一种夜蛾黑卵蜂低温保藏的方法与流程

1.本发明涉及昆虫养殖技术领域，特别是涉及一种夜蛾黑卵蜂低温保藏的方法。


背景技术：

2.夜蛾黑卵蜂(telenomus remus nixon)，属膜翅目(hymenoptera)广腹细蜂科(platygastridae)，是多种鳞翅目夜蛾科昆虫卵期重要的寄生性天敌。1937年nixon首次在马来西亚采集的夜蛾属卵中发现了夜蛾黑卵蜂并对其进行了描述。2007年沈智蓉在斜纹夜蛾的生物防治研究中报道了夜蛾黑卵蜂是斜纹夜蛾的自然天敌昆虫，随后许再福等对夜蛾黑卵蜂的个体发育进行了研究报道。2019年霍梁霄等研究发现夜蛾黑卵蜂对多层堆积的斜纹夜蛾卵和草地贪夜蛾卵的的寄生率在90％以上；赵旭等在玉米田间应用夜蛾黑卵蜂防控草地贪夜蛾卵，发现夜蛾黑卵蜂对草地贪夜蛾的田间寄生率在80％以上。朱凯辉等人也研究报道了夜蛾黑卵蜂与短管赤眼蜂(trichogramma pretiosum)在田间存在竞争关系，夜蛾黑卵蜂在竞争试验中占有优势。这些研究结果均表明了夜蛾黑卵蜂具有极高的应用价值。
3.寄生蜂在生物防治中的成功应用主要通过田间释放来实现，但田间释放常需要大量的寄生蜂作基础。低温冷藏是田间释放前进行寄生蜂储备和运输的有效方法之一，通过低温冷藏可调节其发育进程，从而使多批繁殖的夜蛾黑卵蜂可以在同一时期羽化，以满足实际生防中的虫量需求。
4.袁曦等人的相关研究结果显示，3日龄的螟黄赤眼蜂(trichogramma chilonis)可在10℃下贮藏4周，其活蛹率和羽化率均达70％以上，与对照组无差异；张烨等人发现，玉米螟赤眼蜂(trichogramma ostriniae)经过低温驯化后，置于4℃冷藏90d后仍能保持60％以上的出蜂率。目前研究者仅对夜蛾黑卵蜂蛹和成虫进行了初步的研究，而有关夜蛾黑卵蜂低温冷藏的研究还缺少报道。因此，提供一种夜蛾黑卵蜂低温保藏的方法，使得夜蛾黑卵蜂经低温保藏后仍具有高的羽化率和寄生率，对于实现夜蛾黑卵蜂的规模化繁育、运输及应用具有重要意义。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种夜蛾黑卵蜂低温保藏的方法，以解决上述现有技术存在的问题，使夜蛾黑卵蜂经低温保藏后仍具有高的羽化率和寄生率，且个体大小不受低温保藏的影响，从而实现夜蛾黑卵蜂的规模化繁育。
6.为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
7.本发明提供一种夜蛾黑卵蜂低温保藏的方法，包括以下步骤：
8.(1)将夜蛾黑卵蜂寄生后的寄生卵培养至1
‑
9日龄；
9.(2)将所述1
‑
9日龄的寄生卵进行两步低温驯化；
10.(3)低温驯化完成后，将环境温度降至5
‑
10℃，然后将低温驯化后的寄生卵冷藏3
‑
9d。
11.进一步地，步骤(1)中所述培养条件为：温度26
±
1℃，相对湿度70％
±
5％，光周期
14
‑
15l:9
‑
10d。
12.进一步地，所述寄生卵的寄主为斜纹夜蛾。
13.进一步地，所述两步低温驯化的过程为：在15
‑
16℃条件下放置0.5
‑
1d，之后在12
‑
13℃条件下放置0.5
‑
1d。
14.进一步地，步骤(3)中的降温速率为3
‑
4℃/h。
15.本发明还提供一种上述方法在夜蛾黑卵蜂繁育中的应用。
16.本发明公开了以下技术效果：
17.本发明首先将夜蛾黑卵蜂寄生卵培养至适宜日龄，然后将培养的寄生卵经两步低温驯化后在5
‑
10℃保藏3
‑
9d，经本发明低温保藏处理后的夜蛾黑卵蜂能够实现与未冷藏的对照组基本相当的羽化率和寄生率，并且个体大小不受低温保藏的影响，对于实现夜蛾黑卵蜂的规模化繁育、运输及生物防治具有重大的积极意义。
具体实施方式
18.现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
19.应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
20.除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
21.在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
22.关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
23.本发明的供试昆虫：
24.夜蛾黑卵蜂，来自云南恒草生物科技有限公司，繁育条件为(26
±
1)℃，rh(70
±
5)％，光周期14l﹕10d。羽化后的夜蛾黑卵蜂以10％蜂蜜水进行每日饲喂；
25.斜纹夜蛾，购于河南省济源白云实业有限公司。养虫室内饲养温度(26
±
1)℃，相对湿度rh 60％～80％，光周期14l﹕10d，饲养至成虫羽化后，置于养虫笼内，以无菌脱脂棉蘸取10％蜂蜜水每24h饲喂1次。笼壁内覆折叠的纸作为成虫的产卵介质，将产在纸上的卵块剪下，作为本发明的供试寄主卵块。
