用于治疗乙型肝炎的组合的制作方法

1.本发明属于生物医药领域，涉及一类用于治疗乙型肝炎的式(v)所示组合与其他治疗乙型肝炎药物的组合，以及该组合在制备治疗乙型肝炎药物中的用途。


背景技术：

2.乙型肝炎病毒(hepatitis b virus，hbv，简称乙肝)感染在世界范围内是一种严重的公共卫生负担，超过2.5亿人慢性感染，定义为乙型肝炎表面抗原(hbsag)阳性。大约四分之一的患者可能会发展严重的肝脏疾病，如肝硬化和肝细胞癌(hcc)。
3.hbv属于嗜肝病毒科(hepadnavividae)，其装配了直径为42纳米的dna病毒颗粒,其中含有一个长度达3200碱基对的局部双链松弛环状dna(relaxed circular dna)。hbv dna是通过包裹在核衣壳之中的前基因组rna在逆转录酶催化下逆转录复制而成。乙肝病毒通过与牛胆磺酸钠转运体(ntcp)结合被内吞到肝细胞内。在进入肝细胞之后，首先rcdna在肝细胞核中转变成微小染色体共价闭合环形dna(cccdna)。保守的开放读码框(orf)分别翻译hbsag、hbcag、hbeag、dna逆转录聚合酶金和x蛋白。cccdna转录4种hbv rna。pgrna作为模板，逆转录hbv dna。值得注意的是，hbsag也会伴随转录整合的病毒dna过程而产生。
4.在临床诊断上，高水平的hbsag被认为是慢性hbv感染的标志之一。hbsag可能导致抗病毒cd8 t细胞耗竭。它负向调节hbv特异性免疫反应。持续存在hbsag是发生慢性肝病和晚期hcc风险的主要标志。hbv“功能性治愈”，定义为hbsag清除，以及随后血清转换与可检测的抗hbs抗体水平，是hbv治疗的理想终点。因此，降低hbsag水平的药物将为慢性hbv感染提供潜在的治疗方法，并降低患严重肝病的风险。
5.慢性乙型肝炎治疗的目标是最大限度地长期抑制hbv复制，延缓和减少并发症的发生，从而改善生活质量和延长生存时间。目前，治疗慢性乙型肝炎的药物主要有免疫调节剂、核苷酸类逆转录酶抑制剂和核苷类逆转录酶抑制剂。免疫调节剂的代表性药物有聚乙二醇干扰素α
‑
2a(pegifnα
‑
2a)。而对于长期治疗慢性乙肝而言，核苷类逆转录酶抑制剂是实现持久病毒抑制所必需的。根据西班牙马德里肝脏和消化疾病网络生物医学研究中心修订的抗乙肝药物指南中的建议，恩替卡韦(etv)、替诺福韦(tdf)和富马酸丙酚替诺福韦(taf)是慢性乙肝的一线单药疗法药物，它们在抑制病毒方面都非常有效。
6.目前，这些已上市的一线药物治疗慢性乙肝患者时，存在对hbsag的血清学转换率低、需要长期用药或者终生用药、停药容易复发等问题。因此，临床迫切需要应答率高，更强效的hbsag抑制剂，通过单药或联用现有一线药物以提高功能性治愈率，实现停药不复发的目标，从而显著提升病患的预后生活质量。


技术实现要素：

7.一方面，本发明提供一种组合，所述的组合包括式(v)所示化合物与其他治疗乙型肝炎药物。
8.另一方面，本发明提供一种组合物，其包括本发明的组合和药学上可接受的载体
和/或赋形剂。
9.另一方面，本发明提供一种试剂盒，其包括本发明的组合物。
10.另一方面，本发明提供一种组合、组合物或试剂盒在制备治疗乙型肝炎药物的用途。本发明还提供治疗乙型肝炎的方法，其包括向受试者给予有效量的本发明的组合、组合物或试剂盒。本发明还提供本发明的组合、组合物或试剂盒在治疗乙型肝炎中的用途。
11.另一方面，本发明提供式(v)所示化合物与其他治疗乙型肝炎药物联用在制备治疗乙型肝炎药物的用途。本发明还提供治疗乙型肝炎的方法，其包括向受试者给予有效量式(v)所示化合物与其他治疗乙型肝炎药物。本发明还提供式(v)所示化合物与其他治疗乙型肝炎药物联用治疗乙型肝炎的用途。
12.本发明提供一种组合，包括式(v)所示化合物与其他治疗乙型肝炎药物，
13.本发明提供一种组合，包括式(v)所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐和其他化合物，
[0014][0015]
其中，
[0016]
带“*”碳原子为手性碳原子，以(r)或(s)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在；
[0017]
r1选自h、oh、cn、nh2，或者选自任选被1、2或3个r取代的：c1‑6烷基、c1‑6杂烷基、c2‑5烯基、c2‑5杂烯基、c3‑6环烷基或3～6元杂环烷基；
[0018]
r2选自h、oh、cn、nh2、卤素，或者选自任选被1、2或3个r取代的：c1‑3烷基、c1‑3杂烷基、c3‑6环烷基或3～6元杂环烷基；
[0019]
r3选自任选被1、2或3个r取代的：c1‑6烷基、c3‑6环烷基；
[0020]
m选自：0、1、2、3、4或5；
[0021]
当m为0时，r1不选自：oh、cn、nh2；
[0022]
r选自h、卤素、oh、cn、nh2，或者选自任选被1、2或3个r’取代的：c1‑3烷基、c1‑3杂烷基；
[0023]
r’选自：f、cl、br、i、oh、cn、nh2、ch3、ch3ch2、ch3o、cf3、chf2、ch2f；
[0024]“杂”表示杂原子或杂原子团，所述c1‑6杂烷基、c2‑5杂烯基、3～6元杂环烷基、c1‑3杂烷基之“杂”，分别独立地选自：
‑
c(＝o)n(r)
‑
、
‑
n(r)
‑
、
‑
c(＝nr)
‑
、
‑
(r)c＝n
‑
、
‑
s(＝o)2n(r)
‑
、
‑
s(＝o)n(r)
‑
、n、
‑
o
‑
、
‑
s
‑
、＝o、＝s、
‑
c(＝o)o
‑
、
‑
c(＝o)
‑
、
‑
c(＝s)
‑
、
‑
s(＝o)
‑
、
‑
s(＝o)2‑
、
‑
n(r)c(＝o)n(r)
‑
；
[0025]
以上任何一种情况下，杂原子或杂原子团的数目分别独立地选自1、2或3；
[0026]
其特征在于，所述其他化合物选自免疫调节剂、核苷酸类逆转录酶抑制剂和核苷类逆转录酶抑制剂。
[0027]
在本发明的一些方案中，上述组合，包括式(v)所示化合物或其药学上可接受的盐和免疫调节剂，其特征在于，所述免疫调节剂选自聚乙二醇干扰素α
‑
2a。
[0028]
