一种骨内血管解剖展示陈列标本制作方法及标本与流程

1.本发明涉及生物标本技术领域，具体涉及一种骨内血管解剖展示陈列标本制作方法及标本。


背景技术：

2.膝关节及其周围由于存在许多经典的解剖学结构，且为很多常见运动损伤、退行性变、肿瘤及创伤等的好发部位，近百年来一直是骨科及解剖学学者研究的重点热点话题。其内存在胫骨平台、股骨内外髁及髁间窝、前后交叉韧带、内外侧半月板等经典解剖结构，其宏观结构及相关临床意义都已取得较为成熟的研究，近年来被新命名的膝关节解剖学结构并不多见。
3.关于膝关节的血供来源及血管组成也已有了较为成熟的理论体系，一般认为膝关节的血供，股动脉、腘动脉、胫前动脉和胫后动脉及其分支都有参与，而腘动脉在膝关节及周围发出经典的膝上内、上外、下内、下外及膝中动脉5条分支，对于膝关节的供血有着重要作用。然而，既往文献研究往往只研究到膝动脉的血管分支层面便已经结束，对于静脉的报告则更少，往往只提及腘静脉及5大分支动脉在于腘动脉发出段时存在伴行的同名静脉。对于股骨髁间及胫骨髁间区域穿行的小血管、小孔道结构，既往文献鲜有报道，相对于股骨头颈处已颇为成熟的对骨内小血管解剖及功能的研究，股骨远端及胫骨近端的小血管缺乏相关研究。关于胫骨及股骨骨内存在的孔道结构，滋养孔及其孔道研究最为成熟，其内的滋养血管为长骨骨干供血模式已发展十分完善，其一般认为几乎所有的长骨的滋养孔均位于骨干处，而据我们所知，位于干骺端内的孔道结构或内容小血管报道十分稀少。
4.似乎膝关节的解剖已经达成了广泛的共识，然而自然科学的闪光之处就在于不断的探索、验证和创新，不久前m.gunzer团队发现了tcvs(跨皮质血管)，指出tcvs是起源于骨髓，垂直穿过皮质骨并连接到骨膜循环的毛细血管，表达动脉或静脉标志物并运输中性粒细胞，且有超过80％的动脉和59％的静脉血通过tcvs，这颠覆了既往的皮质骨内血管和管道系统。这说明存在于骨内的孔道血管复合结构可能远超我们现有的认知，尤其是对于膝关节干骺端骨内的通道，缺少系统细致的研究。对于走行进入胫骨平台及股骨髁部位的小血管，既往报道除无意间提及其属于已知的膝关节血管网体系及主要分支外，很少关注进入骨内之后的情况。此外，容纳这些小血管的天然孔道一直未曾有过相关系统报道，学者们现在还不能确定这些孔道位置的出现是随机或是固定的，其孔道的个数、大小、开口位置、内容物性质及覆盖物状况未曾见于既往文献。
5.我们此项研究想法的萌发基于我们团队在既往手术中的一些经历，发现在膝关节肿瘤切除手术中，往往触及膝关节股骨髁间窝及胫骨髁间隆突近中心点时，会出现意想不到的出血，且有时对上述两区域进行切除或电刀处理时，可能会发现被离断的软组织结构。我们还观察到，股骨远端及胫骨近端有的侵袭性或恶性肿瘤自骨内向关节腔内突破时，往往呈现“中间突破而周边相对完好”的现象。那么，是否可能有小血管穿行经过胫骨髁间隆突区域及股骨髁间窝，甚至走行进入骨内，或者胫骨髁间区及股骨髁间窝是否存在固定的
未被发现的含内容物的孔道结构？这些容纳小血管或其他软组织结构的孔道是否真的存在，位置是否固定，其孔道的存在是否为一些疾病提供了潜在的解剖学通路，其有是否有一直被忽略的重要解剖学意义及临床意义？我们团队带着这样的疑问开始了相关研究，并先后通过影像学观测、解剖学暴露实物、组织学验证等方法，发现了股骨及胫骨lc通路及其内固有的股骨髁间孔、胫骨髁间隆突孔、内容小血管、孔口滑膜等结构，并证实了lc通路于正常人体的普遍存在性。
6.上述的lc通路，是指在成人股骨髁间及关节腔间，胫骨髁间及关节腔间，均存在骨端髁间孔道(内含血管)
‑
连接关节腔的孔口
‑
孔口滑膜的复合结构。在儿童内这种复合结构还穿越了骨骺及骺板。这种复合结构胫骨一般存在1条，股骨2
‑
