用于抑制肌成束蛋白的方法与流程

用于抑制肌成束蛋白的方法
1.本技术是申请日为2013年08月21日、申请号为201380055065.x、发明名称为“用于抑制肌成束蛋白的方法”的中国专利申请的分案申请。
2.相关申请的交叉引用
3.本技术要求2012年8月22日递交的第61/692177号美国临时专利申请和2013年3月12日递交的第61/778015号美国临时专利申请的权益，这两件申请的全部公开内容在此通过引用并入文中。
4.政府基金
5.本文所述的技术是用来自国立卫生研究院资助号r01 ca136837的基金来开发的。美国政府拥有该技术的一定权利。
技术领域
6.本技术总体涉及用于治疗或预防癌症的方法。


背景技术：

7.近年来，在癌症的治疗中，特别是靶向治疗剂的开发已经取得进展。然而，在肿瘤转移的治疗中只有非常小的进步，肿瘤转移仍然是癌症患者死亡的主要原因。肿瘤转移是90％的所有癌症死亡的原因(1，2)。转移是多阶段的过程，其中，原发肿瘤从其原发位点向继发组织和器官中扩散(3
‑
5)。这个转移过程对于这类细胞具有选择性：该细胞顺利完成细胞迁移、侵染、栓塞、在循环中存活、在远处毛细血管床中滞留和外渗进入并在实质性器官内增殖。这些阶段的任何一个失败可以阻止整个转移过程。由于肿瘤扩散是多数癌症患者死亡的原因，故存在开发抑制肿瘤转移的治疗剂的需求。
8.大多数对于转移癌症的目前治疗的目的是杀死或停止主要癌细胞的生长(6
‑
8)。虽然肿瘤细胞的迁移和侵染是肿瘤转移过程中的关键步骤(9
‑
12)，但是肿瘤细胞迁移的抑制剂目前不可用来治疗转移癌症。因此，理想的是开发靶向肿瘤细胞迁移的小分子抑制剂。


技术实现要素：

9.本技术提供了在有需要的对象中治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或障碍的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的至少一种式i
‑
a、式i
‑
b、式ii或式iii的化合物、或它们的互变异构体，和/或如本文所述的它们的药学上可接受的盐。
10.在一个方面，本技术提供了在有需要的对象中治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或障碍的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的至少一种化合物或组合物，该组合物包括有效量的至少一种式i
‑
a或式i
‑
b的化合物
[0011][0012]
或它们的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中
[0013]
q1和q2独立地为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基，且在式i
‑
a中q1和q2稠合在一起；
[0014]
q3为6元不饱和环，其中(1)在y1和y2之间的键为双键，且在y3和y2之间的键为单键，或(2)在y1和y2之间的键为单键，且在y3和y2之间的键为双键，其中在式i
‑
b中q3和q2稠合；
[0015]
s为0或1；t为1或2；
[0016]
y1、y3和y5独立地为c或n；y2、y4和y6独立地为ch、cr3或n；条件是y1、y2、y3、y4、y5和y6中的至多四个为n；
[0017]
r1为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基，其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0018]
r和r4中的一个不存在或为氢、卤基或低级烷基(优选甲基或乙基)，r和r4中的另一个为l2‑
r5或l3‑
r5；或r不存在且r4为
‑
(ch2)
j
‑
r
11
；j为1、2或3；r
11
选自
‑
oh、
‑
or7、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
nr
10
cor
10
、
‑
nr
10
co2r
10
、
‑
sor7、
‑
so2r7、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0019]
x1选自or8、nhr8和sr8；
[0020]
x2选自o、nr8和s；
[0021]
l1选自
‑
(c(r8)2)
j
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
c(o)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
c(o)n(r8)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
n(r8)c(o)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
n(r8)s(o)2‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(ch2)
q
‑
s(o)2n(r8)
‑
(ch2)
r
‑
、
‑
s
‑
、
‑
o
‑
和
‑
nr8‑
；
[0022]
q为0或1；
[0023]
r为0或1；
[0024]
l2选自共价键、
‑
c(o)n(r8)
‑
、
‑
n(r8)c(o)
‑
、
‑
n(r8)s(o)2‑
和
‑
s(o)2n(r8)
‑
；
[0025]
l3为＝nc(o)
‑
或＝ns(o)2‑
；
[0026]
每个r3独立地选自低级烷基(优选甲基或乙基)和卤基；
[0027]
r5为苯基、5元杂芳基、6元杂芳基、5元杂环烷基或6元杂环烷基；其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至4个r2取代，其中每个r2独立地选自低级烷基、低级卤代烷基、
‑
oh、
‑
or7、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、卤基、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
nr
10
cor
10
、
‑
nr
10
co2r
10
、
‑
sor7、
‑
so2r7、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0028]
每个r6独立地选自卤基和可选地被1
‑
3个卤基取代的低级烷基(优选甲基或乙基)；或在苯环上两个相邻的r6和该苯环稠合形成5元环烷基、6元环烷基、5元杂环烷基或6元杂环烷基；
[0029]
r7为低级烷基(优选甲基或乙基)；
[0030]
r8为氢或低级烷基(优选甲基或乙基)；及
[0031]
每个r
10
独立地为氢或低级烷基(优选甲基或乙基)，或两个r
10
连同连接在其上的原子一起形成4元环至6元环。
[0032]
在具有式i
‑
a和式i
‑
b的化合物的一些实施方式中
[0033]
q1和q2独立地为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基，且在式i
‑
a中q1和q2稠合在一起；
[0034]
q3为6元不饱和环，其中(1)在y1和y2之间的键为双键，且在y3和y2之间的键为单键，或(2)在y1和y2之间的键为单键，且在y3和y2之间的键为双键，其中在式i
‑
b中q3和q2稠合；
[0035]
s为0或1；t为1或2；
[0036]
y1、y3和y5独立地为c或n；y2、y4和y6独立地为ch、cr3或n；条件是y1、y2、y3、y4、y5和y6中的至多四个为n；
[0037]
r1为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基，其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0038]
r和r4中的一个不存在或为氢、卤基或低级烷基(优选甲基或乙基)，r和r4中的另一个为l2‑
r5或l3‑
r5；
[0039]
x1选自or8、nhr8和sr8；
[0040]
x2选自o、nr8和s；
[0041]
l1选自
‑
c(r8)2‑
、
‑
s
‑
、
‑
o
‑
和
‑
nr8‑
；
[0042]
l2选自共价键、
‑
c(o)n(r8)
‑
、
‑
n(r8)c(o)
‑
、
‑
n(r8)s(o)2‑
和
‑
s(o)2n(r8)
‑
；
[0043]
l3为＝nc(o)
‑
或＝ns(o)2‑
；
[0044]
每个r3独立地选自低级烷基(优选甲基或乙基)和卤基；
[0045]
r5为苯基、5元杂芳基、6元杂芳基、5元杂环烷基或6元杂环烷基；其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至4个r2取代，其中每个r2独立地选自低级烷基、低级卤代烷基、
‑
oh、
‑
or7、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、卤基、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
nr
10
cor
10
、
‑
nr
10
co2r
10
、
‑
sor7、
‑
so2r7、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0046]
每个r6独立地选自卤基和可选地被1
‑
3个卤基取代的低级烷基(优选甲基或乙基)；
[0047]
r7为低级烷基(优选甲基或乙基)；
[0048]
r8为氢或低级烷基(优选甲基或乙基)；及
[0049]
每个r
10
独立地为氢或低级烷基(优选甲基或乙基)，或两个r
10
连同连接在其上的原子一起形成4元环至6元环。
[0050]
在一个方面，本技术提供了在有需要的对象中治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或障碍的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的至少一种化合物或组合物，该组合物包括有效量的至少一种式i
‑
c或式i
‑
d的化合物
[0051][0052]
或它们的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中
[0053]
r1为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基；其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0054]
r2选自低级烷基、低级卤代烷基、
‑
oh、
‑
or7、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、卤基、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
nr
10
cor
10
、
‑
nr
10
co2r
10
、
‑
sor7、
‑
so2r7、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0055]
每个r3独立地选自低级烷基和卤基；
[0056]
m为0、1、2或3；
[0057]
n为0、1、2、3或4；
[0058]
x1选自or8、nhr8和sr8；
[0059]
x2选自o、nr8和s；
[0060]
l1为
‑
s
‑
、
‑
o
‑
或
‑
nr8‑
；
[0061]
l2选自
‑
c(o)n(r8)
‑
、
‑
n(r8)c(o)
‑
、
‑
n(r8)s(o)2‑
和
‑
s(o)2n(r8)
‑
；
[0062]
l3为＝nc(o)
‑
或＝ns(o)2‑
；
[0063]
每个r6独立地选自卤基和可选地被1
‑
3个卤基取代的低级烷基；
[0064]
r7为低级烷基；
[0065]
r8为氢或低级烷基；及
[0066]
每个r
10
独立地为氢或低级烷基，或两个r
10
连同连接在其上的原子一起形成4元环至6元环。
[0067]
在一个实施方式中，本技术提供了在有需要的对象中治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或障碍的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的至少一种化合物或组合物，该组合物包括有效量的至少一种式ii的化合物
[0068][0069]
或它的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中
[0070]
环a为5元杂芳基或5元杂环烷基；
[0071]
w1和w4独立地选自c、cr8、n、nr8、o和s，w2和w3独立地为c或n，条件是w1、w2、w3或w4中的至少一个为c，且w1、w2、w3或w4中的至少一个为n；其中n中的一个可选地带正电荷；
[0072]
r
21
和r
22
独立地为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基；其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0073]
r
23
选自氢、低级烷基、苯基、低级烷基苯基、5元杂芳基或6元杂芳基；其中该苯基、低级烷基苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0074]
每个r6独立地选自卤基和可选地被1
‑
3个卤基取代的低级烷基；
[0075]
每个r8独立地为氢或低级烷基；及
[0076]
为单键或双键，当为单键时，则r
24
为氢或低级烷基；当为双键时，则r
24
不存在。
[0077]
在另一个实施方式中，本技术提供了在有需要的对象中治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或障碍的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的至少一种化合物或组合物，该组合物包括有效量的至少一种式iii的化合物
[0078][0079]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中
[0080]
r
30
选自低级烷基、可选地被苯基取代的低级烯基、可选地被1个或2个独立地选自硝基和卤基的取代基取代的苯基；
[0081]
r
31
选自低级卤代烷基、
‑
oh、
‑
or9、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、卤基、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0082]
p为0、1或2；
[0083]
x
30
为c(＝o)或s(o)2；
[0084]
r7为低级烷基；
[0085]
r9为苯基；及
[0086]
每个r
10
独立地为氢或低级烷基，或两个r
10
连同连接在其上的原子一起形成环。
[0087]
在一个实施方式中，本技术提供了抑制肌成束蛋白的活性的方法，该方法包括向有需要的细胞施用有效量的化合物或包括有效量的化合物的组合物，从而抑制在细胞中肌成束蛋白的活性，其中该化合物为式i
‑
a、式i
‑
b、式ii或式iii的化合物、或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0088]
在另一个实施方式中，本技术提供了一种化合物或包括化合物的组合物，用于在有需要的对象中治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或障碍，或用于抑制肌成束蛋白的活性，其中该化合物为式i
‑
a、式i
‑
b、式ii或式iii的化合物、或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0089]
在另一个实施方式中，本技术提供了一种化合物或包括化合物的组合物在药剂制备中的用途，该药剂用于在有需要的对象中治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或障碍，或用于抑制肌成束蛋白的活性，其中该化合物为式i
‑
a、式i
‑
b、式ii或式iii的化合物、或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0090]
在一些实施方式中，细胞为在动物内的细胞。在一些实施方式中，细胞已经被从动物中取出。在一些实施方式中，动物为人。在一些实施方式中，人患有疾病或病症。
[0091]
在一些实施方式中，病症或障碍为转移癌症、神经元障碍、神经元变性、炎性病症、病毒感染、细菌感染、淋巴增生、霍奇金病(hodgkin's disease)或局部缺血有关的组织损伤。在一些实施方式中，该病症或障碍为转移癌症。
[0092]
在一些实施方式中，癌症为癌、淋巴瘤、肉瘤、黑色素瘤、星形细胞瘤、间皮瘤细胞、卵巢癌、结肠癌、胰腺癌、食道癌、胃癌、肺癌、泌尿癌、膀胱癌、乳腺癌症、胃癌症、白血病、肺癌症、结肠癌症、中枢神经系统癌症、黑色素瘤、卵巢癌症、肾癌症或前列腺癌症。
附图说明
[0093]
参考下面的附图将更充分地理解本发明，该附图仅是用于说明的目的：
[0094]
图1示出了在鼠模型中通过2
‑
氯
‑
n
‑
(6
‑
氯苯并[d]噻唑
‑2‑
基)
‑5‑
硝基苯磺酰胺(化合物3，np
‑
3)和n
‑
(3
‑
(1h
‑
l,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑4‑
甲氧基苯磺酰胺(化合物10，np
‑
10)对乳腺肿瘤转移的抑制作用。肺转移通过6
‑
硫代鸟嘌呤的克隆形成试验来测定。化合物3(8mg/kg)和化合物10(30mg/kg)被使用。结果为平均值
±
标准差(sd)(n＝5)。*，p<0.01。
具体实施方式
[0095]
在下面的详细描述中，参考了附图，该附图形成了本文的一部分。在附图中，相似的符号通常标识相似的部件，除非上下文另外指明。在详细描述中描述的说明性实施方式、附图和权利要求并不意味着是限制性的。可以采用其它实施方式，可以做出其它的改变，而不脱离本主题在此提出的精神或范围。
[0096]
肌成束蛋白是肌动蛋白集束蛋白。对于进行细胞迁移，肌动蛋白细胞骨架必须通过形成聚合物和集束进行重组，以影响细胞形状的动态变化(13
‑
15)。单独的肌动蛋白丝是柔韧的，单独的丝本身的伸长不足以用于膜突出，膜突出是细胞迁移所必需的。肌动蛋白丝的集束提供了肌动蛋白丝刚性以形成片状伪足和丝状伪足形式的突出以对抗来自质膜的压缩力(16)(17)。正如指出，关键的肌动蛋白集束蛋白之一是肌成束蛋白(18
‑
22)。肌成束蛋白是丝状伪足中主要的肌动蛋白交联剂，并且示出与其它肌动蛋白集束蛋白没有序列同源性(23)。需要最大程度地将肌动蛋白丝交联成直线的、致密的且刚性的集束(24)。
[0097]
提高的肌成束蛋白水平在许多类型的转移肿瘤(包括乳腺、前列腺、卵巢、肺、胃、食管等)中已被发现，并与临床侵袭性表型、不良预后和较短的存活相关(25
‑
29)(30，31)(32
‑
34)。肌成束蛋白的抑制剂可以靶向肿瘤细胞迁移和侵袭，并为转移癌症提供治疗。
[0098]
定义
[0099]
在本文中使用了一些定义来描述该技术，如前所述贯穿说明书始终。
[0100]
在描述要素的内容中(尤其在下面的权利要求的内容中)所用的术语“一”“一个”和“该”以及类似的指代被解释为包括单数和复数，除非本文另外指明或与上下文明显相矛盾。
[0101]
如本文所用，“约”将被本领域的普通技术人员理解，并根据在其使用的上下文中进行某种程度的变化。如果存在该术语的使用对于本领域的普通技术人员鉴于其使用的上
重叠，而不管连接点(例如，喹啉
‑5‑
基和喹啉
‑2‑
基是杂芳基)。在一些例子中，芳基是苯基或萘基。在某些例子中，芳基是苯基。以下描述芳基的例子，该芳基包括稠合到非芳族环的芳族碳环。
