一种新型免疫层析唾液检测试剂盒的制作方法

1.本实用新型属于生物检测技术领域，涉及一种新型免疫层析检测装置，尤其涉及一种适用于检测新型冠状病毒的新型免疫层析唾液检测试剂盒。


背景技术：

2.目前临床诊断新型冠状病毒sars
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2的最常用手段是通过采集鼻咽部分泌物或血液样本，虽然核酸检测是临床确诊sars
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2的金标准，但是由于实施核酸检测需要有专门的仪器和标准的分子检测实验室，对设备场地和操作人员要求极高、操作繁琐、耗时长，并且检测人员感染风险较高，同时也给患者造成了很大的不适感。因此，开发出新的sars
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2筛查诊断技术将有利于推动本次及今后的疫情防控工作。
3.目前针对以上问题已经有中国专利申请202010184358.x等公开了检测covid
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19的荧光免疫层析装置及其使用方法，有中国专利申请202010184382等公开了检测covid
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19的胶体金免疫层析装置及使用方法，对应的产品可以应用于基层的早期初步筛查，但是其仍然存在一定的操作缺陷，特别是检测病毒抗原的方法需要先对采集到的样本进行稀释或裂解才能进一步进行检测，从患者口咽或鼻咽处采集样本，采样后先在检测装置以外的其他辅助装置中将采集到的样本进行处理，再将处理后的样本添加到检测装置中进行结果检测。这种采样可能增加病毒传播给缺乏足够个人防护装备的医护人员和卫生保健工作者的风险，操作步骤不是最简化的，容易造成操作误差，从而对检测结果产生一定的影响。
4.因此急需一种适于患者自我采集、自行进行样本前处理、自行检测的，更加便利高效的，适于新型冠状病毒的新型免疫层析唾液检测装置。


技术实现要素：

5.为弥补已有技术的缺陷，本实用新型提供了一种新型免疫层析唾液检测试剂盒，所述试剂盒包含唾液采集装置和唾液检测装置，唾液检测装置中设置有试纸条和专门用于装前处理试剂区域。试剂盒在使用时，先将采集的唾液样本浸入前处理试剂，完成前处理后再进行样品的过滤和检测，能够保障样本的前处理效果，从而保障检测结果的准确性。本实用新型提供的免疫层析唾液检测试剂盒可用于新型冠状病毒sars
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2免疫层析检测，通过诊断新冠抗原阳性来确诊新型冠状病毒阳性，使用方便，快速高效，适合各类医疗机构或个人对新型冠状病毒的快速诊断。采集唾液样本的操作和结果判读比较简单，因此患者可在监督下进行自我采集，从而降低病毒向医护人员和卫生保健工作者传播的风险。
6.本实用新型提供的免疫层析检测装置可采用口腔直接采取唾液样本的方式进行样本采集，与其他上呼吸道部位的取样相比，口腔取样具有较小的侵入性和较少的病人不适感。采集唾液样本的操作技术简单，因此可以通过缩短操作时间和允许患者在监督下进行自我采集，从而降低病毒向医护人员和卫生保健工作者传播的风险。患者在监督下进行自我收集，也减少了个人防护装备的利用，相较于现有的方式，本实用新型的检测方式简单、快速、高效，具有更大的市场需求。
7.本实用新型提供了一种新型免疫层析唾液检测试剂盒，包括唾液采集装置和唾液检测装置，所述唾液检测装置中含有试纸条和唾液样本前处理试剂。
8.进一步地，所述唾液采集装置包含手持端和样本采集端，所述样本采集端由吸水性材料制成。
9.在一些实施方式中，样本采集端采用海绵制成。
10.进一步地，所述唾液检测装置包括盒盖和盒体，所述盒体的顶部用封口膜密封。
