一种甘青青兰种子高发芽率的方法与流程

1.本发明涉及植物种子繁育技术领域，尤其涉及一种甘青青兰种子高发芽率的方法。


背景技术：

2.藏药甘青青兰(dracocephalum tanguticummaxim)，又名唐古特青兰，是唇形科多年生草本植物，花和叶子均为兰色，藏药常用药材之一，主要分布于我国的西藏东南部、青海东部、四川西部及甘肃西南部海拔1900～4000米干燥河谷的河岸、田野、草滩或松林边缘。甘青青兰味甘、性寒、苦就有香味，藏语叫“知羊格”。藏医用甘青青兰的地上部分入药，具有清肝热、干黄水、愈疮、止血等作用，同时可用于治疗肝、胃热、黄水疮口不愈、出血等症，其幼苗常用来治疗腹水和浮肿。甘青青兰在藏区应用非常普遍，1995年《中华人民共和国卫生部药品标准》（藏药）收录的200个制剂中就有21个制剂使用了甘青青兰，充分说明了甘青青兰具有良好的医用价值和开发前景。
3.但由于野生药材资源数量有限，随着经济条件和生活水平的提高，医疗保健也越来越受到人们的关注，藏药材由于其得天独厚的生长环境，与低海拔药材相比具有抗寒、抗旱性强，繁殖方式特殊，光合作用累积高、活性物质含量高、含有多种微量元素、氨基酸等特点，使得藏医药成为人们关注的重点，市场需求量逐渐增多，药材主要依赖于野生资源的利用，长期大肆采摘，使得生态环境遭到严重破坏，不利于藏药材的生长繁殖，资源逐渐减少，长期如此，藏药材将面临濒危灭绝的危险。因此，藏药材驯化人工繁育就成了解决藏药资源濒危状况、保证藏药材质量、保护藏药材资源原生环境的必由之路。
4.藏药材种子种苗是藏药材生产的物质基础，优良品种及优质的种子种苗是实现藏药材规范化生产的基础和首要条件，是从源头把握好藏药材、藏药材饮片及藏药产品的质量的重要保障。
5.郭尚品等人用400mg/kg赤霉素处理甘青青兰种子，在（20
±
1）℃恒温培养箱内进行发芽培养，种子在第5d后开始发芽，发芽率达到54%。禄亚洲等人用0.6mmol/l的sa浸种24h，培养第3天，甘青青兰种子开始萌芽，种子发芽率最大达到54.44%。尹秀等人在（20
±
1)℃，光照强度500lx，14h光照/10h黑暗下照射甘青青兰种子，种子发芽率达到46.67%；20℃，光照强度1000lx，14h光照/10h黑暗下照射甘青青兰种子，种子发芽率达到43.33%；用不同的ph值溶液处理甘青青兰种子时发现当ph为6.0时种子的发芽率达到最高48%，且种子均在3d后开始萌芽。但上述种培方法存在发芽率低，时间周期长的问题。
6.因此，亟需一种操作简单、出芽率高、时间短、重复性强、保留特性的甘青青兰种子高发芽率的方法，具有非常重要理论和现实意义。