[0108]“羧基(carboxy)”或“羧基(carboxyl)”是指
‑
cooh或其盐。
[0109]“杂芳基”表示芳族环，该芳族环含有指明的原子数(例如，5元至12元杂芳基或5元至10元杂芳基)，该原子由选自n、o和s的一个或多个杂原子(例如，1个、2个、3个或4个杂原子)组成，以及其余的环原子为碳。5元杂芳基是具有5个环原子的杂芳基。6元杂芳基是具有6个环原子的杂芳基。杂芳基不含有相邻的s原子和o原子。在一些实施方式中，在杂芳基中s原子和o原子的总数不大于2。在一些实施方式中，在杂芳基中s原子和o原子的总数不大于1。除非另有指明，否则当化合价允许时杂芳基可以通过碳原子或氮原子结合到母体结构。例如，“吡啶基”包括2
‑
吡啶基、3
‑
吡啶基和4
‑
吡啶基，而“吡咯基”包括1
‑
吡咯基、2
‑
吡咯基和3
‑
吡咯基。当氮存在于杂芳基环内时，它可以以氧化态(即，n

‑
o
‑
)存在，其中相邻的原子和基团的性质允许氮在此。此外，当硫存在于杂芳基环内时，它可以以氧化态(即，s

‑
o
‑
或so2)存在，其中相邻的原子和基团的性质允许硫在此。杂芳基可以是单环或多环(例如，二环、三环)。
[0110]
在一些例子中，杂芳基是单环。例子包括吡咯、吡唑、咪唑、三唑(例如，1,2,3
‑
三唑、1,2,4
‑
三唑、1,2,4
‑
三唑)、四唑、呋喃、异恶唑、恶唑、恶二唑(例如，1,2,3
‑
二唑、1,2,4
‑
恶二唑、1,3,4
‑
恶二唑)、噻吩、异噻唑、噻唑、噻二唑(例如，1,2,3
‑
噻二唑、1,2,4
‑
噻二唑、1,3,4
‑
噻二唑)、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪(例如，1,2,4
‑
三嗪、1,3,5
‑
三嗪)和四嗪。
[0111]
在一些例子中，多环杂芳基的两个环均是芳族的。例子包括吲哚、异吲哚、吲唑、苯并咪唑、苯并三唑、苯并呋喃、苯并恶唑、苯并异恶唑、苯并恶二唑、苯并噻吩、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并噻二唑、1h
‑
吡咯并[2,3
‑
b]吡啶、1h
‑
吡唑并[3,4
‑
b]吡啶、3h
‑
咪唑并[4,5
‑
b]吡啶、3h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
b]吡啶、1h
‑
吡咯并[3,2
‑
b]吡啶、1h
‑
吡唑并[4,3
‑
b]吡啶、1h
‑
咪唑并[4,5
‑
b]吡啶、1h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
b]吡啶、1h
‑
吡咯并[2,3
‑
c]吡啶、1h
‑
吡唑并[3,4
‑
c]吡啶、3h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]吡啶、3h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
c]吡啶、1h
‑
吡咯并[3,2
‑
c]吡啶、1h
‑
吡唑并[4,3
‑
c]吡啶、1h
‑
咪唑并[4,5
‑
c]吡啶、1h
‑
[1,2,3]三唑并[4,5
‑
c]吡啶、呋喃并[2,3
‑
b]吡啶、恶唑并[5,4
‑
b]吡啶、异恶唑并[5,4
‑
b]吡啶、[1,2,3]恶二唑并[5,4
‑
b]吡啶、呋喃并[3,2
‑
b]吡啶、恶唑并[4,5
‑
b]吡啶、异恶唑并[4,5
‑
b]吡啶、[1,2,3]恶二唑并[4,5
‑
b]吡啶、呋喃并[2,3
‑
c]吡啶、恶唑并[5,4
‑
c]吡啶、异恶唑并[5,4
‑
c]吡啶、[1,2,3]恶二唑并[5,4
‑
c]吡啶、呋喃并[3,2
‑
c]吡啶、恶唑并[4,5
‑
c]吡啶、异恶唑并[4,5
‑
c]吡啶、[1,2,3]恶二唑并[4,5
‑
c]吡啶、噻吩并[2,3
‑
b]吡啶、噻唑并[5,4
‑
b]吡啶、异噻唑并[5,4
‑
b]吡啶、[1,2,3]噻二唑并[5,4
‑
b]吡啶、噻吩并[3,2
‑
b]吡啶、噻唑并[4,5
‑
b]吡啶、异噻唑并[4,5
‑
b]吡啶、[1,2,3]噻二唑并[4,5
‑
b]吡啶、噻吩并[2,3
‑
c]吡啶、噻唑并[5,4
‑
c]吡啶、异噻唑并[5,4
‑
c]吡啶、[1,2,3]噻二唑并[5,4
‑
c]吡啶、噻吩并[3,2
‑
c]吡啶、噻唑并[4,5
‑
c]吡啶、异噻唑[4,5
‑
c]吡啶、[1,2,3]噻二唑并[4,5
‑
c]吡啶、喹啉、异喹啉、噌啉、喹唑啉、喹喔啉、酞嗪、萘啶(例如，1,8
‑
萘啶、1,7
‑
萘啶、1,6
‑
萘啶、1,5
‑
萘啶、2,7
‑
萘啶、2,6
‑
萘啶)、咪唑并[1,2
‑
a]吡啶、1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]噻唑、1h
‑
吡唑并[4,3
‑
d]噻唑和咪唑并[2,1
‑
b]噻唑。
[0112]
在其它例子中，多环杂芳基可包括非芳族的环(例如，环烷基、环烯基、杂环烷基、
杂环烯基)稠合到杂芳基环，所提供的多环杂芳基经在芳族环中的原子结合到母体结构。例如，4,5,6,7
‑
四氢苯并[d]噻唑
‑2‑
基(其中该部分经芳族的碳原子结合到母体结构)被认为是杂芳基，而4,5,6,7
‑
四氢苯并[d]噻唑
‑5‑
基(其中该部分经非芳族的碳原子结合到母体结构)不被认为是杂芳基。以下描述多环杂芳基的例子，该多环杂芳基包括稠合到非芳族环的杂芳环。
[0113]“杂环烷基”表示非芳族的部分饱和或完全饱和的环，该环具有指明的原子数(例如，3元至10元杂环烷基、或3元至7元杂环烷基)，该原子由选自n、o和s的一个或多个杂原子(例如，1个、2个、3个或4个杂原子)组成，以及其余的环原子为碳。5元杂环烷基是具有5个环原子的杂环烷基。6元杂环烷基是具有6个环原子的杂环烷基。杂环烷基可以是单环或多环(例如，二环、三环)。杂环烷基的例子包括环氧乙烷基、吖丙啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基和硫代吗啉基。当氮存在于杂环烷基环内时，它可以以氧化态(即，n

‑
o
‑
)存在，其中相邻的原子和基团的性质允许氮在此。例子包括哌啶基n
‑
氧化物和吗啉基
‑
n
‑
氧化物。此外，当硫存在于杂环烷基环内时，它可以以氧化态(即，s

‑
o
‑
或
‑
so2‑
)存在，其中相邻的原子和基团的性质允许硫在此。例子包括硫代吗啉s
‑
氧化物和硫代吗啉s,s
‑
二氧化物。此外，多环杂环烷基的一个环可以为芳族的环(例如，芳基或杂芳基)，所提供的多环杂环烷基经非芳族的碳原子或氮原子结合到母体结构。例如，1,2,3,4
‑
四氢喹啉
‑1‑
基(其中该部分经非芳族的氮原子结合到母体结构)被认为是杂环烷基，而1,2,3,4
‑
四氢喹啉
‑8‑
基(其中该部分经芳族的碳原子结合到母体结构)不被认为是杂环烷基。以下描述包括多环杂环烷基的例子，该多环杂环烷基包括稠合到芳族环的杂环烷基。
[0114]“烷氧基”是指通过氧桥连接的指明的碳原子数的烷基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、2
‑
戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、己氧基、2
‑
己氧基、3
‑
己氧基、3
‑
甲基戊氧基等。烷氧基还意在包括如上限定，即同样通过氧桥连接的环烷基。烷氧基通常具有通过氧桥连接的1个至6个碳原子。“低级烷氧基”是指具有1个至4个碳原子的烷氧基。
[0115]
术语“卤基”包括氟基、氯基、溴基和碘基，术语“卤素”包括氟、氯、溴、碘。
[0116]
如本文所用，术语“取代的”指在指定原子或基团上的任何一个或多个氢被选自指明的基团所替代，条件是不超过指定原子的正常化合价。当取代基是氧代(即，＝o)时，则在原子上的2个氢被替代。取代基和/或变量的组合是允许的，只要这种组合产生稳定的化合物或有用的合成中间体。稳定化合物或稳定的结构意味着化合物足够强健以从反应混合物中分离存在，以及随后的制剂为具有至少实际效用的试剂。除非另有指明，取代基命名至核心结构中。例如，可以理解，当(环烷基)烷基被列为可能的取代基时，该取代基与核心结构的附接点在烷基部分上。
[0117]“卤代烷基”是指被1个至5个、1个至3个或1个至2个卤基取代的烷基，其中，烷基和卤基如本文所限定。
[0118]“低级烷基苯基”是指c1‑
c4的烷基苯基。
[0119]“异构体”是具有相同分子式的不同的化合物。“立体异构体”是仅在原子的空间排列方式上不同的异构体。“对映异构体”是彼此为不可重叠的镜像的立体异构体。一对对映异构体的1:1混合物是“外消旋”混合物。符号“(
±
)”可以用于指定其中合适的外消旋混合物。“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子，但它们是彼此不是镜像的立体异构体。
“
内消旋化合物”或“内消旋异构体”是一组立体异构体的非旋光构件。内消旋异构体含有两个或多个立体中心，但不是手性中心(即，在分子内存在对称平面)。根据cahn
‑
ingold
‑
prelog r
‑
s系统规定了绝对立体化学。当化合物是纯对映异构体时，在每个手性碳上的立体化学可以被规定为r或s。分解的化合物，其绝对构型是未知的，可以根据它们在钠光d线的波长处平面偏振光的旋转方向(右旋或左旋)被指定( )或(
‑
)。本文公开和/或描述的某些化合物含有一个或多个不对称中心，因此可以产生对映异构体、非对映体、内消旋异构体和其它立体异构形式。除非另有指明，本文公开的和/或描述的化合物包括所有这些可能的对映异构体、非对映体、内消旋异构体和其它立体异构形式，其它立体异构形式包括外消旋混合物、旋光纯的形式和中间混合物。对映异构体、非对映体、内消旋异构体和其它立体异构形式可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或使用常规技术拆分来制备。除非另有规定，当本文公开和/或所述的化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心时，意在这些化合物包括e和z异构体。
[0120]“互变异构体”是通过互变异构互换的结构上不同的异构体。互变异构是异构化的形式，包括质子转移互变异构或质子移位互变异构，这被认为是酸
‑
碱化学的子集。质子转移互变异构或质子移位互变异构涉及质子的迁移伴随键顺序的改变，通常是单键与相邻的双键互换。在哪里会互变异构(例如在溶液中)，就可以达到互变异构体的化学平衡。互变异构的例子是酮
‑
烯醇互变异构。酮
‑
烯醇互变异构的具体例子是戊烷
‑
2,4
‑
二酮和4
‑
羟基戊
‑3‑
烯
‑2‑
酮互变异构体的互换。互变异构的另一个例子是酚
‑
酮互变异构。酚
‑
酮互变异构的具体例子是吡啶
‑4‑
醇和吡啶
‑
4(1h)
‑
酮互变异构体的互换。当本文所述的化合物含有能够互变异构的部分，除非另有规定，意在该化合物包括所有可能的互变异构体。
[0121]
本文记载的化合物的药学上可接受的形式包括药学上可接受的盐，以及它们的混合物。
[0122]“药学上可接受的盐”包括但不限于无机酸盐，例如盐酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、亚磺酸盐、硝酸盐和类似的盐；以及有机酸盐，例如苹果酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、2
‑
羟乙基磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐和链烷酸盐，链烷酸盐例如乙酸盐、hooc
‑
(ch2)
n
‑
cooh(其中n为0
‑
4)和类似的盐。类似地，药学上可接受的阳离子包括但不限于钠、钾、钙、铝、锂和铵。
[0123]
此外，如果本文所述的化合物作为酸加成盐获得，则游离碱可以通过碱化酸盐的溶液来获得。相反地，如果产物是游离碱，则按照常规的从碱化合物制备酸加成盐的方法，加成盐(特别是药学上可接受的加成盐)可以通过在合适的有机溶剂中溶解游离碱并用酸处理该溶液来产生。本领域的技术人员将认识到，可使用制备非毒性的药学上可接受的加成盐的各种合成方法。
[0124]
本文公开和/或所述的化合物可以是富集同位素形式，例如，富集2h、3h、
11
c、
13
c和/或
14
c。在一个实施方式中，该化合物含有至少一个氘原子。这种氘化形式例如可以通过在第5846514号和第6334997号的美国专利中描述的方法来制备。这种氘化的化合物可以提高疗效，并增加本文公开和/或所述的化合物的作用持续时间。氘取代的化合物可使用各种方法来合成，例如在下面描述的那些：dean,d.,recent advances in the synthesis and applications of radiolabeled compounds for drug discovery and development,
curr.pharm.des.,2000年；6(10)；kabalka,g.等,the synthesis of radiolabeled compounds via organometallic intermediates,tetrahedron,1989年,45(21),第6601
‑
21页；和evans,e.,synthesis of radiolabeled compounds,j.radioanal.chem.,1981年,64(1
‑
2),第9
‑
32页。
[0125]
如本文所使用的术语“基团”、“基”或“片段”是同义的，并且意在表示官能团或分子片段附接到键或其它分子的片段上。
[0126]
术语“活性剂”是用来表示具有生物活性的物质。在一些实施方式中，“活性剂”是具有药物效用的物质。例如活性剂可以是抗转移的治疗剂。
[0127]
术语“治疗有效量”是指当施用于人或非人的对象时提供治疗益处的有效量，治疗益处例如症状的改善、疾病进展的延缓或预防疾病，例如，治疗有效量可以是足以减少疾病的症状对抑制肌成束蛋白的活性进行反应的量。
[0128]“抑制肌成束蛋白的活性”是指相对于在不存在本文所述的至少一种化合物或其药学上可接受的盐时肌成束蛋白的活性，在存在本文所述的至少一种化合物或其药学上可接受的盐时降低了肌成束蛋白的活性作为直接或间接的反应。在活性上的降低可以是由于本文所述的至少一种化合物或其药学上可接受的盐与肌成束蛋白或与反过来影响肌成束蛋白活性的一种或多种其它因子的直接相互作用。
[0129]
在一些实施方式中，本文所述的化合物或其药学上可接受的盐具有的ic
50
(抑制50％肌成束蛋白的活性的浓度)值约500微摩尔(micromolar)、约100微摩尔、约10微摩尔、约1微摩尔、约500纳摩尔、约400纳摩尔、约300纳摩尔、约200纳摩尔、约100纳摩尔、约50纳摩尔、约10纳摩尔、小于约10纳摩尔、或在所包括这些数值的任何两个之间的范围。
[0130]“对抑制肌成束蛋白的活性反应的疾病”是其中抑制肌成束蛋白的疾病，提供了治疗益处，例如症状的改善、减缓疾病进展、预防或延迟疾病发作、预防或改善炎性反应、或抑制某些细胞类型(例如癌细胞)的异常活性和/或死亡。
[0131]“治疗”或“治疗的”是指在患者中疾病的任何治疗，包括：
[0132]
a)预防疾病，即，使疾病不发展成临床症状；
[0133]
b)抑制疾病的进展；
[0134]
c)延缓或阻止临床症状的发展；和/或
[0135]
d)缓解疾病，即，使临床症状消退。
[0136]“对象”或“患者”是指动物，例如哺乳动物，其已经成为或将成为治疗、观察或实验的对象。本文所述的方法在人体疗法和兽医施用中均是有用的。在一些实施方式中，对象为哺乳动物；在一些实施方式中，对象为人。
[0137]
如本文所用，术语“癌症”包括实体哺乳动物肿瘤以及血液恶性肿瘤。术语“肿瘤细胞”和“癌细胞”在本文中可互换使用。
[0138]“实体哺乳动物肿瘤”包括头颈癌症、肺癌症、间皮瘤癌症、纵隔膜癌症、食道癌症、胃癌症、胰腺癌症、肝胆系统癌症、小肠癌症、结肠癌症、结肠直肠癌症、直肠癌症、肛门癌症、肾癌症、尿道癌症、膀胱癌症、前列腺癌症、尿道癌症、阴茎癌症、睾丸癌症、妇科器官癌症、卵巢癌症、乳腺癌症、内分泌系统癌症、皮肤癌症、中枢神经系统癌症；软组织肉瘤和骨肉瘤；以及皮肤黑色素瘤和眼内起源的黑色素瘤。
[0139]
术语“血液恶性肿瘤”包括儿童白血病和淋巴瘤、霍奇金病、淋巴细胞和皮肤起源
的淋巴瘤、急性和慢性白血病、浆细胞肿瘤和与aids相关的癌症。
[0140]
另外，在这些实施例和其它地方，缩写词具有以下含义：
[0141]
℃
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
摄氏度
[0142]
μl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
微升
[0143]
μμ
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
微摩尔
[0144]
ddt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二硫苏糖醇
[0145]
dmso
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲基亚砜
[0146]
g
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
克
[0147]
kg
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
千克
[0148]
hr或h
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
小时
[0149]
l
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
升
[0150]
m
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
摩尔
[0151]
nm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
纳摩尔
[0152]
mg
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
毫克
[0153]
mhz
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
兆赫兹
[0154]
min
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
分钟
[0155]
ml
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
毫升
[0156]
mm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
毫摩尔
[0157]
mmol
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
毫摩尔
[0158]
mol
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
摩尔
[0159]
pmsf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
苯甲基磺酰氟
[0160]
n
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
标准(normal)
[0161]
edta
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙二胺四乙酸
[0162]
μm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
微米
[0163]
r.p.m
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
转每分
[0164]
s.d.
