小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法与流程

1.本发明属于药物检测技术领域，具体涉及小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法。


背景技术：

2.小儿肺热咳喘颗粒为11味中药的复方制剂，含有麻黄、苦杏仁、生石膏、甘草、金银花、连翘、知母、黄芩、板蓝根、麦冬、鱼腥草等中药成分，还含有蔗糖、糊精等辅料成分。此制剂具有清热解毒、宣肺止咳、化痰平喘的功能，主要用于感冒、支气管炎、喘息性支气管炎、支气管肺炎属痰热壅肺证者。
3.麻黄为麻黄科植物草麻黄ephedra sinica stapf、中麻黄ephedra intermedia schrenk et c.a.mey.或木贼麻黄ephedra equisetina bge.的干燥草质茎。麻黄中含有生物碱、黄酮、黄烷、鞣质、挥发油、有机酸、多糖等多种成分。已被分离的麻黄生物碱有麻黄碱、伪麻黄碱、麻黄次碱、麻黄恶烷等，其中麻黄碱和伪麻黄碱是小儿肺热咳喘颗粒中平喘功能的有效成分。麻黄碱(又称麻黄素)是左旋体或消旋体，而伪麻黄碱(又称伪麻黄素)则是麻黄碱的右旋体，二者互为异构体，二者溶解性、酸碱性等方面的性质不同。盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱分别是麻黄碱、伪麻黄碱的盐酸盐。
4.麻黄碱与伪麻黄碱为麻黄中比重较大的生物碱，二者在小儿肺热咳喘颗粒等复方制剂中会同时出现。而复方制剂的组分复杂，在同时检测麻黄碱和伪麻黄碱时其他共存组分会对检测结果产生干扰。因此，若能提供一种可同时检测小儿肺热咳喘颗粒中麻黄碱和伪麻黄碱又能有效屏蔽其他共存组分干扰的方法，这对于小儿肺热咳喘颗粒的质量控制具有重要的促进作用。
5.经检索，发现涉及小儿肺热咳喘颗粒中麻黄碱和伪麻黄碱含量测定的相关报道并不多见，其中“hplc法测定小儿肺热咳喘口服液中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量”(太成梅等，2010)采用agilent xdb
‑
c18柱，流动相为乙腈
‑
0.2％磷酸(3:97)，检测波长210nm。结果显示该方法可用于该制剂的质量控制。但其样品图谱中显示存在明显的杂质峰，且与功效成分的色谱峰较为接近，这些杂质峰的存在将会影响麻黄碱和伪麻黄碱含量检测的准确性。另外，其使用的是c18柱，c18柱是较为常见的hplc法检测麻黄碱所使用的色谱柱，目前尚未发现能够使用c8柱进行小儿肺热咳喘颗粒中麻黄碱和伪麻黄碱含量测定的例子。


技术实现要素：

6.鉴于现有技术的不足，本发明提供一种采用hplc进行小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法。
7.本发明技术方案主要包括以下内容：
8.小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法，采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
9.固定相：agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱；
10.流动相a：0.01～0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇；
11.流动相b：0.002～0.004mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇；
12.洗脱梯度：0～10min，流动相a 90～100v/v％，流动相b10～0v/v％；10～30min，流动相a由90～100v/v％降至10～0v/v％，流动相b由10～0v/v％升至90～100v/v％。完成以上程序后为使系统重新恢复初始平衡以便进下一针样品，在上述梯度之后可继续进行如下程序30～35min，流动相a由0～10v/v％升至90～100v/v％，流动相b由90～100v/v％降至0～10v/v％，35min后继续运行至少10min可进下一针样品。
13.优选的，检测波长为225～235nm。
14.优选的，色谱柱填料粒径5μm，内径4.6mm，长度150mm。
15.优选的，流速0.8～1.2ml/min。
16.优选的，进样量10μl。
17.优选的，流动相a为体积比70～80：20～30的0.01～0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇。
18.优选的，流动相b为体积比20～30：70～80的0.002～0.004mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇。
19.本发明所取得的效果：
20.本发明提出一种全新的色谱条件，首次采用agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱，以0.01～0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇为流动相a，0.002～0.004mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇为流动相b，并通过梯度洗脱的方式进行小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定。结果显示麻黄碱、伪麻黄碱主峰与其前后杂质峰的分离度高，各峰之间实现完全分离，理论板数均大于10000，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量无明显变化，能够实现麻黄碱与伪麻黄碱的有效检测。
附图说明
21.图1为实施例1供试品检测的hplc图
具体实施方式
22.为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
23.盐酸麻黄碱对照品：批号：171241
‑
201007；规格：约100mg；含量：99.7％；由中国药品生物制品检定所提供。
24.盐酸伪麻黄碱对照品：批号：171237
‑
200807；规格：约100mg；含量：99.9％；由中国药品生物制品检定所提供。
25.仪器及试剂：岛津高效液相色谱仪：lc
‑
20at流动相输送泵，spd
‑
20a紫外检测器，sil
‑
10a自动进样器，lcsolution工作站。岛津高效液相色谱仪：lc
‑
10at流动相输送泵，spd
‑
10a紫外检测器，lcsolution工作站。所用甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