技术实现要素：

7.本发明所要解决的技术问题是提供一种方法简单、易操作、成本低、环境污染小、发芽率高、周期短的甘青青兰种子高发芽率的方法。
8.为解决上述问题，本发明所述的一种甘青青兰种子高发芽率的方法，包括以下步骤：
⑴
将储存时间为半年以内且饱满、无病虫害的野生甘青青兰种子置于湿度为15~35%的土壤中，经20~60天后熟处理，得到后熟处理后的甘青青兰种子；
⑵
将所述后熟处理后的甘青青兰种子置于其质量100倍的二次水中，经超声处理，得到超声处理后的种子；
⑶
所述超声处理后的种子浸泡于浓度为0.1~1mol/ l的赤霉素溶液中，12~48h后反复冲洗多次，最后置于温度为19~25℃的培养皿中培养即可。
9.所述步骤
⑵
中超声处理条件是指温度为18~25℃，超声频率为35~50khz，时间为20~150min，超声能量为4~6级。
10.本发明与现有技术相比具有以下优点：1、由于种子的活性随保存时间的延长而降低（如图1所示），因此，本发明选取储存时间为半年以内，饱满，无病虫害的野生甘青青兰种子，以保证原始种子的活性。
11.2、本发明通过一定时间的超声处理，可在获得高的种子发芽率的前提下，缩短了种子的发芽时间。如表1所示。
12.表1 不同超声时间处理种子后，种子发芽周期3、本发明选取植物生长素的最佳浓度和浸泡时间，提高种子的发芽率，从图2可以看出，相同浸泡时间、不同浓度浸泡下的种子发芽率不同，种子发芽率最高可达到85%。不同浸泡时间、相同浓度浓度浸泡种子发芽率也不同。
13.4、本发明方法简单、易操作、成本低、环境污染小。
附图说明
14.下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
15.图1为本发明中使用的甘青青兰种子的活性与保存时间的关系图。
16.图2为本发明中不同赤霉素浸种后种子的发芽图。
17.图3为本发明本发明中使用的甘青青兰种子。
18.图4为本发明半年以内的种子发芽率测试图。其中：a为甘青青兰种子；b为发芽后的甘青青兰种子。
19.图5为本发明超过半年的种子发芽率测试图。其中：a、b、c为三组平行实验发芽图。
20.图6为本发明甘青青兰种子直接自来水浸泡后种子的发芽图。
21.图7为本发明不同赤霉素浓度浸泡后的种子发芽图。其中：a为0.1mol/l赤霉素浓度浸泡后的发芽图，b为0.5mol/l赤霉素浓度浸泡后的发芽图，c为1mol/l赤霉素浓度浸泡后的发芽图。
22.图8为本发明用培养床培养的甘青青兰种子发芽图。
23.图9 为本发明用普通土壤培养的甘青青兰种子的发芽图。其中：a为上层铺满细沙
的种子发芽图；b为上层铺满粗沙的种子发芽图。
24.图10为本发明种子直接种植于湿润的有机、无机生物肥的混合土肥中的发芽图。其中：a为生长10天后种子的发芽图；b为生长33天后种子的发芽图；c为生长45天后种子的发芽图；d为生长146天后种子的发芽图。
具体实施方式
25.一种甘青青兰种子高发芽率的方法，包括以下步骤：
⑴
将储存时间为半年以内且饱满、无病虫害的野生甘青青兰种子（参见图3）置于湿度为15~35%的土壤中，经20~60天后熟处理，得到后熟处理后的甘青青兰种子。
26.⑵
将后熟处理后的甘青青兰种子置于其质量100倍的二次水中，经超声处理，得到超声处理后的种子。超声处理条件是指温度为18~25℃，超声频率为35~50khz，时间为20~150min，超声能量为4~6级。
27.⑶
超声处理后的种子浸泡于浓度为0.1~1mol/ l的赤霉素溶液中，12~48h后反复冲洗多次，最后置于温度为19~25℃的培养皿中培养即可。
28.【发芽率实验】
①
选取已解除休眠的甘青青兰种子150粒，二次水浸泡24h后，平均分为三组，置于已清洗消毒且铺有滤纸的培养皿中，添加清水，以用手按压不出水为标准。
29.将浸泡好的种子均匀摆放在培养皿中，用滴管滴加适量清水，放置在温度20~25℃的环境下，按时添加清水，每次添加清水量一致，且用滴管添加，避免将种子冲动。每天检查一次，记录发芽种子数，直到无新种子发芽则统计结束。对三组平行实验进行发芽率的计算，其平均发芽率为50%。
30.图4为半年以内的种子发芽图，由图4可以看出，半年内种子发芽率可达55%。图5为超过半年的种子发芽图，由图5可以看出，半年后种子发芽率可达50%。
31.②
将随机抽取的饱满无病虫害的甘青青兰种子25粒直接浸泡在自来水中，超声10~60min后，置于培养皿中观察，2~5d后种子发芽，如图6所示。由图6可以看出，经过超声处理后的种子可以缩短种子的发芽时间。
32.③
将随机抽取的饱满无病虫害的野生甘青青兰种子置于湿度为15~35%的土壤中，经20~60天后熟处理，得到后熟处理后的甘青青兰种子；将75粒后熟处理后的甘青青兰种子分三组置于其质量100倍的二次水中，经超声处理，超声温度为18~25℃，超声频率为35~50khz，时间为20 min 、40 min 、150min，超声能量为4~6级，得到超声处理后的种子；将处理后的种子浸泡于浓度为0.1mol/ l、0.5mol/ l、1mol/ l赤霉素溶液中，浸泡12~48h后反复冲洗多次，最后置于温度为19~25℃的培养皿中培养，如图7所示。由图7可以看出，采用本发明方法获得的甘青青兰种子发芽率达到60~85%。
33.④
在10cm深的锥形培养床上先铺上6~7cm厚的粗砂，再在上面铺上2~3cm厚的细沙，并保持培养床湿润，每格放入随机抽取的饱满无病虫害的甘青青兰种子5粒，平行4组，10天后观察其发芽率，如图8所示。由图8可以看出，其出芽率达到42%。
34.【土壤种植】
①
将随机抽取的饱满无病虫害的甘青青兰种子，直接种植于湿润的土壤中，10天后观察其发芽率。发现种子发芽率达到40%，出苗后30天后干枯死亡，如图9所示。
35.②
将采用本发明方法处理的甘青青兰种子直接种植于湿润的有机、无机生物肥的混合土肥中，观察期出芽芽率可达到65%，出芽后观察，甘青青兰地上部分涨势很强，根系不发达，随着时间的推移，死亡率增加，少部分甘青青兰成活下来。如图10所示。
36.综上所述，采用本发明方法可以获得较高的甘青青兰种子发芽率。