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
标准差
[0165]
v/v
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
体积/体积
[0166]
wt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
重量
[0167]
治疗方法
[0168]
在一个方面，本技术提供了在有需要的对象中治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或障碍的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的至少一种式i
‑
a或式i
‑
b的化合物
[0169]
[0170]
或它们的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中
[0171]
q1和q2独立地为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基，且在式i
‑
a中q1和q2稠合在一起；
[0172]
q3为5元不饱和环或6元不饱和环，其中(1)在y1和y2之间的键为双键，且在y3和y2之间的键为单键，或(2)在y1和y2之间的键为单键，且在y3和y2之间的键为双键，其中在式i
‑
b中q3和q2稠合；
[0173]
s为0或1；t为1或2；
[0174]
y1、y3和y5独立地为c或n；y2、y4和y6独立地为ch、cr3或n；条件是y1、y2、y3、y4、y5和y6中的至多四个为n；
[0175]
r1为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基，其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0176]
r和r4中的一个不存在或为氢、卤基或低级烷基(优选甲基或乙基)，r和r4中的另一个为l2‑
r5或l3‑
r5；或r不存在且r4为
‑
(ch2)
j
‑
r
11
；j为1、2或3；r
11
选自
‑
oh、
‑
or7、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
nr
10
cor
10
、
‑
nr
10
co2r
10
、
‑
sor7、
‑
so2r7、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0177]
x1选自or8、nhr8和sr8；
[0178]
x2选自o、nr8和s；
[0179]
l1选自
‑
(c(r8)2)
j
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
c(o)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
c(o)n(r8)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
n(r8)c(o)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
n(r8)s(o)2‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(ch2)
q
‑
s(o)2n(r8)
‑
(ch2)
r
‑
、
‑
s
‑
、
‑
o
‑
和
‑
nr8‑
；
[0180]
q为0或1；
[0181]
r为0或1；
[0182]
l2选自共价键、
‑
c(o)n(r8)
‑
、
‑
n(r8)c(o)
‑
、
‑
n(r8)s(o)2‑
和
‑
s(o)2n(r8)
‑
；
[0183]
l3为＝nc(o)
‑
或＝ns(o)2‑
；
[0184]
每个r3独立地选自低级烷基(优选甲基或乙基)和卤基；
[0185]
r5为苯基、5元杂芳基、6元杂芳基、5元杂环烷基或6元杂环烷基；其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至4个r2取代，其中每个r2独立地选自低级烷基、低级卤代烷基、
‑
oh、
‑
or7、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、卤基、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
nr
10
cor
10
、
‑
nr
10
co2r
10
、
‑
sor7、
‑
so2r7、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0186]
每个r6独立地选自卤基和可选地被1
‑
3个卤基取代的低级烷基(优选甲基或乙基)；或在苯环上两个相邻的r6和该苯环稠合形成5元环烷基、6元环烷基、5元杂环烷基或6元杂环烷基；
[0187]
r7为低级烷基(优选甲基或乙基)；
[0188]
r8为氢或低级烷基(优选甲基或乙基)；及
[0189]
每个r
10
独立地为氢或低级烷基(优选甲基或乙基)，或两个r
10
连同连接在其上的原子一起形成4元杂环烷基环至6元杂环烷基环。
[0190]
在一些实施方式中，提供了在有需要的对象中治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或障碍的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的至少一种式i
‑
c或式i
‑
d的化合物
[0191][0192]
或它们的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中
[0193]
r1为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基；其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0194]
r2选自低级烷基、低级卤代烷基、
‑
oh、
‑
or7、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、卤基、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
nr
10
cor
10
、
‑
nr
10
co2r
10
、
‑
sor7、
‑
so2r7、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0195]
每个r3独立地选自低级烷基和卤基；
[0196]
m为0、1、2或3；
[0197]
n为0、1、2、3或4；
[0198]
x1选自or8、nhr8和sr8；
[0199]
x2选自o、nr8和s；
[0200]
l1为
‑
s
‑
、
‑
o
‑
或
‑
nr8‑
；
[0201]
l2选自
‑
c(o)n(r8)
‑
、
‑
n(r8)c(o)
‑
、
‑
n(r8)s(o)2‑
和
‑
s(o)2n(r8)
‑
；
[0202]
l3为＝nc(o)
‑
或＝ns(o)2‑
；
[0203]
每个r6独立地选自卤基和可选地被1
‑
3个卤基取代的低级烷基；
[0204]
r7为低级烷基；
[0205]
r8为氢或低级烷基；及
[0206]
每个r
10
独立地为氢或低级烷基，或两个r
10
连同连接在其上的原子一起形成4元环至6元环。
[0207]
在式i
‑
b的一些实施方式中，q为6元不饱和环且s为1。
[0208]
在一些实施方式中，l1为o。在一些实施方式中，l1为s。在一些实施方式中，l1为
‑
nh
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
nch3‑
。
[0209]
在一些实施方式中，l2为
‑
n(r8)s(o)2‑
。在一些实施方式中，l2为
‑
nhs(o)2‑
。在一些实施方式中，l3为＝ns(o)2‑
。
[0210]
在一些实施方式中，该化合物为式i
‑
e或式i
‑
f的化合物
[0211][0212]
或它们的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0213]
在一些实施方式中，该化合物为式i
‑
g或式i
‑
h的化合物
[0214][0215]
或它们的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0216]
在一些实施方式中，该化合物为式i
‑
i或式i
‑
j的化合物
[0217][0218]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，
[0219]
其中，y为n或cr，r为氢或低级烷基，且r1、l1、l2和r5如在式i
‑
a或式i
‑
b中所限定。
[0220]
在一些实施方式中，该化合物为式i
‑
k的化合物
[0221][0222]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，
[0223]
其中，r1、l1和r5如在式i
‑
b中所限定。
[0224]
在一些实施方式中，该化合物为式i
‑
l或式i
‑
m的化合物
[0225][0226]
其中，l1、r2和r6如在式i
‑
b中所限定，n为0、1、2、3或4且u为1、2或3。
[0227]
在一些实施方式中，该化合物为式i
‑
n的化合物
[0228][0229]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，
[0230]
其中，r1、l1、j和r
11
如在式i
‑
b中所限定。在一些实施方式中，r
11
为oh。
[0231]
在一些实施方式中，r1为苯基。在一些实施方式中，r1为被1个至3个r6取代的苯基。在一些实施方式中，r1为被一个选自卤基或可选地被1个至3个卤基取代的低级烷基中的基团取代的苯基。在一些实施方式中，r1为被两个选自卤基或可选地被1个至3个卤基取代的低级烷基中的基团取代的苯基。在一些实施方式中，r1为被三个选自卤基或可选地被1个至3个卤基取代的低级烷基中的基团取代的苯基。在一些实施方式中，r1为三氟甲基苯基。在一些实施方式中，r1为二氯苯基。在一些实施方式中，r1为被两个相邻的r6取代的苯基，且该两个相邻的r6与该苯环稠合形成5元环烷基或6元环烷基。在一些实施方式中，r1为被两个相邻的r6取代的苯基，且该两个相邻的r6与该苯环稠合形成5元杂环烷基或6元杂环烷基(例如包括一个或两个环氧原子的杂环烷基)。
[0232]
在一些实施方式中，r1为未取代的5元杂芳基。在一些实施方式中，r1为被一个选自
卤基或低级烷基中的基团取代的5元杂芳基。在一些实施方式中，r1为被两个选自卤基或低级烷基中的基团取代的5元杂芳基。在一些实施方式中，r1为被三个选自卤基或低级烷基中的基团取代的5元杂芳基。在一些实施方式中，r1为未取代的6元杂芳基。在一些实施方式中，r1为被一个选自卤基或低级烷基中的基团取代的6元杂芳基。在一些实施方式中，r1为被两个选自卤基或低级烷基中的基团取代的6元杂芳基。在一些实施方式中，r1为被三个选自卤基或低级烷基中的基团取代的6元杂芳基。
[0233]
在一些实施方式中，r1为未取代的三唑。在一些实施方式中，r1为被一个选自卤基或低级烷基中的基团取代的三唑。
[0234]
在一些实施方式中，x1为oh。在一些实施方式中，x2为o。
[0235]
在一些实施方式中，m为0。在一些实施方式中，m为1。
[0236]
在一些实施方式中，r3为卤基。在一些实施方式中，r3为低级烷基。
[0237]
在一些实施方式中，n为1。在一些实施方式中，n为2。在一些实施方式中，n为3。
[0238]
在一些实施方式中，r2独立地选自oh、卤基、低级烷基和
‑
or7。在一些实施方式中，r2选自溴基、甲基、乙基、甲氧基和乙氧基。在一些实施方式中，r2为卤基。在一些实施方式中，r2为
‑
or7。在一些实施方式中，r2为甲基。在一些实施方式中，r2为乙基。在一些实施方式中，n为2或3，且每个r2为甲基。
[0239]
在一些实施方式中，l1为
‑
(c(r8)2)
j
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
c(o)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
c(o)n(r8)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
n(r8)c(o)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
n(r8)s(o)2‑
(c(r8)2)
r
‑
或
‑
(ch2)
q
‑
s(o)2n(r8)
‑
(ch2)
r
‑
。在一些实施方式中，r8为氢。在一些实施方式中，j为1。在一些实施方式中，l1为
‑
(ch2)
j
‑
。在一些实施方式中，l1为亚甲基。在一些实施方式中，l1为
‑
ch2c(o)
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
c(o)(ch2)
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
ch2‑
c(o)nh
‑
ch2‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
ch2‑
nhc(o)
‑
ch2‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
nhc(o)
‑
ch2‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
ch2‑
nhc(o)
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
c(o)nh
‑
ch2‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
ch2‑
c(o)nh
‑
。在一些实施方式中，l1选自
‑
s
‑
、
‑
o
‑
和
‑
nr8‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
s
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
o
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
nr8‑
。
[0240]
在一些实施方式中，y为n。
[0241]
在一些实施方式中，l2为共价键且r5为5元杂环烷基或6元杂环烷基。在一些实施方式中，该5元杂环烷基或6元杂环烷基包括硫环原子，该硫环原子被氧化为so2。在一些实施方式中，l2为
‑
nhc(o)
‑
且r5为5元杂芳基或6元杂芳基。
[0242]
在一些实施方式中，l1为亚甲基。在一些实施方式中，r1为苯基。
[0243]
在一些实施方式中，该化合物选自
[0244]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑
2,5
‑
二甲基苯磺酰胺；
[0245]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑4‑
乙氧基苯磺酰胺；
[0246]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑4‑
甲氧基苯磺酰胺；
[0247]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑4‑
乙基苯磺酰胺；
[0248]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑
2,4,5
‑
三甲基苯磺酰胺；
[0249]
(z)
‑
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
氧代萘
‑
1(4h)
‑
亚基)苯磺酰胺；
[0250]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑4‑
溴苯磺酰胺；及
[0251]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑
2,4
‑
二甲基苯磺酰胺；
[0252]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0253]
在一些实施方式中，该化合物为
[0254]5‑
(3,4
‑
二氯苄基)
‑1‑
(s,s,
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮或
[0255]
n
‑
(1
‑
(4
‑
(三氟甲基)苄基)
‑
1h
‑
吲唑
‑3‑
基)呋喃
‑2‑
甲酰胺，
[0256]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0257]
在一些实施方式中，该化合物选自
[0258]5‑
(3
‑
氯苄基)
‑1‑
(2
‑
羟基乙基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；
[0259]2‑
(4
‑
氧代
‑1‑
(s,s,
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
5(4h)
‑
基)
‑
n
‑
(3
‑
(三氟甲基)苯基)乙酰胺；
[0260]
n
‑
(4
‑
氟苄基)
‑2‑
(4
‑
氧代
‑1‑
(s,s
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
5(4h)
‑
基)乙酰胺；