在本发明的一些方案中，上述组合，包括式(v)所示化合物或其药学上可接受的盐和核苷酸类逆转录酶抑制剂，其特征在于，所述核苷酸类逆转录酶抑制剂选自富马酸替诺福韦二吡呋酯和富马酸丙酚替诺福韦。
[0029]
在本发明的一些方案中，上述组合，包括式(v)所示化合物或其药学上可接受的盐和核苷类逆转录酶抑制剂，其特征在于，所述核苷类逆转录酶抑制剂选自恩替卡韦。
[0030]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，r选自h、f、cl、br、i、oh、cn、nh2、ch3、ch3ch2、ch3o、cf3、chf2和ch2f，其他变量如本发明所定义。
[0031]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，r1选自h、oh、cn、nh2，或者选自任选被1、2或3个r取代的：c1‑3烷基、c1‑3杂烷基、c2‑3烯基、c2‑3杂烯基、c3‑6环烷基和3～6元杂环烷基，其他变量如本发明所定义。
[0032]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，r1选自h、oh、cn和nh2，或者选自任选被1、2或3个r取代的：ch3、、其他变量如本发明所定义。
[0033]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，r1选自h、oh、cn、nh2、、、其他变量如本发明所定义。
[0034]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，r2选自h、oh、cn、nh2和卤素，或者选自任选被1、2或3个r取代的：c1‑3烷基、c1‑3杂烷基和c3‑6环烷基，其他变量如本发明所定义。
[0035]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，r2选自h、oh、cn、nh2、f、cl、br和i，或者选自任选被1、2或3个r取代的：ch3、其他变量如本发明所定义。
[0036]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，r2选自cl、br、cn、ch3、其他变量如本发明所定义。
[0037]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，r3选自任选被1、2或3个r取代的：c1‑4烷基和c3‑6环烷基，其他变量如本发明所定义。
[0038]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，r3选自
其他变量如本发明所定义。
[0039]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，m选自0、1、2、3和4，且当m为0时，r1不选自oh、cn和nh2，其他变量如本发明所定义。
[0040]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，结构单元选自选自选自其他变量如本发明所定义。
[0041]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，带“*”碳原子为手性碳原子，以(r)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在，其他变量如本发明所定义。
[0042]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，化合物、其异构体或其药学上可接受的盐选自
[0043]
其中，
[0044]
带“*”碳原子为手性碳原子，以(r)或(s)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在；
[0045]
r4选自h，或选自任选被1、2或3个r取代的：c
1～3
烷基和c
1～3
杂烷基；
[0046]
x选自c和n；
[0047]
y选自o和c；
[0048]
l1和l2分别独立地选自单键、
‑
(ch2)n
‑
和
‑
c(＝o)
‑
；
[0049]
且l1和l2不同时为单键；
[0050]
n选自1和2；
[0051]
m、r、r2、r3和c
1～3
杂烷基中的“杂”如上所述，且当m为0时，r4不为h。
[0052]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，带“*”碳原子为手性碳原子，以(r)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在。
[0053]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，化合物选自
[0054]
[0055]
[0056][0057]
在本发明的一些方案中，上述组合，其中，化合物选自
[0058]
[0059]
[0060]
[0061][0062]
本发明还提供上述组合在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。
[0063]
本发明还提供一种组合物，其特征在于，包括上述组合和至少一种药学上可接受的载体和/或赋形剂。
[0064]
本发明还提供一种试剂盒，其特征在于，包括上述组合或上述组合物。
[0065]
本发明还提供上述组合物或上述试剂盒在制备治疗乙型肝炎药物中的用途。
[0066]
在本发明的一些方案中，上述组合是用于治疗慢性乙型肝炎的组合。
[0067]
在本发明的一些方案中，上述组合物是用于治疗慢性乙型肝炎的药物组合物。
[0068]
在本发明的一些方案中，上述试剂盒是用于治疗慢性乙型肝炎的试剂盒。
[0069]
在本发明的一些方案中，上述试剂盒还包括式(v)所示化合物与其他治疗乙型肝炎药物的联合使用治疗乙型肝炎的说明。
[0070]
在本发明的一些方案中，所述式(v)所示化合物的药物组合物包括式(v)所示化合物和药学上可接受的载体和/或赋形剂。
[0071]