26.供试小儿肺热咳喘颗粒的处方：
[0027][0028]
以上十一味中药，加水煎煮二次，每次1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度约为1.17(60～70℃)的清膏，喷雾干燥，取细粉，加蔗糖粉适量，混匀，制成颗粒，干燥，混匀，制成4000g，即得。
[0029]
混合对照品溶液的配制：取50μg/ml盐酸麻黄碱对照品水溶液10ml，置25ml量瓶中，加入0.025g/ml高碘酸溶液1ml和0.25mol/l氢氧化钠溶液2.5ml，摇匀，放置30min，用0.5m盐酸溶液调节ph7.0，加甲醇定容，摇匀，即得盐酸麻黄碱对照品溶液。同法配制盐酸伪麻黄碱对照品溶液。盐酸麻黄碱对照品溶液和盐酸伪麻黄碱对照品溶液等体积混合，得混合对照品溶液。
[0030]
供试品溶液的配制：取小儿肺热咳喘颗粒细粉6.0g，加5mol/l氢氧化钠溶液120ml，摇匀，加氯化钠7.5g，蒸馏，用预先盛有0.5mol/l盐酸溶液5ml的100ml量瓶收集蒸馏液95ml，加水定容，摇匀，量取10ml，置25ml量瓶中，加入0.025g/ml高碘酸溶液1ml和0.25mol/l氢氧化钠溶液2.5ml，摇匀，放置30min，用0.5m盐酸溶液调节ph7.0，加甲醇定容，摇匀。
[0031]
实施例1小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法
[0032]
采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
[0033]
固定相：agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0034]
流动相a：0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇(75：25)；
[0035]
流动相b：0.002mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇(25：75)；
[0036]
洗脱梯度：0～10min，流动相a 100v/v％，流动相b 0v/v％；10～30min，流动相a由100v/v％降至0v/v％，流动相b由0v/v％升至100v/v％，30～35min，流动相a由0v/v％升至100v/v％，流动相b由100v/v％降至0v/v％，35min后继续运行至少10min使系统平衡后可进下一针样品。
[0037]
检测波长：230nm；
[0038]
流速：1.0ml/min；
[0039]
进样量：10μl。
[0040]
实施例2小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法
[0041]
采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
[0042]
固定相：agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0043]
流动相a：0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇(70：30)；
[0044]
流动相b：0.002mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇(20：70)；
[0045]
洗脱梯度：0～10min，流动相a 100v/v％，流动相b 0v/v％；10～30min，流动相a由100v/v％降至0v/v％，流动相b由0v/v％升至100v/v％，30～35min，流动相a由0v/v％升至100v/v％，流动相b由100v/v％降至0v/v％，35min后继续运行至少10min使系统平衡后可进下一针样品。
[0046]
检测波长：230nm；
[0047]
流速：1.0ml/min；
[0048]
进样量：10μl。
[0049]
实施例3小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法
[0050]
采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
[0051]
固定相：agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0052]
流动相a：0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇(80：20)；
[0053]
流动相b：0.002mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇(30：70)；
[0054]
洗脱梯度：0～10min，流动相a 100v/v％，流动相b 0v/v％；10～30min，流动相a由100v/v％降至0v/v％，流动相b由0v/v％升至100v/v％，30～35min，流动相a由0v/v％升至100v/v％，流动相b由100v/v％降至0v/v％，35min后继续运行至少10min使系统平衡后可进下一针样品。
[0055]
检测波长：230nm；
[0056]
流速：1.0ml/min；
[0057]
进样量：10μl。
[0058]
实施例4小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法
[0059]
采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
[0060]
固定相：agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0061]
流动相a：0.01mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇(75：25)；
[0062]
流动相b：0.004mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇(25：75)；
[0063]
洗脱梯度：0～10min，流动相a 100v/v％，流动相b 0v/v％；10～30min，流动相a由100v/v％降至0v/v％，流动相b由0v/v％升至100v/v％，30～35min，流动相a由0v/v％升至100v/v％，流动相b由100v/v％降至0v/v％，35min后继续运行至少10min使系统平衡后可进下一针样品。
[0064]
检测波长：230nm；
[0065]
流速：1.0ml/min；
[0066]
进样量：10μl。
[0067]
实施例5小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法
