含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物及其制备与应用的制作方法

1.本发明涉及一种组合物及其用途，属于化妆品领域，具体涉及长柔毛薯蓣根提取物、鱼卵蛋白的组合物的制备、及其在皮肤外用剂中的应用。


背景技术：

2.随着女性年龄的增长特别是更年期的女性，我们熟知的甲状腺、胰腺、性腺、肾上腺、垂体、松果体等腺体分泌失衡，雌激素水平下降的影响在面部皮肤、身体皮肤健康上更为明显。这些影响包括皱纹、干燥、肌肤变薄、胶原蛋白含量降低、伤口愈合缓慢、弹性丧失、松弛下垂等。补充雌激素能增加皮肤的厚度、弹性和胶原量，使得细胞分裂活跃，修护受损皮肤，增加血液供给，另肌肤显现动人的红晕
……
其作用机制与雌激素受体(estrogen receptor,er)蛋白有很大的关系，它们属于g蛋白偶联蛋白受体家族的gper1(gpr30)、gap
‑
er、er
‑
x，它们介导快速的非基因型效应，通过第二信使系统发挥间接的转录调控作用，参与肌肤细胞活化、再生、损伤修复等多功能调节。雌激素受体蛋白存在于细胞膜、细胞质和细胞核内，非常的敏感，当肌肤受到紫外线照射时，雌激素受体蛋白休眠，造成雌激素信号通路受阻，是产生光老化的主要原因之一。
3.另《j.clin.invest.》丹尼尔r等发表的《成年人群生长激素分泌受损》一文中研究了，随着年龄的增大，雌激素受体蛋白逐渐衰弱，加之肌体本身分泌的荷尔蒙激素的量随着年龄增大呈现明显的降低，雌激素信号的刺激受阻，产生肌体各种问题。
4.长柔毛薯蓣，拉丁名dioscorea villosa，长柔毛薯蓣根提取物，是通过一种薯蓣科多年生藤蔓植物的根茎提取的。该植物的特点是木质根茎(块根)很粗壮，细长弯曲多结节，生产于墨西哥地区的品种品质最佳。美国国立卫生研究院(national institutes of health,nih)的研究表明，从长柔毛薯蓣根部提取的皂苷分子和人体天然黄体素的分子结构非常接近，这些皂苷分子结构以两个l
‑
鼠李糖及一个d
‑
葡萄糖分子，或者两个d
‑
葡萄糖及一个l
‑
鼠李糖分子组成的三糖苷。当这种皂苷分子被肌肤吸收后，能作为天然黄体素类似成分激活人体内组织分泌所需要的荷尔蒙，从而调节人体内部荷尔蒙平衡的功效。
5.鱼卵蛋白是取自鲑鱼(oncorhynchus tschawytscha)、鳟鱼(squaliobarbus ourriculus)、鲱鱼(clupea pallasi)等卵中的一种蛋白，它是一种碱基氨基酸的阳离子活性肽，主要由精氨酸和赖氨酸按照一定的序列组成，而这些氨基酸中含有胍基(pka＝12.48)，使得鱼卵蛋白携带大量的正电荷，能够与细胞膜上携带负电荷的磷脂或者细胞壁上携带负电荷的胞壁酸发生相互作用，从而改善细胞膜或细胞壁的通透性，同时兼具膜异位和膜转运功能。本发明采用的鱼卵蛋白的硫酸盐，又称鱼精蛋白硫酸盐，硫酸鱼精蛋白。自雄鱼生殖细胞或鱼白分离而得的强碱性蛋白硫酸盐。
6.现有技术中，中国专利文献201910828987.9，公开了一种长柔毛薯蓣抗衰眼霜及其制备方法。其仅仅公开了含有长柔毛薯蓣根提取物的眼霜。经检索未发现长柔毛薯蓣根提取物和鱼卵蛋白相结合在化妆品领域应用。
7.为了充分发挥出长柔毛薯蓣根提取物对皮肤的效果，提升其生物利用度，保护长
柔毛薯蓣根活性成分的稳定性，本发明意外地发现了一种微胶囊结构，将其进行了“洋葱”式层层包裹，并将鱼卵蛋白锚定在该微胶囊表面，以改善活性物质对皮肤的透过性，并且保持活性物质在皮肤内的长时间释放特性。本发明中鱼卵蛋白结合长柔毛薯蓣根提取物微胶囊的组合物能够改变细胞膜的通透性，极大地提升肌肤的透皮吸收，鱼卵蛋白透皮肽将微胶囊与雌激素受体蛋白结合，实现对雌激素受体蛋白的强刺激的同时，提供大剂量的黄体素前提，微胶囊的层层释放，改善人体雌激素的状态；自动双向调节人体所需的荷尔蒙直到平衡态，打开瘀堵乳酸结节，排出体内浊质，激活青春能量，调节内分泌，恢复健康与活力。
8.从长柔毛薯蓣根提取物得到相似于人体黄体素的前驱物，通过透皮吸收，避免内服类方式给肝脏带来负担，通过不断优化配比，将富含植物荷尔蒙前驱物质的长柔毛薯蓣根送达肌肤作用部位。本发明中的微胶囊结构与肌肤有极其优异的亲和性，优异的活性物承载和渗透，且长柔毛薯蓣根提取物本身不是荷尔蒙，无副作用。


技术实现要素：

9.一方面，本发明提供了一种含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物，其包含：多元醇，卵磷脂和长柔毛薯蓣根提取物。
10.在优选的实施方式中，本发明含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物中的多元醇的质量百分比为60～90％。
11.在优选的实施方式中，本发明含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物中的多元醇选自甘油、丁二醇、戊二醇、1，3丙二醇中的任意两种。
12.在优选的实施方式中，本发明含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物中的卵磷脂的质量百分比为3.3～12％。
13.在优选的实施方式中，本发明含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物中的长柔毛薯蓣根提取物的质量百分比为3.3～8％。
14.另一方面，本发明涉及含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
15.1a)将长柔毛薯蓣根提取物和卵磷脂分散于多元醇，以形成多元醇体系；
16.1b)冷冻干燥或高压均质，得到包含长柔毛薯蓣根提取物的组合物；
17.在优选的实施方式中，冷冻干燥设置为：升华干燥设置
‑
80～
‑
40℃，真空度1～30pa，时间3～21小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间1～10小时，含水量控制在0～6％之间。
18.在优选的实施方式中，喷雾干燥设置为：进风温度40～80℃，雾化压力0.2～0.8mpa，进料速度100～2000ml/h，含水量控制在0～8％之间。
19.在优选的实施方式中，高压均质设置为：以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次。
20.又一方面，本发明还涉及包含长柔毛薯蓣根提取物和鱼卵蛋白的皮肤外用剂。
21.在优选的实施方式中，包含长柔毛薯蓣根提取物和鱼卵蛋白的皮肤外用剂，所述的鱼卵蛋白选自：鲑鱼精蛋白、鳟鱼精蛋白、鲱鱼精蛋白。
22.在优选的实施方式中，包含长柔毛薯蓣根提取物和鱼卵蛋白的皮肤外用剂，所述的鱼卵蛋白的质量百分比为≤16.7％。
23.再又一方面，本发明还涉及包含长柔毛薯蓣根提取物和鱼卵蛋白的皮肤外用剂的制备方法，所述方法包括以下步骤：
24.1a)将长柔毛薯蓣根提取物和卵磷脂分散于多元醇，以形成多元醇体系；
25.1b)冷冻干燥或高压均质，得到包含长柔毛薯蓣根提取物的组合物；
26.1c)将鱼卵蛋白与步骤1b)制备的包含长柔毛薯蓣根提取物的组合物混合，得到包含鱼卵蛋白的皮肤外用剂。
