用于治疗变态反应性疾病的益生菌组合的制作方法

用于治疗变态反应性疾病的益生菌组合
1.本发明涉及用于治疗或预防变态反应性疾病(包括食物变态反应和/或食物不耐受)的组合，以及采用该组合的组合物和方法。
2.变态反应是最常见的健康问题之一，影响所有年龄的患者的生活。变态反应性疾病当今被世界卫生组织(who)认为是流行病。在过去的几十年中，变态反应的患病率快速增加。据估计，全世界三分之一以上的人口受到影响，以致变态反应被认为是工业化国家的新型流行病。目前人们还不完全清楚引起变态反应性疾病稳定增长的原因。宿主的遗传背景是突出因素，并且最近发现的基因已被证实与呼吸道变态反应/哮喘和皮肤症状相关联。环境因素似乎在变态反应性表现的高患病率和较高严重性中起重要作用，诸如生活方式、污染、家庭规模缩小，以及由于卫生状况改善而使得在早期生命阶段微生物对免疫系统的刺激减少。
3.童年时期、尤其是童年早期发生过变态反应性致敏(尤其是食物变应原致敏)是危险的，并且引起了人们的高度关注，这是因为已经证实“变态反应性表型”或“特异反应性”的发展会促使后续被其他变应原致敏。因此，童年时期发生变态反应可能是变态反应性级联的第一步，该变态反应性级联在以后的生活中会引发多种变态反应(该过程通常被称为“特异反应性进程”)。例如，早期患有持续性食物超敏症的儿童在童年后期患上变态反应性鼻炎(花粉症)或哮喘的风险显著增大。患有轻度食物超敏症的儿童患上呼吸道变态反应的风险也有所增加，但其增加程度低于患有持续性食物超敏症的儿童。因此，缓解食物超敏症的严重程度对于减缓“特异反应性进程”可能至关重要。在这个背景下，管理变态反应的发作并且预防变态反应在童年时期和婴儿期极为重要。
4.在婴儿出生后的头几年中，其免疫系统处于活跃发育状态。干预、预防、避免、管理、减轻或调节这类年幼患者的变态反应性反应不仅可以影响其短期的变态反应性情况，还可以影响其以后生活中的长期变态反应性情况。
5.可以在不同水平上实现对变态反应的预防：
[0006]“一级预防”是指预防或降低患者被变应原致敏的风险这一效果，其特征在于不存在变应原特异性ige抗体或变应原特异性ige抗体的水平降低。预防或降低致敏的结果是，当接触同一变应原时，不出现变态反应症状或变态反应症状减轻。通过调节患者被一种变应原或一组变应原致敏的方式(一级预防)，还可以调节后续的变态反应性应答。
[0007]“二级预防”是指调节变态反应的症状这一效果，即，当已经被一种或几种变应原致敏的患者再次接触所述变应原时，是否发生变态反应性反应或变态反应性反应的强度。通过调节变态反应症状的发生率或强度(二级预防)，可将与变态反应有关的不适降至最低。
[0008]
考虑到变态反应的预防的这些不同概念，可以假设借助于这些概念的内在作用机制，某些化合物可在这些特定预防水平之一者或两者上单独发挥作用。例如，某些化合物可以单独减少被特定变应原致敏(一级预防)，而其他化合物可以单独对二级预防产生作用并且降低变态反应性反应的严重程度。其他化合物可以影响致敏情况和变态反应症状，从而能有效促进一级预防与二级预防。
[0009]
食物变应原是婴儿在生命早期遇到的头几种变应原之一，不只接受母乳喂养的婴儿通常可能遇到的是奶牛乳蛋白质。乳蛋白质确实是引起婴儿食物变态反应的最常观察到的原因之一，其次是蛋类和小麦蛋白质。一般来讲，婴儿和幼儿的食物变态反应可以表现为皮肤症状(皮疹、湿疹及其他)和胃肠道症状(腹部绞痛；疼痛，尤其是在腹部；呕吐)。食物变态反应是严重变态反应性反应的最常见触发因素，这些严重变态反应性反应可能导致危及生命的过敏症。当婴儿/幼儿接触新的食物(诸如谷类、蔬菜、水果、坚果或鱼)和空气传播的变应原(诸如花粉、屋尘螨和动物毛屑)时，也可能出现另外的致敏作用和变态反应发作。成人会在很大程度上受到接触性变态反应和呼吸道变态反应的影响。来自who的最近数据[clark，m.j.和million，r.p(2009)allergic rhinitis：market evolution，nature reviews，drug discovery，8，第271至272页]表明，全世界高达30％至40％的人口患有某种形式的呼吸道变态反应。
[0010]
动物，特别是小型动物诸如宠物(并且尤其是伴侣动物诸如犬和猫)，也可能遭受食物变态反应和食物不耐受，以及环境变应原。这些通常表现为与人相似的症状，例如胃肠道紊乱诸如腹泻、呕吐和腹部不适，以及皮炎或瘙痒。在小型动物(特别是犬)中，慢性腹泻的最常见原因是食物反应性肠病(饮食反应性肠病或食物反应性腹泻)。
[0011]
免疫疗法已用于治疗哮喘、变态反应性鼻炎和其他变态反应性应答。免疫疗法可以通过免疫应答调节来减少临床症状并且诱导对变应原的耐受。然而，免疫疗法(诸如脱敏疗法)对于治疗食物变态反应并不始终有效，而且对于呼吸道变态反应甚至更加无效。此外，免疫疗法在用于治疗食物变态反应(诸如坚果变态反应)时，可能诱发严重的全身性反应。
[0012]
在动物中，排除饮食、新型蛋白质饮食(例如，来自非典型动物来源的肉类)、水解饮食和膳食挑战已被用于治疗食物变态反应，但涉及特殊饮食的治疗可能是不切实际的，特别是对于长期使用而言，并且无法解决根本的问题。另外，通过排除饮食或其他特殊饮食来控制户外猫的饮食，即便不是不可能，也是很困难的。动物膳食挑战的管理可能需要相当长的时间，相当多的精力和兽医监督，因此可能不是切实可行的解决方案。
[0013]
因此，仍然需要开发用于治疗或预防婴儿、儿童和成人以及动物(特别是伴侣动物(宠物))的变态反应、变态反应性反应和/或症状的新策略，所述动物也可能遭受食物变态反应、空气传播的变态反应或接触性变态反应。
[0014]
胃肠道微生物群、肠屏障完整性和免疫系统
[0015]
胃肠道共生菌群构成了肠道相关淋巴组织和相关免疫系统发育的最早期和最大量的刺激物。
[0016]
流行病学研究充分证明，西式生活条件(例如，较少食用发酵食品、大量使用抗生素和其他药物、卫生条件改善)与变态反应性疾病的增涨有关。这与所谓的“卫生假说”有关，该假说提出童年早期缺乏与微生物刺激的接触是影响变态反应性疾病的患病率的主要因素。流行病学研究确实证明了发生变态反应性疾病和胃肠道菌群紊乱之间存在相关性。流行病学数据证明，与非特异反应性儿童相比，特异反应性儿童具有不同的肠道菌群。