[0261]
n
‑
(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯
‑5‑
基甲基)
‑2‑
(4
‑
氧代
‑1‑
(s,s
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
5(4h)
‑
基)乙酰胺；
[0262]
n
‑
(4
‑
氯苯基)
‑2‑
(4
‑
氧代
‑1‑
(s,s
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
5(4h)
‑
基)乙酰胺；
[0263]5‑
(2
‑
(2,3
‑
二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯
‑6‑
基)
‑2‑
氧代乙基)
‑1‑
(s,s
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；
[0264]5‑
(2
‑
(2,4
‑
二甲基苯基)
‑2‑
氧代乙基)
‑1‑
(s,s
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；
[0265]5‑
(2
‑
(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯
‑5‑
基)
‑2‑
氧代乙基)
‑1‑
(s,s
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；
[0266]5‑
(3,4
‑
二氯苄基)
‑1‑
邻甲苯基
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；
[0267]5‑
(3,4
‑
二氯苄基)
‑1‑
(2,3
‑
二甲基苯基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；及
[0268]5‑
(3,4
‑
二氯苄基)
‑1‑
(2,4
‑
二甲基苯基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；
[0269]
或互变异构体，和/或它们药学上可接受的盐。
[0270]
还提供了在有需要的对象中治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或障碍的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的至少一种式ii的化合物
[0271][0272]
或它的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中
[0273]
环a为5元杂芳基或5元杂环烷基；
[0274]
w1和w4独立地选自c、cr8、n、nr8、o和s，w2和w3独立地为c或n，条件是w1、w2、w3或w4中的至少一个为c，且w1、w2、w3或w4中的至少一个为n；其中n中的一个可选地带正电荷；
[0275]
r
21
和r
22
独立地为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基；其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0276]
r
23
选自氢、低级烷基、苯基、低级烷基苯基、5元杂芳基或6元杂芳基；其中该苯基、低级烷基苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0277]
每个r6独立地选自卤基和可选地被1
‑
3个卤基取代的低级烷基；
[0278]
每个r8独立地为氢或低级烷基；及
[0279]
为单键或双键，当为单键时，则r
24
为氢或低级烷基；当为双键时，则r
24
不存在。
[0280]
在一些实施方式中，环a为噻二唑。
[0281]
在一些实施方式中，该化合物为式ii
‑
a或式ii
‑
b的化合物
[0282][0283]
或它们的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0284]
在一些实施方式中，w4为s。在一些实施方式中，w4为o。在一些实施方式中，w4为nh。
[0285]
在一些实施方式中，r
21
和r
22
独立地为可选地被卤基或烷基取代的苯基。在一些实施方式中，r
21
和r
22
为苯基。在一些实施方式中，r
21
和r
22
独立地为被一个、两个或三个选自卤基或低级烷基中的基团取代的苯基。在一些实施方式中，r
21
和r
22
独立地为被一个选自卤基或低级烷基中的基团取代的苯基。在一些实施方式中，r
21
和r
22
独立地为被两个选自卤基或低级烷基中的基团取代的苯基。在一些实施方式中，r
21
和r
22
独立地为被三个选自卤基或低级烷基中的基团取代的苯基。
[0286]
在一些实施方式中，r
23
为甲基、苯基或苄基。在一些实施方式中，r
23
为甲基。在一些实施方式中，r
23
为苯基。在一些实施方式中，r
23
为苄基。在一些实施方式中，r
23
为低级烷基苯基。在一些实施方式中，r
23
为5元杂芳基或6元杂芳基。
[0287]
在一些实施方式中，r
24
为氢。
[0288]
在一些实施方式中，该化合物选自
[0289]
(z)
‑
n
‑
(2,3
‑
二苯基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑
5(2h)
‑
亚基)甲胺；
[0290]
n
‑
甲基
‑
2,3
‑
二苯基1,2,4
‑
噻二唑鎓
‑5‑
胺；
[0291]
n
‑
苄基
‑
2,3
‑
二苯基
‑
1,2,4
‑
噻二唑鎓
‑5‑
胺；及
[0292]
n
‑
苯基
‑
2,3
‑
二苯基
‑
1,2,4
‑
噻二唑鎓
‑5‑
胺；
[0293]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0294]
在另一个实施方式中，本技术提供了在有需要的对象中治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或障碍的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的至少一种式iii的化合物
[0295][0296]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中
[0297]
r
30
选自低级烷基、可选地被苯基取代的低级烯基、可选地被1个或2个独立地选自硝基和卤基的取代基取代的苯基；
[0298]
r
31
选自低级卤代烷基、
‑
oh、
‑
or9、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、卤基、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0299]
p为0、1或2；
[0300]
x
30
为c(＝o)或s(o)2；
[0301]
r7为低级烷基；
[0302]
r9为苯基；及
[0303]
每个r
10
独立地为氢或低级烷基，或两个r
10
连同连接在其上的原子一起形成环。
[0304]
在一些实施方式中，r
30
为低级烷基。
[0305]
在一些实施方式中，r
30
为低级烯基。在一些实施方式中，r
30
为被苯基取代的低级烯基。
[0306]
在一些实施方式中，r
30
为可选地被一个或两个选自硝基和卤基(例如，氯基、溴基或氟基)的取代基取代的苯基。
[0307]
在一些实施方式中，x
30
为c(＝o)且r
30
为低级烷基。在一些实施方式中，x
30
为c(＝o)且r
30
为可选地被苯基取代的低级烯基。
[0308]
在一些实施方式中，x
30
为s(o)2且r
30
为苯基。在一些实施方式中，x
30
为s(o)2且r
30
为被一个或两个独立地为硝基或卤基(例如氯基)的取代基取代的苯基。
[0309]
在一些实施方式中，r
31
选自卤基和苯氧基。在一些实施方式中，r
31
选自氟基、氯基或苯氧基。
[0310]
在一些实施方式中，p为0。在一些实施方式中，p为1。在一些实施方式中，p为2。
[0311]
在一些实施方式中，该化合物选自
[0312]2‑
氯
‑
n
‑
(6
‑
氯苯并[d]噻唑
‑2‑
基)
‑5‑
硝基苯磺酰胺，
[0313]3‑
氯
‑
n
‑
(6
‑
苯氧基苯并[d]噻唑
‑2‑
基)苯磺酰胺，
[0314]
n
‑
(6
‑
氟苯并[d]噻唑
‑2‑
基)
‑3‑
硝基苯磺酰胺，
[0315]
2,3
‑
二氯
‑
n
‑
(6
‑
氟苯并[d]噻唑
‑2‑
基)苯磺酰胺，
[0316]
n
‑
(6
‑
氯苯并[d]噻唑
‑2‑
基)乙酰胺，及
[0317]
n
‑
(苯并[d]噻唑
‑2‑
基)肉桂酰胺，
[0318]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0319]
在一个实施方式中，本技术提供了抑制肌成束蛋白的活性的方法，该方法包括向细胞施用有效量的肌成束蛋白抑制剂，从而抑制在细胞中肌成束蛋白的活性，其中该肌成束蛋白抑制剂为式i
‑
a、式i
‑
b、式ii或式iii的化合物。在一些实施方式中，肌成束蛋白抑制剂具有ic
50
为至多100μμ的肌成束蛋白抑制作用。在一些实施方式中，肌成束蛋白抑制剂具有ic
50
为至多50μμ的肌成束蛋白抑制作用。在一些实施方式中，肌成束蛋白抑制剂具有
ic
50
为至多20μμ的肌成束蛋白抑制作用。在一些实施方式中，肌成束蛋白抑制剂具有ic
50
为至多8μμ的肌成束蛋白抑制作用。
[0320]
在一些实施方式中，病症或障碍为转移癌症、神经元障碍、神经元变性、炎性病症、病毒感染、细菌感染、淋巴增生、霍奇金病或局部缺血有关的组织损伤。
[0321]
在一些实施方式中，该病症或障碍为转移癌症。
[0322]
在一些实施方式中，癌症为癌、淋巴瘤、肉瘤、黑色素瘤、星形细胞瘤、间皮瘤细胞、卵巢癌、结肠癌、胰腺癌、食道癌、胃癌、肺癌、泌尿癌、膀胱癌、乳腺癌症、胃癌症、白血病、肺癌症、结肠癌症、中枢神经系统癌症、黑色素瘤、卵巢癌症、肾癌症或前列腺癌症。在一些实施方式中，癌症为肺癌症、乳腺癌症或前列腺癌症。
[0323]
在另一个方面，本技术提供了抑制肌成束蛋白的活性的方法，该方法包括向细胞施用有效量的肌成束蛋白抑制剂，从而抑制在细胞中肌成束蛋白的活性，其中，该肌成束蛋白抑制剂为式i
‑
a或式i
‑
b的化合物
[0324][0325]
或它们的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中
[0326]
q1和q2独立地为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基，且在式i
‑
a中q1和q2稠合在一起；
[0327]
q3为5元不饱和环或6元不饱和环，其中(1)在y1和y2之间的键为双键，且在y3和y2之间的键为单键，或(2)在y1和y2之间的键为单键，且在y3和y2之间的键为双键，其中在式i
‑
b中q3和q2稠合；
[0328]
s为0或1；t为1或2；
[0329]
y1、y3和y5独立地为c或n；y2、y4和y6独立地为ch、cr3或n；条件是y1、y2、y3、y4、y5和y6中的至多四个为n；
[0330]
r1为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基，其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0331]
r和r4中的一个不存在或为氢、卤基或低级烷基(优选甲基或乙基)，r和r4中的另一个为l2‑
r5或l3‑
r5；或r不存在且r4为
‑
(ch2)
j
‑
r
11
；j为1、2或3；r
11
选自
‑
oh、
‑
or7、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
nr
10
cor
10
、
‑
nr
10
co2r
10
、
‑
sor7、
‑
so2r7、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0332]
x1选自or8、nhr8和sr8；
[0333]
x2选自o、nr8和s；
[0334]
l1选自
‑
(c(r8)2)
j
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
c(o)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
c(o)n(r8)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
n(r8)c(o)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
n(r8)s(o)2‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(ch2)
q
‑
s(o)2n(r8)
‑
(ch2)
r
‑
、
‑
s
‑
、
‑
o
‑
和
‑
nr8‑
；
[0335]
q为0或1；
[0336]
r为0或1；
[0337]
l2选自共价键、
‑
c(o)n(r8)
‑
、
‑
n(r8)c(o)
‑
、
‑
n(r8)s(o)2‑
和
‑
s(o)2n(r8)
‑
；
[0338]
l3为＝nc(o)
‑
或＝ns(o)2‑
；
[0339]
每个r3独立地选自低级烷基(优选甲基或乙基)和卤基；
[0340]
r5为苯基、5元杂芳基、6元杂芳基、5元杂环烷基或6元杂环烷基；其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至4个r2取代，其中每个r2独立地选自低级烷基、低级卤代烷基、
‑
oh、
‑
or7、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、卤基、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
nr
10
cor
10
、
‑
nr
10
co2r
10
、
‑
sor7、
‑
so2r7、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0341]
每个r6独立地选自卤基和可选地被1
‑
3个卤基取代的低级烷基(优选甲基或乙基)；或在苯环上两个相邻的r6和该苯环稠合形成5元环烷基、6元环烷基、5元杂环烷基或6元杂环烷基；
[0342]
r7为低级烷基(优选甲基或乙基)；
[0343]
r8为氢或低级烷基(优选甲基或乙基)；及
[0344]
每个r
10
独立地为氢或低级烷基(优选甲基或乙基)，或两个r
10
连同连接在其上的原子一起形成4元杂环烷基环至6元杂环烷基环。
[0345]
在式i
‑
b的一些实施方式中，q为6元不饱和环且s为1。
[0346]
在一些实施方式中，l1为o。在一些实施方式中，l1为s。在一些实施方式中，l1为
‑
nh
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
nch3‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
ch2‑
。
[0347]
在一些实施方式中，l2为
‑
n(r8)s(o)2‑
。在一些实施方式中，l2为
‑
nhc(o)
‑
。在一些实施方式中，l2为
‑
nhs(o)2‑
。在一些实施方式中，l2为共价键。在一些实施方式中，l2为
‑
c(o)nh
‑
。在一些实施方式中，l3为＝ns(o)2
‑
。
[0348]
在一些实施方式中，提供了抑制肌成束蛋白的活性的方法，该方法包括向细胞施用有效量的肌成束蛋白抑制剂，从而抑制在细胞中肌成束蛋白的活性，其中，该肌成束蛋白抑制剂为式i
‑
c或式i
‑
d的化合物
[0349][0350]
或它们的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中
[0351]
r1为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基；其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0352]
r2选自低级烷基、低级卤代烷基、
‑
oh、
‑
or7、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、卤基、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
nr
10
cor
10
、
‑
nr
10
co2r
10
、
‑
sor7、
‑
so2r7、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0353]
每个r3独立地选自低级烷基和卤基；
[0354]
m为0、1、2或3；
[0355]
n为0、1、2、3或4；
[0356]
x1选自or8、nhr8和sr8；
[0357]
x2选自o、nr8和s；
[0358]
l1为
‑
s
‑
、
‑
o
‑
或
‑
nr8‑
；
[0359]
l2选自
‑
c(o)n(r8)
‑
、
‑
n(r8)c(o)
‑
、
‑
n(r8)s(o)2‑
和
‑
s(o)2n(r8)
‑
；
[0360]
l3为＝nc(o)
‑
或＝ns(o)2‑
；
[0361]
每个r6独立地选自卤基和可选地被1
‑
3个卤基取代的低级烷基；
[0362]
r7为低级烷基；
[0363]
r8为氢或低级烷基；及
[0364]
每个r
10
独立地为氢或低级烷基，或两个r
10
连同连接在其上的原子一起形成4元环至6元环。
[0365]
在一些实施方式中，l1为o。在一些实施方式中，l1为s。在一些实施方式中，l1为
‑
