准确区分紫海胆-中间球海胆和紫海胆上市性腺的方法与流程

技术特征：
1.一种准确区分紫海胆
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中间球海胆和紫海胆上市性腺的方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：a. 取待区分紫海胆
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中间球海胆上市性腺或紫海胆上市性腺，制成液相色谱
‑
质谱分析用样本；b. 采用液相色谱
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质谱联用分析仪对样本进行小分子代谢物组学分析，获得样本中的小分子代谢物相对含量；c. 选出样本中同时有15种小分子代谢物相对含量均位于标准区间值的海胆性腺为紫海胆
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中间球海胆性腺，否则为紫海胆性腺，所述15种小分子代谢物及相对含量标准区间值如下：5'
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单磷酸腺苷1544935
‑
2683833；柠檬酸哌嗪 27169
‑
34038；苯氧苄胺盐酸盐16285
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39853；阿匹啶13729
‑
27718；攀打胺7160
‑
18202；腺嘌呤57401
‑
134457；磷酸乙醇酸磷酸酶(22:6(4z,7z,10z,13z,16z,19z)/20:2(11z,14z)) 125
‑
29861；n
‑
乙酰咪唑4389
‑
25508；（3s）
‑2‑
氧代
‑3‑
苯基丁酸2922
‑
21405；lysopa(22:0/0:0) 251
‑
11093；1
‑
十二烷基
‑
sn
‑
甘油2995
‑
10281；3β
‑
羟基孕烷
‑5‑
烯
‑
20
‑
酮硫酸盐1075
‑
4203；2,2'
‑
（3
‑
甲基环己烷
‑
1,1
‑
二酰基）二乙酸345
‑
9888；(ara
‑
f)3
‑
hyp1452
‑
11140；前列腺素e2对苯甲酰胺苯酯133
‑
8733。2.根据权利要求1所述准确区分紫海胆
‑
中间球海胆和紫海胆上市性腺的方法，其特征在于所述a步骤依次如下：称取上市性腺50
±
2 mg加入到2 ml 离心管中，加入
‑
20℃预冷的500 ul内含1 ppm的2
‑
氯苯丙氨酸的甲醇溶液中，所述甲醇溶液的质量浓度为70%；超声匀浆4次，每次30 s，30 hz；匀浆后振荡5 min，冰上静置15 min；在4℃，12000 r/min下离心10 min，吸取上清液400 ul到另一个离心管中；在原离心管沉淀中加入500 ul乙酸乙酯/甲醇溶液，所述乙酸乙酯与甲醇的体积比为1：3，振荡5 min，冰上静置15 min，在4℃、12000 rmp下离心10min，取上清液400 ul；合并两次上清液，浓缩干燥；干燥物加入100 ul 质量浓度为70%的甲醇溶液，超声3min，在4℃，12000 r/min下离心3 min，吸取60 ul上清液，即制成液相色谱
‑
质谱分析用样本。3.根据权利要求2所述准确区分紫海胆
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中间球海胆和紫海胆上市性腺的方法，其特征在于所述b步骤如下：所述液相色谱
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质谱联用分析仪的条件：色谱柱：waters t3 c18柱，i.d.2.1
×
100 mm, 1.8 μm；流动相a：质量0.04%甲酸/水；流动相b：含有质量0.04%甲酸的纯乙腈；柱温：35℃；流速：0.3ml/min；进样量：1 ul；质谱下机原始数据经过proteowizard 转换为mzml格式，采用xcms程序进行峰提取，对齐，保留时间校正；采用svr方法对峰面积进行校正并对各组样本中缺失率>50%的峰进行过滤；校正筛选后的峰，计算小分子代谢物质谱图中的峰面积以确定代谢物的相对含量，同时确定小分子代谢物种类。

技术总结
本发明公开一种准确区分紫海胆


技术研发人员：常亚青 湛垚垚 宋坚 孙景贤 赵谭军
受保护的技术使用者：大连海洋大学
技术研发日：2021.08.16
技术公布日：2021/11/24