11.在一些方式中，盒盖与盒体采用螺纹配合或卡扣配合。
12.进一步地，所述盒体包括装置a区和装置b区，其中装置a区装有唾液样本前处理试剂，装置b区设有唾液样本挤压口和/或唾液样本过滤部件。
13.进一步地，所述过滤部件为过滤网，所述过滤网能承受较大应力。
14.在一些实施方式中，过滤网选取能承受较大应力的材料制得，使样本采集端可直接在过滤网上面按压，挤出唾液，从而无需设置挤压口。
15.进一步地，所述挤压口为由上向下逐渐变窄，且最窄处小于样本采集端未吸取样本前的尺寸。
16.所述挤压口由上向下逐渐变窄，但形状不限，只要能实现挤压样本采集端即可。挤压口最窄处小于样本采集端未吸取样本前的直径，可保证对样本采集端的充分挤压。
17.进一步地，所述盒体还包括装置c区，用于放置试纸条，装置c区和装置b区完全连通或底部连通。
18.在一些实施方式中，装置c区和装置b区完全连通，相当于装置c区和装置b区合为一个区，相当于试纸条也位于b区；还有一些实施方式中，装置c区和装置b区中间被隔开，但底部相通，待测样本可由b区进入c区，供试纸条进行检测。
19.进一步地，所述盒体表面印有说明书；装置b区标有样本量最低刻度线和样本量最高刻度线。
20.样本量最低刻度线和样本量最高刻度线设于b区挤压口和过滤网下方，便于操作者观察样本量是否足够检测。
21.进一步地，所述试纸条粘贴在在装置c区内表面；所述说明书印刷在装置c区外表面，且位于试纸条对应位置两侧。
22.在一些实施方式中，说明书印刷在c区外表面，对应试纸条的两侧，不影响观察试纸条，且方便使用者阅读说明书并进行结果判读。
23.在一些实施方式中，试纸条粘贴在装置c区内表面。
24.进一步地，所述试纸条包括样品垫、结合垫、反应膜、吸水垫和pvc底板，所述结合垫上包被有胶体金标记的病毒蛋白单克隆抗体。
25.在一些实施方式中，结合垫上包被有胶体金颗粒标记的新型冠状病毒np蛋白单克隆抗体。
26.进一步地，所述反应膜为硝酸纤维素膜，沿样品流动方向依次设有检测线和质控线。
27.在一些实施方式中，所述检测线上包被有新型冠状病毒np蛋白单克隆抗体，所述质控线上包被有山羊抗鼠多克隆抗体。
28.进一步地，所述前处理液试剂为用于唾液样品中的病毒的裂解试剂。
29.进一步地，所述前处理液试剂为用于唾液样品中的新型冠状病毒的裂解试剂。
30.本实用新型的有益效果为：本实用新型提供了一种新型的免疫层析唾液检测试剂盒，所述试剂盒包含唾液采集装置和唾液检测装置，唾液检测装置中设置有装前处理试剂区域、样本挤出过滤区域和试纸条，使用时先将采集的唾液样本浸入前处理试剂，完成前处理后再进行样品的挤出过滤和检测，保障样本前处理效果，从而保障检测结果的准确性。本试剂盒特别适用于新型冠状病毒sars
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2免疫层析检测，采用口腔直接采取唾液样本的方式进行样本采集，方便患者自我采样、自行检测即可确诊新型冠状病毒的阴阳性，使用方便，快速高效，降低病毒向医护人员和卫生保健工作者传播的风险，也减少了个人防护装备的利用，适合各类医疗机构或个人对新型冠状病毒感染情况的初期快速诊断。
附图说明
31.图1为实施例1中的新型免疫层析唾液检测试剂盒的主视图；
32.图2为实施例1中的新型免疫层析唾液检测试剂盒的左视图；
33.图3为实施例1中的新型免疫层析唾液检测试剂盒的右视图；
34.图4为实施例1中的新型免疫层析唾液检测试剂盒的俯视图；
35.图5为实施例1中的试纸条的结构图；
36.图6为实施例1中的试纸条的结果判定图；
具体实施方式
37.下面结合实施例对本实用新型作进一步详细描述，需要指出的是，以下所述实施例旨在便于对本实用新型的理解，而对其不起任何限定作用。本实施例中未特别指出的试剂均为已知产品，通过购买市售产品获得。
38.实施例1本实用新型提供的新型免疫层析唾液检测装置
39.本实施例提供的新型免疫层析唾液检测装置如图1