4条，为了方便叙述，我们将这样复合结构命名为lc通路(li jianmin
‑
cheng kun通路)。
7.在发现了lc通路为正常人固有普遍存在的通路后，我们又进行了股骨及胫骨lc通路在骨肿瘤学和小儿骨科学领域的相应研究。首先，膝关节周围本身就是原发侵袭性肿瘤及恶性肿瘤好发部位，其复发问题也经常出现。刮除或切除后的侵袭性肿瘤(如gct,色结等)，抑或是广泛切除后的原发恶性肿瘤，都经常有在几年甚至几个月后肿瘤原位复发的报告，即使有一些还辅以了足量的辅助治疗。我们猜想是否有可能在骨内或关节内存在于一些未被熟悉的腔隙性结构，使得肿瘤细胞方便隐匿其中，躲过手术及放疗的重点治疗区域，并导致一段时间后的复发，lc通路是否会涉及这样的肿瘤隐匿机制。
8.在很多文献共识中，都认为关节软骨及软骨下骨可以为侵袭性肿瘤及恶性肿瘤的传播提供屏障作用。膝关节也是如此，无论对于股骨、胫骨骨内病变向膝关节腔内的传播，还是膝关节腔内病变向两骨的传播，股骨远端及胫骨近端软骨下骨、关节软骨、关节表面的滑膜及内外侧半月板、前后交叉韧带等组织进行对机体的保护和对肿瘤的物理防御。然而譬如骨巨细胞瘤等侵袭性强的骨肿瘤仍常突破关节屏障进入关节腔内，形成campancciiii级骨巨细胞瘤；腱鞘巨细胞瘤等常发生或多发于膝关节腔内，但有时会突破膝关节软骨界限，侵及股骨或胫骨，形成播散。此外，骨肉瘤等骨原发恶性肿瘤及一些骨转移瘤往往也在膝关节内形成骨肿瘤及软组织肿块并存的形态，还有一些会发生血行转移。
9.我们观察到实验中心的既往膝关节肿瘤病人，其骨通往关节腔，或关节腔通向骨的肿瘤播散很多涉及股骨髁间窝中央或胫骨髁间隆突处，有时还会呈现中心突破而四周关节软骨完好的现象。因此我们假想是否存在经股骨及胫骨lc通路的隐匿及双向传播机制存在。在此项研究中，我们也通过典型病例定性分析和既往病例回顾性定量分析，验证了股骨及胫骨lc通路都可参与肿瘤隐匿及“骨
‑
lc通路
‑
关节腔”的肿瘤双向传播。
10.在小儿骨科的既往研究中，对于骨骺、骺生长板及干骺端的细胞组成，具体分区及其相应的血液供应范围都已取得了较为成熟的共识。通常认为，2岁之后小儿的骺生长板是一个细胞紧密排列且连续无空隙的结构，中间没有孔道等穿越结构的完整连续性结构。骺生长板的血运一方面来自骨骺的滋养血管，这部分血管主要供应骺板的生长带，其受阻可致生长减慢或停止；另一方面来自干骺端滋养动脉，而终止于zpc区近端，主要影响软骨细胞凋亡和软骨内骨化，同时软骨膜血管可供应ranvier区。骨骺血管、软骨膜血管等同时也为骨骺区供血，干骺端血管及骨干滋养血管等为干骺端供血。
11.既往文献中这样的描述，表明涉及小儿骺板及sandwiched的干骺端及骨骺内的血管，一般只存在于其中一层或两层区域，且不会出现穿骺板血管，未见有自关节腔内进入骨
骺，穿过整个骨骺、骺生长板区域，到达干骺端且可能继续延续的小血管描述。
12.然而我们此次研究发现的儿童胫骨股骨lc通路，孔道自关节腔内传入髁间，其内包含的膝中血管分支小血管，进入胫骨或股骨骨骺区后，纵行贯穿整个骨骺区域及骺板，并进入干骺端，成为了未见于既往报道的贯穿血管。既往报道中所谓的穿骺血管，认为一般只存在于18个月前的幼儿，其往往出现在骨骺血管未成熟的时期，经由epiphyseal vessels(within cartilage canal),transphyseal vessel及metaphyseal vessel loop等几部分组成，一般会在最多18个月时消失，我们区别了此次发现的lc通路中贯穿血管与既往报道的穿骺血管的不同之处，讨论了其血管系来源，及打破了骺板的整体连续性的可能性及合理性。
