一种去除血清中抗原的方法与流程

1.本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种去除血清中抗原的方法。


背景技术：

2.在做体外诊断试剂的部分项目时，大部分直接获得的血清中的抗原含量较高，一般在线性范围的中值左右，但是厂家的某些产品，例如工作校准品中血清需要低值，直接用体检血清不能满足线性范围的需要；并且部分项目的低值部分对临床诊断也有意义，但是该部分低值的血清较难收集。
3.现有技术去除抗原的方法一般是加一定比例的活性炭或者过柱，采用添加活性炭的方法需要过滤，但是后续想完全去除活性炭较难，会导致血清在处理之后略黑；采用过柱的方式较复杂，获取大量的血清比较困难，不能普适。


技术实现要素：

4.针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种去除血清中抗原的方法，从而解决现有技术导致血清质量下降，或者操作复杂的难题。
5.为了实现上述目的，本发明具体采用如下技术方案：
6.一种去除血清中抗原的方法，包括如下步骤：
7.(1)向待处理的含有抗原的血清样品中加入乙醇，混合均匀，2℃～8℃冷藏6h～12h；
8.(2)离心，吸取上清液；
9.(3)将上清液在50℃～60℃条件下加热20min～40min，冷却至20℃～30℃得到处理后的血清样品。
10.优选的，所述的含有抗原的血清样品中的抗原包括三碘甲状腺原氨酸(tt3)、游离三碘甲状腺原氨酸(ft3)、甲状腺素(tt4)、游离甲状腺素(ft4)、促甲状腺激素(tsh)、促黄体生成素(lh)、人绒毛膜促性腺激素(hcg)、促卵泡生成激素(fsh)、泌乳素(prl)、孕酮(p)、睾酮(t)、雌二醇(e2)中的一种或多种。
11.优选的，所述步骤(1)中的血清样品为人血清、牛血清、马血清或羊血清。
12.优选的，步骤(1)中的乙醇纯度≥95％，所述乙醇的体积为含有抗原的血清样品的体积的15％
‑
50％。
13.优选的，所述步骤(2)中离心操作的转速为1000r/min～10000r/min，离心时间为5min～60min。
14.优选的，所述步骤(3)的加热温度为56℃，加热时间为30min。
15.优选的，所述步骤(3)的加热方式为水浴加热。
16.优选的，得到处理后的血清样品加入保护剂，所述的保护剂包括0％
‑
5％的蛋白，0％
‑
10％的糖类，前述所述的百分比指的是与处理后的血清样品的质量体积百分比，即g/ml的比例；所述的蛋白选自牛血清白蛋白或人血清白蛋白；所述的糖类选自蔗糖、海藻糖、
葡萄糖、甘露醇中的一种或几种。例如处理后的血清样品为500ml，那么加入的蛋白的含量需要在0g～25g；加入的糖类的质量需要在0g～50g。
17.有益效果
18.本发明所提供方法可以快速简便的同时去除血清中的多种抗原，且保证了血清的质量。
19.本发明巧妙的采用水浴加热的方法不仅去除了剩余残留的乙醇外，同时还具有另外两个作用：1.灭活血清，为去除血清中补体等对热敏感的物质；2.在对补体灭活以外，还可去除血清中的支原体的污染，保证使用的安全性。
附图说明
20.图1本发明实施例1所得产品冻干后的样品图。
21.图2本发明实施例4所得产品冻干后的样品图。
具体实施方式
22.下面将结合本发明的具体实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，决不作为对本发明及其应用或使用的任何限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
23.需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
24.下面结合实施例对本发明进行详细说明，以方便本领域技术人员理解本发明。
25.本发明下述实施例中所使用的人血清收集自徐州矿务总医院；
26.牛血清购买自浙江天杭生物科技股份有限公司；
27.马血清和羊血清购买自北京博尔西科技有限公司；
28.样品的蛋白浓度检测使用的nanodrop(超微量紫外
‑
可见光分光光度计)购买自thermo fisher scientific；
29.抗原浓度的检测方法为：化学发光免疫分析法(使用基蛋生物全自动化学发光测定仪及配套试剂)；
30.本发明实施例使用的乙醇纯度为99.7％，购买自南京化学试剂股份有限公司。
31.实施例1
32.取一份正常人体检血清样品，测试样品的蛋白浓度为286mg/ml，样品中12个抗原项目的浓度分别为：
33.项目处理之前测值(浓度)tt3(nmol/l)1.73ft3(pmol/l)4.51tt4(nmol/l)118.06
ft4(pmol/l)19.15tsh(μiu/ml)1.58lh(miu/ml)3.74hcg(miu/ml)18.97fsh(miu/ml)4.36prl(ng/ml)3.41p(ng/ml)1.25t(ng/ml)0.64e2(pg/ml)29.73
34.步骤(1)：取上述人血清样品50ml，向其中加入15ml的乙醇，两者混合均匀后的混合液在2℃
‑
8℃冰箱中8h；
35.步骤(2)：对放置后的混合液进行离心，离心速度为5000r/min，离心时间为30min，离心结束后，吸取上清液备用，剩余残渣按当地生物垃圾的方式处理；此处的剩余残渣是指加入乙醇之后也会使得部分多余的纤维蛋白析出，不影响后续使用；
