男性志愿者中的2
‑
部分、单一中心试验(2
‑
part single
‑
center trial)。第1部分为双盲、随机、安慰剂对照的顺序渐增单一剂量的化合物2的安全性、耐受性和pk研究。第2部分为在有或无高脂饮食下化合物2的pk的开放性、单世代、随机、2
‑
顺序、2
‑
时期、2
‑
治疗交叉研究。
[0202]
研究的第1部分招收及随机分配55位健康男性(安慰剂，n＝14；2
‑
、5
‑
、15、25
‑
、50和100
‑
mg剂量，各n＝6；150
‑
mg剂量，n＝5)。8位健康男性参与第2部分。
[0203]
在第1部分中受试者随机分配在第一天早上至少10
‑
小时禁食后接受2、5、15、25、50、100或150mg的化合物2(l
‑
苹果酸盐形式)或匹配的安慰剂。在第2部分中，受试者随机分配在禁食(至少给药的10小时之前和4小时之后)或标准化的高脂早餐(～815kcal)后30分钟，接受单一口服剂量的5mg化合物2。7
‑
天清除期之后，让参加者交叉投入其他条件。
[0204]
在研究1第1部分中，在研究药物给药(0小时)时及给药后0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、24、48、72和96小时的时间进行化合物2的血浆浓度的血液采样。在研究药物投予前2小时开始至之后的48小时，收集尿液样本进行化合物2浓度的分析。
[0205]
在研究1第2部分中，在给药后0、0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、24和48小时进行化合物2的血浆浓度的血液采样。
[0206]
从第1部分中，发现在2至150mg剂量的化合物2的单一口服给药后，在3
–
5.5小时的中位数时间时发生最大血浆浓度(c
max
)，之后血浆浓度以28.9小时的几何平均t
1/2
开始指数性下降。整个剂量范围中增加的暴露接近与剂量成比例：75
‑
倍剂量增加分别造成97.3
‑
、89.2
‑
和85.9
‑
倍的几何平均c
max
、auc
last
和auc
inf
值增加。pk结果显示于下表中(auc＝为最后可测量浓度或外推至无限的时间浓度曲线下的面积；t
1/2
＝终半衰期；cl/f＝血浆的表观总清除率；cv＝变异系数；sd＝标准偏差；t
max
＝达到c
max
的时间；vss/f＝稳态的表观分布体积)：
[0207]
从第2部分，发现投予5mg剂量和高脂饮食，相较于禁食条件对于化合物2暴露并无影响。无论有饮食或禁食，中位数t
max
为6.00小时。饮食/禁食几何平均比率就c
max
和auc
last
分别为0.92和0.91。受试者内的变异(亦即饮食与禁食)占总受试者变异的一半以下。研究2
[0208]
研究2为在健康成年男性和女性志愿者中的单一中心、双盲、随机、安慰剂对照、顺序递增重复给药的化合物2的安全性、耐受性、pk和药物动力学研究。
[0209]
本研究招收及随机分配36位健康成人(19位男性和17位女性)(各组n＝9)。受试者经随机分配于至少10
‑
小时禁食后接受每天一次的5、10或20mg化合物2剂量(以5
‑
mg的l
‑
苹果酸盐形式的胶囊提供)或安慰剂进行14天。
[0210]
用于化合物2的血浆浓度的血液取样如下：第1天，给剂后0、0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12和16小时；在第2
–
5、8、11和13天，于0h；在第14天，给药后0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12小时；在第15
–
17天，分别为第14天给药后24、48和72小时。于第1天(给剂后0小时)及继续于第14天给药后的0