[0068]
采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
[0069]
固定相：agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0070]
流动相a：0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇(75：25)；
[0071]
流动相b：0.002mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇(25：75)；
[0072]
洗脱梯度：0～10min，流动相a 90v/v％，流动相b10v/v％；10～30min，流动相a由90v/v％降至10v/v％，流动相b由10v/v％升至90v/v％，30～35min，流动相a由10v/v％升至90v/v％，流动相b由90v/v％降至10v/v％，35min后继续运行至少10min使系统平衡后可进下一针样品。
[0073]
检测波长：230nm；
[0074]
流速：1.0ml/min；
[0075]
进样量：10μl。
[0076]
实施例6小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法
[0077]
采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
[0078]
固定相：agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0079]
流动相a：0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇(75：25)；
[0080]
流动相b：0.002mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇(25：75)；
[0081]
洗脱梯度：0～10min，流动相a 100v/v％，流动相b 0v/v％；10～30min，流动相a由100v/v％降至0v/v％，流动相b由0v/v％升至100v/v％，30～35min，流动相a由0v/v％升至100v/v％，流动相b由100v/v％降至0v/v％，35min后继续运行至少10min使系统平衡后可进下一针样品。
[0082]
检测波长：225nm；
[0083]
流速：1.0ml/min；
[0084]
进样量：10μl。
[0085]
实施例7小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法
[0086]
采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
[0087]
固定相：agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0088]
流动相a：0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇(75：25)；
[0089]
流动相b：0.002mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇(25：75)；
[0090]
洗脱梯度：0～10min，流动相a 100v/v％，流动相b 0v/v％；10～30min，流动相a由100v/v％降至0v/v％，流动相b由0v/v％升至100v/v％，30～35min，流动相a由0v/v％升至100v/v％，流动相b由100v/v％降至0v/v％，35min后继续运行至少10min使系统平衡后可进下一针样品。
[0091]
检测波长：235nm；
[0092]
流速：1.0ml/min；
[0093]
进样量：10μl。
[0094]
实施例8小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法
[0095]
采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
[0096]
固定相：agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0097]
流动相a：0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇(75：25)；
[0098]
流动相b：0.002mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇(25：75)；
[0099]
洗脱梯度：0～10min，流动相a 100v/v％，流动相b 0v/v％；10～30min，流动相a由
100v/v％降至0v/v％，流动相b由0v/v％升至100v/v％，30～35min，流动相a由0v/v％升至100v/v％，流动相b由100v/v％降至0v/v％，35min后继续运行至少10min使系统平衡后可进下一针样品。
[0100]
检测波长：230nm；
[0101]
流速：0.8ml/min；
[0102]
进样量：10μl。
[0103]
实施例9小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法
[0104]
采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
[0105]
固定相：agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0106]
流动相a：0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇(75：25)；
[0107]
流动相b：0.002mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇(25：75)；
[0108]
洗脱梯度：0～10min，流动相a 100v/v％，流动相b 0v/v％；10～30min，流动相a由100v/v％降至0v/v％，流动相b由0v/v％升至100v/v％，30～35min，流动相a由0v/v％升至100v/v％，流动相b由100v/v％降至0v/v％，35min后继续运行至少10min使系统平衡后可进下一针样品。
[0109]
检测波长：230nm；
[0110]
流速：1.2ml/min；
[0111]
进样量：10μl。
[0112]
实施例10小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法
[0113]