27.在优选的实施方式中，冷冻干燥设置为：升华干燥设置
‑
80～
‑
40℃，真空度1～30pa，时间3～21小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间1～10小时，含水量控制在0～6％之间。
28.在优选的实施方式中，喷雾干燥设置为：进风温度40～80℃，雾化压力0.2～0.8mpa，进料速度100～2000ml/h，含水量控制在0～8％之间。
29.在优选的实施方式中，高压均质设置为：以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次。
30.又再一方面，本发明还涉及含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物，在化妆品中的应用。
31.又再一方面，本发明还涉及含有包含长柔毛薯蓣根提取物和鱼卵蛋白的皮肤外用剂，在化妆品中的应用。
附图说明
32.图1显示了实施例1组合物包含长柔毛薯蓣根提取物、卵磷脂、多元醇和鱼卵蛋白的电子显微镜照片。
具体实施方式
33.除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域普通技术人员共同理解的相同含义。虽然与本文所述相似或等同的任何方法和材料可用于实施或测试本发明，但本文描述的是优选的方法和材料。对于本发明的目的，下面定义了以下术语。
34.本文所用术语“约”指与参比品的数量、水平、数值、维度、大小或用量相比，差异可高达30％、20％或10％的数量、水平、数值、维度、大小或用量。本文所使用的百分含量，除非另有说明，均以重量计。
35.在全篇说明书和权利要求书中，除非另有要求，以下词语“包含”和其变体“含有”和“包括”应理解为意指包括所述的整体或步骤，或一组整体或步骤，但不排除任何其它整体或步骤，或其它一组整体或步骤。
36.本发明是基于以下意外发现：将含有长柔毛薯蓣根提取物组合物与鱼卵蛋白结合使用时，能够制备得到稳定的皮肤外用剂。而且，包含长柔毛薯蓣根提取物组合物与鱼卵蛋白皮肤外用剂能够显著提高长柔毛薯蓣根提取物的摄取，进而提高其的生物利用度。
37.本技术的发明人还发现，为了充分发挥出长柔毛薯蓣根提取物对皮肤的效果，提升其生物利用度，保护长柔毛薯蓣根活性成分的稳定性，本发明意外地发现了一种微胶囊结构，将其进行了“洋葱”式层层包裹，并将鱼卵蛋白锚定在该微胶囊表面，以改善活性物质对皮肤的透过性，并且保持活性物质在皮肤内的长时间释放特性。本发明中鱼卵蛋白结合
长柔毛薯蓣根提取物微胶囊的组合物能够改变细胞膜的通透性，极大地提升肌肤的透皮吸收，鱼卵蛋白透皮肽将微胶囊与雌激素受体蛋白结合，实现对雌激素受体蛋白的强刺激的同时，提供大剂量的黄体素前提，微胶囊的层层释放，改善人体雌激素的状态；自动双向调节人体所需的荷尔蒙直到平衡态，打开瘀堵乳酸结节，排出体内浊质，激活青春能量，调节内分泌，恢复健康与活力。
38.从长柔毛薯蓣根提取物得到相似于人体黄体素的前驱物，通过透皮吸收，避免内服类方式给肝脏带来负担，通过不断优化配比，将富含植物荷尔蒙前驱物质的长柔毛薯蓣根送达肌肤作用部位。本发明中的微胶囊结构与肌肤有极其优异的亲和性，优异的活性物承载和渗透，且长柔毛薯蓣根提取物本身不是荷尔蒙，无副作用。
39.皮肤外用剂
40.本发明的皮肤外用剂包含长柔毛薯蓣根提取物、卵磷脂、多元醇和鱼卵蛋白,并且具有“洋葱”式层层包裹微胶囊结构。这里皮肤外用剂可以换言为皮肤外用剂组合物或皮肤外用用组合物。在本发明中,所谓具有“洋葱”式层层包裹微胶囊结构,是指保留两亲性分子的双分子膜与水交替取向的分子排列的规整性同时保持流动性的状态的结构。因此,所谓“具有“洋葱”式层层包裹微胶囊结构”,是指皮肤外用剂包含层状微胶囊结构,例如,可以通过使用偏光显微镜,按照后述的实施例所记载的方法和条件,来确认具有层状微胶囊结构。
41.本发明的目的之二在于提供所述组合物的在制备皮肤外用剂中的用途。
42.作为优选，所述皮肤外用剂为化妆品优选为化妆水、精华液、面膜、乳液、膏霜；
43.优选地，所述含组合物在皮肤外用剂中的质量百分比为0.001～50％，例如为0.005％、0.01％、0.05％、0.1％、0.5％、1.5％、3％、5％、12％、22％、30％、35％、40％、45％、49％等，优选为1～20％，更优选为2～10％，最优选为3～8％。
44.本发明通过特定的鱼卵蛋白结合制备得到的组合物可以显著的加快长柔毛薯蓣根提取物的皮肤渗透率，增加长柔毛薯蓣根提取物在皮肤内的释放时间，并且有着优良的安全性、稳定性和功效性；本发明与相同组分和制备工艺获得的未添加鱼卵蛋白的组合物进行了对比测试，包含鱼卵蛋白的组合物或皮肤外用剂具有明显的优势。
45.长柔毛薯蓣根提取物
46.长柔毛薯蓣，拉丁名dioscorea villosa，长柔毛薯蓣根提取物，是通过一种薯蓣科多年生藤蔓植物的根茎提取的。该植物的特点是木质根茎(块根)很粗壮，细长弯曲多结节，生产于墨西哥地区的品种品质最佳。美国国立卫生研究院(national institutes of health,nih)的研究表明，从长柔毛薯蓣根部提取的皂苷分子和人体天然黄体素的分子结构非常接近，这些皂苷分子结构以两个l
‑
鼠李糖及一个d
‑
葡萄糖分子，或者两个d
‑
葡萄糖及一个l
‑
鼠李糖分子组成的三糖苷。当这种皂苷分子被肌肤吸收后，能作为天然黄体素类似成分激活人体内组织分泌所需要的荷尔蒙，从而调节人体内部荷尔蒙平衡的功效。
47.鱼卵蛋白
48.鱼卵蛋白是取自鲑鱼(oncorhynchus tschawytscha)、鳟鱼(squaliobarbus ourriculus)、鲱鱼(clupea pallasi)等卵中的一种蛋白，它是一种碱基氨基酸的阳离子活性肽，主要由精氨酸和赖氨酸按照一定的序列组成，而这些氨基酸中含有胍基(pka＝12.48)，使得鱼卵蛋白携带大量的正电荷，能够与细胞膜上携带负电荷的磷脂或者细胞壁上携带负电荷的胞壁酸发生相互作用，从而改善细胞膜或细胞壁的通透性，同时兼具膜异
位和膜转运功能。本发明采用的鱼卵蛋白的硫酸盐，又称鱼精蛋白硫酸盐，硫酸鱼精蛋白。自雄鱼生殖细胞或鱼白分离而得的强碱性蛋白硫酸盐。
49.卵磷脂
50.本发明所使用的卵磷脂是大豆或蛋黄来源的卵磷脂和对这些卵磷脂进行了酶处理的物质,可以实施氢化等化学处理。这里,所谓卵磷脂,是以从动物、植物取出的各种磷脂作为主体的混合物的总称,以磷脂酰胆碱(pc)、磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酰肌醇(pi)、磷脂酸(pa)作为主成分。作为本发明中使用的卵磷脂,可以使用将固醇与卵磷脂复合化而得的复合体(卵磷脂复合体)。作为这样的复合体,可举出氢化卵磷脂与植物甾醇的复合体、氢化卵磷脂与胆固醇的复合体等。因此,作为使用的卵磷脂,优选使用将固醇与卵磷脂复合化而得的复合体。在本发明的皮肤外用剂中,卵磷脂的含量没有特别限定,可以根据皮肤外用剂的剂型、目的、其它成分的构成比例等来适当调整。例如,相对于皮肤外用剂整体,卵磷脂的含量优选为0.1～15质量％,更优选为3.3～12质量％。
51.多元醇