–
24小时，收集尿液样本进行化合物2浓度分析。于第1
–
5、8、11、13和14天在给剂后0小时；及于第15天在第14天给剂后24小时，评估药物动力学的疗效指标(血浆gl
‑
1、gl
‑
3和gm3浓度)。
[0211]
发现在接受每天一次5、10或20mg的化合物2历时14天的受试者，血浆c
max
发生在第1天和第14天给剂后2
–
5小时的中位数时间时。在第5天之后c
trough
值达到高峰。在5
–
20mg的剂量范围内增加的化合物2暴露接近与剂量成比例：此4
‑
倍剂量增加分别造成几何平均c
max
和auc0‑
24
值在第14天3.76
‑
和3.69
‑
倍增加。研究2的pk结果汇整于下表中：
[0212]
14个每天一次的化合物2剂量后，其24
‑
小时无变化尿液排泄分率(平均fe0–
24
)范围介于26.3％和33.1％之间，无任何明显剂量
‑
相关性。平均cl
r(0
–
24)
范围介于1.49l/h和
2.07l/h之间，低于观察到的血浆cl/f大约3.18
–
3.86
‑
倍。
[0213]
安慰剂病患中的血浆gl
‑
1、gl
‑
3和gm3整体仍然与基线时相类似，而在3个化合物2给药组，血浆gl
‑
1和gm3量与基线相比为时间
‑
和剂量依赖地下降，如下表中所示(在重复递增剂量的研究中于第15天，葡萄糖神经酰胺(gl
‑
1)、酰基鞘氨醇三己糖苷(gl
‑
3)和gm3神经节苷脂(gm3)的治疗比率的评估点)：
[0214]
对gl
‑
1的最大持续效应发生在第11天于5
‑
和10
‑
mg组及第8天20
‑
mg组。与基线相比平均计算的gl
‑
1下降于第15天在5
‑
、10
‑
和20
‑
mg组分别为41.9％、69.6％和74.6％。在基线时于5
‑
mg化合物2接受者中有1位，及于第15天在5
‑
、10
‑
和20
‑
mg组分别有3、5和9位受试者，gl
‑
1值低于定量下限(lloq)。
[0215]
于第13天开始最大持续gm3下降发生在所有化合物2给药组。平均第15天血浆gm3水平就5
‑
、10
‑
和20
‑
mg剂量组分别为基线的42.7％、49.4％和57.8％。在第15天于10
‑
和20
‑
mg剂量组中分别有1和2位受试者gm3低于lloq。
[0216]
在所有的化合物2给药组中，血浆gl
‑
3也随时间下降，但相对于lloq，变量和低基线gl
‑
3值限制平均计算的gl
‑
3下降。在安慰剂、5
‑
、10
‑
和20
‑
mg剂量组中在基线时分别有1、3、1和6位受试者，及在第15天分别有4、9、7和9位受试者gl
‑
3值低于lloq。
[0217]
与基线相比归因于化合物2的平均估算血浆gl
‑
1下降(90％ci)c
trough
在5、10和20mg剂量组中(分别为19.0、47.5和69.9ng/ml)分别为67.0％(54.4
–
79.7％)、74.4％(63.7
–
85.2％)和76.3％(64.8
–
87.8％)。结论
[0218]
在这些研究中，当以范围从2
–
150mg的单一剂量或范围从5
–
20mg每天一次重复给药历时14天时，健康受试者中的化合物2暴露(c
max
和auc)接近与剂量成比例。相较于禁食，高脂饮食对于接受单一5
‑
mg剂量的受试者的暴露并无影响。就5
–
20mg重复的每天一次剂量，是在5天内达到稳态；年龄或性别皆不会影响累积。虽然gl
‑
3的基线量太低而无法用作为药物动力学的生物标记，但在药物动力学上，重复每天一次的化合物2剂量以时间
‑
和剂量
‑
依赖的方式降低了gl
‑
1和gm3的血浆浓度，与化合物2
‑
介导的gcs抑制作用一致。剂量
‑
依赖的gl
‑
1降低证实了化合物2预期的作用机制：通过gcs抑制神经酰胺形成gl
‑
1。
[0219]