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5所示，其中图1为新型免疫层析唾液检测试剂盒的主视图，图2为左视图，图3为右视图，图4为俯视图，图5为试纸条结构图。
40.如图1，本实施例提供的新型免疫层析唾液检测装置包括唾液采集装置20和唾液检测装置30，所述唾液检测装置中含有试纸条7和唾液样本前处理试剂8。
41.优选地，所述唾液采集装置包含手持端1和样本采集端2，所述样本采集端2由吸水性材料制成，本实施例中，样本采集端2由海绵制成。
42.优选地，所述唾液检测装置20包括盒盖5和盒体40(如图2、3)，盒盖5与盒体40采用螺纹配合或卡扣连接；盒体40的顶部用封口膜6密封。
43.优选地，所述盒体40包括装置a区3和装置b区4，其中装置a区3装有唾液样本前处理试剂8，装置b区4设有唾液样本挤压口9和/或过滤网21。装置b区4可以仅设置挤压口9，或是仅设置过滤网21，也可以同时设置挤压口9和过滤网21。
44.优选地，所述过滤网21选取能承受较大应力的材料制得，能承受较大应力，使样本采集端2可直接在过滤网21上面按压，挤出唾液，从而无需设置挤压口9。
45.优选地，所述挤压口9为由上向下逐渐变窄，但形状不限，只要能实现挤压样本采集端2即可；挤压口9最窄处小于样本采集端2未吸取溶液前的尺寸，可保证对样本采集端2
的充分挤压。
46.优选地，所述盒体40还包括装置c区22，用于放置试纸条7，装置c区22和装置b区4完全连通或底部连通。当装置c区22和装置b区4完全连通，相当于装置c区22和装置b区4合为一个装置b区4，相当于试纸条7也位装置b区4；当装置c区22和装置b区4中间被隔开，但底部相通，待测样本可由装置b区4进入装置c区22，供试纸条7进行检测。
47.优选地，所述盒体40表面印有说明书；装置b区4标有样本量最低刻度线11和样本量最高刻度线10。样本量最低刻度线11和样本量最高刻度线10设于b区挤压口9和过滤网21下方，便于操作者观察样本量是否足够检测。
48.优选地，所述试纸条7粘贴在在装置c区22内表面；所述说明书印刷在装置c区22外表面，且位于试纸条7对应位置两侧；说明书也可印刷在盒体40其他区域，方便测试者阅读即可。本实施例中，说明书印刷在c区22外表面，对应试纸条7的两侧，不影响观察试纸条7，且方便使用者阅读说明书并进行结果判读；同时，试纸条7粘贴在装置c区22的内表面。
49.优选地，如图5，所述试纸条7包括样品垫17、结合垫16、反应膜15、吸水垫12和pvc底板18，所述结合垫16上包被有胶体金标记的新型冠状病毒np蛋白单克隆抗体。
50.优选地，所述反应膜15为硝酸纤维素膜，沿样品流动方向依次设有检测线14和质控线13；所述检测线14上包被有新型冠状病毒np蛋白单克隆抗体，所述质控线13上包被有山羊抗鼠多克隆抗体。
51.优选地，所述前处理液试剂8为用于唾液样品中的新型冠状病毒的裂解试剂。
52.实施例2新型冠状病毒sars
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2抗原免疫层析唾液检测试纸条的制备
53.本实施例提供的新型冠状病毒sars
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2抗原免疫层析唾液检测试纸条的制备方法如下：
54.步骤一：胶体金标记新型冠状病毒np蛋白单克隆抗体
55.将胶体金溶液与新型冠状病毒np蛋白单克隆抗体混匀反应，得到标记抗体，用复溶液复溶。
56.步骤二：样本垫处理
57.(1)配置样本垫处理液：0.02
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0.1m ph 8.0硼酸缓冲液，0.05
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0.3％酪蛋白，1.0
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5.0％表面活性剂，0.2