52.在本发明中能够使用的多元醇只要是分子中具有2个以上羟基的水溶性多元醇,就没有特别限制。具体而言,可举出例如,甘油、双甘油、三甘油、聚乙二醇、丙二醇、1,3
‑
丁二醇、1,2
‑
戊二醇、山梨糖醇等。其中,从层状液晶结构的稳定性优异这样的方面考虑,优选使用甘油、1,3
‑
丁二醇、1,2
‑
戊二醇。这些多元醇可以单独使用,或组合使用2种以上。在本发明的皮肤外用剂中,多元醇的含量没有特别限定,可以根据皮肤外用剂的剂型、目的、其它成分的构成比例等来适当调整。例如,相对于皮肤外用剂整体优选为60～90质量％,更优选为65
‑
86质量％。
53.在本发明的皮肤外用剂中,鱼卵蛋白的含量没有特别限定,可以根据皮肤外用剂的剂型、目的、其它成分的构成比例等来适当调整。例如,相对于皮肤外用剂整体优选为0.001～20质量％,更优选为0.01～10质量％。通常鱼卵蛋白含量0.001质量％以上,认为通过鱼卵蛋白的表面活性作用使得皮肤外用剂的白色疏松多孔、海绵状被稳定化,进而在保持皮肤外用剂的稳定性方面是有利的。
54.根据本发明的研究,判明了鱼卵蛋白具有与卵磷脂和多元醇的相互作用,鱼卵蛋白由于与卵磷脂和多元醇具有相互作用,可以提高卵磷脂与多元醇的亲和性。
55.本发明正是基于以下意外发现：鱼精蛋白的使用，能够提高皮肤细胞对长柔毛薯蓣根提取物的摄取，提高生物利用度，在成纤维细胞、朗格汉斯细胞中实验，均显示含有鱼卵蛋白组合物较不含鱼卵蛋白组合物具有更高的吸收强度，且数据之间具有统计学意义。
56.在本发明的某些实施例中，多元醇的质量百分比为60～90％。
57.在本发明的某些实施例中，多元醇选自甘油、丁二醇、戊二醇、1，3丙二醇中的任意两种。
58.在本发明的某些实施例中，卵磷脂的质量百分比为3.3～12％。
59.在本发明的某些实施例中，长柔毛薯蓣根提取物的质量百分比为3.3～8％。
60.制备方法
61.本发明的组合物或皮肤外用剂可通过使用高压均质机、低温冷冻干燥方法制备。
62.可以通过以下过程制备本发明含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物。例如，1a)将长柔毛薯蓣根提取物和卵磷脂分散于多元醇，以形成多元醇体系；1b)冷冻干燥或高压均质，
得到包含长柔毛薯蓣根提取物的组合物；
63.在本发明的某些实施方式中，将得到的含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物至于
‑
80℃冰箱冰冻。然后，采用以下设置进行冷冻干燥：升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间3～21小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间1～10小时，含水量控制在0～6％之间。
64.在本发明的某些实施方式中，将得到的含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物至于
‑
80℃冰箱冰冻。然后，采用以下设置进行喷雾干燥：进风温度40～80℃，雾化压力0.2～0.8mpa，进料速度100～2000ml/h，含水量控制在0～8％之间。
65.在本发明的某些实施方式中，将得到的含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物置于高压均质机中进行均质处理：以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次。
66.可以通过以下过程制备本发明含有长柔毛薯蓣根提取物的皮肤外用剂。例如，
67.1a)将长柔毛薯蓣根提取物和卵磷脂分散于多元醇，以形成多元醇体系；1b)冷冻干燥或高压均质，得到包含长柔毛薯蓣根提取物的组合物；1c)将鱼卵蛋白与步骤1b)制备的包含长柔毛薯蓣根提取物的组合物混合，得到包含鱼卵蛋白的皮肤外用剂。
68.在本发明的某些实施方式中，将得到的含有长柔毛薯蓣根提取物的皮肤外用剂组合物至于
‑
80℃冰箱冰冻。然后，采用以下设置进行冷冻干燥：升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间3～21小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间1～10小时，含水量控制在0～6％之间。
69.在本发明的某些实施方式中，将得到的含有长柔毛薯蓣根提取物的皮肤外用剂至于
‑
80℃冰箱冰冻。然后，采用以下设置进行喷雾干燥：进风温度40～80℃，雾化压力0.2～0.8mpa，进料速度100～2000ml/h，含水量控制在0～8％之间。
70.在本发明的某些实施方式中，将得到的含有长柔毛薯蓣根提取物的皮肤外用剂置于高压均质机中进行均质处理：以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次。
71.使用方法
72.可以将本发明的含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物局部地施用于哺乳动物皮肤。例如，从多至每天2次到少至每周1次(例如，每天一次，每两天一次，每周一次)等，可以将所述含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物施用至需要处理的皮肤。
73.可以将本发明的含有长柔毛薯蓣根提取物的皮肤外用剂局部地施用于哺乳动物皮肤。例如，从多至每天2次到少至每周1次(例如，每天一次，每两天一次，每周一次)等，可以将所述含有长柔毛薯蓣根提取物的组合物施用至需要处理的皮肤。
74.鱼卵蛋白的使用，能够提高皮肤细胞对组合物的摄取，提高生物利用度和渗透性，在皮肤模型实验中均显示鱼卵蛋白组合物较普通组合物具有更高的吸收强度，且数据之间具有统计学意义。
75.以下，通过优选的实施方式对本发明的技术方案进行详细说明，但本发明的范围并不局限于这些实施方式，其旨在说明本发明的技术方案而不是限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另有说明，所有的百分比和份数按重量计。
76.本发明中原料的来源说明(型号和厂家，列表或文字说明)
77.长柔毛薯蓣根提取物：广州家化生物科技有限公司提供
78.鱼卵蛋白(p4020)：sigma
‑
alorich公司
79.香豆素均购自sigma
‑
alorich
80.卵磷脂：日本精化株式会社
81.甘油、戊二醇、丁二醇、1，3丙二醇、香豆素等，均为分析纯，上海阿拉丁生化科
82.流式细胞仪，型号facscanto 10c,bd biosciences
83.真空冷冻干燥机，型号fd
‑
2型，北京博医康实验仪器有限公司
84.喷雾干燥机，型号qfn
‑
9000y,上海乔枫实业有限公司
85.体外成纤维母细胞、黑色素细胞、朗格汉斯细胞培养方法采用酶联合消化法，即采用mem完全培养液，37℃,5％co2孵育箱内进行培养。
86.实施例1：