nh
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
nch3‑
。
[0366]
在一些实施方式中，l2为
‑
n(r8)s(o)2‑
。在一些实施方式中，l2为
‑
nhs(o)2‑
。在一些实施方式中，l3为＝ns(o)2‑
。
[0367]
在一些实施方式中，该化合物为式i
‑
e或式i
‑
f的化合物
[0368][0369]
或它们的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0370]
在一些实施方式中，该化合物为式i
‑
g或式i
‑
h的化合物
[0371][0372]
或它们的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中，表示可以在双键一侧的单键。
[0373]
在一些实施方式中，该化合物为式i
‑
i或式i
‑
j的化合物
[0374][0375]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，
[0376]
其中，y为n或cr，r为氢或低级烷基，且r1、l1、l2和r5如在式i
‑
a或式i
‑
b中所限定。
[0377]
在一些实施方式中，该化合物为式i
‑
k的化合物
[0378][0379]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，
[0380]
其中，r1、l1和r5如在式i
‑
b中所限定。
[0381]
在一些实施方式中，该化合物为式i
‑
l或式i
‑
m的化合物
[0382][0383]
其中，l1、r2、r6和n如在式i
‑
b中所限定，且u为1、2或3。
[0384]
在一些实施方式中，该化合物为式i
‑
n的化合物
[0385][0386]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，
[0387]
其中，r1、l1、j和r
11
如在式i
‑
b中所限定。在一些实施方式中，r
11
为oh。
[0388]
在一些实施方式中，r1为苯基。在一些实施方式中，r1为被1个至3个r6取代的苯基。在一些实施方式中，r1为被两个相邻的r6取代的苯基，且该两个相邻的r6与该苯环稠合形成5元环烷基或6元环烷基。在一些实施方式中，r1为被两个相邻的r6取代的苯基，且该两个相邻的r6与该苯环稠合形成5元杂环烷基或6元杂环烷基(例如包括一个或两个环氧原子的杂环烷基)。在一些实施方式中，r1为被一个选自卤基或可选地被1个至3个卤基取代的低级烷基中的基团取代的苯基。在一些实施方式中，r1为被两个选自卤基或可选地被1个至3个卤基取代的低级烷基中的基团取代的苯基。在一些实施方式中，r1为被三个选自卤基或可选地被1个至3个卤基取代的低级烷基中的基团取代的苯基。在一些实施方式中，r1为三氟甲基苯基。在一些实施方式中，r1为二氯苯基。
[0389]
在一些实施方式中，r1为未取代的5元杂芳基。在一些实施方式中，r1为被一个选自卤基或低级烷基中的一个基团取代的5元杂芳基。在一些实施方式中，r1为被两个选自卤基或低级烷基中的基团取代的5元杂芳基。在一些实施方式中，r1为被三个选自卤基或低级烷基中的基团取代的5元杂芳基。在一些实施方式中，r1为未取代的6元杂芳基。在一些实施方式中，r1为被一个选自卤基或低级烷基中的基团取代的6元杂芳基。在一些实施方式中，r1为被两个选自卤基或低级烷基中的基团取代的6元杂芳基。在一些实施方式中，r1为被三个选自卤基或低级烷基中的基团取代的6元杂芳基。
[0390]
在一些实施方式中，r1为未取代的三唑。在一些实施方式中，r1为被一个选自卤基或低级烷基中的基团取代的三唑。
[0391]
在一些实施方式中，x1为oh。在一些实施方式中，x2为o。
[0392]
在一些实施方式中，m为0。在一些实施方式中，m为1。
[0393]
在一些实施方式中，r3为卤基。在一些实施方式中，r3为低级烷基。
[0394]
在一些实施方式中，n为1。在一些实施方式中，n为2。在一些实施方式中，n为3。
[0395]
在一些实施方式中，r2独立地选自oh、卤基、低级烷基和
‑
or7。在一些实施方式中，r2选自溴基、甲基、乙基、甲氧基和乙氧基。在一些实施方式中，r2为卤基。在一些实施方式中，r2为
‑
or7。在一些实施方式中，r2为甲基。在一些实施方式中，r2为乙基。在一些实施方式中，n为2或3，且每个r2为甲基。
[0396]
在一些实施方式中，l1为
‑
(c(r8)2)
j
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
c(o)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
c(o)n(r8)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
n(r8)c(o)
‑
(c(r8)2)
r
‑
、
‑
(c(r8)2)
q
‑
n(r8)s(o)2‑
(c(r8)2)
r
‑
或
‑
(ch2)
q
‑
s(o)2n(r8)
‑
(ch2)
r
‑
。在一些实施方式中，r8为氢。在一些实施方式中，j为1。在一些实施方式中，l1为
‑
(ch2)
j
‑
。在一些实施方式中，l1为亚甲基。在一些实施方式中，l1为
‑
ch2c(o)
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
c(o)(ch2)
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
ch2‑
c(o)nh
‑
ch2‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
ch2‑
nhc(o)
‑
ch2‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
nhc(o)
‑
ch2‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
ch2‑
nhc(o)
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
c(o)nh
‑
ch2‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
ch2‑
c(o)nh
‑
。在一些实施方式中，l1选自
‑
s
‑
、
‑
o
‑
和
‑
nr8‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
s
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
o
‑
。在一些实施方式中，l1为
‑
nr8‑
。
[0397]
在一些实施方式中，y为n。
[0398]
在一些实施方式中，l2为共价键且r5为5元杂环烷基或6元杂环烷基。在一些实施方式中，该5元杂环烷基或6元杂环烷基包括硫环原子，该硫环原子被氧化为so2。在一些实施方式中，l2为
‑
nhc(o)
‑
且r5为5元杂芳基或6元杂芳基。在一些实施方式中，l1为亚甲基。在一些实施方式中，r1为苯基。
[0399]
在一些实施方式中，该化合物选自
[0400]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑
2,5
‑
二甲基苯磺酰胺；
[0401]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑4‑
乙氧基苯磺酰胺；
[0402]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑4‑
甲氧基苯磺酰胺；
[0403]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑4‑
乙基苯磺酰胺；
[0404]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑
2,4,5
‑
三甲基苯磺酰胺；
[0405]
(z)
‑
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
氧代萘
‑
1(4h)
‑
亚基)苯磺酰胺；
[0406]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑4‑
溴苯磺酰胺；及
[0407]
n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑
2,4
‑
二甲基苯磺酰胺；
[0408]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0409]
在一些实施方式中，该化合物为
[0410]5‑
(3,4
‑
二氯苄基)
‑1‑
(s,s,
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮或
[0411]
n
‑
(1
‑
(4
‑
(三氟甲基)苄基)
‑
1h
‑
吲唑
‑3‑
基)呋喃
‑2‑
甲酰胺，
[0412]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0413]
在一些实施方式中，该化合物选自
[0414]5‑
(3
‑
氯苄基)
‑1‑
(2
‑
羟基乙基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；
[0415]2‑
(4
‑
氧代
‑1‑
(s,s,
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
5(4h)
‑
基)
‑
n
‑
(3
‑
(三氟甲基)苯基)乙酰胺；
[0416]
n
‑
(4
‑
氟苄基)
‑2‑
(4
‑
氧代
‑1‑
(s,s
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
5(4h)
‑
基)乙酰胺；
[0417]
n
‑
(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯
‑5‑
基甲基)
‑2‑
(4
‑
氧代
‑1‑
(s,s
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
5(4h)
‑
基)乙酰胺；
[0418]
n
‑
(4
‑
氯苯基)
‑2‑
(4
‑
氧代
‑1‑
(s,s
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
5(4h)
‑
基)乙酰胺；
[0419]5‑
(2
‑
(2,3
‑
二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯
‑6‑
基)
‑2‑
氧代乙基)
‑1‑
(s,s
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；
[0420]5‑
(2
‑
(2,4
‑
二甲基苯基)
‑2‑
氧代乙基)
‑1‑
(s,s
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；
[0421]5‑
(2
‑
(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯
‑5‑
基)
‑2‑
氧代乙基)
‑1‑
(s,s
‑
二氧代
‑
四氢噻吩
‑3‑
基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；
[0422]5‑
(3,4
‑
二氯苄基)
‑1‑
邻甲苯基
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；
[0423]5‑
(3,4
‑
二氯苄基)
‑1‑
(2,3
‑
二甲基苯基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；及
[0424]5‑
(3,4
‑
二氯苄基)
‑1‑
(2,4
‑
二甲基苯基)
‑
1h
‑
吡唑并[3,4
‑
d]嘧啶
‑
4(5h)
‑
酮；
[0425]
或互变异构体，和/或它们药学上可接受的盐。
[0426]
还提供了抑制肌成束蛋白的活性的方法，该方法包括向细胞施用有效量的肌成束蛋白抑制剂，从而抑制在细胞中肌成束蛋白的活性，其中该肌成束蛋白抑制剂为式ii的化合物
[0427][0428]
或它的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中
[0429]
环a为5元杂芳基或5元杂环烷基；
[0430]
w1和w4独立地选自c、cr8、n、nr8、o和s，w2和w3独立地为c或n，条件是w1、w2、w3或w4中的至少一个为c，且w1、w2、w3或w4中的至少一个为n；其中n中的一个可选地带正电荷；
[0431]
r
21
和r
22
独立地为苯基、5元杂芳基或6元杂芳基；其中该苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0432]
r
23
选自氢、低级烷基、苯基、低级烷基苯基、5元杂芳基和6元杂芳基；其中该苯基、低级烷基苯基、5元杂芳基或6元杂芳基可选地被1个至3个r6取代；
[0433]
每个r6独立地选自卤基和可选地被1
‑
3个卤基取代的低级烷基；
[0434]
每个r8独立地为氢或低级烷基；及
[0435]
为单键或双键，当为单键时，则r
24
为氢或低级烷基；当为双键时，则r
24
不存在。
[0436]
在一些实施方式中，环a为噻二唑。
[0437]
在一些实施方式中，该方法包括式ii
‑
a或式ii
‑
b的化合物
[0438][0439]
或它们的互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0440]
在一些实施方式中，w4为s。在一些实施方式中，w4为o。在一些实施方式中，w4为nh。
[0441]
在一些实施方式中，r
21
和r
22
独立地为可选地被卤基或烷基取代的苯基。在一些实施方式中，r
21
和r
22
为苯基。在一些实施方式中，r
21
和r
22
独立地为被一个、两个或三个选自卤基或低级烷基中的基团取代的苯基。在一些实施方式中，r
21
和r
22
独立地为被一个选自卤基或低级烷基中的基团取代的苯基。在一些实施方式中，r
21
和r
22
独立地为被两个选自卤基或低级烷基中的基团取代的苯基。在一些实施方式中，r
21
和r
22
独立地为被三个选自卤基或低级烷基中的基团取代的苯基。
[0442]
在一些实施方式中，r
23
为甲基、苯基或苄基。在一些实施方式中，r
23
为甲基。在一些实施方式中，r
23
为苯基。在一些实施方式中，r
23
为苄基。在一些实施方式中，r
23
为被苯基取代的烷基。在一些实施方式中，r
23
为被5元杂芳基或6元杂芳基取代的烷基。
[0443]
在一些实施方式中，r
24
为氢。
[0444]
在一些实施方式中，该化合物选自
[0445]
(z)
‑
n
‑
(2,3
‑
二苯基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑
5(2h)
‑
亚基)甲胺；
[0446]
n
‑
甲基
‑
2,3
‑
二苯基1,2,4
‑
噻二唑鎓
‑5‑
胺；
[0447]
n
‑
苄基
‑
2,3
‑
二苯基
‑
1,2,4
‑
噻二唑鎓
‑5‑
胺；及
[0448]
n
‑
苯基
‑
2,3
‑
二苯基
‑
1,2,4
‑
噻二唑鎓
‑5‑
胺；
[0449]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐。
[0450]
还提供了抑制肌成束蛋白的活性的方法，该方法包括向细胞施用有效量的肌成束蛋白抑制剂，从而抑制在细胞中肌成束蛋白的活性，其中，该肌成束蛋白抑制剂为式iii的化合物
[0451][0452]
或互变异构体，和/或它们的药学上可接受的盐，其中
[0453]
r
30
选自低级烷基、可选地被苯基取代的低级烯基、可选地被1个或2个独立地选自硝基和卤基的取代基取代的苯基；
[0454]
r
31
选自低级卤代烷基、
‑
oh、
‑
or9、
‑
sh、
‑
sr7、
‑
nr
10
r
10
、卤基、氰基、硝基、
‑
coh、
‑
cor7、
‑
co2h、
‑
co2r7、
‑
conr
10
r
10
、
‑
ocor7、
‑
oco2r7、
‑
oconr
10
r
10
、
‑
so2nr
10
r
10
和
‑
nr
10
so2r7；
[0455]
p为0、1或2；
culture reveal a role for fascin in neurite shape and trajectory，j.neurosci，26(34)：第8734
‑
47页(2006年))。肌成束蛋白还涉及神经元的变性(fulga等，abnormal bundling and accumulation of f
‑
actin mediates tau
‑
induced neuronal degeneration in vivo nat cell biol.9(2)：第139
‑
48页(2007年))。此外，肌成束蛋白在霍奇金病中发挥作用(pinkus等，fascin，a sensitive new marker for reed
‑
sternberg cells of hodgkin's disease，am j pathol.150(2)：第543
‑
562页(1997年))。肌成束蛋白还在处理和呈递抗原中发挥作用，例如，在抗原呈递细胞(mosialos等，circulating human dendritic cells differentially express high levels of a 55
‑