在本发明的一些方案中，所述式(v)所示化合物的药物组合物呈固体制剂形式，优选胶囊或片剂。
[0072]
在本发明的一些方案中，所述其他治疗乙型肝炎药物的药物组合物包括其他治疗乙型肝炎药物、和药学上可接受的载体和/或赋形剂。
[0073]
在本发明的一些方案中，所述其他治疗乙型肝炎药物的药物组合物呈液体制剂形式，优选水溶性注射液，所述水溶性注射液包括但不限于未经冻干的水溶性制剂或冻干粉重构的水溶性制剂。
[0074]
施用方式
[0075]
下述内容并非限制本发明组合的施用方式。
[0076]
本发明的组合中的组分可以各自分开配制成药物组合物，或者其中的部分或全部共同配制成药物组合物。在一些方案中，本发明的组合可以配制成适合于单次或多次施用的药物组合物。
[0077]
本发明的组合中的组分可以各自单独施用，或者其中的部分或全部共同施用。本发明的组合中的组分可以基本上不同时施用，或者其中的部分或全部基本上同时施用。本发明的组合中的组分可以具有相同或不同的施用周期。
[0078]
本发明的组合中的组分可以各自独立地以适合的各种途径施用，包括，但不限于，口服或肠胃外(通过静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、脊柱或其他胃肠外施用途径，例如通过
注射或输注)。在一些方案中，本发明的组合的组分可以各自独立地口服施用或注射施用，例如静脉注射或腹腔注射。
[0079]
本发明的组合中的组分可以各自独立地是适合的剂型，包括，但不限于，片剂、含片、丸剂、胶囊剂(例如硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊、微囊剂)、酏剂、颗粒剂、糖浆剂、注射剂(肌肉内、静脉内、腹腔内)、颗粒剂、乳剂、悬浮液、溶液、分散剂和用于口服或非口服给药的缓释制剂的剂型。
[0080]
本发明的组合中的组分可以各自独立地含有药学上可接受的载体和/或赋形剂。
[0081]
技术效果
[0082]
本发明的式(v)化合物为乙肝表面抗原抑制剂，能够有效降低hbsag含量。通过式(v)化合物与所述免疫调节剂组合使用，或通过式(v)化合物与核苷类或核苷酸类逆转录酶抑制剂的组合使用，对hbsag、hbeag和hbv dna的作用得到明显加强，产生协同抑制效应，可达到提高疗效、减少毒副作用、缩短给药治疗周期和剂量、减少耐药性等目的，达到hbv载量降低，hbsag减少甚至清除的效果。
[0083]
定义和说明
[0084]
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
[0085]
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
[0086]
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
[0087]
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
[0088]
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(
‑
)
‑
和( )
‑
对对映体、(r)
‑
和(s)
‑
对映体、非对映异构体、(d)
‑
异构体、(l)
‑
异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
[0089]
除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异
构体。
[0090]
除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。
[0091]
除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
[0092]
除非另有说明，“( )”表示右旋，“(
‑
)”表示左旋，“(
±
)”表示外消旋。
[0093]
除非另有说明，用楔形实线键()和楔形虚线键()表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键()和直形虚线键()表示立体中心的相对构型，用波浪线()表示楔形实线键()或楔形虚线键()，或用波浪线()表示直形实线键()和直形虚线键()。
[0094]
本发明的化合物可以存在特定的。除非另有说明，术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下，不同官能团异构体处于动态平衡，并能很快的相互转化。若互变异构体是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮
‑
烯醇异构化和亚胺
‑
烯胺异构化。价键异构体(valence tautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。其中酮
‑
烯醇互变异构化的具体实例是戊烷
‑
2,4
‑
二酮与4
‑
羟基戊
‑3‑
烯
‑2‑
酮两个互变异构体之间的互变。
[0095]
除非另有说明，本发明化合物当是异构体时，存在“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”。所述术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或者大于等于99.9％。
[0096]
除非另有说明，本发明化合物当是异构体时，存在“异构体过量”或“对映体过量”。所述术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。
[0097]
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(r)
‑
和(s)
‑
异构体以及d和l异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3h)，碘
‑
125(
125
i)或c
‑
14(
14
c)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定