[0017]
肠道菌群的此类变化还可能对肠屏障完整性具有负面影响。屏障功能受损，称为“肠漏症”，长期以来被认为是胃肠疾病的易感因素(heyman，m.eur.j.gastroenterol.hepatol.17：1279
‑
1285；odenwald m，.nature reviews gastroenterology&hepatology，
bifidum)、短双歧杆菌(bifidobacterium breve)和婴儿双歧杆菌(bifidobacterium infantis)诱导显著更多的促炎细胞因子分泌。此外，注意到青春双岐杆菌尤其不刺激抗炎细胞因子il
‑
10的产生。他们得出的结论是，成人型双歧杆菌可能更有效地扩增炎性应答，但不太能够下调炎性应答。然而，最近，鉴定用于治疗用途的最有前景的抗炎益生菌菌株的尝试已经表明益生菌的系统分类通常不是特定益生菌菌株的例如抗炎特性的可靠预测因子。


技术实现要素：

[0023]
本发明人已惊讶地发现，两种益生菌菌株任选地与长双歧杆菌atcc baa
‑
999的组合可以预防炎症诱导的肠屏障渗透性并且实现抗炎细胞因子(诸如il
‑
10)的产生或表达的增加，所述两种益生菌菌株包括长双歧杆菌和乳双歧杆菌，具体地讲是长双歧杆菌atcc cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446。因此，本发明的益生菌组合可用于提供治疗或预防变态反应性疾病和/或食物不耐受的有效疗法。
[0024]
本发明的益生菌组合可以在用于治疗或预防变态反应性疾病和/或食物不耐受的组合物中采用。
[0025]
本发明提供：
[0026]
用于治疗或预防变态反应性疾病和/或食物不耐受的方法，其包括将如本文所述的益生菌组合施用于个体，例如患有或易患这种疾病或不耐受的个体。
[0027]
用于治疗或预防变态反应性疾病和/或食物不耐受的益生菌组合，其中该益生菌组合包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446。
[0028]
该益生菌组合可以还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999。
[0029]
如本文所述使用的益生菌组合，其通过增强肠道屏障和肠道屏障完整性，并且更优选地，通过预防炎症诱导的肠屏障渗透性以限制变应原致敏。
[0030]
如本文所述使用的益生菌组合，其中变态反应性疾病或食物不耐受由抗炎细胞因子调节，优选地其中变态反应性疾病由il
‑
10调节；或者其中变态反应性疾病由t调节性细胞调节。
[0031]
如本文所述使用的益生菌组合，其中变态反应性疾病或食物不耐受通过有益细菌(诸如双歧杆菌和乳杆菌)的失衡来调节；或者其中变态反应性疾病或食物不耐受由氧化应激标志物或炎性标志物(诸如crp)调节。
[0032]
如本文所述的益生菌组合，用于：降低或阻抑变态反应性疾病和/或食物不耐受中的th2细胞因子(诸如(但不限于)il
‑
4和il
‑
5)的产生或表达；增加变态反应性疾病和/或食物不耐受中的抗炎细胞因子的产生或表达，优选地其中抗炎细胞因子是il
‑
10，并且更优选地调节变态反应性疾病和/或食物不耐受中的th1和th2细胞因子2的浓度比；增加变态反应性疾病和/或食物不耐受的肠道中的有益细菌(诸如双歧杆菌和乳杆菌)的群体；减少变态反应性疾病和/或食物不耐受中的氧化应激标志物或炎性标志物(诸如crp)；支持或促进变态反应性疾病和/或食物不耐受中的组织愈合，或者增强其中的肠道屏障；调节变态反应性疾病和/或食物不耐受中的t调节性细胞和/或b调节性细胞，优选地促进t调节性细胞活化。
[0033]
如本文所述使用的益生菌组合，其中变态反应性疾病是食物变态反应、呼吸道变态反应、皮肤变态反应。
[0034]
如本文所述使用的益生菌组合，其中变态反应性疾病是：鼻炎、哮喘、皮炎、特异反应性皮炎、接触性皮炎、湿疹、特异反应性湿疹、荨麻疹、牛皮癣、嗜酸性食管炎或嗜酸性细胞/肥大细胞相关的胃肠道疾病。
[0035]
如本文所述使用的益生菌组合，其中变态反应性疾病或食物不耐受中的变应原触发因素选自下列中的一种或多种：食物变应原、尘螨、花粉、霉菌或霉菌孢子、杂草花粉、树木花粉、草花粉、跳蚤、宠物毛发、羽毛或宠物毛屑。
[0036]
如本文所述使用的益生菌组合，其中变态反应性疾病或食物不耐受中的变应原触发因素为食物变应原，优选地其中食物变应原选自：坚果、树仁、花生、鱼、贝类、软体动物、甲壳类、奶、蛋、大豆、谷蛋白、谷类食物、小麦、燕麦、大麦、黑麦、芹菜、玉米、羽扇豆、亚硫酸盐、芝麻、芥末、稻米、家禽和肉类。
[0037]
如本文所述使用的益生菌组合物，其中该益生菌组合物增加抗炎细胞因子的浓度或表达，并且更优选地，其中抗炎细胞因子是il
‑
10。
[0038]
如本文所述使用的益生菌组合，其中个体为哺乳动物，优选地为人或伴侣动物，优选地其中个体为儿童、婴儿、青少年或成人、犬、幼犬、猫或幼猫。
[0039]
如本文所述使用的益生菌组合，其中该益生菌组合中的每种益生菌以等同于每天108cfu至10
12
cfu的量施用于个体。
[0040]
如本文所述使用的益生菌组合，其中该益生菌组合以组合物的形式施用。该组合物可以选自：药物制剂、兽医用制剂、营养制剂、管饲制剂、膳食补充剂、功能性食品、饮料产品和宠物护理产品。
[0041]
一种包含如本文所述的益生菌组合的组合物，其中该益生菌组合包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446，该组合物用于治疗或预防变态反应性疾病、或者用于治疗或预防食物不耐受。所述益生菌组合可以还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999。该组合物可以在益生菌组合中包含其量等同于每天108cfu至10