采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
[0114]
固定相：waters xbridge c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0115]
流动相a：0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇(75：25)；
[0116]
流动相b：0.002mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇(25：75)；
[0117]
洗脱梯度：0～10min，流动相a 100v/v％，流动相b 0v/v％；10～30min，流动相a由100v/v％降至0v/v％，流动相b由0v/v％升至100v/v％，30～35min，流动相a由0v/v％升至100v/v％，流动相b由100v/v％降至0v/v％，35min后继续运行至少10min使系统平衡后可进下一针样品。
[0118]
检测波长：230nm；
[0119]
流速：1.0ml/min；
[0120]
进样量：10μl。
[0121]
实施例11小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法
[0122]
采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
[0123]
固定相：agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0124]
流动相a：0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇(75：25)；
[0125]
流动相b：0.002mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇(25：75)；
[0126]
等度洗脱，流动相a：流动相b＝50:50。
[0127]
检测波长：230nm；
[0128]
流速：1.0ml/min；
[0129]
进样量：10μl。
[0130]
实施例12小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法
[0131]
采用高效液相色谱法进行测定，色谱条件为：
[0132]
固定相：agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0133]
流动相a：25％甲醇水；
[0134]
流动相b：75％甲醇水；
[0135]
洗脱梯度：0～10min，流动相a 100v/v％，流动相b 0v/v％；10～30min，流动相a由100v/v％降至0v/v％，流动相b由0v/v％升至100v/v％，30～35min，流动相a由0v/v％升至100v/v％，流动相b由100v/v％降至0v/v％，35min后继续运行至少10min使系统平衡后可进下一针样品。
[0136]
检测波长：230nm；
[0137]
流速：1.0ml/min；
[0138]
进样量：10μl。
[0139]
方法学研究：
[0140]
1.耐用性试验
[0141]
分别考察检测波长变化
±
5nm、流速相对值变化
±
20％以及不同色谱柱、不同流动相、不同洗脱程序进行测定时，仪器色谱行为的变化。具体的试验方法见表1，试验结果见表2。
[0142]
测定法：分别采用前述实施例的色谱条件进行测定。按外标法计算样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量。
[0143]
表1耐用性试验条件
[0144]
项目变化范围波长的变化225nm～235nm(实施例6、7)流速的变化0.8～1.2ml/min(实施例8、9)色谱柱的变化实施例10洗脱程序的变化实施例5、11流动相的变化实施例2～4、12
[0145]
注：以上变化均以实施例1为对比
[0146]
表2耐用性试验结果
[0147]
[0148][0149]
注：/代表峰畸形、重叠无法计算各成分含量；
‑
代表该峰后无其他峰。
[0150]
结论：检测本品盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量时，实施例1～9流速、波长、洗脱程序、流动相的变化对测定结果影响较小，主峰与其前后杂质峰的分离度较高，理论板数均大于10000，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量无明显变化。实施例10～12色谱柱、流动相、洗脱程序的变化对盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰的峰形、分离度、塔板等影响较大，不适用于小儿肺热咳喘颗粒中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量测定。
[0151]
综上所述，本品盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量测定的hplc色谱条件为：
[0152]
agilent zorbax eclipse xdb
‑
c8色谱柱(4.6
×
150mm，5μm)；
[0153]
流动相a：0.01～0.02mol
·
l
－1
磷酸二氢钠溶液
‑
甲醇(70～80：20～30)；
[0154]
流动相b：0.002～0.004mol
·
l
－1
磷酸二氢钠液
‑
甲醇(20～30：70～80)；
[0155]
洗脱梯度：0～10min，流动相a 90～100v/v％，流动相b10～0v/v％；10～30min，流动相a由90～100v/v％降至10～0v/v％，流动相b由10～0v/v％升至90～100v/v％。
[0156]
检测波长为225～235nm。
[0157]
流速0.8～1.2ml/min。
[0158]
进样体积10μl。
[0159]
2.中间精密度试验
[0160]
由不同分析人员，间隔一天，在同一实验室分别采用两台不同的液相色谱仪测定样品的含量，计算平均值，每次取6份供试样品，计算盐酸麻黄碱含量平均值(mg/g)，考察其中间精密度。采用实施例1的色谱条件。
[0161]
表3中间精密度试验结果
[0162][0163]
结论：18次样品的含量的平均值是0.46mg/g，其rsd是2.52％，中间精密度良好。
[0164]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用限制本发明，凡在本发明的精神
和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。