盐酸克林霉素棕榈酸酯的含量检测方法与流程

1.本发明涉及原料药质量控制领域，特别涉及盐酸克林霉素棕榈酸酯的含量检测方法。


背景技术：

2.盐酸克林霉素棕榈酸酯(clindamycin palmitate hydochloride，cph)是克林霉素的衍生物，它是一种新型林可霉素类抗生素，是克林霉素和棕榈酸酯化物的水溶性盐酸盐。
3.盐酸克林霉素棕榈酸酯在体外无活性，在体内能迅速转化为具有抗菌活性的克林霉素，具有较高的抗菌作用，对革兰阳性需氧菌、厌氧杆菌、衣原体、支原体均有活性。临床上广泛用于敏感菌引起的败血症、细菌性内膜炎、呼吸道、软组织、骨关节、耳部、泌尿生殖系统感染的治疗。
4.盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药是制备盐酸克林霉素棕榈酸酯药物制剂的活性成分，出于对药品质量控制的目的，有必要对原料药中盐酸克林霉素棕榈酸酯的含量进行检测。


技术实现要素：

5.有鉴于此，本发明提供了一种盐酸克林霉素棕榈酸酯的含量检测方法。
6.具体技术方案如下：
7.本发明提供了一种盐酸克林霉素棕榈酸酯的含量检测方法，采用高效液相色谱法检测盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药中盐酸克林霉素棕榈酸酯的含量，所述方法包括以下步骤：
8.(1)进行系统适应性试验，以确定色谱的理论塔板数和分离度；
9.(2)确定高效液相色谱法检测的线性范围；
10.(3)进行重复性试验以确定所述高效液相色谱法的精密度；
11.(4)进行回收率试验以确定所述高效液相色谱法的准确度；
12.(5)在理论塔板数大于3000，分离度大于1.5，精密度和准确度的rsd均小于2.0的情况下，在所确定的线性范围内采用所述高效液相色谱法检测盐酸克林霉素棕榈酸酯的含量；
13.其中，所述高效液相色谱法的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为醋酸铵溶液
‑
0.21％丁二酸二辛酯磺酸钠甲醇溶液。
14.在本发明的一些实施方式中，所述醋酸铵溶液和0.21％丁二酸二辛酯磺酸钠甲醇溶液的体积比为20∶480。
15.在本发明的一些实施方式中，所述高效液相色谱法采用等度洗脱。
16.在本发明的一些实施方式中，步骤(5)包括
17.用流动相配制盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药的供试品溶液以及盐酸克林霉素棕
榈酸酯的对照品溶液；
18.将所述供试品溶液和所述对照品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
19.分别量取供试品溶液色谱图中盐酸克林霉素棕榈酸酯的峰面积a
供
和对照品溶液色谱图中盐酸克林霉素棕榈酸酯的峰面积a
对
，按以下公式确定供试品溶液中盐酸克林霉素棕榈酸酯的浓度c
供
：
20.c
供
＝(a
供
/a
对
)*c
对
，其中，c
对
为对照品溶液中盐酸克林霉素棕榈酸酯的浓度；
21.根据c
供
确定盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药中盐酸克林霉素棕榈酸酯的含量。
22.在本发明的一些实施方式中，所述供试品溶液和所述对照品溶液的浓度相同。
23.在本发明的一些实施方式中，所述供试品溶液中盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药的浓度为4.517mg/ml～67.749mg/ml。
24.在本发明的一些实施方式中，所述供试品溶液中盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药的浓度为18mg/ml。
25.在本发明的一些实施方式中，所述供试品溶液和所述对照品溶液的进样量均为20μl。
26.有益效果
27.本技术采用高效液相色谱法对盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药中盐酸克林霉素棕榈酸酯的含量进行检测，根据测定数据表明，理论板数以主成分盐酸克林霉素棕榈酸酯峰计算均大于3000，分离度1.89以上，保证了有关物质峰与主成分峰的良好分离。此外，该方法也具有较好的精密度和准确度，因此可以确定，本发明提供的高效液相色谱法，可以准确地检测出盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药中盐酸克林霉素棕榈酸酯的含量，为盐酸克林霉素棕榈酸酯药物制剂的质量控制提供依据。
具体实施方式
28.为使本技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面通过具体实施例将对本技术的技术方案进行清楚、完整地描述。
29.需要说明的是，以下实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
30.实施例1系统适用性试验
31.色谱条件
32.仪器：岛津lc
‑
9a高效液相色谱仪；
33.岛津rid
‑
10a示差折光检测器；js
‑
3050色谱工作站；
34.色谱柱：hypersil ods2(4.6mm
×
200mm，5μm)；
35.流动相：醋酸铵溶液
‑