12
cfu的每种益生菌。该组合物可以选自：药物制剂、兽医用制剂、营养制剂、管饲制剂、膳食补充剂、功能性食品、饮料产品和宠物护理产品。
[0042]
在制造用于治疗或预防变态反应性疾病和/或食物不耐受的组合物中使用的益生菌组合，其中所述益生菌组合包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446。所述益生菌组合可以还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999。
[0043]
用于治疗或预防个体的变态反应性疾病和/或食物不耐受的方法，其包括向所述个体施用益生菌组合的步骤，其中该益生菌组合是长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446。该益生菌组合可以还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999。
附图说明
[0044]
图1：用不同益生菌菌株和组合刺激的外周血单核细胞中的细胞因子(il
‑
10)产生
[0045]
图2：用不同的益生菌菌株和组合预防炎症诱导的屏障渗透性
具体实施方式
[0046]
本文使用以下术语和定义：
[0047]
如本文所用的术语“包含”、“包括”和“由...构成”与“包括”或“含有”同义，其具有
microbiology.第7版，施普林格科学出版社，纽约州纽约，第790页)。通常，可通过如下现象证实不存在活细胞：接种不同浓度的细菌制剂(“非复制型”样品)，并在适当条件下(有氧和/或厌氧气氛中至少24小时)温育后，在琼脂平板上没有可见的菌落或在液体生长培养基中无浊度。
[0068]
优选的是，长双歧杆菌cncm i
‑
2618、长双歧杆菌cncm i
‑
2618和(当存在时)长双歧杆菌atcc baa
‑
999的至少一部分在该组合或组合物中是活的，并且优选地在到达肠时是活的。这样，它们可以持续存在于肠中，并且具有代谢活性。这可以提高其有效性。它们也可通过与共生菌和/或宿主相互作用来发挥效果。对于特殊的无菌食物产品或药物，例如，可能优选的是，长双歧杆菌cncm i
‑
2618、长双歧杆菌cncm i
‑
2618和(当存在时)长双歧杆菌atcc baa
‑
999以非复制型形式存在于该组合或组合物中。因此，在本发明的一个实施方案中，长双歧杆菌cncm i
‑
2618、长双歧杆菌cncm i
‑
2618和(当存在时)长双歧杆菌atcc baa
‑
999的至少一部分在该组合或组合物中是非复制型的。
[0069]
在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防变态反应性疾病和/或食物不耐受的益生菌组合，其中该益生菌组合包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446。任选地，益生菌组合还可包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999。
[0070]
在另一个实施方案中，本发明提供了包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的益生菌组合，其用于增加抗炎细胞因子(优选il
‑
10)的产生或表达，或者调节抗炎细胞因子(例如il
‑
10)的血清浓度比。
[0071]
在另一个实施方案中，本发明提供了包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的益生菌组合，其用于调节t调节性细胞。
[0072]
在另一个实施方案中，本发明提供了包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的益生菌组合，其通过增加肠道中的有益细菌(诸如双歧杆菌和乳杆菌)的群体来用于治疗或预防变态反应性疾病和/或食物不耐受。
[0073]
在另一个实施方案中，本发明提供了包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的益生菌组合，其通过减少氧化应激标志物或炎性标志物(诸如crp)来用于治疗或预防变态反应性疾病和/或食物不耐受。
[0074]
在另一个实施方案中，本发明提供了包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的益生菌组合，其通过支持或促进组织愈合或者通过增强肠道屏障完整性和/或功能来用于治疗或预防变态反应性疾病和/或食物不耐受。
[0075]
包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的该益生菌组合优选地用于治疗或预防变态反应性疾病和/或食物不耐受，优选地，该变态反应性疾病或食物不耐受由抗炎细胞因子(例如il
‑
10)调节。变态反应性疾病或食物不耐受可以是可以由il
‑
10和/或通过t调节性细胞分化调节的疾病或食物不耐受。
[0076]
在本发明的任何方面或实施方案中，变态反应性疾病和/或食物不耐受可以通过有益细菌(诸如双歧杆菌和乳杆菌)的失衡来调节，和/或可以由氧化应激标志物或炎性标
志物(诸如crp)来调节。
[0077]
本发明还提供了包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的益生菌组合，其用于治疗或预防变态反应性疾病和/或食物不耐受。变态反应性疾病可以是食物变态反应、呼吸道变态反应或皮肤变态反应。具体的变态反应性疾病的示例可以是鼻炎、哮喘、皮炎、特异反应性皮炎、接触性皮炎、湿疹、特异反应性湿疹、荨麻疹、牛皮癣、嗜酸性食管炎或嗜酸性细胞/肥大细胞相关的胃肠道疾病。
[0078]