87.分别称取甘油41.7克和戊二醇30克，加入烧杯中，再称取卵磷脂3.3克，长柔毛薯蓣根提取物8.3克和香豆素0.2克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持200rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至60℃，搅拌速度保持200rpm，保温搅拌20分钟。然后用盘式搅拌桨搅拌降温，搅拌速度保持150rpm，冷却至45℃之后停止搅拌。冷冻干燥，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间12小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间8小时，含水量控制在0～6％之间，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间12小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间10小时，含水量控制在0～6％之间，得白色疏松多孔、海绵状无定型粉末。加入鱼卵蛋白16.7克，研磨，300目过筛，获得白色组合物备用；
88.实施例2：
89.分别称取甘油33.3克、丁二醇26.7克和1,3～丙二醇16.7克，加入烧杯中，再称取卵磷脂3.3克，长柔毛薯蓣根提取物3.3克和香豆素0.04克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持220rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至70℃，搅拌速度保持220rpm，保温搅拌12分钟。然后用盘式搅拌桨搅拌降温，搅拌速度保持120rpm，冷却至40℃之后停止搅拌。冷冻干燥，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间17小时，解析干燥设置～10～ 20℃，真空度1～30pa，时间10小时，含水量控制在0～6％之间，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间5小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间5小时，含水量控制在0～6％之间，得白色疏松多孔、海绵状无定型粉末。加入鱼卵蛋白16.7克，研磨，300目过筛，获得白色组合物备用；
90.实施例3：
91.分别称取甘油33.3克和丁二醇33.3克，加入烧杯中，再称取卵磷脂6.7克，长柔毛薯蓣根提取物10克和香豆素0.05克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持280rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持280rpm，保温搅拌15分钟。然后用盘式搅拌桨搅拌降温，搅拌速度保持200rpm，冷却至45℃之后停止搅拌，冷冻干燥，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间15小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间6小时，含水量控制在0～6％之间，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间18小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间3小时，含水量控制在0～6％之间，得白色疏松多孔、海绵状无定型粉末。加入鱼卵蛋白16.7克，研磨，300目过筛，获得白色组合物备用；
92.实施例4：
93.分别称取甘油16.7克和丁二醇29.1克，加入烧杯中，再称取卵磷脂20.8克，长柔毛薯蓣根提取物16.7克和香豆素0.1克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持300rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持300rpm，保温搅拌5分钟。然后用盘式搅拌桨搅拌降温，搅拌速度保持200rpm，冷却至45℃之后停止搅拌。冷冻干燥，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间20小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间2小时，含水量控制在0～6％之间，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间10小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间7小时，含水量控制在0～6％之间，得白色疏松多孔、海绵状无定型粉末。加入鱼卵蛋白16.7克，研磨，300目过筛，获得白色组合物备用；
94.实施例5：
95.分别称取甘油55克和丁二醇16.7克，加入烧杯中，再称取卵磷脂5克，长柔毛薯蓣根提取物6.6克和香豆素0.08克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持350rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持350rpm，保温搅拌6分钟。然后用盘式搅拌桨搅拌降温，搅拌速度保持150rpm，冷却至40℃之后停止搅拌。冷冻干燥，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间5小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间9小时，含水量控制在0～6％之间，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间11小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间4小时，含水量控制在0～6％之间，得白色疏松多孔、海绵状无定型粉末。加入鱼卵蛋白16.7克，研磨，300目过筛，获得白色组合物备用；
96.实施例6：
97.分别称取甘油25克和丁二醇29.2克，加入烧杯中，再称取卵磷脂16.6克，长柔毛薯蓣根提取物12.5克和香豆素0.15克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌15分钟。然后用盘式搅拌桨搅拌降温，搅拌速度保持200rpm，冷却至40℃之后停止搅拌。冷冻干燥，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间21小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间1小时，含水量控制在0～6％之间，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间8小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间6小时，含水量控制在0～6％之间，得白色疏松多孔、海绵状无定型粉末。加入鱼卵蛋白16.7克，研磨，300目过筛，获得白色组合物备用；
