一种磁响应前列地尔微球的制备方法与流程

1.本发明涉及磁性靶向治疗领域，尤其涉及一种磁响应前列地尔微球的制备方法。


背景技术：

2.前列地尔，又称前列腺素e，是一种天然前列腺素(prostaglandin，pg)类物质，是多不饱和脂肪酸二高r
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亚油脂酸的氧化产物，具有内源性前列腺素e相类似的性质和特点。内源性前列腺素e是正常生物体内广泛分布的一种前列腺素物质，化学性质比较活泼，多在局部发挥作用后被迅速灭活。前列地尔作为一种高效生物活性的前列腺素物质,有多种生物学作用，不仅可以明显抑制毛细血管平滑肌收缩，减少血小板聚集、抑制血栓烷a2生成，增加红细胞变形能力、减少红细胞聚集,从而改善微循环，同时还能通过作用于血管内皮，减少其分泌内皮素，使其内皮型一氧化氮合酶的活性和表达升高，增加血清一氧化氮含量，发挥抑制神经损伤、预防和逆转动脉粥样脂质斑块的形成等多种作用。磁性前列地尔微球在外加磁场的作用下，可以实现靶向性地将前列地尔运送到病变部位，减少全身其他组织药物浓度，实现靶向性治疗的目的。
3.磁流体作为一种磁性载药粒子，是把经表面活性剂处理过纳米级(即粒径在几纳米到几百纳米之间)的超细铁磁性或超顺磁性颗粒高度均匀地分散到一定的基液(载液)中，从而形成的一种具有磁性的稳定、功能化胶体溶液或悬浮液。因此，磁流体既有固体材料的强磁性又有液体材料的流变性铁磁流体，是一种常用的磁性颗粒，它可与高分子物质结合，制备形成磁性高分子物质，这种磁性高分子物质具有良好的表面效应，当粒径达到纳米级时，形成磁性纳米高分子物质携带的药物量会急剧增加，并且在外加磁场的作用下能够快速运动和迅速分离，可以明显提高药物疗效。已被广泛应用于磁流体热疗、磁栓塞封死治疗、磁性药物靶向治疗、影像学检查、细胞分离等领域。其在磁性药物靶向治疗中，磁流体可作为药物的磁性载体粒子，携带特定药物在外加磁场作用下在体内靶向移动、定位蓄积，提高靶部位药物的浓度，减少药物对全身其他正常组织的毒性和不良反应。近几年，国内外先后有学者就磁性药物的靶向治疗进行了一系列的基础实验、动物实验和临床实验，结果表明磁性靶向治疗这种方案是安全的，是有效的。目前该领域的研究主要集中在肿瘤治疗方面，而在器官缺血再灌注损伤防治领域，特别是脊柱缺血再灌注损伤领域尚无报导。