本发明的任何方面或实施方案的益生菌组合可以用于治疗或预防变态反应性疾病，其中变应原触发因素是环境变应原，优选地选自下列中的一种或多种：尘螨、花粉、霉菌或霉菌孢子、杂草花粉、树木花粉、草花粉、跳蚤、宠物毛发、羽毛或宠物毛屑。
[0079]
优选地，使用本发明的益生菌组合治疗或预防变态反应性疾病和/或食物不耐受包括增加抗炎细胞因子(优选il
‑
10)的产生或表达。
[0080]
待治疗的个体优选地为哺乳动物，优选地为人或伴侣动物(宠物)，优选地其中个体为儿童、婴儿、青少年或成人、犬、幼犬、猫或幼猫。
[0081]
在另一个实施方案中，该益生菌组合用于治疗或预防食物变态反应和/或食物不耐受，其中变态反应性疾病或食物不耐受中的变应原触发因素优选地选自：坚果、树仁、花生、鱼、贝类、软体动物、甲壳类、奶、蛋、大豆、谷蛋白、谷类食物、小麦、燕麦、大麦、黑麦、芹菜、玉米、羽扇豆、亚硫酸盐、芝麻、芥末、稻米、家禽和肉类。在该实施方案中，食物变态反应或食物不耐受的治疗或预防优选地在人类中进行。
[0082]
另选地，根据本发明的任何方面或实施方案使用的益生菌组合用于治疗或预防伴侣动物(宠物)的食物变态反应和/或食物不耐受，所述伴侣动物优选地为犬或猫，并且更优选地为犬，其中变态反应性疾病或食物不耐受中的变应原触发因素选自肉类，诸如羔羊肉、牛肉、家禽肉、猪肉；鱼；甲壳类；玉米、稻米；小麦；土豆；奶和蛋。
[0083]
因此，本发明还提供了包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的益生菌组合，其用于治疗猫或犬的食物变态反应和/或食物不耐受。益生菌组合优选地为组合物的形式，更优选地为宠物食品(尤其是干燥宠物食品)或宠物营养补充剂或兽医用组合物(尤其是片剂、胶囊或干粉)。
[0084]
在另一个实施方案中，待治疗的个体是犬、幼犬、猫或幼猫。因此，本发明还提供了包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的益生菌组合，其用于治疗或预防伴侣动物(优选犬或猫)的变态反应性疾病，例如食物变态反应和/或食物不耐受。益生菌组合优选地为组合物的形式，更优选地为宠物食品、宠物营养补充剂或兽医用组合物。
[0085]
在另一个实施方案中，待治疗的个体为儿童、婴儿、青少年或成人。因此，本发明还提供了包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的益生菌组合，其用于治疗或预防这些个体的食物变态反应或食物不耐受。益生菌组合优选地为组合物的形式，更优选地为食物、营养补充剂或药物组合物(尤其是片剂、胶囊、颗粒或干粉)。
[0086]
在本发明的任何实施方案中，该益生菌组合可以包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳酸双歧杆菌cncm i
‑
3446作为唯一的益生菌。该益生菌组合优选地为组合物的形式，更优
选地为食品、营养补充剂或者药物组合物或兽医用组合物的形式。
[0087]
在本发明的任何实施方案中，该益生菌组合可以包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳酸双歧杆菌cncm i
‑
3446和长双歧杆菌atcc baa
‑
999。另选地，根据本发明的任何实施方案的益生菌组合可包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳酸双歧杆菌cncm i
‑
3446和长双歧杆菌atcc baa
‑
999作为唯一益生菌。该益生菌组合优选地为组合物的形式，更优选地为食品、营养补充剂或者药物组合物或兽医用组合物的形式。
[0088]
益生菌组合可为如任何实施方案中所述的组合物形式，其中组合物包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳酸双歧杆菌cncm i
‑
3446作为唯一益生菌。该益生菌组合物优选地为食品、营养补充剂或者药物组合物或兽医用组合物的形式。
[0089]
益生菌组合可为如任何实施方案中所述的组合物形式，其中组合物包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳酸双歧杆菌cncm i
‑
3446和长双歧杆菌atcc baa
‑
999。另选地，益生菌组合可为如任何实施方案中所述的组合物形式，其中组合物包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳酸双歧杆菌cncm i
‑
3446和长双歧杆菌atcc baa
‑
999作为唯一益生菌。该益生菌组合物优选地为食品、营养补充剂或者药物组合物或兽医用组合物的形式。
[0090]
可使用任何合适剂量的益生菌组合。优选地，在本发明的任何实施方案中，该益生菌组合包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳酸双歧杆菌cncm 1
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999，其中每种益生菌均以等同于每天107cfu至10
12
cfu的量施用给个体。
[0091]
虽然组合中的益生菌组分可在不进一步加工的情况下使用，但根据本发明的任何实施方案的益生菌组合优选地以组合物的形式施用。合适的组合物包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳酸双歧杆菌cncm i
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999，其可以优选地为以下形式：药物制剂或兽医用制剂，其包含一种或多种药学上可接受或兽医学可接受的赋形剂；营养制剂(例如，包括营养补充剂)、管饲制剂、膳食补充剂、功能性食品、饮料产品和宠物护理产品(例如，宠物食品或宠物营养补充剂)。
[0092]
药物制剂或兽医用制剂可以为片剂、胶囊、颗粒或粉末的形式。
[0093]