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2.0％bsa。
58.(2)将处理液均匀分散在玻璃纤维上，37℃干燥箱过夜干燥，取出置于铝箔袋内封口备用。
59.步骤三：结合垫处理
60.(1)配置结合垫处理液：0.02
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0.2m ph 8.0pbs，0.5
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3.0％的bsa。
61.(2)将处理液均匀分散在玻璃纤维上，37℃干燥箱过夜干燥，取出置于铝箔袋内封口备用。
62.步骤四：抗体标记物稀释喷涂
63.(1)将步骤一胶体金标记的病毒蛋白单克隆抗体用划膜喷金仪以1.5
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3.5ul/cm喷涂在步骤三处理好的结合垫上，置于37℃干燥箱过夜干燥，取出置于铝箔袋封口待用。
64.步骤五；硝酸纤维素膜划膜
65.(1)将新型冠状病毒np蛋白单克隆抗体用pbs稀释，作为t线溶液。
66.(2)将山羊抗鼠多克隆抗体用pbs稀释，作为c线溶液。
67.(3)用划膜喷金仪以0.5
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1.0ul/cm进行划膜，置于37℃干燥箱过夜干燥，取出置于铝箔袋封口待用。
68.步骤六：组装切割与装袋
69.(1)将步骤二处理好的样本垫，步骤四喷涂好抗体标记物的结合垫，步骤五处理好的硝酸纤维素膜，吸水纸裁切为适当宽度，依次黏在底板上，每层之间搭牢1
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2mm。
70.(2)将粘好的大卡用斩切机斩切成4mm宽测试卡，固定在检测装置中。
71.(3)顶部用pp封口膜密封，盖上盒盖。
72.(4)装入铝箔袋中密封保存。
73.实施例3新型冠状病毒sars
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2抗原免疫层析唾液检测试剂盒的检测方法
74.本实施例采用实施例1提供的新型免疫层析唾液检测试剂盒，其中的试纸条采用实施例2提供的试纸条，进行样本检测，具体检测方法包括以下步骤：
75.测试前，先将检测试剂盒恢复至室温。
76.(1)从铝箔袋中取出唾液采集装置20，将样本采集端2放入口腔中，含3～5min，待样本采集端2吸取足够唾液后，取出。
77.(2)打开唾液检测装置30的盒盖，再撕下密封在唾液检测装置30顶部的pp封口膜6。
78.(3)将样本采集端2插入装置a区3的样本处理液8中，旋转样本采集端2约10秒钟。
79.(4)再将样本采集端2插入装置b区4中，检测装置b区4下端有挤压口9，待样本采集端2慢慢深入采挤压口9，由于挤压口9的直径逐渐缩小，并且最窄处小于样本采集端2未吸取溶液前的直径，所以样本采集端2会被充分挤压，待样本量达到检测装置b区的样本量最低刻度线11与样本量最高刻度线10之间时，结束对样本采集端2的挤压，盖上盒盖；挤压口9下方还可设置滤网21，达到过滤杂质的效果。检测装置b区也可仅设置有滤网，手握手持端1，在过滤网21处按压，待样本量最低刻度线11与样本量最高刻度线10之间时，结束对样本采集端2的挤压，盖上盒盖。
80.(5)检测开始，唾液样本浸湿试纸条的样本垫区域，通过毛细作用层析到反应区域，反应复合物沿着反应垫向前扩散，被固定在检测线上的包被抗体捕获，从而在包被抗体处显示出肉眼可见的颜色信号。吸水垫为收集层析反应的废液，拉动层析反应往该方向进行。
81.(6)15～20min判读测试结果。如图6所示，若质控线c和检测线t均显紫红色，则结果为阳性；若只有质控线c显紫红色，检测线t不显色，则结果为阴性；若质控线c和检测t均不显紫红色，则结果无效；若质控线c未显示紫红色，即使检测线t显示紫红色，测试结果也无效。