26.实施例1一种夜蛾黑卵蜂低温保藏的方法
27.(1)将新鲜斜纹夜蛾卵块以1:50的蜂卵比供夜蛾黑卵蜂雌蜂寄生24h，之后将已被
夜蛾黑卵蜂寄生的卵块置于25℃，rh 75％，光周期14l:10d的条件下培养至1日龄；
28.(2)将1日龄的寄生卵在15℃条件下放置1d，之后在13℃条件下再放置1d，进行低温驯化；
29.(3)低温驯化完成后，以3℃/h的降温速率将环境温度降至5℃，将寄生卵冷藏6d，然后将寄生卵置于26℃，rh 75％，光周期14l:10d下继续培养至夜蛾黑卵蜂羽化。
30.实施例2
31.(1)将新鲜斜纹夜蛾卵块以1:50的蜂卵比供夜蛾黑卵蜂雌蜂寄生24h，之后将已被夜蛾黑卵蜂寄生的卵块置于26℃，rh 70％，光周期15l:9d的条件下培养至6日龄；
32.(2)将6日龄的寄生卵在16℃条件下放置0.5d，之后在12℃条件下再放置0.6d，进行低温驯化；
33.(3)低温驯化完成后，以4℃/h的降温速率将环境温度降至8℃，将寄生卵冷藏9d，然后将寄生卵置于27℃，rh 65％，光周期15l:9d下继续培养至夜蛾黑卵蜂羽化。
34.实施例3
35.(1)将新鲜斜纹夜蛾卵块以1:50的蜂卵比供夜蛾黑卵蜂雌蜂寄生24h，之后将已被夜蛾黑卵蜂寄生的卵块置于27℃，rh 65％，光周期14l:9d的条件下培养至9日龄；
36.(2)将9日龄的寄生卵在16℃条件下放置0.7d，之后在12℃条件下再放置0.8d，进行低温驯化；
37.(3)低温驯化完成后，以3℃/h的降温速率将环境温度降至10℃，将寄生卵冷藏3d，然后将寄生卵置于25℃，rh 70％，光周期14l:10d下继续培养至夜蛾黑卵蜂羽化。
38.实施例4
39.(1)将新鲜斜纹夜蛾卵块以1:50的蜂卵比供夜蛾黑卵蜂雌蜂寄生24h，之后将已被夜蛾黑卵蜂寄生的卵块置于26℃，rh68％，光周期15l:10d的条件下培养至5日龄；
40.(2)将5日龄的寄生卵在15℃条件下放置0.8d，之后在13℃条件下再放置0.5d，进行低温驯化；
41.(3)低温驯化完成后，以3.5℃/h的降温速率将环境温度降至9℃，将寄生卵冷藏8d，然后将寄生卵置于26℃，rh 73％，光周期15l:9d下继续培养至夜蛾黑卵蜂羽化。
42.对比例1
43.同实施例1，区别在于不进行步骤(2)的低温驯化。
44.低温保藏的具体步骤为：
45.将新鲜斜纹夜蛾卵块以1:50的蜂卵比供夜蛾黑卵蜂雌蜂寄生24h，之后将已被夜蛾黑卵蜂寄生的卵块在5℃下冷藏6d，然后将寄生卵置于26℃，rh 75％，光周期14l:10d下继续培养至夜蛾黑卵蜂羽化。
46.对比例2
47.同实施例1，区别在于，不对寄生后的卵块进行培养，待寄生完成后直接进行步骤(2)的低温驯化步骤。
48.对比例3
49.同实施例1，区别在于，步骤(2)的低温驯化过程具体为：在15
‑
16℃条件下放置0.5
‑
1d，进行低温驯化。
50.对比例4
51.同实施例1，区别在于，步骤(3)的降温速率为1℃/h。
52.对比例5
53.同实施例1，区别在于，步骤(3)的降温速率为4.5℃/h。
54.以不进行低温保藏的夜蛾黑卵蜂为对照组：
55.将新鲜斜纹夜蛾卵块以1:50的蜂卵比供夜蛾黑卵蜂雌蜂寄生24h，然后将寄生卵置于25℃，rh 75％，光周期14l:10d下继续培养至夜蛾黑卵蜂羽化。
56.实施例1
‑
4、对比例1
‑
5以及对照组夜蛾黑卵蜂的羽化率结果如表1所示。
57.表1
[0058] 羽化率(％)实施例187.29实施例287.26实施例387.28实施例487.25对比例176.52对比例280.29对比例380.16对比例481.36对比例582.34对照组87.31
[0059]
由表1可以看出，本发明的低温保藏方法能有效避免对夜蛾黑卵蜂羽化的不利影响，和未经冷藏处理的对照组羽化效果持平。
[0060]
将新鲜斜纹夜蛾卵块以1：50的蜂卵比,供实施例1
‑
4、对比例1
‑
5以及对照组羽化后的夜蛾黑卵蜂雌蜂寄生24h，统计夜蛾黑卵蜂对每个卵块的卵粒寄生率，结果见表2。
[0061]
表2
[0062][0063][0064]
表2数据结果显示，经本发明低温保藏方法保藏的夜蛾黑卵蜂羽化后依然具有较高的寄生率。
[0065]
以雌蜂后足胫节长度作为衡量标准，评定实施例1
‑
4、对比例1
‑
5以及对照组羽化
后的夜蛾黑卵蜂个体大小，统计结果平均值如表3所示。
[0066]
表3
[0067] 后足胫节长度(um)实施例1159.97实施例2159.95实施例3159.95实施例4159.94对比例1144.29对比例2146.25对比例3146.02对比例4147.56对比例5148.23对照组159.98
[0068]
本发明低温保藏的夜蛾黑卵蜂与未经冷藏的对照组个体大小相差不大，说明本发明的低温保藏法未对夜蛾黑卵蜂个体发育产生不利影响。
[0069]
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。