根据本发明的任何实施方案，该组合物可以包含其量等同于每天107cfu至10
12
cfu的每种益生菌。该量可以为单剂量，或分布在多个剂量上。
[0094]
还提供了包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳酸双歧杆菌cncm i
‑
3446并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的益生菌组合，在制造用于治疗或预防变态反应性疾病(例如，食物变态反应和/或食物不耐受)的组合物中使用。
[0095]
本发明还提供了用于治疗或预防个体中的变态反应性疾病(例如食物变态反应和/或食物不耐受)的方法，其包括向所述个体施用益生菌组合的步骤，其中该益生菌组合包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999。
[0096]
可提供包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳酸双歧杆菌cncm i
‑
3446并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的本发明的益生菌组合，用于同时或顺序施用每种益生菌。另选地，益生菌组合可被配制为单一组合物。
[0097]
包含长双歧杆菌cncm 1
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
2446，并且任选地还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的益生菌组合可以作为包含例如107个至10
12
个菌落形成单位(cfu)的每种益生菌组分的组合物(例如，胶囊、片剂、颗粒或粉末)施用，或者可以掺入营养组合物
诸如营养全面配方食品(例如婴儿配方食品或临床营养产品)、乳制品、饮料粉末、脱水汤粉、膳食补充剂、代餐物、营养棒、谷类食物、甜食产品或干燥宠物食品中。
[0098]
在一个实施方案中，组合可为包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳酸双歧杆菌cncm i
‑
2446两者的单个胶囊的形式，或者为包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳酸双歧杆菌cncm i
‑
2446和长双歧杆菌atcc baa
‑
999的单个胶囊的形式。
[0099]
另选地，组合可作为单独胶囊提供，在一个胶囊中包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618并且在另一个胶囊中包含乳酸双歧杆菌cncm i
‑
2446，用于同时或顺序施用；或者组合可作为包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳酸双歧杆菌cncm i
‑
2446和长双歧杆菌atcc baa
‑
999的单独胶囊提供，作为用于同时或顺序施用的单独胶囊。
[0100]
当掺入营养组合物中时，长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446以及任选的长双歧杆菌atcc baa
‑
999可以各自以等同于介于5
×
104与10
19
cfu/g之间的量存在于该组合物中。这些关于数量的表达包括以下可能性：细菌是活的、失活的或死亡的，或甚至作为诸如dna或细胞壁物质的碎片或作为代谢物存在。换句话讲，细菌数量根据该数量细菌的菌落形成能力表示，就好像所有细菌都是活的，而不论它们实际上是活的、失活的、死亡的、碎片化的或为这些状态的任何或全部的混合。优选地，长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳双歧杆菌cncm i
‑
3446和长双歧杆菌atcc baa
‑
999(当存在时)中的每一者以等同于介于5
×
104至109，更优选地107至109cfu/g干组合物的量存在。
[0101]
在其中益生菌组合还包含长双歧杆菌atcc baa
‑
999的本发明的实施方案中，长双歧杆菌atcc baa
‑
999可以存在于同一组合物中或存在于单独的组合物中，以用于同时施用或顺序施用。例如，在上述胶囊中，长双歧杆菌atcc baa
‑
999可以与长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446一起包封在胶囊中，其中每个胶囊包含每种菌株的107个至109个菌落形成单位(cfu)。同样，可以将包含长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳双歧杆菌cncm 1
‑
3446和长双歧杆菌atcc baa
‑
999的组合物掺入营养组合物诸如营养全面配方食品(例如婴儿配方食品或临床营养产品)、乳制品、饮料粉末、脱水汤粉、膳食补充剂、代餐物、营养棒、谷类食物、甜食产品或干燥宠物食品中。
[0102]
长双歧杆菌cncm 1
‑
2618和乳酸双歧杆菌cncm i
‑
3446各自可根据任何合适的方法培养，然后通过例如冷冻干燥或喷雾干燥进行制备，以供包封或添加到营养组合物中。另选地，可购买已经以合适形式制备好的它们，以供添加到食物产品中。
[0103]
atcc baa
‑
999可商购获得，并且可以商标bb536购自日本的森永乳业株式会社。其可根据任何合适的方法培养，然后通过例如冷冻干燥或喷雾干燥进行制备，以供包封或添加到营养组合物中。另选地，可购买已经以合适形式制备好的菌株，以供添加到食物产品中。
[0104]
用于本发明的营养全面配方食品可包含蛋白质源，优选地为膳食蛋白质，诸如动物蛋白质(例如乳、肉或卵蛋白)、植物蛋白(例如大豆、小麦、大米或豌豆蛋白)；游离氨基酸的混合物；或其组合。乳蛋白(诸如酪蛋白和乳清蛋白)和大豆蛋白是特别优选的。该组合物还可以含有碳水化合物源和脂肪源。