13.骺板一直以来被认为对于骨肉瘤及尤文肉瘤等干骺端小儿原发恶性肿瘤有着屏障作用，这很大原因来自于其内细胞，尤其是r区和p区细胞的连续紧密性。近期文献中关于小儿骨肉瘤或尤文肉瘤的讨论中，为了获得更好的功能预后，倾向于保留关节及保留骺板的建议越来越多，但其往往侧重于液氨灭活后的骨回植及假体选择等。对于切除安全边界的选择，常依靠mri精确导航等技术，骺板切除、骺板部分切除、保留骺板等手术方式的选择，还是基于骺板连续性及屏障作用的基础，也未曾考虑有孔道结构可能穿越骺板，破坏其紧密连续性的因素而存在。因此小儿骨肉瘤经lc通路进行穿越骺板的传播，小儿干骺端内骨肉瘤累及lc通路后的治疗方案选择、小儿肉瘤经lc通路可能造成的临近及远处转移成为了我们本次研究的重点。我们也研究了小儿骨肉瘤累及lc通路并传播时，宏观解剖及微观病理学观察下其肿瘤细胞对lc通路及骺板的影响情况，比较了lc通路及骺板对肿瘤防御能力的强弱，并讨论了如何鉴定lc通路受到肿瘤侵犯的主要证据。骨肉瘤或尤文肉瘤发生时，其可能发生产生新生的侵入骺板层的肿瘤血管，而我们此次发现的贯穿血管也同样涉及于存在于干骺端的小儿骨肉瘤。此外，lc通路穿越骺板破坏骺板紧密连续性的这种模型也可能涉及其他儿科疾病的诊疗方案。
14.鉴于发明人首次发现骨内血管的走向通路，并命名为lc通路(li jianmin
‑
cheng kun通路)，而现有技术中尚未有将该lc通路解剖出来并展示的方法，更没有将解剖出来的lc通路制作成标本的先例；另外，发明人在发现lc通路的基础上，进一步发现了自股骨髁间孔或胫骨髁间隆突孔进入至骨骼内部的骨内血管孔道，以及内容于该孔道内部的骨内血管，而现有技术中从未有将骨内血管解剖并展示的先例，发明人独创的解剖方法，可以100％找到骨内血管孔道并完整展示骨内血管，填补了这一细分领域的空白，具有很高的独创性。
15.lc通路的发现会影响到诸多跟骨科先关的治疗方案的调整和优化，发明人希望制作形成用于展示骨内lc通路及骨内血管的陈列标本，用于供临床和教学之用，向医护人员直观展示骨内血管走向，为例如骨肿瘤治疗方法提供指导，降低骨肿瘤的术后复发率。


技术实现要素：

16.因此，本发明的目的在于提供一种骨内血管解剖展示陈列标本的制作方法，用于将在股骨髁间、胫骨髁间隆突孔穿行的血管显露出来，并制作形成便于教学展示用的标本。
17.为此，本发明提供一种骨内血管解剖展示陈列标本的制作方法，包括如下步骤：
18.1)、获取新鲜股骨或胫骨标本，股骨远端或胫骨近端的骨髁完整；
19.2)、去除骨皮质，在3
‑
5℃的10％福尔马林固定液中浸泡固定5
‑
8天；
20.3)、使用edta脱钙剂浸泡脱钙25
‑
35天，隔日更换脱钙剂；
21.4)、使用ct薄层扫描后三维重建，找到股骨髁间孔或胫骨髁间隆突孔；
22.5)、自股骨髁间孔或胫骨髁间隆突孔进入进行解剖，逐渐显露出进入股骨髁间孔或胫骨髁间隆突孔的血管，以及容纳该血管的骨内血管孔道；
23.6)、将解剖完成的骨骼标本放入容器盒中，容器盒的内部形状与解剖完成的骨骼标本的形状匹配，在容器盒中加入树脂，没过骨骼标本，维持1
‑
3天，树脂逐渐进入到骨骼标本内部；
24.7)、将上述的容器盒放入25
‑
35℃的恒温箱内2
‑
5天，待树脂硬化后去掉容器盒，取出与树脂融合为一体的标本；
25.8)、切除边缘多余的树脂，然后打磨抛光标本边缘，完成标本制作。
26.作为一种优选方案，所述步骤5)中的解剖具体包括如下步骤：
27.使用组织剪去除关节腔内的牵连软组织；
28.顺血管走向，使用精细剪刀将与关节腔内血管贴附的软组织剪断去除；
29.找到股骨髁间孔或胫骨髁间隆突孔，以该孔为中心沿骨内血管孔道的延伸方向使用病理取片刀切出小角度坡面，使用尖嘴钳将切除的组织移除；
30.使用尖嘴钳的侧面咬磨已切出坡面的骨质，每次磨除一层骨小梁碎粒，逐层深入；