性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
[0098]
术语“药物组合物”是指一种或多种本技术的活性成分或其药物组合与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对受试者给予本技术的化合物或其药物组合。
[0099]
术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。
[0100]
术语“赋形剂”通常是指配制有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。
[0101]
词语“包括(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。
[0102]
术语“治疗”意为将本技术所述化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：
[0103]
(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时；
[0104]
(ii)抑制疾病或疾病状态，即遏制其发展；
[0105]
(iii)缓解疾病或疾病状态，即使该疾病或疾病状态消退。
[0106]
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
[0107]
术语“施用”表示，使用本领域技术人员已知的多种方法和递送系统中的任一种，向主体物理引入包含治疗剂的组合物。免疫检验点抑制剂(例如，抗pd
‑
1抗体或抗pd
‑
l1抗体)的施用途径包括静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、脊柱或其它胃肠外施用途径，例如通过注射或输注。本文中使用的短语“胃肠外施用”是指，通常通过注射进行的除了肠内和局部施用以外的施用模式，且包括、但不限于，静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注、以及体内电穿孔。在某些实施方案中，所述免疫检验点抑制剂(例如，抗pd
‑
1抗体或抗pd
‑
l1抗体)通过非胃肠外途径施用，在某些实施方案中，口服施用。其它非胃肠外途径包括局部、表皮或粘膜施用途径，例如，鼻内地、阴道地、直肠地、舌下地或局部地。还可以执行施用，例如，一次、多次，和/或在一个或多个延长的时间段中。
[0108]
术语“受试者”是哺乳动物。在部分实施方案中，所述受试者是小鼠。在部分实施方案中，所述受试者是人。
[0109]
如本文所用，“联用”或“联合使用”意指两种或更多种活性物质可以各自作为单一制剂同时地、或各自作为单一制剂以任何顺序依次地施用于受试者。
[0110]
术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。
[0111]“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
[0112]
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝o)时，意味着两个氢原子被取代。酮取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
[0113]
当任何变量(例如r)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0
‑
2个r所取代，则所述基团可以任选地至多被两个r所取代，并且每种情况下的r都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
[0114]
当一个连接基团的数量为0时，比如
‑
(crr)0‑
，表示该连接基团为单键。
[0115]
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如a
‑
l
‑
z中l代表单键时表示该结构实际上是a
‑
z。
[0116]
当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如a
‑
x中x为空缺时表示该结构实际上是a。当一个取代基可以连接到一个环上的一个以上原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合，例如，结构单元表示取代基r可在环己基或者环己二烯上的任意一个位置发生取代。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，中连接基团l为
‑
m
‑
w
‑
，此时
‑
m
‑
w
‑
既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环a和环b构成也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环a和环b构成所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
[0117]
除非另有规定，术语“杂”表示杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，包括碳(c)和氢(h)以外的原子以及含有这些杂原子的原子团，例如包括氧(o)、氮(n)、硫(s)、硅(si)、锗(ge)、铝(al)、硼(b)、
‑
o
‑
、
‑
s
‑
、＝o、＝s、
‑
c(＝o)o
‑
、
‑
c(＝o)
‑
、
‑
c(＝s)
‑
、
‑
s(＝o)、
‑
s(＝o)2‑
，以及任选被取代的
‑
c(＝o)n(h)
‑
、
‑
n(h)
‑
、
‑
c(＝nh)
‑
、
‑
s(＝o)2n(h)
‑
或
‑
s(＝o)n(h)
‑
。
[0118]
除非另有规定，“环”表示被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所谓的环包括单环、联环、螺环、并环或桥环。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5～7元环”是指环绕排列5～7个原子。除非另有规