98.实施例7：
99.分别称取甘油33.3克和戊二醇26.7克，加入烧杯中，再称取卵磷脂6.7克，长柔毛薯蓣根提取物16.6克和香豆素0.2克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌15分钟。搅拌结束后，使用高压均质机对组合物进行均质处理，以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次，获得乳白色光滑细腻乳液，加入鱼卵蛋白16.7克，搅拌均匀得到组合物备用；
100.实施例8：
101.分别称取甘油33.3克、丁二醇26.7克和1,3～丙二醇16.7克，加入烧杯中，再称取
卵磷脂3.3克，长柔毛薯蓣根提取物3.3克和香豆素0.04克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌10分钟。搅拌结束后，使用高压均质机对组合物进行均质处理，以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次，获得乳白色光滑细腻乳液，加入鱼卵蛋白16.7克，搅拌均匀得到组合物备用；
102.实施例9：
103.分别称取甘油33.3克和丁二醇42.5克，加入烧杯中，再称取卵磷脂3.3克，长柔毛薯蓣根提取物4.2克和香豆素0.05克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌10分钟。搅拌结束后，使用高压均质机对组合物进行均质处理，以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次，获得乳白色光滑细腻乳液，加入鱼卵蛋白16.7克，搅拌均匀得到组合物备用；
104.实施例10：
105.分别称取甘油16.7克和丁二醇33.3克，加入烧杯中，再称取卵磷脂25克，长柔毛薯蓣根提取物8.3克和香豆素0.1克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌10分钟。搅拌结束后，使用高压均质机对组合物进行均质处理，以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次，获得乳白色光滑细腻乳液，加入鱼卵蛋白16.7克，搅拌均匀得到组合物备用；
106.实施例11：
107.分别称取甘油55克和丁二醇16.7克，加入烧杯中，再称取卵磷脂5克，长柔毛薯蓣根提取物6.6克和香豆素0.08克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌10分钟。搅拌结束后，使用高压均质机对组合物进行均质处理，以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次，获得乳白色光滑细腻乳液，加入鱼卵蛋白16.7克，搅拌均匀得到组合物备用；
108.实施例12：
109.分别称取甘油25克和丁二醇29.2克，加入烧杯中，再称取卵磷脂16.6克，长柔毛薯蓣根提取物12.5克和香豆素0.15克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌10分钟。搅拌结束后，使用高压均质机对组合物进行均质处理，以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次，获得乳白色光滑细腻乳液，加入鱼卵蛋白16.7克，搅拌均匀得到组合物备用；
110.实施例13：
111.分别称取甘油41.7克和戊二醇30克，加入烧杯中，再称取卵磷脂3.3克，长柔毛薯蓣根提取物8.3克和香豆素0.2克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持200rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至60℃，搅拌速度保持200rpm，保温搅拌20分钟。然后用盘式搅拌桨搅拌降温，搅拌速度保持150rpm，冷却至45℃之后停止搅拌。冷冻干燥，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间12小时，解析干燥设置
‑
10～
20℃，真空度1～30pa，时间8小时，含水量控制在0～6％之间，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间12小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间10小时，含水量控制在0～6％之间，得白色疏松多孔、海绵状无定型粉末。研磨，300目过筛，获得白色组合物备用；
112.实施例14：
113.分别称取甘油33.3克、丁二醇26.7克和1,3～丙二醇16.7克，加入烧杯中，再称取卵磷脂3.3克，长柔毛薯蓣根提取物3.3克和香豆素0.04克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持220rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至70℃，搅拌速度保持220rpm，保温搅拌12分钟。然后用盘式搅拌桨搅拌降温，搅拌速度保持120rpm，冷却至40℃之后停止搅拌。冷冻干燥，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间17小时，解析干燥设置～10～ 20℃，真空度1～30pa，时间10小时，含水量控制在0～6％之间，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间5小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间5小时，含水量控制在0～6％之间，得白色疏松多孔、海绵状无定型粉末。研磨，300目过筛，获得白色组合物备用；
114.实施例15：
115.分别称取甘油33.3克和丁二醇33.3克，加入烧杯中，再称取卵磷脂6.7克，长柔毛薯蓣根提取物10克和香豆素0.05克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持280rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持280rpm，保温搅拌15分钟。然后用盘式搅拌桨搅拌降温，搅拌速度保持200rpm，冷却至45℃之后停止搅拌，冷冻干燥，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间15小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间6小时，含水量控制在0～6％之间，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间18小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间3小时，含水量控制在0～6％之间，得白色疏松多孔、海绵状无定型粉末。研磨，300目过筛，获得白色组合物备用；