0.21％丁二酸二辛酯磺酸钠甲醇溶液(20∶480)；
36.流速：1.0ml/min；
37.进样量：20μl；
38.其中，醋酸铵溶液按以下方法制得：取醋酸铵3.85g，加5％醋酸溶液溶解并稀释至100ml。
39.试验过程
40.取盐酸克林霉素棕榈酸酯对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml
约含18mg的溶液，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样5次；计算其理论板数、分离度及重复进样的相对标准偏差。结果见下表：
[0041][0042][0043]
根据测定数据表明，理论板数以主成分盐酸克林霉素棕榈酸酯峰计算均大于3000，有关物质峰与主成分峰均良好分离，重复进样相对标准偏差为0.65％，均满足系统要求。
[0044]
实施例2线性范围的确定
[0045]
贮备液的制备
[0046]
精密称取盐酸克林霉素棕榈酸酯对照品2.2583g，置25ml量瓶中。以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。每1ml中含盐酸克林霉素棕榈酸酯对照品90.332mg。
[0047]
供试液的制备
[0048]
精密量取贮备液0.5、1.0、2.0、4.0与7.5ml，分别用流动相稀释至10ml量瓶中，摇匀，制备成一系列浓度的供试品溶液。分别精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果如下表：
[0049]
盐酸克林霉素棕榈酸酯线性范围测试结果
[0050][0051]
试验结果表明：盐酸克林霉素棕榈酸酯在4.517mg/ml～67.749mg/ml浓度范围内呈良好线性关系。
[0052]
实施例3重复性试验
[0053]
取盐酸克林霉素棕榈酸酯对照品适量，精密称取6份，各置10ml量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算每份样品的含量，测试结果如下表：
[0054]
重复性试验结果
[0055]
序号123456平均值rsd％含量(％)58.2458.6958.0357.7858.1758.8758.300.70
[0056]
通过重复性试验可以看出，本发明的高效液相色谱法的精密度满足相关要求。
[0057]
实施例4回收率试验
[0058]
取供试品(盐酸克林霉素棕榈酸酯含量：60.4％)1.8262g，置10ml量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，精密量取1.0ml置10ml量瓶中共9份。再另取对照品1.8186g置10ml量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度。然后按低、中、高三个不同浓度将后配制的对照品溶液分别精密加入到已知含量的供试品中，以流动相稀释至刻度，摇匀。分别量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，另取对照品适量，同法测定，以峰面积按外标法计算，求出回收率，结果如下表：
[0059]
低、中、高三个不同浓度回收率测试表
[0060][0061]
通过回收率试验可以看出，本发明的高效液相色谱法的准确度满足相关要求。
[0062]
实施例5盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药的检测
[0063]
取本公司自制的盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药3批样品，按照以上实施例所制订的含量检测方法和条件，进行含量测定。具体检测过程如下：
[0064]
用流动相配制浓度均为18mg/ml盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药的供试品溶液以及盐酸克林霉素棕榈酸酯的对照品溶液；
[0065]
将20μl供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0066]
分别量取供试品溶液色谱图中盐酸克林霉素棕榈酸酯的峰面积a
供
和对照品溶液色谱图中盐酸克林霉素棕榈酸酯的峰面积a
对
，按以下公式确定供试品溶液中盐酸克林霉素棕榈酸酯的浓度c
供
：
[0067]
c
供
＝(a
供
/a
对
)*c
对
，其中，c
对
为对照品溶液中盐酸克林霉素棕榈酸酯的浓度；
[0068]
根据c
供
确定盐酸克林霉素棕榈酸酯原料药中盐酸克林霉素棕榈酸酯的含量。
[0069]
3批样品测定结果如下表：
[0070]
3批样品含量测定结果
[0071]
样品批号080108020803含量(％)58.3357.2957.46
[0072]
经过以上各项试验及对含量测定方法的验证和样品实际测定，结果表明，本发明提供的测定方法可行，可以准确地控制产品的质量。
[0073]
以上所述仅为本技术的优选实施例而已，并不用于限制本技术，对于本领域中的技术人员来说，本技术可以有各种修改和变化。凡在本技术的主旨和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本技术的保护范围之内。