定，该环任选地包含1～3个杂原子。因此，“5～7元环”包括例如苯基、吡啶和哌啶基；另一方面，术语“5～7元杂环烷基环”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。术语“环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。
[0119]
除非另有规定，术语“杂环”或“杂环基”意指稳定的含杂原子或杂原子团的单环、双环或三环，它们可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的(芳族的)，它们包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自n、o和s的环杂原子，其中上述任意杂环可以稠合到一个苯环上形成双环。氮和硫杂原子可任选被氧化(即no和s(o)p，p是1或2)。氮原子可以是被取代的或未取代的(即n或nr，其中r是h或本文已经定义过的其他取代基)。该杂环可以附着到任何杂原子或碳原子的侧基上从而形成稳定的结构。如果产生的化合物是稳定的，本文所述的杂环可以发生碳位或氮位上的取代。杂环中的氮原子任选地被季铵化。一个优选方案是，当杂环中s及o原子的总数超过1时，这些杂原子彼此不相邻。另一个优选方案是，杂环中s及o原子的总数不超过1。如本文所用，术语“芳族杂环基团”或“杂芳基”意指稳定的5、6、7元单环或双环或7、8、9或10元双环杂环基的芳香环，它包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自n、o和s的环杂原子。氮原子可以是被取代的或未取代的(即n或nr，其中r是h或本文已经定义过的其他取代基)。氮和硫杂原子可任选被氧化(即no和s(o)p，p是1或2)。值得注意的是，芳香杂环上s和o原子的总数不超过1。桥环也包含在杂环的定义中。当一个或多个原子(即c、o、n或s)连接两个不相邻的碳原子或氮原子时形成桥环。优选的桥环包括但不限于：一个碳原子、两个碳原子、一个氮原子、两个氮原子和一个碳
‑
氮基。值得注意的是，一个桥总是将单环转换成三环。桥环中，环上的取代基也可以出现在桥上。
[0120]
杂环化合物的实例包括但不限于：吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并巯基呋喃基、苯并巯基苯基、苯并恶唑基、苯并恶唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4ah
‑
咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯、噌啉基十氢喹啉基、2h,6h
‑
1,5,2
‑
二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3
‑
b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1h
‑
吲唑基、吲哚烯基、二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3h
‑
吲哚基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异二氢吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基，八氢异喹啉基、恶二唑基、1,2,3
‑
恶二唑基、1,2,4
‑
恶二唑基、1,2,5
‑
恶二唑基、1,3,4
‑
恶二唑基、恶唑烷基、恶唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯并黄嘌呤基、酚恶嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4
‑
哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2h
‑
吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4h
‑
喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基，6h
‑
1,2,5
‑
噻二嗪基、1,2,3
‑
噻二唑基、1,2,4
‑
噻二唑基、1,2,5
‑
噻二唑基、1,3,4
‑
噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、异噻唑基噻吩基、噻吩并恶唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1h
‑
1,2,3
‑
三唑基、2h
‑
1,2,3
‑
三唑基、1h
‑
1,2,4
‑
三唑基、4h
‑
1,2,4
‑
三唑基和呫吨基。还包括稠环和螺环化合物。
[0121]
除非另有规定，术语“烃基”或者其下位概念(比如烷基、烯基、炔基、芳基等等)本身或者作为另一取代基的一部分表示直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，可以是完全饱和的(如烷基)、单元或多元不饱和的(如烯基、炔基、芳基)，可以是单取代或多取代的，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)，可以包括二价或多价原子
团，具有指定数量的碳原子(如c1‑
c
12
表示1至12个碳，c1‑
12
选自c1、c2、c3、c4、c5、c6、c7、c8、c9、c
10
、c
11
和c
12
；c3‑
12
选自c3、c4、c5、c6、c7、c8、c9、c
10
、c
11
和c
12
。)。“烃基”包括但不限于脂肪烃基和芳香烃基，所述脂肪烃基包括链状和环状，具体包括但不限于烷基、烯基、炔基，所述芳香烃基包括但不限于6
‑