116.实施例16：
117.分别称取甘油16.7克和丁二醇29.1克，加入烧杯中，再称取卵磷脂20.8克，长柔毛薯蓣根提取物16.7克和香豆素0.1克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持300rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持300rpm，保温搅拌5分钟。然后用盘式搅拌桨搅拌降温，搅拌速度保持200rpm，冷却至45℃之后停止搅拌。冷冻干燥，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间20小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间2小时，含水量控制在0～6％之间，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间10小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间7小时，含水量控制在0～6％之间，得白色疏松多孔、海绵状无定型粉末。研磨，300目过筛，获得白色组合物备用；
118.实施例17：
119.分别称取甘油55克和丁二醇16.7克，加入烧杯中，再称取卵磷脂5克，长柔毛薯蓣根提取物6.6克和香豆素0.08克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持350rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持350rpm，保温搅拌6分钟。然后用盘式搅拌桨搅拌降温，搅拌速度保持150rpm，冷却至40℃之后停止搅拌。冷
冻干燥，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间5小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间9小时，含水量控制在0～6％之间，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间11小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间4小时，含水量控制在0～6％之间，得白色疏松多孔、海绵状无定型粉末。研磨，300目过筛，获得白色组合物备用；
120.实施例18：
121.分别称取甘油25克和丁二醇29.2克，加入烧杯中，再称取卵磷脂16.6克，长柔毛薯蓣根提取物12.5克和香豆素0.15克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌15分钟。然后用盘式搅拌桨搅拌降温，搅拌速度保持200rpm，冷却至40℃之后停止搅拌。冷冻干燥，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间21小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间1小时，含水量控制在0～6％之间，升华干燥设置—80～—40℃，真空度1～30pa，时间8小时，解析干燥设置
‑
10～ 20℃，真空度1～30pa，时间6小时，含水量控制在0～6％之间，得白色疏松多孔、海绵状无定型粉末。研磨，300目过筛，获得白色组合物备用；
122.实施例19：
123.分别称取甘油33.3克和戊二醇26.7克，加入烧杯中，再称取卵磷脂6.7克，长柔毛薯蓣根提取物16.7克和香豆素0.2克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌15分钟。搅拌结束后，使用高压均质机对组合物进行均质处理，以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次，获得乳白色光滑细腻乳液，搅拌均匀得到组合物备用；
124.实施例20：
125.分别称取甘油33.3克、丁二醇26.7克和1,3～丙二醇16.7克，加入烧杯中，再称取卵磷脂3.3克，长柔毛薯蓣根提取物3.3克和香豆素0.04克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌10分钟。搅拌结束后，使用高压均质机对组合物进行均质处理，以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次，获得乳白色光滑细腻乳液，搅拌均匀得到组合物备用；
126.实施例21：
127.分别称取甘油33.3克和丁二醇42.5克，加入烧杯中，再称取卵磷脂3.3克，长柔毛薯蓣根提取物4.2克和香豆素0.05克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌10分钟。搅拌结束后，使用高压均质机对组合物进行均质处理，以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次，获得乳白色光滑细腻乳液，搅拌均匀得到组合物备用；
128.实施例22：
129.分别称取甘油16.7克和丁二醇33.3克，加入烧杯中，再称取卵磷脂25克，长柔毛薯蓣根提取物8.3克和香豆素0.1克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌10分钟。搅拌结束后，使用高压均质机对组合物进行均质处理，以流量1200升/小时，压力
100mpa，循环3次，获得乳白色光滑细腻乳液，搅拌均匀得到组合物备用；
130.实施例23：
131.分别称取甘油55克和丁二醇16.7克，加入烧杯中，再称取卵磷脂5克，长柔毛薯蓣根提取物6.6克和香豆素0.08克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌10分钟。搅拌结束后，使用高压均质机对组合物进行均质处理，以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次，获得乳白色光滑细腻乳液，搅拌均匀得到组合物备用；
132.实施例24：
133.分别称取甘油25克和丁二醇29.2克，加入烧杯中，再称取卵磷脂16.6克，长柔毛薯蓣根提取物12.5克和香豆素0.15克，加入同一个烧杯中，并用盘式搅拌桨混合均匀，搅拌速度保持400rpm。在混合均匀之后，将混合物用水浴加热至75℃，搅拌速度保持400rpm，保温搅拌10分钟。搅拌结束后，使用高压均质机对组合物进行均质处理，以流量1200升/小时，压力100mpa，循环3次，获得乳白色光滑细腻乳液，搅拌均匀得到组合物备用；
134.测试例1组合物的稳定性
135.将样品装入100ml玻璃瓶中，并且储存于不同温度的恒温箱中。观察不同时期的样品的外观，结构变化情况。
