一种麻竹的组织培养方法与流程

1.本发明涉及植物组织培养领域，具体地说，涉及一种麻竹的组织培养方法。


背景技术：

2.麻竹是禾本科的牡竹属植物，本种是我国南方栽培最广的竹种，高20～30m，直径15～30cm，节间长45～60cm，竿分枝习性高，每节分多枝。麻竹是极佳的笋、材两用竹，笋味甜美，营养价值高，每年均有大量笋干和罐头上市且远销海外；其竿粗壮高大可作为建筑材料、造纸材料、同时也可庭园栽植，具有较高观赏价值。
3.麻竹虽为一种优质的植物原材料，但其自然繁衍难以满足现今产业需求。麻竹在育种方面，竹类无规律开花及开花后迅速死亡的生物学特性，限制其研究与发展。目前大多的文献报道都集中在麻竹的扦插繁殖与应用价值分析上，有关麻竹组织培养的文献报道非常少，国内有覃和业等对麻竹的组织培养(覃和业，2014)、李海营对麻竹花药的组织培养研究(李海营，2011)等关于麻竹组织培养的报道。麻竹的组织培养方法，可以进行大量快速繁殖，并保持母本的优良品质，为麻竹的应用提供大量优良的原材料，为实现对麻竹的栽培、对麻竹种苗的需求，以及基因库的建立奠定了技术基础。


技术实现要素：

4.为解决麻竹日益增长的商业需求，保护麻竹资源、满足科研需要，选择优良的麻竹品种，应用组织培养技术进行快速大量繁殖，并保持母本的优良品质，为麻竹的应用提供大量优良的原材料，为实现对麻竹野生资源的保护、栽培对种苗的需求，以及基因库的建立奠定技术基础。本发明提供的一种麻竹的组织培养方法，包括如下步骤：
5.1)麻竹幼枝形成愈伤组织：截取2～4年生麻竹幼枝经消毒处理后，切成4mm
×
4mm的小块，接种至愈伤诱导培养基上，得到麻竹愈伤组织。
6.2)愈伤组织分化不定芽：将步骤1)得到的愈伤组织切成4mm
×
4mm的小块，移至分化不定芽的诱导培养基上，得到生成不定芽的愈伤组织。
7.3)不定芽生根培养：将步骤2)得到长至2～4cm不定芽愈伤组织移至生根诱导培养基，得到生根麻竹幼苗。
8.4)生根培养：将步骤3)得到根须1～3cm生根麻竹幼苗移至生根培养基，得到麻竹组培苗。
9.其中所述愈伤组织的诱导培养基以ms固体培养基为基准，包含质量浓度为0.48～0.52mg/l吲哚丁酸和8mg/l 2，4
‑
二氯苯氧乙酸。
10.其中所述愈伤组织的增殖培养基以3/4ms固体培养基为基准，包含质量浓度为2.8～3.1g/l山梨糖醇、250mg/聚乙烯吡咯烷酮和2mg/l 2，4
‑
二氯苯氧乙酸。
11.其中所述生根诱导的培养基以1/2ms固体培养基为基准，包含质量浓度为1mg/l吲哚
‑3‑
乙酸。
12.所述生根培养基以ms固体培养基为基准，包含0.1mg/l tdz，或以ms固体培养基为基准，包含0.1mg/l tdz 0.48～0.51mg/l萘乙酸。
13.其中所述ms培养基中蔗糖浓度为31g/l，植物凝胶浓度为4.1g/l。
14.所述培养环境均为独立无菌环境，ph值为6.1，培养温度为23
±
2℃，光照强度为1800～2100lx，每日光照16h/d。
15.其中所述幼枝形成愈伤的时间是10d。
16.其中所述愈伤组织分化出不定芽是14d。
17.其中所述不定芽生根是6d。.
18.本发明的方法有益效果在于：
19.1)本发明的方法在30d内可获得大量优质的麻竹组培苗，可快速、便捷、大量的为麻竹的应用及研究提供优良原材料。
20.2)本发明的方法在保护麻竹自然资源、栽培对种苗的需求、以及基因库的建立等方面具有重要意义。
附图说明
21.图1：是本发明实施例中，培育10d后麻竹幼枝形成愈伤组织的情况(麻竹来源自野外采摘，下同)。
22.图2：是本发明实施例中，麻竹幼枝形成愈伤组织14d后麻竹愈伤组织分化出不定芽的情况。
23.图3：是本发明实施例中，麻竹愈伤组织分化出不定芽6d后麻竹不定芽培养生根的情况。
24.图4：是本发明实施例中，麻竹不定芽培养生根7d后麻竹幼苗情况。
具体实施方式
25.下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
26.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
27.下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
28.下述实施例中所使用的植物生长调节剂吲哚丁酸、2，4
‑
二氯苯氧乙酸、山梨糖醇、聚乙烯吡咯烷酮、吲哚
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乙酸、萘乙酸与已报道的关于麻竹组织培养所使用的不同。
29.实施例1
30.一种麻竹的组织培养方法，包括如下步骤：
31.1)幼枝形成的愈伤组织：将野外采摘的麻竹叶片经过消毒处理后，切成约4mm
×
4mm的小块，接种至愈伤组织诱导培养基上，常规培养至形成愈伤组织；所述幼枝形成愈伤的时间是10d；所述的麻竹愈伤组织的诱导培养基为包含质量浓度为0.48～0.52mg/l吲哚丁酸和8mg/l 2，4
‑
二氯苯氧乙酸的ms固体培养基；所述ms培养基中蔗糖浓度为31g/l，植物凝胶浓度为4.1g/l；所述培养环境均为独立无菌环境，ph值为6.1，培养温度为23
±
2℃，光照强度为1800～2100lx，每日光照16h/d。
32.2)愈伤组织分化不定芽：将步骤1)得到的愈伤组织切成4mm
×
4mm的小块，接种至分化不定芽的诱导培养基上，常规培养至愈伤组织上形成不定芽；所述愈伤组织分化出不定芽是14d；所述的分化诱导不定芽培养基为包含2.8～3.1g/l山梨糖醇、250mg/聚乙烯吡咯烷酮和2mg/l 2，4
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二氯苯氧乙酸的3/4ms固体培养基；所述3/4ms培养基中蔗糖浓度为31g/l，植物凝胶浓度为4.1g/l；所述常规培养的培养条件同步骤1)。
33.3)不定芽生根培养：将步骤2)得到长至2～4cm不定芽愈伤组织移至生根诱导培养基，常规培养至根须初步形成，得到生根麻竹幼苗；所述生根诱导培养基为包含1mg/l吲哚
‑3‑
乙酸的1/2ms培养基；所述不定芽生根培养是6d；所述1/2ms培养基中蔗糖浓度为31g/l，植物凝胶浓度为4.1g/l；所述常规培养的培养条件同步骤1)。
34.4)生根培养：将步骤3)得到根须1～3cm生根麻竹幼苗移至生根培养基，常规培养至根须形成，得到麻竹组培苗；所述麻竹生根培养基为包含0.1mg/l tdz的ms培养基，或为包含0.1mg/l tdz 0.48～0.51mg/l萘乙酸的ms培养基；所述ms培养基和所述常规培养的培养条件同步骤1)
35.结果表明，本发明的方法即可在30d之内获得大量优良的麻竹组培苗，为麻竹的应用提供大量优良的原材料，为实现对麻竹自然资源的保护、栽培对种苗的需求，以及基因库的建立奠定技术基础，市场应用前景广阔。
36.虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。