kd actin
‑
bundling protein.am.j.pathol.148(2)：第593
‑
600页(1996年)；said等，the role of follicular and inter digitating dendritic cells in hiv
‑
related lymphoid hyperplasia：localization of fascin.mod pathol.10(5)：第421
‑
27页(1997年))。另外，肌成束蛋白还在缺血性损伤中发挥作用(meller等，ubiquitin proteasome
‑
mediated synaptic reorganization：a novel mechanism underlying rapid ischemic tolerance，j neurosci.28(l)：第50
‑
9页(2008年))。
[0481]
本文提供了调节肌成束蛋白的活性的试剂，以及可用于治疗和抑制转移癌症、神经元障碍、神经元变性、炎性病症、病毒感染、细菌感染、淋巴增生、霍奇金病和局部缺血有关的组织损伤的方法。
[0482]
肿瘤转移是癌症患者死亡的主要原因(weiss 2000年，fidler 2003年)。因此，抑制或预防肿瘤转移将显著提高癌症患者的存活率，允许更温和的辐射或具有较少的副作用的化疗，并且控制实体肿瘤的进展。
[0483]
肿瘤细胞的迁移和侵袭是肿瘤转移过程中的关键步骤(partin等1989年，aznavoorian等1993年，condeelis等2005年)。对于进行细胞迁移，肌动蛋白细胞骨架必须通过形成聚合物和集束进行重组，以影响细胞形状的动态变化(jaffe等2005年，matsudaira 1994年，otto 1994年)。单独的肌动蛋白丝是柔韧的，单独的丝本身的伸长不足以用于膜突出，膜突出是细胞迁移所必需的。肌动蛋白丝的集束提供了肌动蛋白丝用于突出的刚性以对抗来自质膜的压缩力(mogilner等2005年)。
[0484]
关键的肌动蛋白集束蛋白之一是肌成束蛋白。肌成束蛋白是丝状伪足中主要的肌动蛋白交联剂，其是膜突出，对于癌细胞的迁移和转移是重要的。肌成束蛋白需要最大程度地交联肌动蛋白丝成直线的、致密的且刚性的集束。肌成束蛋白的mrna和蛋白在癌细胞中的高表达已经与侵袭的临床特点、不良预后和较短的存活相关。因此，通过施用如本文所述的肌成束蛋白抑制剂可以治疗、预防和/或抑制转移癌症。
[0485]
此外，癌症进展的任何阶段(例如原发癌症、转移癌症以及复发癌症)都可以通过本技术的方法进行治疗。在一些实施方式中，例如在检测到转移之前治疗癌症，以抑制发展成转移癌症。在其它实施方式中，例如当检测到转移时治疗癌症，以抑制癌症的进一步转移和进展。
[0486]
本文所述的化合物，或其药学上可接受的盐，也可用于治疗自身免疫缺陷综合征相关的卡波西肉瘤(kaposi's sarcoma)、肾上腺皮质的癌症、子宫颈的癌症、子宫内膜的癌症、食道的癌症、头和颈的癌症、肝的癌症、胰脏的癌症、前列腺的癌症、胸腺的癌症、类癌肿瘤、慢性淋巴细胞性白血病、尤文氏肉瘤(ewing's sarcoma)、妊娠滋养层肿瘤、肝母细胞
瘤、多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌症、视网膜母细胞瘤、或在卵巢中的肿瘤。癌症进展的任何阶段(例如原发癌症、转移癌症以及复发癌症)都可以进行治疗或检测。关于众多类型的癌症的信息可以从例如美国癌症协会(www.cancer.org)，或从例如wilson等(1991年)harrison's principles of internal medicine，第12版，mcgraw
‑
hill公司中发现。
[0487]
在一些实施方式中，提供了用于治疗或抑制在动物中转移癌症的方法，例如，用于人类或兽医用途，该方法包括向受试的动物(例如，人)施用治疗有效量的本文所述的化合物或它们的药学上可接受的盐。在一些实施方式中，该细胞已经被从动物中取出。
[0488]
疾病或病症(例如，癌症)的治疗或治疗疾病或病症(例如，癌症)是指包括减轻或减少通常与疾病或病症相关的至少一种症状。该治疗还包括减轻或减少该疾病或病症的一种以上的症状。治疗可以通过例如消除症状和/或疾病或病症的根源来治愈疾病或病症。例如，治疗可以通过基本上抑制癌细胞的转移来治愈癌症，以便去除或杀死原发肿瘤细胞或癌细胞来基本上消除癌症。治疗还可以阻止或抑制癌细胞和/或肿瘤细胞的转移，而不直接杀死或促进癌细胞的凋亡。
[0489]
肌成束蛋白在多种细胞功能中起作用，其在调节细胞生长、细胞运动和细胞的相互作用中发挥关键作用。然而，肌成束蛋白的肌动蛋白集束的功能是直接参与肿瘤转移和侵袭生长。
[0490]
对于本领域技术人员使用本文所述的方法对抗各种癌症可以评价肌成束蛋白的抗转移活性(例如，存在如本文所述的那些各种测试剂或治疗剂)。抗癌活性，例如可以通过识别如本文所述的化合物或组合物抑制50％的癌细胞转移(ic
50
)的剂量来确定。
[0491]
还提供了用于评价使用本文所述的化合物或它们的药学上可接受的盐治疗癌症(例如，抑制转移)治疗有效剂量的方法，该方法包括：在体外确定试剂的ic
50
。这种方法允许计算抑制癌细胞的迁移每体积所需要的近似量。该量例如可以通过标准微量稀释法来确定。在一些实施方式中，如本文所述的化合物或组合物可以在时间的持续期多剂量施用，或间歇性地施用。
[0492]
组合物
[0493]
如本文所述的化合物(例如，肌成束蛋白抑制剂)可配制成药物组合物并以各种适于所选择的施用途径的形式施用至哺乳动物宿主(例如人类患者)，施用途径即口服或肠道外途径、通过静脉注射途径、肌内途径、局部途径、经皮途径、鞘内途径、经眼途径、鼻内途径、腹膜内途径或皮下途径。
[0494]
本文所述的化合物(例如，肌成束蛋白抑制剂)可以全身施用，例如将其与药学上可接受的媒介物(例如，惰性稀释剂或可吸收可食用的载体)结合口服。它们可以被包封在硬壳明胶胶囊或软壳明胶胶囊中，可以被压缩成片剂，或可以直接掺入患者饮食的食物中。对于口服治疗施用，活性化合物可与一种或多种赋形剂结合并且以可摄取的片剂、口含片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、干胶片等形式使用。这种组合物和制剂应含有至少0.1％的活性化合物。当然该组合物和制剂的百分比可以变化并且方便地在给定单位剂型重量的约2％至约60％之间。在这种治疗有用的组合物中的活性化合物的量使得将获得有效的剂量水平。
[0495]
片剂、锭剂、丸剂、胶囊等也可含有以下：粘合剂，例如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，例如磷酸二钙；崩解剂，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸等；润滑剂，例如
硬脂酸镁；并且可以加入甜味剂例如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜，或调味剂例如薄荷、冬青油、或樱桃调味剂。当单位剂型为胶囊时，除了上述类型的材料外，它可以含有液体载体，例如植物油或聚乙二醇。各种其它材料可以作为包衣存在或以固体单位剂型的其它改变的外观方式存在。例如，片剂、丸剂或胶囊可以涂有明胶、蜡、虫胶或糖等。糖浆或酏剂可以含有活性化合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和调味剂(例如樱桃调味剂或橙调味剂)。用于制备任何单位剂型的材料应当是药学上可接受的且所用的量基本上是无毒的。此外，活性化合物可被掺入到缓释制剂和装置中。
[0496]
本文所述的活性化合物也可以静脉内施用或通过输注或注射腹膜内施用。活性化合物或其盐的溶液可在水中制备，可选地与无毒表面活性剂混合。分散剂也可以在甘油、液体聚乙二醇、三醋精及它们的混合物并且在油中制备。在常规的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。
[0497]
适于注射或输注的药物剂型可以包括含有活性成分的无菌水溶液或分散液或者无菌粉剂，这些药物剂型适于无菌注射或输注溶液或分散液的临时制备，可选地包封在脂质体中。在所有情况下，最终的剂型应该是无菌的、液体的且在制造和储存的条件下是稳定的。液体载体或媒介物可以是溶剂或液体分散介质，包括例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒的甘油酯以及它们的合适的混合物。适当的流动性可以通过例如脂质体的形成、在分散的情况下所需的颗粒尺寸的维持或通过使用表面活性剂来保持。预防微生物的作用可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂来实现，抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在许多情况下，将优选包括等渗剂，例如糖、缓冲剂或氯化钠。可注射的组合物的延长吸收可以通过使用延迟吸收剂的组合物(例如单硬脂酸铝和明胶)来实现。
[0498]
无菌可注射的溶液通过在合适的溶剂中掺入所需量的活性化合物来制备，如需要则将一些上面列举的其它成分掺入至该溶剂中，随后过滤灭菌。对于用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末而言，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其产生活性成分的粉末加上存在于之前无菌过滤溶液中的任何附加的所期望的成分。
[0499]
对于局部施用，本化合物可以以纯的形式(即当它们是液体时)被涂覆。然而，通常将期望它们与皮肤病学上可接受的载体结合作为组合物或制剂对皮肤施用，其可以是固体或液体。
[0500]
有用的固体载体包括极细散的固体，例如滑石、粘土、微晶纤维素、硅石、氧化铝等。有用的液体载体包括水、醇或乙二醇或水
‑
醇/乙二醇共混物，本化合物可以以有效量可选地借助无毒表面活性剂溶解或分散在其中。可加入如香料的佐剂和附加的抗微生物剂以优化给定用途的性质。所得的液体组合物可以应用于吸收垫、用于浸渍绷带和其它敷料、或使用泵型喷雾器或气溶胶喷雾器喷洒到患处。
[0501]
例如合成的聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物材料的增稠剂也可与液体载体一起使用以形成可涂抹的糊剂、凝胶、软膏、肥皂等，用于直接涂覆到使用者的皮肤上。
[0502]
本领域已知的有用的皮肤病学组合物的例子，该组合物可用于本文所述的化合物或其药学上可接受的盐递送到皮肤上；例如，参见jacquet等(美国专利号4608392)、geria
(美国专利号4992478)、smith等(美国专利号4559157)和wortzman(美国专利号4820508)。
[0503]
本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的有用的剂量可通过在动物模型中比较它们的体外活性和体内活性来确定。本领域已知在鼠和其它动物内的有效剂量到人类的外推方法；例如，参见美国专利号4938949。
[0504]
通常，本文所述的化合物或其药学上可接受的盐在液体组合物(例如洗液)中的浓度将为约0.01wt％(重量％)、约0.1wt％、约1.0wt％、约2.0wt％、约3.0wt％、约4.0wt％、约5.0wt％、约10.0wt％、约25.0wt％、或在包括这些值中的任何两个之间的范围内。在半固体或固体组合物(例如凝胶或粉末)中的浓度将为约0.01wt％、约0.1wt％、约1.0wt％、约2.0wt％、约3.0wt％、约4.0wt％、约5.0wt％、约10.0wt％、约25.0wt％、或在包括这些值中的任何两个之间的范围内。
[0505]
在治疗中需使用的化合物或活性盐或衍生物的量，将不仅随选择的具体盐而变化，也随施用途径、待治疗的病症的性质和患者年龄和状况而变化，该量将最终由护理医师或临床医师来判断。然而，通常合适的剂量将在约1.0mg/kg至约200mg/kg的范围内，例如每天约1mg/kg体重至约100mg/kg体重，例如每天约2.0mg/kg体重至约100mg/kg体重，例如每天约3.0mg至约50mg每千克接受者的体重，或在约5mg/kg/天至20mg/kg/天的范围内。可替选地，该组合物可以每周连续五天停止两天施用五次，或每周连续四天停止三天或每隔一天施用四次。
[0506]
本领域已知在鼠和其它动物内的有效剂量到人类的外推方法(例如，参见美国专利号4938949)。例如，在一些实施方式案中，本文所述的化合物或其药学上可接受的盐(例如用于治疗结肠癌症和/或卵巢癌症的那些)可以施用的剂量水平每天约0.01mg/kg对象体重至约300mg/kg对象体重、约0.1mg/kg对象体重至约250mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约200mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约150mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约100mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约90mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约80mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约70mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约60mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约50mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约40mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约30mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约20mg/kg对象体重、约5mg/kg对象体重至约100mg/kg对象体重、约5mg/kg对象体重至约90mg/kg对象体重、约5mg/kg对象体重至约80mg/kg对象体重、约5mg/kg对象体重至约70mg/kg对象体重、约5mg/kg对象体重至约60mg/kg对象体重、约5mg/kg对象体重至约50mg/kg对象体重、约5mg/kg对象体重至约40mg/kg对象体重、约5mg/kg对象体重至约30mg/kg对象体重、约5mg/kg对象体重至约20mg/kg对象体重、约10mg/kg对象体重至约100mg/kg对象体重、约10mg/kg对象体重至约90mg/kg对象体重、约10mg/kg对象体重至约80mg/kg对象体重、约10mg/kg对象体重至约70mg/kg对象体重、约10mg/kg对象体重至约60mg/kg对象体重、约10mg/kg对象体重至约50mg/kg对象体重、约10mg/kg对象体重至约40mg/kg对象体重、约10mg/kg对象体重至约30mg/kg对象体重、约10mg/kg对象体重至约20mg/kg对象体重、约20mg/kg对象体重至约100mg/kg对象体重、约20mg/kg对象体重至约90mg/kg对象体重、约20mg/kg对象体重至约80mg/kg对象体重、约20mg/kg对象体重至约70mg/kg对象体重、约20mg/kg对象体重至约60mg/kg对象体重、约20mg/kg对象体重至约50mg/kg对象体重、约20mg/kg对象体重至约40mg/kg对象体重、约20mg/kg对象体重至约30mg/kg对象体重，每天一次或多次以获得所需
的治疗效果。在一些实施方式中，化合物可以施用的剂量约1mg/kg体重或更多、5mg/kg体重或更多；10mg/kg体重或更多、15mg/kg体重或更多、20mg/kg体重或更多、25mg/kg体重或更多、30mg/kg体重或更多、35mg/kg体重或更多、40mg/kg体重或更多、45mg/kg体重或更多、50mg/kg体重或更多、60mg/kg体重或更多、70mg/kg体重或更多。还将理解小于0.01mg/kg或大于70mg/kg(例如70
‑
200mg/kg)的剂量可以被施用至对象。
[0507]
在一些实施方式中，本文所述的化合物可在化疗中使用(即，抑制转移)，并且可以以更高的剂量施用。例如，在化疗中使用的化合物可以每天被施用约100mg/kg对象体重至约300mg/kg对象体重、约120mg/kg对象体重至约280mg/kg对象体重、约140mg/kg对象体重至约260mg/kg对象体重、约150mg/kg对象体重至约250mg/kg对象体重、约160mg/kg对象体重至约240mg/kg对象体重，每天一次或多次，以获得所需的治疗效果。
[0508]
在某些其它实施方式中，本文所述的化合物可在支持疗法中使用(例如，作为对在常见类型的肿瘤的范围内的外科手术或辐射的佐剂)，并且可以以较低的剂量施用。例如，在支持疗法中使用的化合物可以每天被施用约1mg/kg对象体重至约30mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约25mg/kg对象体重、约5mg/kg对象体重至约20mg/kg对象体重，每天一次或多次，以获得所需的治疗效果。
[0509]
在某些其它实施方式中，本文所述的化合物可用于治疗转移癌症(例如，卵巢癌症和/或结肠癌症)，并且可以以中间剂量施用。例如，用在支持疗法中的化合物可以每天被施用约1mg/kg对象体重至约100mg/kg对象体重、约1mg/kg对象体重至约80mg/kg对象体重、约5mg/kg对象体重至约70mg/kg对象体重、约10mg/kg对象体重至约70mg/kg对象体重、约10mg/kg对象体重至约60mg/kg对象体重、约20mg/kg对象体重至约70mg/kg对象体重、约20mg/kg对象体重至约60对象体重，每天一次或多次，以获得所需的治疗效果。