31.骨内血管孔道有一层骨质较硬、骨小梁排列方向与周围骨质不一致的骨性外壁；初步显露出后，使用刮匙刮掉与骨性外壁连接的周围骨小梁，使骨内血管孔道的骨性外壁适度凸显；
32.凸显出骨内血管孔道的骨性外壁后，使用虹膜拉钩顺孔道方向将骨内血管孔道部分外壁的骨小梁逐个挑断，部分显露出骨内血管孔道内的血管。
33.作为一种优选方案，在所述步骤1)中，还包括将获取到的新鲜股骨或胫骨标本行血管造影以观察骨内血管的步骤。
34.本发明还提供一种含肿瘤骨内血管解剖展示陈列标本的制作方法，包括如下步骤：
35.1)、获取新鲜股骨或胫骨标本，股骨远端或胫骨近端的骨髁完整，并且干骺端形成有肿瘤组织，所述细胞瘤组织靠近骺板，且ct薄层或核磁共振显示已穿越骺板；
36.2)、去除骨皮质，在3
‑
5℃的10％福尔马林固定液中浸泡固定5
‑
8天；
37.3)、使用edta脱钙剂浸泡脱钙25
‑
35天，隔日更换脱钙剂；
38.4)、使用ct薄层扫描后三维重建，找到股骨髁间孔，或胫骨髁间隆突孔；
39.5)、自股骨髁间孔或胫骨髁间隆突孔进入进行解剖，逐渐显露进入股骨髁间孔或胫骨髁间隆突孔的血管，以及肿瘤组织；
40.6)、将解剖完成的骨骼标本放入容器盒中，容器盒的内部形状与解剖完成的骨骼标本的形状匹配，在容器盒中加入树脂，没过骨骼标本，维持1
‑
3天，树脂逐渐进入到骨骼标本内部；
41.7)、将上述的容器盒放入25
‑
35℃的恒温箱内2
‑
5天，待树脂硬化后去掉容器盒，取出与树脂融合为一体的标本；
42.8)、切除边缘多余的树脂，然后打磨抛光标本边缘，完成标本制作。
43.作为一种优选方案，所述步骤5)中的解剖具体包括如下步骤：
44.使用组织剪去除关节腔内的牵连软组织；
45.顺血管走向，使用精细剪刀将与关节腔内血管贴附的软组织剪断去除；
46.找到股骨髁间孔或胫骨髁间隆突孔，以该孔为中心沿着骨内血管孔道延伸方向使用病理取片刀切出小角度坡面，使用尖嘴钳将切除的组织移除；
47.使用尖嘴钳的侧面咬磨已切出坡面的骨质，每次磨除一层骨小梁碎粒，逐层深入；从外层向内层逐渐暴露出骨肿瘤组织；
48.骨内血管孔道有一层骨质较硬、骨小梁排列方向与周围骨质不一致的骨性外壁；初步显露出后，使用刮匙刮掉与骨性外壁连接的周围骨小梁，使骨内血管孔道的骨性外壁适度凸显；
49.凸显出骨内血管孔道的骨性外壁后，使用虹膜拉钩顺孔道方向将骨内血管孔道部分外壁的骨小梁逐个挑断，部分显露出骨内血管孔道内的血管。
50.作为一种优选方案，在所述步骤1)中，还包括将获取到的新鲜股骨或胫骨标本行血管造影以观察骨内血管的步骤。
51.本发明还提供一种骨内血管解剖展示陈列标本，采用如上任一项所述的制作方法制作而成。
52.本发明还提供一种成人骨内lc通路展示标本的制作方法，包括如下步骤：
53.步骤1)、取新鲜成人膝关节标本，行ct薄层扫描，进行三维重建，通过横断面、冠状面和矢状面展示，显露出完整的lc通路；
54.步骤2)、去除骨皮质，在3
‑
5℃的10％福尔马林固定液中浸泡固定7
‑
10天，再使用edta脱钙剂浸泡30
‑
40天，隔日更换脱钙剂；
55.步骤3)、切割暴露膝关节囊及胫骨近端、股骨远端，于膝关节囊内寻找到膝中动脉；沿膝中动脉经关节囊、剖开表面滑膜，暴露至股骨或胫骨髁间；失状切除股骨或胫骨内外髁，保留髁间部分；
56.步骤4)、再沿膝中动脉分支解剖至血管、骨结合部；观察到lc通路中股骨髁间孔、胫骨髁间隆突孔存在后，保护孔道开口并剖开附近松质骨，直至显露骨端内的孔道结构及内容物；
57.步骤5)、将显露完成的骨骼标本放入容器盒中，在容器盒中加入树脂，并没过骨骼标本，维持1
‑
2天，使树脂逐渐进入到骨骼标本内部；
58.步骤6)、将上述的容器盒放入30℃的恒温箱内2
‑
6天，待树脂完全硬化后去掉容器盒，取出与树脂融合为一体的标本；