136.实验室中高温低温贮存稳定性试验可采用以下方法进行：(1)在48℃恒温培养箱中放置90天，恢复室温后观察，(2)在25℃恒温培养箱中放置90天，恢复室温后观察其稳定性，观察其稳定性；(3)在
‑
18℃下存放90天，恢复室温后观察其稳定性。
137.如果样品无明显油水分离，无明显的长霉长菌，无明显的气味色泽变化，则稳定性考察通过。结果如表1所示。
138.表1实施例1
‑
24组合物的稳定性结果
139.[0140][0141]
实施例1
‑
24中，实施例4，6,10,12,16,18,22未通过即时、一个月和三个月期限高温稳定性考察，测试过程中发生了组合物分层、絮凝、粗化及颜色泛黄等不利于应用的现象。
[0142]
测试例2安全性评价
[0143]
将实施例1
‑
24配置成10％的水溶液，然后对10％的水溶液进行皮肤刺激性实验。
[0144]
实验动物使用成年、健康、皮肤无损伤的普通白色新西兰种家兔，体重2.3
‑
2.6kg，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。实验动物至少要用4只。实验动物单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间，温度控制在19
‑
26℃。实验动物及实验动物房符合国家相应规定。选用常规饲料，饮水不限制。试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm
×
3cm。取受试物约0.5ml(g)直接涂在一侧皮肤上，然后用二层纱布(2.5cm
×
2.5cm)和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。另一侧皮肤用蒸馏水作为对照。采用封闭试验，敷用时间为4h。试验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残留受试物。于清除受试物后的1、24、48和72h观察涂抹部位皮肤反应，按表1进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，根据24、48和72h各观察时点最高积分均值，判定皮肤刺激强度。
[0145]
按下列公式计算每天每只动物平均积分，以表2和3判定皮肤刺激强度。
[0146]
每天每只动物平均积分＝(σ红斑和水肿积分/受试动物数)/14
[0147]
表2皮肤刺激反应评分
[0148][0149]
表3皮肤刺激强度分级
[0150][0151][0152]
[评价结果]
[0153]
表4安全性评价结果
[0154]
[0155][0156]
表4实施例1
‑
3、5、7
‑
9、11、13
‑
15、17、19
‑
21、23组合物的10％水溶液的红斑和红肿得分均低于0.5分，可以判断为无刺激，这些实施例制备的组合物的安全性良好。而实施例4，6,10,12,16,18,22,24组合物的10％水溶液的红斑和红肿得分落在0.5
‑
2.0分之间，且出现了明显的红斑和红肿现象，有轻度刺激，判定未通过。
[0157]
测试例3
[0158]
常规方法培养成纤维细胞，种板(6孔板)，将实施例1
‑
12为添加鱼卵蛋白组合物
(空白组)和实施例13
‑
24为添加鱼卵蛋白。空白组加入带有荧光探针(香豆素)的组合物
‑
培养基溶液，鱼卵蛋白加入带有荧光探针(香豆素)、鱼卵蛋白浓度为25ug/ml，细胞孵育4h，细胞处理：孵育完毕，去掉培养基，每孔加入300ul胰酶，消化2min，加入培养基终止消化，吹打三次，离心(1200r/min 3min)，弃上清，取沉淀加入1ml pbs吹打，离心(1200r/min 3min)弃上清，加入0.3mlpbs吹打，使用细胞流式仪对细胞摄取量进行测定，上机检测。数据差异具有统计学意义(p<0.01)。
[0159]
上述组合物在制备过程中都加入荧光探针作为标记物；
[0160]
将流式细胞仪数据中fl1h中位数(香豆素对应的检测通道)进行统计平均，结果为表5显示了实施例1
‑
24中制备的各个组合物的组成以及在成纤维细胞实验中的结果.
[0161]
表5
[0162]
实施例成纤维细胞摄取结果/fl1h实施例成纤维细胞摄取结果/fl1h189395135418128977614497763854321537651487690164199657965117508726778951833497780584194580987895120443619775032148952108236922534901181207234981012786992447658
[0163]
实施例1
‑
6和实施例13
‑
18制备的组合物为用相同冻干工艺制备得到的冻干组合物，他们之间的区别在于实施例1
‑
6为添加了鱼卵蛋白的冻干组合物，而实施例13
‑
18为未添加鱼卵蛋白的冻干组合物。具体而言，实施例1相较于实施例13的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为65％；实施例2相较于实施例14的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为80.4％；实施例3相较于实施例15的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为126.9％；实施例4相较于实施例16的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为108.8％；实施例5相较于实施例17的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为56.6％；实施例6相较于实施例18的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为132.5％；平均提升率为95％。由此可见，由于鱼卵蛋白的添加，使得实施例1
‑
6的冻干组合物相较于实施例13
‑
18的冻干组合物而言，可以更容易的使得冻干组合物被成纤维母细胞吸收。
[0164]
实施例7
‑
12和实施例19
‑
24制备的组合物为用相同高压均质工艺制备得到的组合物，他们之间的区别在于实施例7
‑
12为添加了鱼卵蛋白的组合物，而实施例19
‑
24为未添加鱼卵蛋白的组合物。具体而言，实施例7相较于实施例19的组合物的fl1h中位数均值，提升率为75.9％；实施例8相较于实施例20的组合物的fl1h中位数均值，提升率为78.0％；实施例9相较于实施例21的组合物的fl1h中位数均值，提升率为58.3％；实施例10相较于实施例22的组合物的fl1h中位数均值，提升率未54.0％；实施例11相较于实施例23的组合物的
fl1h中位数均值，提升率为63％；实施例12相较于实施例24的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为65.1％；平均提升率为65.7％。由此可见，由于鱼卵蛋白的添加，使得实施例7
‑
12的冻干组合物相较于实施例19
‑
24的组合物而言，可以更容易的使得组合物被成纤维母细胞吸收。