[0105]
如果配方食品包含脂肪源，则脂肪源优选地提供配方食品的5％至55％的能量；例如20％至50％的能量。构成脂肪源的脂质可以是任何合适的脂肪或脂肪混合物。植物脂肪诸如大豆油、棕榈油、椰子油、红花油、向日葵油、玉米油、低芥酸菜籽油和卵磷脂是尤其适
宜的。如果需要，还可加入动物脂肪，诸如乳脂肪。
[0106]
如果配方食品包含碳水化合物源，则碳水化合物源优选地提供配方食品的40％至80％的能量。可使用任何合适的碳水化合物，例如蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖、玉米糖浆固体、麦芽糊精及其混合物。如果需要，也可添加膳食纤维。膳食纤维可来自任何适宜的源，包括例如大豆、豌豆、燕麦、果胶、瓜尔胶、阿拉伯树胶、低聚果糖、低聚半乳糖、唾液乳糖和源自动物乳的低聚糖。合适的维生素和矿物质可以满足适当指南的量包含在营养配方食品中。
[0107]
本发明的组合物还可包含益生元。益生元通常是非消化性的，在这个意义上来讲，它们在胃或小肠中是不能被分解和吸收的，因而它们通过胃和小肠到达结肠时可保持完整，在结肠处通过有益菌选择性地发酵。益生元的示例包括某些低聚糖，诸如低聚果糖(fos)、菊粉、低聚木糖(xos)、聚右旋糖或它们的任何混合物。在具体实施方案中，益生元可为低聚果糖和/或菊粉。另一个示例是70％短链低聚果糖与30％菊粉的组合，这是由nestl
é
公司以商标“prebio 1”注册的。
[0108]
如果需要，可将一种或多种食品级的乳化剂掺入到营养配方食品中；例如二乙酰基酒石酸单和双甘油酯、卵磷脂以及单和双甘油酯。相似地，可包含合适的盐和稳定剂。
[0109]
该营养全面配方食品可以任何合适的方式制备。例如，可以适当的比例将蛋白质源、碳水化合物源和脂肪源共混在一起。如果使用乳化剂，则可将其包含在共混物中。此时可添加维生素和矿物质，但为了避免热降解，通常在稍晚一点的时候添加。在共混之前，可先将任何亲脂性维生素、乳化剂等溶解于脂肪源中。然后可混入水(优选经受反渗透的水)，以形成液体混合物。
[0110]
随后可对液体混合物进行热处理，以降低细菌载量。例如，可以将液体混合物迅速加热到约80℃至约110℃范围内的温度，保持约3秒至约5分钟。这可通过蒸汽喷射或热交换器例如板式热交换器或管式热交换器来实施。
[0111]
然后，可例如通过急速冷却将液体混合物冷却到约60℃至约85℃范围内的温度。接着可将液体混合物均质化；例如分两个阶段进行：第一阶段在约10mpa至约30mpa下进行，第二阶段在约2mpa至约10mpa下进行。然后可进一步冷却均质化混合物，以添加任何热敏感组分；诸如维生素和矿物质。此刻便利地将均质化混合物的ph和固体含量标准化。
[0112]
然后可以将均质化混合物转移进合适的干燥装置(诸如喷雾干燥器或冷冻干燥器)，并且将其转变成粉末。该粉末的水分含量应小于约5重量％。可以通过干混将长双歧杆菌cncm i
‑
2618和/或乳双歧杆菌cncm i
‑
3446和/或长双歧杆菌atcc baa
‑
999以期望的量添加到该粉末中。
[0113]
用于本发明的干燥宠物食物可包括碳水化合物源、蛋白质源和脂质源中的任何一者或多者。
[0114]
可使用任何合适的碳水化合物源。优选地，碳水化合物源以谷物、面粉或淀粉的形式提供。例如，碳水化合物源可为大米、大麦、高粱、小米、燕麦、玉米粗粉或小麦粉。也可使用普通糖，诸如蔗糖、葡萄糖和玉米糖浆。可根据需要选择由碳水化合物源提供的碳水化合物的量。例如，宠物食物可包含按重量计最多约60％的碳水化合物。
[0115]
合适的蛋白质源可选自任何合适的动物蛋白质源或植物蛋白质源；例如肌肉或骨骼肌、肉和骨粉、禽肉粉、鱼粉、乳蛋白、玉米谷蛋白、小麦谷蛋白、大豆粉、大豆蛋白浓缩物、大豆蛋白分离物、卵蛋白、乳清、酪蛋白、谷蛋白等。对于老年动物，优选的是蛋白质源包含
高质量的动物蛋白质。可根据需要选择由蛋白质源提供的蛋白质的量。例如，宠物食物可包含按干燥基重量计约12％至约70％的蛋白质。
[0116]
宠物食物可包含脂肪源。可使用任何合适的脂肪源。优选地，脂肪源为动物脂肪源，诸如牛脂。也可使用植物油，诸如玉米油、葵花油、红花油、菜籽油、大豆油、橄榄油和其他富含单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸的油。除了必需脂肪酸(亚油酸和α
‑
亚油酸)之外，脂肪源还可包括长链脂肪酸。合适的长链脂肪酸包括γ亚油酸、十八碳四烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。鱼油是二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的合适源。琉璃苣油、黑醋栗种子油和月见草油是γ亚油酸的合适源。菜籽油、大豆油、亚麻籽油和核桃油是α
‑
亚麻酸的合适来源。红花油、葵花油、玉米油和大豆油是亚油酸的合适源。橄榄油、菜籽油(低芥酸菜籽油)、高油酸葵花油、红花油、花生油和米糠油是单不饱和脂肪酸的合适源。可根据需要选择由脂肪源提供的脂肪的量。例如，宠物食物可包含按干燥基重量计约5％至约40％的脂肪。优选地，宠物食物具有相对减少的脂肪量。
[0117]
碳水化合物、蛋白质和脂质源的选择不是关键性的，并且将基于动物的营养需求、适口性考虑事项和所生产的产品的类型进行选择。此外，还可根据需要将各种其他成分例如糖、盐、香料、调味品、维生素、矿物质、风味剂、树胶和益生微生物掺入到宠物食物中。
[0118]
对于老年宠物，宠物食物优选地包含比针对年轻宠物的宠物食物成比例更少的脂肪。此外，淀粉源可包括燕麦、大米、大麦、小麦和玉米中的一者或多者。
[0119]
宠物食物可通过挤出烹制来生产，但也可使用烘焙和其他合适的方法。当挤出烹制时，宠物食物通常以粗磨食物的形式提供。益生菌组分可优选地涂覆到干燥宠物食物上或填充到干燥宠物食物中。合适的方法在欧洲专利申请号0862863有述。
[0120]