59.步骤7)、标本聚合硬化后，切除边缘多余的树脂，然后用打磨抛光标本边缘，完成标本制作。
60.本发明还提供一种小儿骨内lc通路展示标本制作方法，包括如下步骤：
61.步骤1)、取新鲜小儿膝关节标本，行ct薄层扫描，进行三维重建，通过横断面、冠状面和矢状面展示，显露出完整的lc通路；
62.步骤2)、去除骨皮质，在3
‑
5℃的10％福尔马林固定液中浸泡7
‑
10天，再使用edta脱钙剂浸泡30
‑
40天，隔日更换脱钙剂；
63.步骤3)、切割暴露膝关节囊及胫骨近端、股骨远端，于膝关节囊内寻找到膝中动
脉；沿膝中动脉经关节囊、剖开表面滑膜，暴露至股骨或胫骨髁间；失状切除股骨或胫骨内外髁，保留髁间部分；
64.步骤4)、再沿膝中动脉分支解剖至血管、骨结合部；观察到lc通路中股骨髁间孔、胫骨髁间隆突孔存在后，保护孔道开口并剖开附近松质骨，直至显露骨骺及干骺端内的孔道结构及内容物，并显露孔道在骨骺中的穿行方式、纵贯程度；
65.步骤5)、将显露完成的骨骼标本放入容器盒中，在容器盒中加入树脂，并没过骨骼标本，维持1
‑
2天，使树脂逐渐进入到骨骼标本内部；
66.步骤6)、将上述的容器盒放入30℃的恒温箱内2
‑
4天，待树脂硬化后去掉包埋盒，取出与树脂融合为一体的标本；
67.步骤7)、标本聚合硬化后，切除边缘多余的树脂，然后用打磨抛光标本边缘，完成标本制作。
68.所述lc通路，是指在股骨髁间及关节腔间、胫骨髁间及关节腔间存在的，在骨端髁间孔道
‑
连接关节腔的孔口
‑
孔口滑膜的复合结构。
69.本发明提供的技术方案，具有以下优点：
70.1.本发明的骨内血管解剖展示陈列标本的制作方法，包含了独创的解剖方法，而借助该解剖方法制作出的标本，可以100％显露出骨内血管孔道，以及在骨内血管孔道内穿行的骨内血管，可以直观展示骨内血管在骨内的存在，在骨内的分布；如果是小儿骨骼标本，还可以显露出骨内血管穿越骺板的情形；
71.现有技术中可以观测到骨内的滋养血管以及骨皮质血管，然而现实中人们从来也没能想到一种合适的方法，将滋养血管或骨皮质血管解剖并完整展示出来，而本发明的骨内血管解剖展示陈列标本的制作方法中提到的解剖方法，不仅可以解剖骨内血管，也可以用于解剖滋养血管或骨皮质血管，具有一定的通用性。
72.2.本发明的含肿瘤骨内血管解剖展示陈列标本的制作方法，包含的独创的解剖方法，可以100％显露骨内血管孔道，以及在骨内血管孔道内穿行的骨内血管、骨内肿瘤，并展示骨肿瘤与血运的关系；当骨内生长出肿瘤后，从既往经验来看，一般发生在骨端，肿瘤细胞在滋养血管或骨皮质血管中几乎不会藏身并传播，而经上述解剖方法解剖得到的骨内血管孔道却可以为肿瘤细胞所藏身，并成为肿瘤术后复发的隐患；借助本发明的标本，可以直观展示骨内血管孔道，为手术提供指导，降低骨肿瘤的术后复发率。
73.借助本发明的解剖方法制作完成的标本，可以直观展示血管穿越骺板的情形，现实中从未有人观察到血管穿越骺板的情况，而且已知的理论也认为不存在穿越骺板的血管；借助本发明的标本，可以直观展示血管穿行骺板的情况，并为感染骨肿瘤后是否切除骺板提供思路。
74.使用本发明的骨内血管解剖展示陈列标本的制作方法制作出来的标本，可供临床及教学使用，具有重大的教育指导意义。
75.3.本发明的骨内lc通路展示标本的制作方法，包含了特定的解剖方法，通过该解剖方法可以100％显露lc通路，并展示血管在lc通路中的穿行情况；与成人骨内lc通路的分布不同，小儿骨内lc通路还有穿越骨骺的情形。现实中从未有人提出过lc通路的存在，发明人首次发现并通过上述的解剖方法将其完整展示，并进一步将其制作成标本直观显露lc通路存在；lc通路的存在会影响到骨骼相关的诸多医疗方案的调整或修改，而通过标本向医