在所有的研究中，安全性样貌通过在最后的研究医药给药后经由10天监测治疗中
出现的不良事件(teae)，包括严重不良事件[sae])、ecg监测、实验室数值和身体检查来评估。
[0220]
在任何的这些研究中并无死亡、sae、严重teae或tea导致研究中断。
[0221]
在任何的这些研究中并无临床上相关的血液学或生化学异常的报告。在任何的这些研究中生命征象与基线相比并无显示相关变化。在单一渐增的剂量和食物效应研究中，ecg参数显示无相关变化；在多重递增剂量研究中，在任何剂量的化合物2接受者中，对照安慰剂，与平均基线相比ecg参数并无统计上显著的变化。应了解，当已结合上述实施方案描述本发明的同时，前述说明和实施例是希望用于说明而非限制本发明的范围。在本发明范围内的其他方面、优点和修改对于本领域技术人员为显而易见的。实施例7：在法布瑞氏症病患中化合物2的临床研究方法
[0222]
于年轻典型法布瑞氏症病患中进行化合物2的三年开放性研究，用以评估化合物2在成年男性法布瑞氏症病患中的长期安全性、药物动力学和探索性疗效。在本研究中招收11位受试者，且有7位受试者完成所有方面的研究。全部的受试者，经基因型和残余α
‑
半乳糖苷酶活性低于检测量确认，为经诊断患有典型法布瑞氏症男性(11位中有9位在gla基因上具有无义突变)。所有的受试者在血浆中具有至少65ng/ml的lyso
‑
gl3量且之前并无法布瑞氏症
‑
特定的治疗。受试者的中位数年龄为24岁(19
‑
37岁范围)。
[0223]
病患被投予15mg化合物2的每日口服剂量。gl
‑
3沉积的清除通过在第12、26、52和156周采取切片来监测，其以光学显微镜半定量评估(重点放在皮肤微血管内皮细胞)。各样本由3位病理学家就gl
‑
3包含物的存在以四分量表独立评分，并根据eng et al.,n.engl.j.med.345：9
‑
16(2001)分等级为0分(无/微量)、1分(轻度)、2分(中度)或3分(严重)。每位病患每个时间点的单一得分采用三位病理学家过半数的评分所产生。若无法产生过半数的得分，则使用中位数的得分(造成某些为分数的得分)。在基线及第12、26、52和156周时也分析血浆样本的gl
‑
3、lyso
‑
gl
‑
3、gl
‑
1和gm3。在基线及第12、26、52和156周时使用sf
‑
36评分准则分析疼痛得分和腹部症状。
[0224]
从基线至第156周在多次的随访中使用short form
‑
36(sf
‑
36)问卷评估病患。其为用于测量8个不同健康方面的36
‑
项目问卷调查[活力(vitality)、身体功能(physical functioning)、身体疼痛(bodily pain)、整体健康自觉状况(general health perceptions)、身体角色功能(physical role functioning)、情感角色功能(emotional role functioning)、社会角色功能(social role functioning)和精神健康(mental health)]。8个方面的各自得分范围从0(最大失能)至100(无失能)，且因此，较高的分数表示较佳的健康状况。此外，肠胃症状，包括腹痛、腹胀和肠道运动是使用修订版的发炎性肠道严重度评分系统来评估。作为这些评估的部分所问的问题包括：(1)病患在最近10日内是否有腹痛，(2)在最近10日内所经历的腹痛的严重度为何，使用0(无疼痛)至100(非常严重疼痛)等级，及(3)在最近10日内病患发生腹痛有几天。结果
[0225]
在第156周，五位病患在皮肤gl
‑
3评分上显示下降1
‑
分，二位病患已完全清除gl
‑
3包含物，一位病患无变化，及一位病患缺少样本。在156
‑
周的研究期间，平均血浆gl
‑