[0510]
该化合物可以方便地以单位剂型施用；例如，每单位剂型含有45mg至3000mg活性成分、方便地90mg至2250mg活性成分、最方便地450mg至1500mg活性成分。在一些实施方式中，该化合物以约1mg/kg至约100mg/kg的剂量被施用。
[0511]
理想地，活性成分应被施用达到约0.5nm至约10μμ、或约1nm至1μμ，或约10nm至约0.5μμ的活性化合物的峰值血药浓度。这可以通过例如静脉内注射0.05％至5％的活性成分的溶液(可选在盐水中)，或口服施用含有约20
‑
2000mg活性成分的丸剂来实现。期望的血液水平可通过连续输注提供的约0.2mg/kg/hr至1.0mg/kg/hr来维持，或通过间歇输注含有约0.4mg/kg至20mg/kg的活性成分来维持。所期望的剂量可以方便地以单一剂量提供或作为以适当的间隔施用的分剂量提供，分剂量例如每天两个、三个、四个或更多个子剂量。子剂量本身可以进一步划分成例如多个离散的松散间隔的施用；例如从吹入器多次吸入或通过多滴施用进入眼睛。
[0512]
本文所述的化合物或其药学上可接受的盐用作治疗剂施用来用于抑制细胞迁移和治疗转移癌症。这种癌症包括但不限于，例如涉及动物的头、颈、肺、间皮瘤、纵隔膜、食道、胃、胰腺、肝胆系统、小肠、结肠、结肠直肠、直肠、肛门、肾、输尿管、膀胱、前列腺、尿道、阴茎、睾丸、妇科器官、卵巢、乳腺、内分泌系统、皮肤或中枢神经系统的癌症。因此，例如癌症可以是乳腺癌症、白血病、肺癌症、结肠癌症、中枢神经系统癌症、黑色素瘤、卵巢癌症、肾癌症或前列腺癌症。
[0513]
此外，本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，如本文所描述的示例性的盐，可
以用作药理学工具来用于进一步调查细胞迁移的抑制。
[0514]
本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，也可与其它治疗剂结合施用，这对于治疗或控制癌细胞或肿瘤细胞的扩散是有效的。
[0515]
此外，本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，可以在适当的动物模型中进行测试。例如，本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，可在患有已知肿瘤的动物内，或已被注射肿瘤细胞至局部区域的动物内进行试验。随时间形成继发肿瘤的程度或数量是转移的量度，相对于具有原发肿瘤但没有接受测试化合物的对照动物，可以评价化合物抑制这种转移的能力。
[0516]
本文所述的化合物或其药学上可接受的盐，也将发现用于治疗脑障碍(kraft等，j.neurosci.2006年8月23日；26(34)：第8734
‑
47页)；霍奇金病(pinkus等，am j pathol.1997年2月；150(2)：第543
‑
62页)；病毒感染(mosialos等，am j pathol.1996年2月；148(2)：第593
‑
600页)；神经元变性(fulga等，nat cell biol.2007年2月：9(2)：第139
‑
48页)；淋巴增生(said等，mod pathol.1997年5月；10(5)：第421
‑
7页)；和局部缺血(meller等，j neurosci.2008年1月2日；28(1)：第50
‑
9页)。
[0517]
通常的合成方法
[0518]
本文所述的化合物是市售的，或者可以从容易获得的起始材料使用下列通常的方法和过程来制备。应该理解，其中给出了典型或优选的工艺条件(即反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)，除非另有说明，也可使用其它工艺条件。最佳反应条件可随特定的反应物或使用的溶剂而变化，但这种条件可以由本领域技术人员通过常规最优化过程来确定。
[0519]
此外，对于本领域技术人员显而易见地是，为防止某些官能团发生不期望的反应常规的保护基团是必要的。本领域公知，用于各种官能团的合适的保护基团以及用于保护和脱保护特定官能团的合适的条件。例如，在t.w.greene和g.m.wuts，protecting groups in organic synthesis，第三版，wiley，纽约，1999年，以及其引用的参考文献中描述了许多保护基团。
[0520]
另外，本文所述的化合物可含有一个或多个手性中心。因此，如果需要，则这种化合物可制备或分离成纯的立体异构体，即作为单独的对映异构体或非对映体、或作为立体异构体富集的混合物。除非另有说明，否则所有这些立体异构体(和富集混合物)均包括在本发明的范围之内。可使用例如本领域公知的光学活性的起始材料或立体选择性试剂来制备纯的立体异构体(或富集混合物)。可替选地，可以使用例如手性柱色谱法、手性拆分剂等将这种化合物的外消旋混合物进行分离。
[0521]
用于下面反应的起始材料通常是已知化合物，或者可以通过已知的过程或其明显的修饰来制备。例如，许多起始材料可从商业供应商来购买，该供应商例如aldrich化学公司(密尔沃基，威斯康星州，美国)、bachem(托兰斯，加利福尼亚州，美国)、emka
‑
chemce或sigma(圣路易斯，密苏里州，美国)。其它的可以通过在标准的参考文献中的过程或其明显的修改来制备，该参考文献例如fieser and fieser's reagents for organic synthesis，1
‑
15卷(john wiley和sons，1991年)、rodd's chemistry of carbon compounds，1
‑
5卷和增补(elsevier science出版社，1989年)、organic reactions，1
‑
40卷(john wiley和sons，1991年)、march's advanced organic chemistry(john wiley和
sons，第4版)和larock'scomprehensive organic transformations(vch出版公司，1989年)。
[0522]
各种起始材料、中间体和本文所述的化合物可以适当使用例如沉淀、过滤、结晶、蒸发、蒸馏和色谱法的常规技术来分离和纯化。可以使用例如熔点、质谱、核磁共振以及各种其它光谱分析的常规方法来进行这些化合物的表征。
[0523]
方案1
‑
7示出用于制备本文所述的化合物的示例性的方法。
[0524]
在方案1中，化合物1
‑
1(其中lg为离去基团，例如oh、氟基、氯基、溴基、碘基、甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯等)和r1‑
oh、r1‑
sh或r1‑
hnr8反应形成化合物1
‑
2，其中l1分别为
‑
o
‑
、
‑
s
‑
或
‑
nr8‑
。例如，在mitsunobu反应条件下，化合物1
‑
1(其中lg为oh)在偶氮二甲酸二乙酯(dead)和三苯基膦的存在下反应形成化合物1
‑
2。可替选地，在化合物1
‑
1中lg为氢且y3为氮，该化合物1
‑
1与r1‑
l1‑
lg2(其中lg2为离去基团，例如卤素)反应形成化合物1
‑
2，其中l1为式i
‑
a中所限定，例如l1为
‑
c(r8)2‑
。
[0525]
方案1
[0526]
[0527]
在催化剂(例如pd)的存在下，化合物1
‑
2利用还原剂(例如h2)被还原成化合物1
‑
3。在一些实施方式中，在偶联条件下(例如使用酰胺偶联试剂)化合物1
‑
3与羧酸化合物r5co2h反应形成式i
‑
a的化合物，其中r为l2‑
r5且l2为
‑
nhc(o)
‑
。在一些实施方式中，化合物1
‑
3可以与磺酰氯化合物r5so2c1反应形成式i
‑
a的化合物，其中r为l2‑
r5且l2为
‑
nhs(o)2‑
。在一些实施方式中，化合物1
‑
3和亚硝酸钠以及亲核试剂z
‑
m

(其中z
‑
为亲核体，例如碘化物、溴化物、氯化物、氟化物、氰化物、羧基，且m

为抗衡离子，例如铜、钠等)反应形成由化合物1
‑
4表示的各种中间体。化合物1
‑
4可进行各种转化以提供式i
‑
a的化合物的实施方式。例如，当z为碘基、溴基或氯基时，化合物1
‑
4可与另一种碘基化合物、溴基化合物或氯基化合物或具有硼酸官能度的化合物进行多种交叉偶联反应形成式i
‑
a的化合物，其中r为l2‑
r5且l2为共价键。优选地，这种反应在使用催化剂(例如cui或钯催化剂)的催化条件下进行。可替选地，当z为羧基时，化合物1
‑
4可以与胺r5‑
nhr8反应形成式i
‑
a的化合物，其中r为l2‑
r5且l2为
‑
c(o)n(r8)
‑
。还可替选地，化合物1
‑
3与亚硝酸钠以及二氧化硫和氯化铜(i)反应形成磺酰氯化合物(z为so2cl)，该磺酰氯化合物可以与胺r5‑
nhr8反应形成式i
‑
a的化合物，其中r为l2‑
r5且l2为
‑
s(o)2n(r8)
‑
。在方案1中，q1、q2、r1、r4、r5、x1、y1、y2、y3、y5、y6、s和t如式i
‑
a中所限定。
[0528]
酰胺偶联试剂是本领域已知的，可以包括但不限于基于铵(amininum)和鏻的试剂。铵盐包括n
‑
[(二甲基氨基)
‑
1h
‑
1,2,3
‑
三唑并[4,5
‑
b]吡啶
‑1‑
基亚甲基]
‑
n
‑
甲基甲铵六氟磷酸n
‑
氧化物(hatu)、n
‑
[(1h
‑
苯并三唑
‑1‑
基)(二甲基氨基)亚甲基]
‑
n
‑
甲基甲铵六氟磷酸n
‑
氧化物(hbtu)、n
‑
[(1h
‑6‑
氯苯并三唑
‑1‑
基)(二甲基氨基)亚甲基]
‑
n
‑
甲基甲铵六氟磷酸n
‑
氧化物(hctu)、n
‑
[(1h
‑
苯并三唑
‑1‑
基)(二甲基氨基)亚甲基]
‑
n
‑
甲基甲铵四氟硼酸n
‑
氧化物(tbtu)和n
‑
[(1h
‑6‑
氯苯并三唑
‑1‑
基)(二甲基氨基)亚甲基]
‑
n
‑
甲基甲铵四氟硼酸n
‑
氧化物(tctu)。鏻盐包括7
‑
氮杂苯并三唑
‑1‑
基
‑
n
‑
氧
‑
三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐(pyaop)和苯并三唑
‑1‑
基
‑
n
‑
氧
‑
三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐(pybop)。酰胺形成步骤可在极性溶剂(例如二甲基甲酰胺(dmf))中进行，并且还可以包括有机碱(例如二异丙基乙胺(diea)或二甲基氨基吡啶(dmap))。
[0529]
交叉偶联反应是本领域公知的，例如在anna roglans等diazonium salts as substrates in palladium
‑
catalyzed cross
‑
coupling reactions，chem.rev.，2006年，106(11)：第4622
‑
4643页；brad m.rosen等，nickel
‑
catalyzed cross
‑
couplings involving carbon
‑
oxygen bonds，percec chem.rev.，2011年，111(3)：第1346
‑
1416页；jean
‑
pierre corbet等，selected patented cross
‑
coupling reaction technologies，chem.rev.，2006年，106(7)：第2651
‑
2710页；gwilherm evano等，copper
‑
mediated coupling reactions and their applications in natural products and designed biomolecules synthesis，chem.rev.，2008年，108(8)：第3054
‑
3131页；benny bogoslavsky等，formation of a carbon
‑
carbon triple bond by coupling reactions in aqueous solution，science 308(5719)：第234
‑
235页(2005年)；和m.lafrance等，catalytic intermolecular direct arylation of perfluorobenzenes,j.am.chem.soc.128(27)：第8754
‑
8756页(2006年)；norio miyaura等，“a new stereospecific cross
‑
coupling by the palladium
‑
catalyzed reaction of 1
‑
alkenylboranes with 1
‑
alkenyl or 1
‑
alkynyl halides，”tetrahedron letters，1979
年，20(36)：第3437
‑
3440页；p.e.fanta，“the ullmann synthesis of biaryls”，synthesis，1974年，1974：第9
‑
21页；m.gomberg和w.e.bachmann,j.am.chem.soc，1924年，42(10)：第2339
‑
2343页；r.j.p.corriu和masse，j.p.“activation of grignard reagents by transition
‑
metal complexes.a new and simple synthesis of trans
‑
stilbenes and polyphenyls”，journal of the chemical society，chemical communications，1972年，(3)：144a中报道。
[0530]
方案2
[0531][0532]
在方案2中，化合物2
‑
1(其中lg为离去基团，例如oh、氟基、氯基、溴基、碘基、甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯等，r
p
为氢或羧基保护基团，例如低级烷基或苄基)和r1‑
oh、r1‑
sh或r1‑
hnr8反应形成化合物2
‑
2。例如，在mitsunobu反应条件下，化合物2
‑
1(其中lg为oh)在偶氮二甲酸二乙酯(dead)和三苯基膦的存在下反应形成化合物2
‑
2。当r
p
为羧基保护基团时，化合物2
‑
2可以脱保护形成化合物2
‑
3。在偶联条件下(例如使用酰胺偶联试剂)，化合物2
‑
2或化合物2
‑
3可以与可选地被取代的苯胺反应形成式i
‑
c的化合物，其中l2为
‑
c(o)nr8‑
。在方案2中，r1、r2、r3、l1、x1、m和n如式i
‑
c中所限定。
[0533]
方案3
[0534][0535]
在方案3中，化合物3
‑
1(其中lg为离去基团，例如oh、氟基、氯基、溴基、碘基、甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯等)和r1‑
oh、r1‑
sh或r1‑
hnr8反应形成化合物3
‑
2，在催化剂(例如pd)的存在下，化合物3
‑
2通过还原剂(例如h2)还原成化合物3
‑
3。例如，在mitsunobu反应条件下化合物3
‑
1(其中lg为oh)在偶氮二甲酸二乙酯(dead)和三苯基膦的存在下反应形成化合物3
‑
2。然后在偶联条件下(例如使用酰胺偶联试剂)化合物3
‑
3和可选地被取代的苯甲酸反应形成式i
‑
c的化合物，其中l2为
‑
nhc(o)
‑
。可替选地，化合物3
‑
3可以与可选地被取代的苯磺酰氯反应形成式i
‑
c的化合物，其中l2为
‑
nhs(o)2‑
。在方案3中，r1、r2、r3、l1、x1、m和n如式i
‑
c中所限定。
[0536]
式i
‑
c的化合物可以具有式i
‑
d的结构的互变异构体，其中，l3为＝nc(o)
‑
或＝nso2‑
且x2为o、s或nr8。
[0537]
方案4
[0538][0539]
在方案4中，化合物4
‑
1，pr为氨基保护基团，例如叔丁氧基羰基、苄氧基羰基或羧基苄基，z1和z2为适于交叉偶联反应的基团，例如碘基、溴基、氯基、甲苯磺酸酯、硼酸等。其它变量如式ii中所限定。z1和z2可以是相同的或不同的。当z1和z2相同时，化合物4
‑
2(其中r
21
和r
22
相同)可以通过一步交叉偶联反应和至少两当量的式r
21
z3的化合物反应来制备，其中z3是在交叉偶联反应中可以与z1和z2反应的基团。可替选地，z1和z2是不同的，化合物4
‑
2(其中r
21
和r
22
不同)可以使用选择性地偶联r
21
和r
22
中的第一个的条件通过第一交叉偶联反应，然后通过偶联r
21
和r
22
中的第二个的第二交叉偶联反应来制备。化合物4
‑
2的氨基保护
基团可以在本领域已知的条件下进行脱保护，以提供式ii的化合物，在式ii中为单键且r
24
为氢，可以存在其互变异构体，其中为双键且r
24
不存在，或者可以和低级卤代烷基烷基化形成式ii的化合物，其中为单键且r
24
为低级烷基。
[0540]
方案5
[0541][0542]
在方案5中，在偶联条件下(例如使用酰胺偶联试剂)化合物5
‑
1与r
30
‑
co2h反应形成式iii的化合物，其中x
30
为c(＝o)。可替选地，在mitsunobu反应条件下化合物5
‑
1在偶氮二甲酸二乙酯(dead)和三苯基膦的存在下反应形成式iii的化合物。可替选地，化合物5
‑
1与r
30
‑
coc1或r
30
‑
so2cl在碱性条件(例如使用有机碱，有机碱例如三乙胺、二异丙基乙胺或吡啶)下反应形成式iii的化合物，其中x
30
为c(＝o)或so2。在方案5中的变量如式iii所限定。
[0543]
方案6
[0544][0545]
在方案6中，化合物6
‑
1(其中lg为离去基团，例如甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯等)和r1‑
oh、r1‑
sh或r1‑
hnr8反应形成化合物6
‑
2，其中l1分别为
‑
o
‑
、
‑
s
‑
或
‑
nr8‑
。可替选地，在mitsunobu反应条件下化合物6
‑
1在偶氮二甲酸二乙酯(dead)和三苯基膦的存在下反应形成化合物6