护人员展示其所在的位置具有特别重要的意义。通过本发明的骨内lc通路展示标本的制作方法制作而成的标本，能够直观地向医护人员展示lc通路的走行情况，可用于临床和教学，具有重大的教育指导意义。
附图说明
76.为了更清楚地说明现有技术或本发明具体实施方式中的技术方案，下面对现有技术或具体实施方式描述中所使用的附图作简单介绍。
77.图1a是12岁股骨远端骨肉瘤截肢新鲜标本，术前影像显示胫骨完好无病灶。
78.图1b是图1a去除骨皮质以后的示意图。
79.图1c是图1b经浸泡及脱钙完成后的示意图。
80.图1d是行ct薄层扫描后三维重建后的示意图。
81.图1e是自胫骨髁间隆突孔进入，在矢状面上根据骨内血管孔道走向进行解剖，看到进入胫骨髁间隆突孔的静脉分支血管。
82.图1f是逐渐显露进入胫骨髁间隆突孔的膝中静脉分支。
83.图2a是解剖所用眼科显微手术器械包的示意图。
84.图2b是图2a打开后的示意图。
85.图3a是切割骨质用病理切片刀的示意图。
86.图3b是使用侧面咬磨已切出坡面的骨质的尖嘴钳的示意图。
87.图3c是去除关节腔血管贴附的软组织用精细剪刀的示意图。
88.图3d是刮掉周围骨小梁，使骨内血管孔道骨性外壁适度显现的刮匙的示意图。
89.图3e是顺孔道方向将骨内血管孔道骨性外壁部分骨小梁逐个挑断，显露孔道内血管的虹膜拉钩的示意图。
90.图4a是术前mri显示完整穿越骺板及骨骺的胫骨lc通路，瘤体大部处于干骺端内，且临近骺板的示意图。
91.图4b是术后标本大体解剖示肿瘤侵及胫骨lc通路并向干骺端传播，临近骺板完整且未被破坏的示意图。
具体实施方式
92.下面结合附图对本发明的技术方案进行详细描述。
93.实施例1
94.本实施例提供一种骨内血管解剖展示陈列标本的制作方法，本实施例中病例、影像资料及人体标本均来自山东大学齐鲁医院及山东大学齐鲁医院青岛院区。
95.肿瘤膝关节解剖学标本：
96.收集自2017年5月至2020年3月间的人体完整肿瘤膝关节标本共22例。其取材来源包括截肢术后新鲜标本(12例)、瘤段切除术后新鲜标本(10例)。
97.纳入标准：1.股骨远端及胫骨侵袭性肿瘤切取瘤段，病理诊断明确者；2.胫骨及股骨原发恶性骨肿瘤，行瘤段切除或截肢且病理诊断明确者；3.膝关节腔内原发侵袭性肿瘤，行肿瘤瘤段切除，术后病理明确者；4.符和纳入标准1.2.3者，其股骨髁间孔及胫骨髁间隆突孔术前影像需确保可明显见到且结构完好。
98.排除标准：
①
合并严重关节退变、滑膜退变者；
②
既往膝关节手术史；
③
病理性骨折，尤其骨折线穿越髁间者；
④
广泛病变致使难以判断突破点；
⑤
标本完整性不佳。
99.依上述纳入及排除标准，收集自2017年5月至2020年3月共12例肿瘤截肢新鲜标本、10例瘤段切除新鲜标本，其中男14例，女8例；年龄(28.8
±
3.6)岁(范围：8～51岁)。22例中左膝12例(54.5％)，右膝10例(45.5％)。22例的病理类型均经病理学明确诊断，其中骨肉瘤12例(54.5％)，骨巨细胞瘤6例(27.3％)，骨转移瘤2例(9.1％)，腱鞘巨细胞瘤1例(4.5％)。2例骨转移瘤的来源分别为肺癌和肾癌。6例骨巨细胞瘤(27.3％)均为第一次行刮除术后复发、第二次行瘤段切除术患者。
100.小儿膝关节解剖学标本：
101.自2017年5月至2020年3月间的小儿完整膝关节标本共15例。其取材来源包括膝关节以上平面截肢(3例)及一般儿童尸体解剖标本(12例)。进行儿童lc通路解剖及组织学形态观察。
102.纳入标准：1.截肢取得的新鲜完整膝关节标本及尸体解剖取得的膝关节标本；2.年龄2
‑
14岁之间；3.股骨及胫骨结构完整，未有明显损坏；4.膝关节内重要结构如前、后交叉韧带、内外侧半月板、外侧副韧带等结构完好。
103.排除标准：
①