[0165]
综合观察，可以看到冻干工艺和鱼卵蛋白的叠加对fl1h中位数均值的平均提升率95％，要大大高于均质工艺和鱼卵蛋白的叠加对fl1h中位数均值的平均提升率65.7％。
[0166]
测试例4
[0167]
常规方法培养朗格汉斯细胞，种板(6孔板)，将实施例13
‑
24为未添加鱼卵蛋白(空白组)和实施例1
‑
12为添加鱼卵蛋白。空白组加入带有荧光探针(香豆素)的长柔毛薯蓣根提取物组合物
‑
培养基溶液(长柔毛薯蓣根提取物浓度为50ug/ml)，鱼卵蛋白组加入带有荧光探针(香豆素)、鱼卵蛋白的长柔毛薯蓣根提取物组合物
‑
培养基溶液(长柔毛薯蓣根提取物浓度为50ug/ml、鱼卵蛋白浓度为25ug/ml)，细胞孵育4h，细胞处理：孵育完毕，去掉培养基，每孔加入300ul胰酶，消化2min，加入培养基终止消化，吹打三次，离心(1200r/min 3min)，弃上清，取沉淀加入1ml pbs吹打，离心(1200r/min 3min)弃上清，加入0.3mlpbs吹打，使用细胞流式仪对细胞摄取量进行测定，上机检测。数据差异具有统计学意义(p<0.01)。
[0168]
表6
[0169]
实施例朗格汉斯细胞摄取结果/fl1h实施例朗格汉斯细胞摄取结果/fl1h116207137936217346147659312390156651413507166932515711176834616589186654714572195912816604207730915488217129101450722732311156122368731214382246751
[0170]
实施例1
‑
6和实施例13
‑
18制备的组合物为用相同冻干工艺制备得到的冻干组合物，他们之间的区别在于实施例1
‑
6为添加了鱼卵蛋白的冻干组合物，而实施例13
‑
18为未添加鱼卵蛋白的冻干组合物。具体而言，实施例1相较于实施例13的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为104.2％；实施例2相较于实施例14的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为126.5％；实施例3相较于实施例15的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为86.3％；实施例4相较于实施例16的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为94.8％；实施例5相较于实施例17的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为129.9％；实施例6相较于实施例18的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为149.3％；平均提升率为115.2％。由此可见，由于鱼卵蛋白的添加，使得实施例1
‑
6的冻干组合物相较于实施例13
‑
18的冻干组合物而言，
可以更容易的使得冻干组合物被朗格汉斯细胞吸收。
[0171]
实施例7
‑
12和实施例19
‑
24制备的组合物为用相同高压均质工艺制备得到的组合物，他们之间的区别在于实施例7
‑
12为添加了鱼卵蛋白的组合物，而实施例19
‑
24为未添加鱼卵蛋白的组合物。具体而言，实施例7相较于实施例19的组合物的fl1h中位数均值，提升率为146.5％；实施例8相较于实施例20的组合物的fl1h中位数均值，提升率为114.8％；实施例9相较于实施例21的组合物的fl1h中位数均值，提升率为117.3％；实施例10相较于实施例22的组合物的fl1h中位数均值，提升率未98.1％；实施例11相较于实施例23的组合物的fl1h中位数均值，提升率为127.1％；实施例12相较于实施例24的冻干组合物的fl1h中位数均值，提升率为113％；平均提升率为119.5％。由此可见，由于鱼卵蛋白的添加，使得实施例7
‑
12的冻干组合物相较于实施例19
‑
24的组合物而言，可以更容易的使得组合物被朗格汉斯细胞吸收。
[0172]
综合观察，可以看到冻干工艺和鱼卵蛋白的叠加对fl1h中位数均值的平均提升率115.2％，与均质工艺和鱼卵蛋白的叠加对fl1h中位数均值的平均提升率119.5％不相上下。
[0173]
测试例5：电子显微镜表征
[0174]
使用电子显微镜(型号：amt camera)的设备，以实施例1制备的组合物为研究对象进行微观形貌表征(测试图像为实际样品放大2.5万倍的效果)，分析测试结果如下图1所示。
[0175]
由电子显微镜扫描结果可知，实施例1组合物包含长柔毛薯蓣根提取物、卵磷脂、多元醇和鱼卵蛋白,并且具有“洋葱”式层层包裹微胶囊结构。
[0176]
图1显示了实施例1组合物包含长柔毛薯蓣根提取物、卵磷脂、多元醇和鱼卵蛋白的电子显微镜照片。
[0177]
取稳定性和安全性成功的实施例中制备的组合物，用于皮肤外用剂的制备。所述皮肤外用剂优选为化妆品，例如化妆水、精华液、乳霜等。所述含组合物在皮肤外用剂中的重量百分比为0.001％
‑
50％(w/w)。优选的重量百分比为1％
‑
20％(w/w)。更优选的重量百分比为2％
‑
10％(w/w)。最优选的重量百分比为3％
‑
8％(w/w)。
[0178]
以下是含组合物在皮肤外用剂中的具体应用的实施例，及其这些剂型的配方和制备方法。以下各表中
“‑”
表示无添加。
[0179]
应用例1：面霜的制备
[0180]
所用原料及含量见表7
[0181]
表7
[0182]
[0183][0184]
应用例2：乳液的制备
[0185]
所用原料及含量见表8。
[0186]
表8
[0187]
[0188][0189]
应用例3：啫喱的制备
[0190]
所用原料及含量见表9。
[0191]
表9
[0192][0193]
应用例4：化妆水的制备
[0194]
所用原料及含量见表10。
[0195]
表10
[0196]
[0197][0198]
应用例5：精华液的制备
[0199]
所用原料及含量见表11。
[0200]
表11
[0201]
[0202][0203]
应用例6：面膜的制备
[0204]
所用原料及含量见表12。
[0205]
表12
[0206][0207]
应用例7：眼霜的制备
[0208]
所用原料及含量见表13。
[0209]
表13
[0210]
[0211][0212]
应用例8：沐浴露的制备
[0213]
所用原料及含量见表14。
[0214]
表14
[0215]
[0216][0217]
实施例9：洗面奶的制备
[0218]
所用原料及含量见表15。
[0219]
表15
[0220][0221]
本发明中的实施例1
‑
6和实施例13
‑
18也可以作为低温冷冻干燥产品单独使用。
[0222]
利用本发明的组合物制得的上述化妆品取得与市售的产品相当或更好的使用效果。申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具
体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。