36.步骤(3)：将步骤(2)所得上清液放入水浴锅中，水浴温度为56℃，水浴时间为30min，结束后取出冷却至室温，加入3％质量体积比的的人血清白蛋白和5％质量体积比的的甘露醇，待溶解完全混合均匀后放置冰箱中保存备用；
37.步骤(4)：肉眼检测步骤(3)所得样品的颜色与处理前颜色相比无异，但看上去更清透，用nanodrop测试处理后的样品的蛋白浓度为138mg/ml，同时，对步骤(3)所得产品进行检测个项目抗原浓度，检测结果如下表所示。
[0038][0039]
上表中相对偏差的计算公式为：(处理之前测值
‑
处理之后测值)/处理之前测值。
[0040]
从上表可以看出，采用本发明的方法，可以简便快速的同时去除12种抗原，且大部分抗原的去除率达到了90％以上。
[0041]
将本实施例的处理后的产品，进行冻干，得到的冻干产品如图1所示，对本实施例所得产品进行三次冻干，可以看出，本实施例三次冻干所得产品均保持了冻干前的体积大小，形状也和冻干前基本没有变化，具有疏松多孔状(微小细孔)的结构，冻干粉无明显塌陷、膨胀或残留液体现象。
[0042]
实施例2
[0043]
将实施例1的步骤(1)中乙醇的加入量改为5ml，其他操作与实施例1完全相同，最终得到处理后的血清样品。对处理后所得产品进行检测，检测结果如下表所示。
[0044][0045]
从上表可以看出，当乙醇用量过少时，会导致血清中的抗原去除效果不佳，所有抗原的去除率均低于50％。
[0046]
实施例3
[0047]
将实施例1的步骤(1)中乙醇的加入量改为30ml，其他操作与实施例1完全相同，最终得到处理后的血清样品。对处理后所得产品进行检测，检测结果如下表所示。
[0048][0049]
从上表可以看出，所有抗原的去除率均极佳，这样导致处理之后测值过低，且处理后所得样品的颜色较淡，用nanodrop测试处理后样品的蛋白浓度为24mg/ml，与处理前样品相比蛋白浓度过低，降低了11倍多，默认处理后的血清品质和处理前有较大差异。
[0050]
实施例4
[0051]
将实施例1的步骤(3)中不加入人血清白蛋白和甘露醇，其他操作与实施例1完全相同，最终得到处理后的血清样品。然后将血清样品抽取与实施例1相同体积的三份进行进
行三次冻干，冻干后的效果如图2所示，可以看出，不加入人血清白蛋白和甘露醇的冻干效果很差，肉眼可见的本实施例的三次冻干的产品形状不饱满，冻干粉的形状和体积与冻干前的形状和体积有很大差别，部分产品有液体残留。
[0052]
实施例5
[0053]
取一份牛血清样品，测试样品中的蛋白浓度为289mg/ml，样品中12个项目的抗原浓度分别为：
[0054]
项目处理之前测值(浓度)tt3(nmol/l)1.75ft3(pmol/l)4.55tt4(nmol/l)120.51ft4(pmol/l)19.56tsh(μiu/ml)1.55lh(miu/ml)3.78hcg(miu/ml)19.10fsh(miu/ml)4.16prl(ng/ml)3.32p(ng/ml)1.31t(ng/ml)0.66e2(pg/ml)28.45
[0055]
步骤(1)：取上述牛血清样品50ml，向其中加入7.5ml的乙醇，两者混合均匀后的混合液在2℃
‑
8℃冰箱中12h；
[0056]
步骤(2)：对放置后的混合液进行离心，离心速度为1000r/min，离心时间为60min，离心结束后，吸取上清液备用，剩余残渣按当地生物垃圾的方式处理；
[0057]
步骤(3)：将步骤(2)所得上清液放入水浴锅中，水浴温度为56℃，水浴时间为30min，结束后取出冷却至室温，加入0％的蛋白和0％的糖类，待溶解完全混合均匀后放置冰箱中保存备用。
[0058]
步骤(4)：所得样品的颜色与处理前颜色相比无异，但看上去更清透，用nanodrop测试处理后的样品的蛋白浓度为182mg/ml，同时，对步骤(3)所得产品中的各项目抗原浓度进行检测，检测结果如下表所示。
[0059][0060]
实施例6
[0061]
取马血清样品，测试样品中的蛋白浓度为274mg/ml，样品中12个项目的抗原浓度分别为：
[0062]
项目处理之前测值(浓度)tt3(nmol/l)1.76ft3(pmol/l)4.54tt4(nmol/l)118.14ft4(pmol/l)19.58tsh(μiu/ml)1.51lh(miu/ml)3.60hcg(miu/ml)19.05fsh(miu/ml)4.48prl(ng/ml)3.57p(ng/ml)1.24t(ng/ml)0.63e2(pg/ml)30.36
[0063]
步骤(1)取上述马血清样品50ml，向其中加入25ml的乙醇，两者混合均匀后的混合液在2℃
‑
8℃冰箱中6h；
[0064]
步骤(2)对放置后的混合液进行离心，离心速度为10000r/min，离心时间为5min，离心结束后，吸取上清液备用，剩余残渣按当地生物垃圾的方式处理；
[0065]
步骤(3)将步骤(2)所得上清液放入水浴锅中，水浴温度为56℃，水浴时间为30min，结束后取出冷却至室温，加入5％的蛋白和10％的糖类，待溶解完全混合均匀后放置冰箱中保存备用。
[0066]
步骤(4)所得样品的颜色与处理前颜色相比无异，但看上去更清透，用nanodrop测试处理后的样品的蛋白浓度为118mg/ml，同时，对步骤(3)所得产品中的各项目抗原浓度进行检测，检测结果如下表所示。
[0067][0068]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。