本发明的益生菌组合及其组合物可以用于治疗、管理或预防患有变态反应性疾病或食物不耐受的个体或者易患变态反应性疾病或食物不耐受的个体(例如，具有特异反应性病史的个体)的变态反应性疾病和/或食物不耐受。
[0121]
通常，组合物可选自食品组合物、宠物食品组合物、膳食补充剂、营养食品、营养配方食品、饮料和/或药物组合物。
[0122]
适用于本发明的食品组合物的示例为酸奶、牛奶、调味奶、冰淇淋、即食甜点、用例如牛奶或水复原的粉末、巧克力乳饮料、麦芽饮料、供人食用的即食菜肴、速食菜肴或饮料、或代表旨在用于宠物或牲畜的完整或部分饮食的食品组合物。因此，在一个实施方案中，根据本发明的组合物是旨在用于人、宠物或牲畜并且优选地用于人和宠物的食物产品。在一个优选的实施方案中，组合物为旨在用于人类(婴儿、儿童、青少年或成人)或伴侣动物(宠物)(优选犬、幼犬、猫或幼猫)的食物产品或膳食补充剂。
[0123]
本发明的组合物还可包含保护性亲水胶体(诸如胶类、蛋白质类、改性淀粉类)、粘合剂、成膜剂、包囊剂/材料、壁/壳材料、基质化合物、包衣、乳化剂、表面活性剂、增溶剂(油类、脂肪类、蜡类、卵磷脂类等)、吸附剂、载体、填充剂、共化合物、分散剂、润湿剂、加工助剂(溶剂)、流动剂、掩味剂、增重剂、胶凝剂、凝胶形成剂、抗氧化剂和抗微生物剂。该组合物可以还包含常规的药物添加剂和佐剂、赋形剂和稀释剂，包括但不限于水、任何来源的明胶、植物胶、木质素磺酸盐、滑石、糖类、淀粉、阿拉伯树胶、植物油、聚亚烷基二醇、风味剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、缓冲剂、润滑剂、着色剂、润湿剂、填充剂等。在所有的情况下，将考虑它们对预期接受者的适用性来选择此类另外的组分。
[0124]
组合物可为营养全面配方食品。根据本发明的组合物可包含蛋白质源。
[0125]
可以使用任何合适的膳食蛋白质，例如动物蛋白质(诸如乳蛋白质、肉类蛋白质和蛋类蛋白质)；植物蛋白质(诸如大豆蛋白质、小麦蛋白质、稻米蛋白质和豌豆蛋白质)；游离氨基酸的混合物；或其组合。
[0126]
该蛋白质可为完整的或水解的，或为完整蛋白质和水解蛋白质的混合物。例如对于处于发展成牛奶变态反应风险的人类个体和/或动物而言，可能希望提供部分水解的蛋白质(水解程度介于2％和20％之间)。
[0127]
此外，预水解蛋白质源通常更易被受损胃肠道消化和吸收。
[0128]
如果需要水解的蛋白质，则可根据需要并且如本领域已知的那样进行水解过程。可能希望提供部分水解的蛋白质(水解程度介于2％和20％之间)。
[0129]
例如，可通过在一个或多个步骤中对乳清级分进行酶法水解来制备乳清蛋白水解物。如果用作原料的乳清级分基本上不含乳糖，则发现该蛋白质在水解过程期间经受少得多的赖氨酸封闭(1ysine blockage)。这使得能够将赖氨酸封闭的程度从约15重量％的总赖氨酸减少至小于约10重量％的赖氨酸；例如约7重量％的赖氨酸，这大大地改善蛋白质源的营养质量。
[0130]
该组合物还可以含有碳水化合物源和脂肪源。如果组合物包含脂肪源，则脂肪源优选地提供组合物的5％至40％的能量；例如20％至30％的能量。可使用低芥酸菜籽油、玉米油以及高油酸葵花油的共混物来获得合适的脂肪分布型。
[0131]
可向组合物中加入碳水化合物源。
[0132]
碳水化合物源优选地提供组合物的40％至80％的能量。可使用任何合适的碳水化合物，例如蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖、玉米糖浆固体、麦芽糊精及其混合物。如果需要，也可添加膳食纤维。膳食纤维通过小肠而不被酶消化，并且起到天然膨松剂和轻泻剂的功能。膳食纤维可为可溶的或不溶的，并且一般来说两种类型的共混物是优选的。合适的膳食纤维源包括大豆、豌豆、燕麦、果胶、瓜尔胶、部分水解的瓜尔胶、阿拉伯树胶、低聚果糖、酸性低聚糖、低聚半乳糖、唾液乳糖以及来源于动物乳的低聚糖。优选的纤维混合物是菊粉与较短链低聚果糖的混合物。优选地，如果存在纤维，则纤维含量在消耗的组合物的2g/l与40g/l之间，更优选在4g/l与10g/l之间。
[0133]
根据政府机构推荐(诸如usrda)，组合物也可包含矿物质和微量营养素，诸如微量元素和维生素。例如，组合物可包含以下给定范围内的日剂量的以下微量营养素中的一种或多种：300mg至500mg的钙、50mg至100mg的镁、150mg至250mg的磷、5mg至20mg的铁、1mg至7mg的锌、0.1mg至0.3mg的铜、50μg至200μg的碘、5μg至15μg的硒、1000μg至3000μg的β胡萝卜素、10mg至80mg的维生素c、1mg至2mg的维生素b1、0.5mg至1.5mg的维生素b6、0.5mg至2mg的维生素b2、5mg至18mg的烟酸、0.5μg至2.0μg的维生素b12、100μg至800μg的叶酸、30μg至70μg的生物素、1μg至5μg的维生素d、3μg至10μg的维生素e。
[0134]
如果需要，可将一种或多种食品级的乳化剂掺入到组合物中；例如二乙酰基酒石酸单和双甘油酯、卵磷脂以及单和双甘油酯。相似地，可包含合适的盐和稳定剂。
[0135]
所述组合物可口服或经胃肠内施用；例如呈粉末的形式，供用奶或水复原。
[0136]
这些组合物以足以至少部分地治疗或阻止变态反应性疾病或食物不耐受及其并发症的症状的量施用。足以实现这一点的量被定义为“治疗有效剂量”。有效实现该目的的
量将取决于本领域技术人员已知的许多要素，诸如疾病的严重程度以及患者的体重和一般情况。
[0137]
在预防应用中，将根据本发明的组合物以足以至少部分地降低发生疾病的风险的量施用给易患特定疾病或处于特定疾病风险中的患者。这样的量被定义为“预防有效剂量”。同样，精确用量取决于患者的若干具体要素，诸如患者的健康状态和体重。
[0138]
一般来讲，长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳双歧杆菌cncm i
‑
3446和(如果存在)长双歧杆菌atcc baa
‑