‑
2。可替选地，lg为氢且化合物6
‑
1与r1‑
l1‑
lg2(其中lg2为离去基团，例如卤基)反应形成化合物6
‑
2，其中l1如式i
‑
a中所限定，例如l1为
‑
c(r8)2‑
。
[0546]
在催化剂(例如pd)的存在下，化合物6
‑
2通过还原剂(例如h2)还原成化合物6
‑
3。在一些实施方式中，在偶联条件下(例如使用酰胺偶联试剂)化合物6
‑
3与羧酸化合物r5co2h
反应形成形成式i
‑
j的化合物，其中r为l2‑
r5且l2为
‑
nhc(o)
‑
。在一些实施方式中，化合物6
‑
3可以与磺酰氯化合物r5so2c1反应形成式i
‑
j的化合物，其中r为l2‑
r5且l2为
‑
nhs(o)2‑
。在一些实施方式中，化合物6
‑
3和亚硝酸钠以及亲核试剂z
‑
m

(其中z
‑
为亲核体，例如碘化物、溴化物、氯化物、氟化物、氰化物、羧基，且m

为抗衡离子，例如铜、钠等)反应形成由化合物6
‑
4表示的各种中间体。化合物6
‑
4可进行各种转化以提供式i
‑
j的化合物的实施方式。例如，当z为碘基、溴基或氯基时，化合物6
‑
4可与另一种碘基化合物、溴基化合物或氯基化合物或具有硼酸官能度的化合物进行多种交叉偶联反应形成式i
‑
j的化合物，其中r为l2‑
r5且l2为共价键。优选地，这种反应在使用催化剂(例如cui或钯催化剂)的催化条件下进行。可替选地，当z为羧基时，化合物6
‑
4可以与胺r5‑
nhr8反应形成式i
‑
j的化合物，其中r为l2‑
r5且l2为
‑
c(o)n(r8)
‑
。还可替选地，化合物6
‑
3与亚硝酸钠以及二氧化硫和氯化铜(i)反应形成磺酰氯化合物(z为so2cl)，该磺酰氯化合物可以与胺r5‑
nhr8反应形成式i
‑
j的化合物，其中r为l2‑
r5且l2为
‑
s(o)2n(r8)
‑
。在方案6中，r1、l1、r5和l2如式i
‑
a中所限定。
[0547]
方案7
[0548][0549]
在方案7中，化合物7
‑
1(pr为氨基保护基团，例如叔丁氧基羰基、苄氧基羰基或羧基苄基，lg为离去基团，例如甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯等)和r1‑
oh、r1‑
sh或r1‑
hnr8反应形成化合物7
‑
2，其中l1分别为
‑
o
‑
、
‑
s
‑
或
‑
nr8‑
。可替选地，在mitsunobu反应条件下化合物7
‑
1在偶氮二甲酸二乙酯(dead)和三苯基膦的存在下反应形成的化合物7
‑
2。可替选地，lg为氢且化合物7
‑
1与r1‑
l1‑
lg2(其中lg2为离去基团，例如卤基)反应形成化合物7
‑
2，其中l1如式i
‑
a中所限定，例如l1为
‑
c(r8)2‑
。
[0550]
化合物7
‑
2可以和被取代的低级卤代烷基烷基化形成式i
‑
i的化合物，例如式i
‑
n，其中l2和r5如式i
‑
a中所限定。
[0551]
在本说明书中提到的所有的出版物、专利申请、授权专利以及其它文件通过引用并入本文，如果每个单独的出版物、专利申请、授权专利或其它文件被具体地且单独地指明，则通过引用其全部内容并入。包含在通过引用并入文中的定义就本公开中它们相矛盾定义的意义上被排除。
[0552]
因此通常描述的本技术通过参考下面的实施例将会更容易地被理解，其通过说明的方式提供，并不意欲限定本技术。
[0553]
实施例
[0554]
实施例1：高通量肌成束蛋白抑制测定
[0555]
开发高通量测定以筛选肌成束蛋白的特异性抑制剂。将具有或不具有肌成束蛋白的纯化聚合的f
‑
肌动蛋白混合并培养，以使肌动蛋白集束形成。然后将f
‑
肌动蛋白聚合物结合到聚
‑
d
‑
赖氨酸覆盖的板上。在充分(extensive)洗涤之后，f
‑
肌动蛋白聚合物通过使用alexa fluor 488鬼笔环肽标记而使它们可视化。从每个孔采集四个图像，并且对每个测
试的化合物分析平均纤维长度。如下所示，存在肌成束蛋白时，肌动蛋白纤维更长且更厚。30μμ的2
‑
氯
‑
n
‑
(6
‑
氯苯并[d]噻唑
‑2‑
基)
‑5‑
硝基苯磺酰胺(化合物3)抑制纤维的生长。
[0556][0557]
根据对～150000种小分子化合物的初级筛选，当与不存在小分子化合物的那些比较时，确定～700种化合物导致较短的和较薄的肌动蛋白集束。
[0558]
对来自这些～700种化合物筛选的图像进行单独检查，以确保它们看起来像仅对照组的肌动蛋白的那些图像一样。在第二次和第三次确定性筛选之后，其中肌肉肌动蛋白和非肌肉肌动蛋白被测试，证实145种小分子化合物抑制肌成束蛋白的肌动蛋白集束功能。建立这些145种化合物的剂量
‑
反应曲线。
[0559]
实施例2：人肌成束蛋白
‑
1的表达和纯化
[0560]
重组人肌成束蛋白1在bl21大肠杆菌中表达为gst融合蛋白。一升具有氨苄青霉素的2yt培养基用3ml的使用pgex4t
‑
肌成束蛋白1质粒转化的bl21/de3培养物进行接种过夜并在37℃下生长，直到在600nm(d
600
)处衰减率达到约0.8。然后将培养物转移到18℃下并通过加入0.1mm的异丙基β
‑
d
‑
硫代半乳糖苷(iptg)进行诱导12小时。在5000r.p.m下离心分离收集细菌10分钟。将颗粒状物(pellet)悬浮在补充有0.2mm的pmsf、1mm的dtt、1％(v/v)的triton x
‑
100和1mm的edta的30ml的pbs中。在超声处理后，将悬浮液在15000r.p.m下离心30分钟以除去细胞碎片。然后将上清液用4ml的谷胱甘肽珠(sigma)在4℃下培养2小时。在用pbs充分洗涤后，将该珠重新悬浮在10ml的凝血酶裂解缓冲液(20mm的tris
‑
hcl ph 8.0、150mm的nacl、2mm的cacl2、1mm的dtt)中。用40
‑
100u的凝血酶在4℃下培养过夜将肌成束蛋白从珠中释放。在离心分离后，将0.2mm的pmsf加入到上清液中，以钝化残余的凝血酶活性。将肌成束蛋白用(boca raton，佛罗里达州)过滤器进一步浓缩至约50mg/ml。
[0561]
实施例3：肌成束蛋白的表达水平的定量
[0562]
肌成束蛋白mrna水平和蛋白质水平可分别通过实时pcr和western印迹来确定。对于定量实时pcr，来自癌症患者的样品被用于rna分离。对肌成束蛋白的mrna特异性的寡核苷酸引物被用于pcr反应。对于western印迹，来自癌症患者的样品用抗肌成束蛋白的抗体来评价。表示肌成束蛋白的带的强度通过图像文件编制(documentation)和量化软件来定量。
[0563]
实施例4：化学库筛选和分析
[0564]
对约150000种化合物进行了筛选。这些化学化合物分别来自lopac 1280收集、prestwick化学库、pharmakon收集、microsource光谱收集、生命化学库、greenpharma天然化合物库、enamine库、chembridge库、chem
‑
x
‑
infinity库和biofocus dpi库。使用thermo multidrop combi(fisher)将在缓冲液(100mm的kcl、20mm的tris/hcl、ph为7.5、2mm的mgcl2)中的纯化的肌成束蛋白(15μl、0.5μμ)加入到透明384
‑
孔平底板(corning)的每个孔中。将来自各种化学库的化合物溶液(180nl)(5mm原液(stock))从原液384
‑
孔板用针转
移到384
‑
孔测定板，并培养30分钟。然后加入15μl的0.5μμ聚合肌动蛋白(在100mm的kcl、20mm的tris/hcl、ph为7.5、2mm的mgcl2、1mm的dtt、1mm的atp中)(cytoskeleton公司)，从而得到化学化合物的30μμ最终浓度。在又一30分钟之后，加入10μl的alexa fluro 488鬼笔环肽(以100％甲醇稀释原液25倍，invitrogen)以染色f
‑
肌动蛋白，并在暗处培养一小时。然后将混合的溶液(25μl)转移到涂覆有聚
‑
d
‑
赖氨酸的黑色384
‑
孔板的一个孔中且染色，肌动蛋白集束或f
‑
肌动蛋白会粘到聚
‑
d
‑
赖氨酸板上。在将板用1
×
pbs充分洗涤3次之后，使用imagexpress微高通量筛分系统(分子装置)将板成像。并使用metamorph软件对图像进行处理和分析。对于每个孔的原始图像数据通过减去在板上所有孔的平均强度进行背景校正。背景校正后的数据被用于计算每个孔的集束长度。阴性对照孔用于质量对照：多个仅dmso的对照孔(16孔/板)存在于每个测定板上。在每个板上具有最短集束长度的前十种化合物被选择用于后续的验证筛选。在验证筛选中，将～700种化合物一式两份进行测试。具有确认反应的一百四十五种化合物被挑选且继续ic
50
研究。
[0565]
在所选择的化合物的验证筛选中，另一种肌动蛋白集束蛋白质(丝束蛋白)作为对照，该对照用来消除对肌成束蛋白没有特异性的化合物。此外，在验证筛选中，将每个化合物一式两份在同一平板上进行测试。
[0566]
测试化合物的浓度在某些测定中变化。
[0567]
在下表1中示出了式i
‑
a、式i
‑
b、式ii或式iii的某些化合物以及它们的ic
50
。
[0568]
表1.肌成束蛋白活性的抑制
[0569]
[0570]
[0571]
[0572]
[0573]
[0574][0575]
基于它们在体外肌成束蛋白抑制活性，上述化合物被预期用于治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或障碍。
[0576]
实施例5：boyden
‑
室细胞迁移测定
[0577]
由于肌成束蛋白是肿瘤细胞迁移的关键，故肌成束蛋白的抑制剂应该阻止肿瘤细胞的迁移。代表性的化合物选自上述鉴定的肌成束蛋白抑制剂，以测试它们抑制肿瘤细胞迁移的能力(见表2)。对细胞迁移的boyden室测定已示出了这些化合物抑制乳腺肿瘤细胞、前列腺肿瘤细胞以及肺肿瘤细胞的迁移。因此，具有肌成束蛋白表达的肿瘤细胞对这些肌成束蛋白抑制剂敏感。以下列出所使用的细胞系。
[0578]
4t1乳腺肿瘤细胞mda
‑
mb
‑
231乳腺肿瘤细胞du145前列腺肿瘤细胞pc
‑
3前列腺肿瘤细胞llc肺肿瘤细胞
[0579]
示例性的过程：将悬浮在100μl饥饿培养基中的mda
‑
mb
‑
231细胞(5
×
104)或4t1细胞(1
×
l05)加入到插入物(6.5mm直径、8μm孔径尺寸；becton dickson)的上室，并且将插入物置于含有700μl饥饿培养基(具有或不具有10％的fbs)的24
‑
孔板中。当使用时，将抑制剂加入到下室。进行6小时迁移测定，并且用3.7％甲醛将细胞固定。用结晶紫染色溶液将细胞染色，并用棉签去除插入物上侧的细胞。对插入物下侧的三个随机选择的视野(
×
10物镜)进行拍照，并对迁移的细胞进行计数。在视野中迁移被表示为迁移细胞的平均数。
[0580]
表2.抑制肌成束蛋白的活性和肿瘤细胞迁移
[0581]
[0582]
[0583][0584]
统计分析：数据被表示为平均值
±
标准差，并通过限定为p<0.05的显著性的学生t(student’s t)检验进行分析。
[0585]
以上所示的化合物代表抑制肿瘤细胞迁移的那些化合物。在这种测定中获得的体外数据与从体内模型获得结果的关联是已知的。参见，例如shan，d等，synthetic analogues of migrastatin that inhibit mammary tumor metastasis in mice,proc.nat.acad.sci.102：第3772
‑
3776页(2005年)。基于它们的体外细胞迁移抑制活性，以及与体内活性的已知关联，可将该化合物预期用于治疗由肌成束蛋白的活性和/或肿瘤转移介导的病症或障碍。
[0586]
实施例6：在鼠模型中的肿瘤转移
[0587]
肿瘤细胞迁移对肿瘤转移是必不可少的。在表1中示出的两种代表性的化合物，2
‑
氯
‑
n
‑
(6
‑
氯苯并[d]噻唑
‑2‑
基)
‑5‑
硝基苯磺酰胺(化合物3)和n
‑
(3
‑
(1h
‑
1,2,4
‑
三唑
‑3‑
基硫代)
‑4‑
羟基萘
‑1‑
基)
‑4‑
甲氧基苯磺酰胺(化合物10)被选择以研究它们在动物模型中对肿瘤转移的影响。将肿瘤细胞(4t1乳腺肿瘤细胞)注射到鼠的乳腺脂肪垫。这些乳腺肿瘤细胞从乳腺至肺的转移通过克隆测定来监测。如图1所示，这两种代表性的肌成束蛋白抑制剂(化合物3和化合物10)减少了在鼠模型中的肿瘤转移。
[0588]
从charles river购买balb/c鼠。所有动物的过程被威尔康乃尔医学院的动物护理和使用委员会(animal care and use committees of the weill cornell medical college)批准，并按照制度政策来执行。对异种移植肿瘤转移的研究，将5
×
l0
5 4t1的细胞悬浮在100μl的pbs中，并皮下注射到6
‑
8周大的雌性balb/c鼠的乳腺中。在注射后对肿瘤的发病率监测21天。每周三次测量肿瘤尺寸，并使用公式长
×
宽2×
0.5计算体积。肿瘤植入后7天开始进行化合物治疗；每天用指定剂量对动物施用2周。在第28天，杀死鼠。在肺中转移4t1细胞的数量通过克隆测定来确定。简言之，在第28天将每只小鼠的肺取出、精细切碎并在振荡器上在5ml含pbs和1mg/ml iv型胶原酶的复合酶(enzyme cocktail)中在37℃下酶切2小时。在培养之后，将样品通过70
‑
μm尼龙细胞过滤器进行过滤并用pbs洗涤两次。将所得细胞悬浮，放置在10cm的组织培养皿中在含有60μμ的硫鸟嘌呤的rpmi
‑
1640培养基中的一系列的稀释液中，在14天之后转移的肿瘤细胞形成病灶，此时将它们用甲醇固定，并用0.03％的亚甲基蓝染色计数。将数据表示为平均值
±
标准差并通过限定为p<0.05的显著性的学生t检验进行分析。
[0589]
以上所示的两种化合物代表抑制肿瘤转移的那些化合物，因而本文所述的化合物被期望用于治疗由肌成束蛋白的活性介导的病症或病症和/或治疗肿瘤转移。
[0590]
实施例7：前列腺肿瘤转移的体内鼠模型
[0591]
将从charles river(威尔明顿，马萨诸塞州)购买的5周大至6周大的雄性重症联合免疫缺陷的鼠(n＝20)随机分成两组(每组n＝10只动物)。在这两组中，在1.75％的异氟烷/空气麻醉下将人前列腺肿瘤细胞pc
‑
3luc细胞(用荧光素酶基因稳定转染)(2
×
105个细胞在100μl的缺少ca
2
和mg
2
的dulbecco磷酸盐缓冲盐溶液[pbs]中)通过心脏内注射引入到动物中。在整个实验期间，在组1中的动物在肿瘤细胞接种之前1周开始每天接受腹膜内(i.p.)施用在0.2ml的无菌生理盐水中的测试化合物。在组2(空白对照)中，动物每天接受0.2ml的i.p.注入无菌生理盐水的媒介物。每周使用ivis系统(xenogen公司，alameda，ca)对鼠连续成像5周，使用活体图像软件(xenogen)对结果进行分析。对于成像，在1.75％的异氟烷/空气麻醉下对小鼠i.p.注射荧光素(40mg/ml)，并在注射15分钟后采集腹侧图像。在实验结束时，将动物杀死，并将组织收集用于骨转移的组织病理学确认。可以预期，与在组2动物中发现的骨转移比较，在用本文所公开的肌成束蛋白抑制化合物治疗的组1的动物中发现了较少的骨转移。这种测试化合物可用于治疗癌症，特别是前列腺肿瘤转移。
[0592]
实施例8：对肺肿瘤转移的体内小鼠模型
[0593]
将20只鼠分成两组，将2
×
106个a549人肺肿瘤细胞经尾静脉注射到各小鼠中。一组用本文公开的化合物进行治疗，另一组作为对照。在8周之后，将肺采集、固定并包埋于石蜡中。在用h&e染色的连续组织切片中对转移的肺结节的数量进行计数。使用paint.net软
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522页。
[0631]
等价例
[0632]
本文说明性地描述的实施方式可以在不存在任何要素、限制下适当地实施，不是本文特定地公开。因此，例如术语“包含”、“包括”、“含有”等应被宽泛理解而没有限制。此外，本文使用的术语和表达被用作描述而不是限制的术语，并且没有意图使用排除所示和
所述的特征的任何等价物或它的部分的术语和表达，但可以认识到，在要求保护的技术的范围之内可以进行各种修改。此外，短语“基本上包括”将被理解为包括那些具体陈述的要素，以及那些不实质上影响所要求保护的技术的基本性质和新颖性的附加要素。短语“包括”排除任何不指定的要素。
[0633]
本公开不受在本技术中所述的关于具体实施方式的限制，具体实施方式意欲作为各方面的说明。许多修改和变化可以在不脱离其精神和范围内进行，这对于本领域的那些技术人员将是显而易见的。在本公开的范围内功能上等价的组合物、设备和方法，除了那些在本文中列举的之外，对于那些本领域技术人员从前面的描述中将是显而易见的。这些修改和变化都将落入所附权利要求的范围之内。本发明仅受所附的权利要求的条款连同这些权利要求的等价物的全部范围的限制。但是应当理解，本公开不限于具体的方法、试剂、化合物组合物或生物系统，其当然可以变化。也应当理解，本文所用的术语仅用于描述具体实施方式的目的，并且不旨在进行限制。
[0634]
此外，关于马库什(markush)组描述的本公开的特征或方面，本领域的技术人员将认识到，从而本公开也以任何单独的成员或马库什组的成员的子集来描述。
[0635]
如本领域技术人员所理解，对于任何和所有目的，特别是关于提供的书面描述，本文公开的所有范围还包括任何及所有可能的子范围和子范围的组合。任何列出的范围由于充分描述故可以容易地识别，并能使相同的范围被分为至少相等的两份、三份、四份、五份、十份等。作为非限制性的例子，本文所讨论的每个范围可容易地被分成较低的三分之一、中间的三分之一和较高的三分之一等。还如本领域技术人员所理解，所有语言例如“高达”、“至少”、“大于”、“小于”等，包括陈述的数量和涉及的范围，该范围随后可被分成如以上所讨论子范围。最后，如本领域技术人员所理解，范围包括每个单独的成员。
[0636]
虽然某些实施方式已被说明和描述，但是应当理解，根据本领域的普通技术人员可以作出本文的变化和修改，而不脱离该技术在其如下面的权利要求所限定的更广泛的方面。