82.实施例4新型冠状病毒的免疫层析唾液检测试剂盒的验证
83.将病毒培养物1.51
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106tcid
50
/ml分别稀释成100倍、800倍、3200倍、6400倍作为待测样本。判读检测结果时参考图6进行比对。
84.如图6所示，若质控线c和检测线t均显紫红色，则结果为阳性；若只有质控线c显紫红色，检测线t不显色，则结果为阴性；若质控线c和检测t均不显紫红色，则结果无效；若质控线c未显示紫红色，即使检测线t显示紫红色，测试结果也无效。
85.共分两组进行，第一组为先进行样品裂解处理再使用检测试纸条(具体结果见表
1)，第二组为使用实施例1提供的唾液检测试剂盒，及实施例2提供的试纸条，进行检测(具体结果见表2)，每一个处理重复10次。具体实验过程如下：
86.1)检测装置在15
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30℃复温。
87.2)将病毒培养物分别稀释成100倍、800倍、3200倍、6400倍。
88.3)采集唾液样本后分别按照2)中的梯度添加稀释后的的病毒培养物到唾液样本中共得到4份样本，样本的病毒培养物浓度分别为1/6400、1/3200、1/800、1/100，除此之外另有1份样本不添加病毒培养物，其培养物浓度为0，作为对照组。
89.4)将两组组检测装置分别从密封的铝箔袋中取出，放在干净和水平的平面上。
90.6)取60微升添加裂解液的样本滴加到第一组的试纸条；采用样本采集装置采集唾液样本后，通过第二组的检测试剂盒进行检测(检测方法如实施例3)。
91.7)室温放置在水平桌面上15～20min后，通过检视窗判读测试结果。
92.检测结果分别如表1、表2所示，当稀释倍数相同时，第一组与第二组的结果相符，与真实结果一致，因此，采用本实用新型所述的检测装置进行病毒检测是可行的，唾液检测装置上设置装有裂解液的样本前处理区，其上包括裂解试剂，可以真正实现快速高效的检测病毒。这样的检测装置减少了步骤，可由患者自行操作，降低了前处理步骤造成对于操作人员可能的二次污染。
93.表1、第一组结果：样本进行裂解后加入检测试纸条进行检测的结果
94.培养物浓度01/64001/32001/8001/100重复1阴性阳性阳性阳性阳性重复2阴性阳性阳性阳性阳性重复3阴性阳性阳性阳性阳性重复4阴性阳性阳性阳性阳性重复5阴性阳性阳性阳性阳性重复6阴性阳性阳性阳性阳性重复7阴性阳性阳性阳性阳性重复8阴性阳性阳性阳性阳性重复9阴性阳性阳性阳性阳性重复10阴性阳性阳性阳性阳性阳性率％0％100％100％100％100％
95.表2、第二组结果：样本利用本技术提供的检测装置进行检测的结果
96.[0097][0098]
本实用新型说明书中提到的所有专利和出版物都表示这些是本领域的公开技术，本实用新型可以使用。这里所引用的所有专利和出版物都被同样列在参考文献中，跟每一个出版物具体的单独被参考引用一样。这里所述的本实用新型可以在缺乏任何一种元素或多种元素，一种限制或多种限制的情况下实现，这里这种限制没有特别说明。例如这里每一个实例中术语“包含”，“实质由
……
组成”和“由
……
组成”可以用两者之一的其余2个术语代替。这里的所谓的“一个”仅仅表示“一”的意思，而不排除仅仅只是包括一个，也可以表示包括2个以上。这里采用的术语和表达方式所为描述方式，而不受其限制，这里也没有任何意图来指明此书描述的这些术语和解释排除了任何等同的特征，但是可以知道，可以在本实用新型和权利要求的范围内做任何合适的改变或修改。可以理解，本实用新型所描述的实施例子都是一些优选的实施例子和特点，任何本领域的一般技术人员都可以根据本实用新型描述的精髓下做一些更改和变化，这些更改和变化也被认为属于本实用新型的范围和独立权利要求以及附属权利要求所限制的范围内。