12元的芳香烃基，例如苯、萘等。在一些实施例中，术语“烃基”表示直链的或支链的原子团或它们的组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以包括二价和多价原子团。饱和烃原子团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、异丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子团的同系物或异构体。不饱和烃基具有一个或多个双键或三键，其实例包括但不限于乙烯基、2
‑
丙烯基、丁烯基、巴豆基、2
‑
异戊烯基、2
‑
(丁二烯基)、2，4
‑
戊二烯基、3
‑
(1，4
‑
戊二烯基)、乙炔基、1
‑
和3
‑
丙炔基，3
‑
丁炔基，以及更高级的同系物和异构体。
[0122]
除非另有规定，术语“杂烃基”或者其下位概念(比如杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基等等)本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一些实施例中，术语“杂烷基”本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的烃原子团或其组合物，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一个典型实施例中，杂原子选自b、o、n和s，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮杂原子任选地被季铵化。杂原子或杂原子团可以位于杂烃基的任何内部位置，包括该烃基附着于分子其余部分的位置，但术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)属于惯用表达，是指分别通过一个氧原子、氨基或硫原子连接到分子的其余部分的那些烷基基团。实例包括但不限于
‑
ch2‑
ch2‑
o
‑
ch3、
‑
ch2‑
ch2‑
nh
‑
ch3、
‑
ch2‑
ch2‑
n(ch3)
‑
ch3、
‑
ch2‑
s
‑
ch2‑
ch3、
‑
ch2‑
ch2、
‑
s(o)
‑
ch3、
‑
ch2‑
ch2‑
s(o)2‑
ch3、
‑
ch＝ch
‑
o
‑
ch3、
‑
ch2‑
ch＝n
‑
och3和
–
ch＝ch
‑
n(ch3)
‑
ch3。至多两个杂原子可以是连续的，例如
‑
ch2‑
nh
‑
och3。
[0123]
除非另有规定，术语“环烃基”、“杂环烃基”或者其下位概念(比如芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基等等)本身或与其他术语联合分别表示环化的“烃基”、“杂烃基”。此外，就杂烃基或杂环烃基(比如杂烷基、杂环烷基)而言，杂原子可以占据该杂环附着于分子其余部分的位置。环烃基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1
‑
环己烯基、3
‑
环己烯基、环庚基等。杂环基的非限制性实例包括1
‑
(1,2,5,6
‑
四氢吡啶基)、1
‑
哌啶基、2
‑
哌啶基，3
‑
哌啶基、4
‑
吗啉基、3
‑
吗啉基、四氢呋喃
‑2‑
基、四氢呋喃吲哚
‑3‑
基、四氢噻吩
‑2‑
基、四氢噻吩
‑3‑
基，1
‑
哌嗪基和2
‑
哌嗪基。
[0124]
除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基,可以是单取代(如
‑
ch2f)或多取代的(如
‑
cf3)，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。烷基的例子包括甲基(me)，乙基(et)，丙基(如，n
‑
丙基和异丙基)，丁基(如，n
‑
丁基，异丁基，s
‑
丁基，t
‑
丁基)，戊基(如，n
‑
戊基，异戊基，新戊基)等。
[0125]
除非另有规定，“烯基”指在链的任何位点上具有一个或多个碳碳双键的烷基,可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。烯基的例子包括乙烯基，丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基，丁间二烯基，戊间二烯基，己间二烯基等。
[0126]
除非另有规定，“炔基”指在链的任何位点上具有一个或多个碳碳三键的烷基，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。炔基的例子包括乙炔基，丙炔基，丁炔基，戊炔基等。
[0127]
除非另有规定，环烷基包括任何稳定的环状或多环烃基，任何碳原子都是饱和的，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、降冰片烷基、[2.2.2]二环辛烷、[4.4.0]二环癸烷等。
[0128]
除非另有规定，环烯基包括任何稳定的环状或多环烃基，该烃基在环的任何位点含有一个或多个不饱和的碳
‑
碳双键，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烯基的实例包括，但不限于，环戊烯基、环己烯基等。
[0129]
除非另有规定，环炔基包括任何稳定的环状或多环烃基，该烃基在环的任何位点含有一个或多个碳
‑
碳三键，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。
[0130]
除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，术语“卤代烷基”意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(c1‑
c4)烷基”意在包括但不仅限于三氟甲基、2，2，2
‑
三氟乙基、4
‑
氯丁基和3
‑
溴丙基等等。除非另有规定，卤代烷基的实例包括但不仅限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。