1量下降69％，平均血浆gm3量下降60％，平均血浆gl
‑
3量下降77％，及平均血浆lyso
‑
gl3量下降
52％。血浆gl
‑
1和gm3在治疗的前面2
‑
4周内显现非常快速的下降。全部四种测量皆显示持续的保持血浆载量下降，其在第52周大多已稳定。
[0226]
血浆和尿液数据汇整于下表中：
[0227]
这些结果展现投予15mg/天的化合物2以整体渐进的方式一贯地降低体内gl
‑
1、lyso
‑
gl
‑
1和gm3水平。
[0228]
另外，分析来自之前完成的agalsidaseβ(fabrazyme)的安慰剂对照的第3期试验数据进行比较(参见eng et al.,n.eng.j.med.,345：9(2001)。与agalsidaseβ相较，历史对照臂为第3期试验中经agalsidaseβ治疗的病患，并将在多个时间点至多三年的血浆gl
‑
3的变化相比较。纳入标准和基线特征在二个研究间为相似的。为了加强比较，以倾向评分为基准使用年龄、血浆gl
‑
3、性别、upcr(<500mg/g对500
‑
1000mg/g对>1000mg/g)及egfr(<80对≥80ml/min/1.73m2)的基线变量，将接受化合物2的病患与第3期研究的病患进行配对。就安慰剂比较，11位接受化合物2的病患与19位病患匹配，而agalsidaseβ比较则有28位病患。在三组中的所有病患皆为男性且展现升高的血浆gl
‑
3、upcr<500mg/g及egfr≥80ml/min/1.73m2。在三组中平均年龄为相似的。比较显示以化合物2治疗26周，相较于安慰剂使得血浆gl
‑
3显著下降，
–
3.62μg/ml对
–
1.06μg/ml(p<0.0001)。当相较于agalsidaseβ，以化合物2治疗在52周产生类似的血浆gl
‑
3下降，在104周和在156周化合物治疗的血浆gl
‑
3下降显著更多(在104周，p＝0.0351；在156周，p＝0.0081)。相较于以agalsidaseβ治疗病患的4.44μg/ml，以化合物2治疗的病患在156周后，血浆gl
‑
3量为1.90μg/ml。
[0229]
皮肤gl
‑
3包含物评分的详细结果显示于下表中(0分代表无gl
‑
3包含物)：
[0230]
除了以光学显微镜评分gl
‑
3皮肤包含物，还使用电子显微镜造影计点，通过屏蔽的判读仪估算内皮细胞细胞质中gl
‑
3包含物所占的体积分量。使用7500x放大率的电子显微镜得到至少50个浅层内皮细胞微血管影像。使用双边t检验评估基线和各时间点治疗后数值之间的差异。结果如下表所示：
[0231]
这些结果显示投予15mg/天的化合物2以总体渐进的方式一贯地降低皮肤中gl
‑
3包含物的量。一般而言，相较于深层血管内皮细胞和其他皮肤组织，结果对浅层血管内皮而言更为明显。
[0232]
9位病患中有7位在第26周具有改善的整体身体疼痛评分(sf
‑
36)，而6位病患中有3位在第156周整体身体疼痛评分改善(sf
‑
36)。在基线时具有肠胃疼痛的病患中，在第26周疼痛(腹痛)严重度下降的在5位病患中有4位，而在第156周4位病患中有4位。肠胃疼痛天数下降的在第26周5位病患中有5位，在第156周4位病患中有3位。
[0233]
腹痛测量的详细结果显示于下表中。
[0234]
这些结果显示投予15mg/天的化合物2以总体渐进的方式一贯地降低腹痛和身体的不适。
[0235]
此外，当本发明的多个特征或多个方面是根据马库什群组(markush group)描述时，本领域技术人员应了解，本发明也据此根据马库什群组的任何个别成员或成员的亚群描述。
[0236]
本技术中所提到的所有的出版品、专利申请案、专利和其他参考文献是明确地以全文引用的方式并入本技术中，如同其各自个别地以引用的方式并入的程度。在有冲突的情况下，则以本说明书，包括定义为主。