关节严重畸形、髁间区病变、骨骺损伤等致观察条件不理想者；
②
既往膝关节手术史；
③
严重的膝关节外伤史；
④
膝关节标本完整性不佳；
⑤
膝关节及周围肿瘤已严重破坏固有结构。
104.依上述纳入及排除标准，收集自2017年5月至2020年3月共3例截肢后新鲜标本、12例尸体解剖(6具尸体，每具取双侧膝关节)福尔马林浸泡的标本纳入本研究，年龄(9.6
±
2.5)岁，均在2
‑
14岁之间，其中男8例(来自5人)，女7例(来自4人)。15例中左侧膝关节8例(53.3％)，右侧膝关节7例(46.7％)。
105.以12岁股骨骨肉瘤截肢新鲜肢体胫骨近端骨内血管解剖为例，展示骨内血管解剖步骤。
106.以长骨胫骨近端为例，取得新鲜标本后(如图1a所示)，先行血管造影观察骨内血管。去除骨皮质(如图1b所示)，在4℃的10％福尔马林固定液中浸泡固定7天，再使用edta脱钙剂浸泡脱钙30天，隔日更换脱钙剂(如图1c所示)。行ct薄层扫描后三维重建，找到胫骨髁间隆突孔(如图1d所示)；自胫骨髁间隆突孔进入进行解剖，根据骨内血管孔道走向进行解剖(如图1e和图1f所示)。解剖过程使用眼科显微手术器械(如图2a和图2b所示)精细操作。
107.解剖步骤中，首先使用组织剪去除关节腔内的牵连软组织；然后顺血管走向，使用精细剪刀将与关节腔内血管贴附的软组织剪断去除，避免横向剪断血管；在找到胫骨髁间隆突孔后，以该孔为中心沿骨内血管孔道的延伸方向(即向原关节腔端)使用病理取片刀(如图3a所示)切出小角度坡面，使用尖嘴钳(如图3b所示)将切除的组织移除；使用尖嘴钳的侧面小心咬磨已切出坡面的骨质，每次磨除一层骨小梁碎粒，逐层深入；骨内血管孔道有一层骨质较硬、骨小梁排列方向与周围骨质不一致的骨性外壁；初步显露出后，使用刮匙(如图3d所示)刮掉与骨性外壁连接的周围骨小梁，使骨内血管孔道的骨性外壁适度凸显；凸显出骨内血管孔道的骨性外壁后，使用虹膜拉钩(如图3e所示)顺孔道方向将骨内血管孔道部分外壁的骨小梁逐个挑断，部分显露出骨内血管孔道内的血管。
108.直观展示解剖结果，与造影成像对比，并使用组织切片验证。同时使用其他标本行
强酸脱钙剂脱钙，行效果对比。
109.需要说明的是，传统上对胫骨或股骨解剖，常用强酸脱钙剂进行脱钙，而非edta脱钙剂，使用强酸脱钙剂进行脱钙后，骨内血管孔道内的血管会被溶解以致完全破坏，无法清楚看到，进而也就难以知晓哪些孔道有血管贯穿经过。
110.本实施例中，ct薄层扫描的影像学资料来自西门子somatom forcect机。
111.将经上述解剖步骤完成的骨骼标本放入容器盒中，选择容器盒的内部形状与解剖完成的骨骼标本的形状匹配，在容器盒中加入树脂，没过骨骼标本，维持2天，树脂逐渐进入到骨骼标本内部；将上述的容器盒放入30℃的恒温箱内4天，待树脂硬化后去掉容器盒，取出与树脂融合为一体的标本；切除边缘多余的树脂，然后打磨抛光标本边缘，完成标本制作。
112.本实施例还提供一种含瘤骨内血管解剖展示陈列标本的制作方法，选取新鲜胫骨标本，干骺端形成有骨巨细胞瘤，骨巨细胞瘤靠近骺板，且ct薄层或核磁共振显示已穿越骺板(如图4a和图4b所示)，其制作方法同正常骨内血管解剖展示陈列标本的制作方法类似(即与上述的方法类似)，区别在于：在步骤5)中，自股骨髁间孔或胫骨髁间隆突孔进入进行解剖，逐渐显露进入股骨髁间孔或胫骨髁间隆突孔的血管时，需要同时注意显露骨巨细胞瘤组织。
113.申请人对本实施例所选取的所有符合要求的标本都进行了上述的解剖操作，解剖结果显示，骨内血管孔道内的存在、走向，以及骨内血管的存在具有普遍性。
114.实施例2
115.本实施例提供一种成人骨内lc通路展示标本的制作方法，本实施例中病例、影像资料及人体标本均来自山东大学齐鲁医院及山东大学齐鲁医院青岛院区。