[0131]“烷氧基”代表通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基，除非另有规定，c1‑6烷氧基包括c1、c2、c3、c4、c5和c6的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和s
‑
戊氧基。
[0132]
除非另有规定，术语“芳基”表示多不饱和的芳族烃取代基，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价，它可以是单环或多环(比如1至3个环；其中至少一个环是芳族的)，它们稠合在一起或共价连接。术语“杂芳基”是指含有一至四个杂原子的芳基(或环)。在一个示范性实例中，杂原子选自b、n、o和s，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接到分子的其余部分。芳基或杂芳基的非限制性实施例包括苯基、萘基、联苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡嗪基、恶唑基、苯基
‑
恶唑基、异恶唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、苯并噻唑基、嘌呤基、苯并咪唑基、吲哚基、异喹啉基、喹喔啉基、喹啉基、1
‑
萘基、2
‑
萘基、4
‑
联苯基、1
‑
吡咯基、2
‑
吡咯基、3
‑
吡咯基、3
‑
吡唑基、2
‑
咪唑基、4
‑
咪唑基、吡嗪基、2
‑
恶唑基、4
‑
恶唑基、2
‑
苯基
‑4‑
恶唑基、5
‑
恶唑基、3
‑
异恶唑基、4
‑
异恶唑基、5
‑
异恶唑基、2
‑
噻唑基、4
‑
噻唑基、5
‑
噻唑基、2
‑
呋喃基、3
‑
呋喃基、2
‑
噻吩基、3
‑
噻吩基、2
‑
吡啶基、3
‑
吡啶基、4
‑
吡啶基、2
‑
嘧啶基、4
‑
嘧啶基、5
‑
苯并噻唑基、嘌呤基、2
‑
苯并咪唑基、5
‑
吲哚基、1
‑
异喹啉基、5
‑
异喹啉基、2
‑
喹喔啉基、5
‑
喹喔啉基、3
‑
喹啉基和6
‑
喹啉基。上述任意一个芳基和杂芳基环系的取代基选自下文所述的可接受的取代基。
[0133]
除非另有规定，芳基在与其他术语联合使用时(例如芳氧基、芳硫基、芳烷基)包括如上定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”意在包括芳基附着于烷基的那些原子团(例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括其中碳原子(如亚甲基)已经被例如氧原子代替的那些烷基，例如苯氧基甲基、2
‑
吡啶氧甲基3
‑
(1
‑
萘氧基)丙基等。
[0134]
术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。
[0135]
术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语
“
氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(cbz)和9
‑
芴甲氧羰基(fmoc)；芳基甲基，如苄基(bn)、三苯甲基(tr)、1,1
‑
二
‑
(4'
‑
甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(tms)和叔丁基二甲基甲硅烷基(tbs)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(bn)，对甲氧基苄基(pmb)、9
‑
芴基甲基(fm)和二苯基甲基(二苯甲基，dpm)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(tms)和叔丁基二甲基甲硅烷基(tbs)等等。
[0136]
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
[0137]
本发明所使用的溶剂可经市售获得。
[0138]
本发明采用下述缩略词：dmso代表二甲亚砜；hbsag代表乙型肝炎表面抗原；hbeag代表乙型肝炎e抗原；cccdna代表共价、闭合、环状dna分子。
[0139]
化合物依据本领域常规命名原则或者使用软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
附图说明
[0140]
图1为孔培养板单药或双药联合对hbv抑制结果和细胞活力结果。
[0141]
图2为孔培养板单药或双药联合的细胞活力(viablity)结果。
具体实施方式
[0142]
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施.方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
[0143]
实验例1
[0144]
实验目的：本研究的目的是应用从人源化frg小鼠模型中分离得到的人原代肝细胞(phh)来评价受试化合物与etv(恩替卡韦)、taf(富马酸丙酚替诺福韦)、peg
‑
ifn
‑
α2a(聚乙二醇干扰素α2a)联合给药的体外抗乙肝病毒药效。
[0145]
实验材料：
[0146]
(1)主要仪器：荧光qpcr仪(applied biosystems，型号7500)。酶标仪(bio tek，型号synergy 2)。化学发光成像系统(ge，型号las4010)
[0147]
(2)主要试剂和耗材：faststart universal probe master(roche)，dna提取试剂盒(qiagen)，96孔板(costar 3599)和96well v型板(axygen wipp02280)，hbsag elisa试剂盒(autobio)和hbeag elisa试剂盒(autobio)，cell counting kit
‑
8(cck
‑
8)(biolite)。
[0148]
(3)其他：frg小鼠、d型hbv、受试化合物wws1
表示5个浓度；dmso表示dmso对照组；uninf表示未感染组。