技术实现要素：

4.本发明目的在于提供一种磁响应前列地尔微球的制备方法，适用于脊柱缺血再灌注损伤领域。
5.本发明的技术方案如下：
6.本发明提供一种磁响应前列地尔微球的制备方法，主要通过双乳化
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溶剂挥发法制备聚乳酸
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羟基乙酸共聚物(plga)
‑
前列地尔微球，之后使用静电吸附自组装法，制备得到磁响应前列地尔微球，具体包含以下步骤：
7.(1)称取聚乳酸
‑
羟基乙酸共聚物(plga)置入二氯甲烷溶液中，振荡使之充分溶
解；
8.(2)将步骤(1)中加入前列地尔溶液，使用超声探头乳化，形成初级乳化物(w1/o)；
9.(3)将步骤(2)中形成的w1/o溶液加入到聚乙烯醇(pva)溶液中，高速分散均质机均质，形成次级乳化物(w1/o/w2)；
10.(4)将步骤(3)中次级乳化物(w1/o/w2)溶液置于搅拌器过夜搅拌，使微球表面固化，二氯甲烷尽量挥发；
11.(5)将步骤(4)中搅拌后的溶液分装入离心管中，高速冷冻离心机中离心，从离心机中取出试管，弃上清液，再加入适量双蒸水洗涤，用旋涡混合仪充分混匀，再离心，再洗涤，共离心洗涤三次；
12.(6)将步骤(5)中得到plga
‑
前列地尔微球悬液加入到聚乙稀亚胺(pei)溶液中，振荡充分混匀后，摇晃吸附、离心、去上层清液，再加入去离子水重新涡旋振荡分散，离心洗涤两次，除去没有吸附上的聚乙稀亚胺(pei)；
13.(7)将步骤(6)中加入γ
‑
fe2o3@dmsa，共孵育吸附，在同样条件下磁分离洗涤三次，重新分散于去离子水中，得到磁响应前列地尔微球。
14.在步骤(1)中，聚乳酸
‑
羟基乙酸共聚物(plga)用量为500mg,二氯甲烷溶液为20ml。
15.在步骤(2)中，前列地尔溶液用量为5ml、溶度为0.5
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3ug/ml，初级乳化物的乳化时间为50
‑
150s。
16.在步骤(3)中，聚乙烯醇溶液用量为100ml、浓度为1％
‑
5％，高速分散均质机均质时间为5
‑
15min。
17.在步骤(6)中，聚乙稀亚胺(pei)用量为100ml、溶液浓度为1％
‑
5％，吸附时间为10
‑
30min,离心条件为转速1500
‑
3500rpm，时间5
‑
10min，温度为10
‑
20℃。
18.在步骤(7)中，共孵育吸附时间为20
‑
40min。
19.本发明通过双乳化
‑
溶剂挥发法和静电吸附自组装法来制备磁响应前列地尔微球，通过物理及化学方法将药物、磁性材料包裹在高分子耦合剂中制成的具有磁响应的药物，在靶部位聚集，提高靶部位药物的浓度，提高疾病治疗作用并降低全身不良反应。
附图说明
20.图1为前列地尔plga微球制备流程图；
21.图2为磁响应前列地尔微球的制备流程图；
22.图3为磁响应前列地尔微球原子力显微镜(afm)图；
23.图4为磁响应前列地尔微球的扫描电镜(sem)图；
24.图5为磁响应前列地尔微球的磁滞回线图；
25.图6为磁响应前列地尔微球在磷酸盐缓冲盐溶液中的累积释放曲线。
具体实施方式
26.以下通过具体实施例进一步说明本发明，但本领域技术人员应当知晓本发明的具体实施例并不以任何方式限制本发明，且在本发明基础上所作出的任何等同替换均落入本发明的保护范围。
27.实施例
28.1、磁响应前列地尔微球制备方法
29.(1)称取500mg聚乳酸
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羟基乙酸共聚物(plga)置入20ml二氯甲烷溶液中，振荡使之充分溶解。
30.(2)在步骤(1)中加入5ml前列地尔(1ug/ml)溶液，使用超声探头乳化100s，形成初级乳化物(w1/o)。
31.(3)将步骤(2)中形成的w1/o溶液加入到100ml的3％聚乙烯醇(pva)溶液中，高速分散均质机均质10min，形成次级乳化物(w1/o/w2)。
32.(4)将步骤(3)中次级乳化物(w1/o/w2)溶液置于搅拌器过夜搅拌，使微球表面固化，二氯甲烷尽量挥发。
33.(5)将步骤(4)中搅拌后的溶液分装入50ml离心管中，高速冷冻离心机中离心，从离心机中取出试管，弃上清液，再加入适量双蒸水洗涤，用旋涡混合仪充分混匀，再离心，再洗涤，共离心洗涤三次，收集后放置4℃冰箱中保存备用。
34.(6)将步骤(5)中得到前列地尔plga微球悬液取10ml加入25ml浓度为3％的聚乙稀亚胺(pei)溶液中，振荡充分混勾后，摇晃吸附15min，然后离心(3000rpm，5min，15℃)后，去上层清液，再加入去离子水重新涡旋振荡分散，离心洗涤两次，除去没有吸附上的聚乙稀亚胺(pei)。
35.(7)将步骤(6)中加入5mlγ
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fe2o3@dmsa，共孵育吸附30min，在同样条件下磁分离洗涤三次，重新分散于去离子水中，得到磁响应前列地尔微球，将最终收集的样品用封口膜密封，密封置于4℃冰箱保存备用。
36.2、磁响应前列地尔微球性能表征结果
37.2.1磁响应前列地尔微球原子力显微镜(afm)图
38.由图3可知双乳化
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溶剂挥发法制备的磁响应前列地尔微球在自然晾干后都存在微小球状结构，干态粒径均在100nm以下，但两者也存在一定团聚现象。
39.2.2磁响应前列地尔微球的扫描电镜(sem)图
40.由图4可知双乳化
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溶剂挥发法制备的磁响应前列地尔微球均成球状，具有良好的单分散性，微球径均在20nm左右，也存在少量团聚现象。
41.2.3磁响应前列地尔微球的振动样品磁强计(vsm)磁滞回线图
42.由图5可知磁响应前列地尔微球比饱和磁化强度为82.4065emu/g。
43.2.4磁响应前列地尔微球的载药及载药情况
44.根据标准工作曲线可得磁响应前列地尔微球载药量为3.2wt.％，包覆率达77.9％。
45.由图6可知，磁性plga微球在磷酸缓冲盐溶液中1h内的释药率达15.0％。在120h后的释药率为72.4％，240h之后稳定在84.4％。