999将各自以治疗有效剂量和/或预防有效剂量施用。
[0139]
如果长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳双歧杆菌cncm i
‑
3446和(如果存在)长双歧杆菌atcc baa
‑
999以活的形式存在，则考虑到这些细菌可以定殖在肠道中并且繁殖这一事实，理论上任何浓度都是有效的。就本发明的组合物而言，通常优选的是每日剂量的组合物包含介于104cfu和10
12
cfu之间的益生菌剂中的每种益生菌剂。每种益生菌的特别合适的日剂量为108cfu至10
12
cfu。
[0140]
在失活和/或非复制型长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳酸双歧杆菌cncm i
‑
3446和(当存在时)长双歧杆菌atcc baa
‑
999的情况下，通常优选的是本发明的组合物包含介于102个与10
12
个之间的长双歧杆菌atcc baa
‑
999非复制型细胞/每克组合物干重。益生菌中的每种益生菌的特别合适的剂量为每克组合物干重103至10
12
个非复制型细胞，更优选地105至108个非复制型细胞。
[0141]
显然，非复制型微生物不形成菌落，因此术语“细胞”应被理解为从特定量的复制型细菌细胞得到的非复制型微生物的量。这包括失活的、无活力的、死亡的或作为诸如dna或细胞壁物质的碎片存在的微生物。
[0142]
本发明的组合物可以具有小于0.2的水活度(例如在0.19至0.05的范围内，优选小于0.15)的粉末形式提供。
[0143]
组合物可以是货架稳定的粉末。低水活度提供这种货架稳定性，并且确保即使在较长的储存时间后益生微生物仍将保持存活。
[0144]
水活度或aw是系统中的水的能量状态度量。它被定义为水的蒸气压除以相同温度下纯水的蒸气压；因此，纯蒸馏水的水活度恰好为1。
[0145]
除此之外或另选地，益生微生物长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳酸双歧杆菌cncm i
‑
3446和(如果存在)长双歧杆菌atcc baa
‑
999可以以包封形式提供。
[0146]
已发现，细菌的包封具有治疗和技术优点。包封提高细菌的存活率，因此增加到达肠的活细菌的数目。此外，细菌逐渐释放，从而使细菌长效作用于个体的健康。细菌可为微胶囊化的，例如如fr2443247(soci
é
t
éꢀ
des produits nestl
é
)所述，该文献以引用方式并入本文。简而言之，细菌可经冷冻或喷雾干燥并掺入到凝胶中。
[0147]
现在将参照以下实施例进一步描述本发明。
[0148]
实施例
[0149]
细菌的制备：
[0150]
在测定前一天，将得自nestl
éꢀ
culture collection的三种所选择的细菌菌株ncc 3001、2818和2705在10ml mrs 半胱氨酸中培养，并且在厌氧条件下在37℃处生长16小时。
[0151]
将细菌培养物以5000rpm离心5分钟(室温)。将细菌团块悬浮在冷的磷酸盐缓冲盐水(pbs)(10ml)中。在600nm处测量每种细菌培养物的光密度。根据验证od和cfu的对应关系
的在选择性琼脂培养基上计数细菌菌落形成单位的预测试，将rpmi培养基中的经调节的细菌制剂设定为具有5
×
106cfu/ml和1
×
107cfu/ml。
[0152]
外周血单核细胞(pbmc)的制备：
[0153]
将从三个健康供体分离的pbmc在pbs中洗涤一次。以500g离心5分钟之后，将细胞团块悬浮在2ml rpmi 10％胎牛血清(fcs)中。对细胞进行计数，并且制备物被调节成具有2
×
106个细胞/ml。
[0154]
用细菌刺激pbmc：
[0155]
将pbmc接种到12孔培养板(500μl)中，然后加入细菌制剂(500μl)。将共培养物在37℃处用10％co2温育24小时。
[0156]
对于细胞因子分析，将上清液以500g离心5分钟并转移到新管中。将样品保存在
‑
20℃处，直到评估。通过elisa(il
‑
10 elisa，r&d systems，mn)测量细胞因子il
‑
10。
[0157]
肠屏障渗透性的评估
[0158]
将caco
‑
2和ht
‑
29
‑
mtx细胞以3∶1的比率在聚苯乙烯过滤器内芯上的12孔培养板中共培养。在分化时(14天)，将共培养物用细菌制剂(5
×
106)预温育24小时，之后用tnfα(0.6ng/ml)和ifnγ(2.5ng/ml)进行基底侧刺激，以改变屏障完整性(对照物)。在16小时之后测量经上皮电阻(teer)以量化炎症诱导的屏障渗透性变化，示出为teer相比于用tnfα/ifnγ处理的对照物的增加百分比。
[0159]
结果示于图1和图2中。如图1中清楚地示出，根据本发明的长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌的组合在增加抗炎细胞因子il
‑
10的产生方面令人惊讶地有效(图1)。
[0160]
图1还证实，当采用本发明的长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳双歧杆菌cncm i
‑
3446和长双歧杆菌atcc baa
‑
999的三重组合时，对抗炎细胞因子il
‑
10的产生增加具有令人惊讶的协同效应。
[0161]
如图2中清楚地示出并且根据本发明，与单一菌株或两种菌株的组合相比，长双歧杆菌cncm i
‑
2618和乳双歧杆菌cncm i
‑
3446在预防炎症诱导的屏障渗透性方面令人惊讶地有效。根据本发明的一个方面的长双歧杆菌cncm i
‑
2618、乳双歧杆菌cncm i
‑
3446和长双歧杆菌atcc baa
‑
999的三重组合还示出预防炎症诱导的屏障破坏(图2)，尽管程度较小。
[0162]
pct
[0163]
[0164][0165]
仅由受理局填写
[0166][0167]
仅由国际局填写
[0168]