[0160]
表3受试化合物与taf的排板设置
[0161] 12345678aa0；d5a5；d5a4；d5a3；d5a2；d5a1；d5dmsouninfba0；d4a5；d4a4；d4a3；d4a2；d4a1；d4dmsouninfca0；d3a5；d3a4；d3a3；d3a2；d3a1；d3dmsouninfda0；d2a5；d2a4；d2a3；d2a2；d2a1；d2dmsouninfea0；d1a5；d1a4；d1a3；d1a2；d1a1；d1dmsouninffdmsoa5；d0a4；d0a3；d0a2；d0a1；d0dmsouninf
[0162]
注：受试化合物(a＝wws1，b＝peg
‑
ifn
‑
α2a，c＝etv，d＝taf)；0表示无化合物，1
‑
5表示5个浓度；dmso表示dmso对照组；uninf表示未感染组。
[0163]
表4 48孔细胞板联合给药排布和浓度设置
[0164][0165][0166]
注：medium代表peg
‑
ifn
‑
α2a所在的介质
[0167]
表5 24孔细胞板联合给药排布和浓度设置
[0168][0169]
第4，6，8，10天更换培养液和化合物。第12天，收集细胞上清，应用dna提取试剂盒(qiagen
‑
51162)提取上清中的dna，使用qpcr法定量样品中的hbv dna；应用elisa试剂盒检测上清中的hbeag和hbsag水平。收集上清后的细胞用cck
‑
8检测细胞活力。24孔培养板中的细胞检测过cck
‑
8后，用pbs清洗两次，收集细胞提取hirt dna，应用southern blot法(印迹杂交)检测细胞中cccdna的表达水平。
[0170]
qpcr反应体系见表5。hbv质粒dna作为标准品，10倍系列稀释，标准品范围从1.0
×
107copies/μl至10copies/μl。
[0171]
表5 qpcr反应体系
[0172]
试剂配置1个孔所需体积(μl)定量快速启动通用探针试剂12.5正向引物(10μm)1反向引物(10μm)1探针(10μm)0.5
[0173]
pcr反应程序为：95℃加热10min，然后进入循环模式，95℃加热15sec，随后60℃，1min，共40个循环。依据标准曲线和各样品的ct值来计算样品中的hbv dna含量。
[0174]
hbeag和hbsag水平由elisa试剂盒检测，依据标准曲线和各样品的化学发光值来计算样品中的hbv hbeag和hbsag含量。
[0175]
抑制率％＝【1
‑
样品中的hbv dna含量或hbsag含量或hbeag含量/dmso对照组中的hbv dna含量或hbsag含量或hbeag含量】
×
100
[0176]
ec
50
值通过prism软件计算，抑制曲线拟合方法为sigmoidal dose
‑
response(variable slope)。48孔板联合给药效果由macsynergy软件分析。
[0177]
细胞活力由cck
‑
8法检测，依据各样品的od
450
/od
630
值来计算细胞活力。
[0178]
细胞活力％＝【样品od值
‑
培养基对照od值】/【dmso对照发光值
‑
培养基对照od值】
×
100
[0179]
cc
50
值通过prism软件计算，抑制曲线拟合方法为sigmoidal dose
‑
response(variable slope)。
[0180]
24孔培养板中细胞内cccdna水平由southern blot法检测。
[0181]
在48孔培养板中，wws1和etv、taf、peg
‑
ifn
‑
α2a联合药效由macsynergy软件分析。联合药效根据协同/拮抗作用到95％的置信区间计算，结果按照macsynergy准则解释如下：
[0182]
<25＝insignificant synergism/antagonism不显著的协同或拮抗作用；
[0183]
25
‑
50＝minor but significant synergism/antagonism弱但显著的协同或拮抗作用；
[0184]
50
‑
100＝moderate synergism/antagonism
‑
may be important in vivo中等的协同或拮抗作用
‑
在体内实验中也许很重要；
[0185]
>100＝strong synergism/antagonism
‑
probably important in vivo强的协同或拮抗作用
‑
在体内实验中可能很重要；
[0186]
～1000＝possible errors
‑
check data and repeat experiment可能错误
‑
检查数据并重复实验；
[0187]
实验结果：见表6、7、图1和图2。
[0188]
表6单药在phh中的抗hbv活性和细胞毒性(48孔培养板)
[0189][0190]
表7受试化合物在phh中的联合给药结果(95％的置信区间)
[0191][0192][0193]
实验结论：如图1，本发明化合物和etv或peg
‑
ifn
‑
α2a联合药效结果显示，双药联合后对hbv dna、hbsag和hbeag的抑制具有较强的协同作用，和单药相比，双药联合后对hbv dna、hbsag和hbeag抑制均有更好的抑制作用。如图2，本发明化合物和peg
‑
ifn
‑
α2a在所测试浓度范围内均未显示出明显的细胞毒性，细胞活力均大于92％。本发明化合物与etv或taf联合药效结果显示，双药联合后对hbv dna、hbsag和hbeag的抑制具有较强的协同作用，和单药相比，双药联合后对hbv dna、hbsag和hbeag抑制均有更好的抑制作用；受试化合物在测试浓度范围内均未显示出明显的细胞毒性。
[0194]
实验例2
[0195]
根据实验例1的方法，将受试化合物wws1分别替
换为wws11wws12wws13得到受试化合物在phh中的联合给药结果：wws11、wws12、wws13与peg
‑
ifnα
‑
2a、etv、taf对hbv dna、hbsag和hbeag的抑制具有强的协同作用，95％的置信区间协同指数为125.24～236.83，拮抗指数为
‑
10～0。