116.于2017年5月
‑
2020年3月间影像中心数据库共200例(200膝)膝关节ct1mm薄层平扫 三维重建，100例(100膝)膝关节mri平扫或增强影像。包括膝关节创伤、膝关节退行性病变、半月板损伤、前交叉韧带、后交叉韧带、外侧副韧带损伤、膝关节原发侵袭性肿瘤、膝关节恶性肿瘤患者及一般查体者。ct资料主要用于展示胫骨髁间隆突孔及股骨髁间孔的普遍存在性及位置学分布，mri资料主要用于胫骨髁间隆突孔及股骨髁间孔的位置学测量，并分析lc通路内容物性质。
117.ct纳入标准：1.完整清晰的膝关节ct平扫及三维重建影像，ct扫描为薄层平扫,至多为1mm一层，同时拥有冠状位、矢状位及三维立体重建影像；2.年龄15
‑
90岁之间，骺线已闭合者。3.胫骨髁间区域及股骨髁间窝应结构完好,不存在明显损伤及破坏。
118.除外标准：1.股骨远端或胫骨近端完整性受外伤等因素破坏,使胫骨平台及股骨髁间显示不全者。2.合并膝关节严重退变(膝关节髁间型及混合型退变)、类风湿性关节炎等观察条件不理想者；3.膝关节肿瘤严重破坏股骨远端或胫骨近端骨质,造成相应解剖学结构无法观测者；4.因扫描技术或图像存储等问题导致膝关节ct扫描资料不完整,影像显示不清晰或层面太厚者；5.曾行膝关节手术或破坏膝关节结构的有创检查者。
119.依上述纳入及排除标准，随机纳入2017年5月
‑
2020年3月影像中心数据库200例(200膝)患者膝关节ct薄层扫描及三维重建资料，其中包括男115例，女85例；年龄(48.3
±
6.8)岁(范围：15～90岁)。本组200例中左膝94例(47％)，右膝106例(53％)。对侧有疾患的健康膝关节(影像判断)141例(70.5％)；退变29例(14.5％)，包括髌股关节型9例，胫股关节
型20例；外伤13例(6.5％)；肿瘤11例(5.5％),其中影像学资料考虑良性者8例，恶性3例；膝关节损伤6例(3％)。
120.mri纳入标准：1.完整清晰的膝关节mri平扫或增强影像，影像清晰，应为连续序列,至少包括t1wi及t2w2序列。同时拥有冠状位及矢状位影像；2.能清楚的显示胫骨髁间隆突孔及股骨髁间孔，且同层面胫骨平台前后缘、胫骨平台内外缘、股骨髁间窝前后缘、股骨内外侧髁显示清晰；3.胫骨髁间区域及股骨髁间窝应结构完好,不存在明显损伤及破坏；4.年龄15
‑
90岁，骺线已闭合。
121.mri排除标准：1.观察者不能100％影像学确定胫骨髁间隆突孔或股骨髁间孔者；2.膝关节mri扫描层太厚，序列不完整,资料不清晰或系统内储存资料错误者；3.因膝关节肿瘤、创伤、退行性变等原因，严重破坏股骨远端或胫骨近端骨质,造成相应解剖学结构无法观测者；4.经历过膝关节手术或有创检查者。
122.依上述纳入及排除标准，随机纳入2017年5月
‑
2020年3月影像中心数据库100例(100膝)膝关节mri平扫或增强，其中包括男55例，女45例；年龄(35.2
±
6.3)岁(范围：15～90岁)。本组100例中左膝59例(59％)，右膝41例(41％)。膝关节损伤72例(72％)，外伤20例(20％)，肿瘤5例(5％)，退变3例(3％)。
123.取得成人膝关节标本后，先行影像学观察，完善标本两lc通路解剖学组成的相关影像学资料，并进行影像学定位。随后通过横断面、冠状面、矢状面的展示，显露出完整的lc通路组成结构。去除骨皮质，在4℃的福尔马林溶液中浸泡8天，再使用edta脱钙剂浸泡35天，隔日更换脱钙剂。
124.首先切割暴露膝关节囊及胫骨近端、股骨远端，于膝关节囊内寻找到膝中动脉；沿膝中动脉经关节囊、剖开表面滑膜，处理关节软骨，暴露至股骨及胫骨髁间，矢状切除股骨及胫骨内外髁，保留髁间部分；再沿膝中动脉分支解剖至血管、骨结合部；观察到lc通路中股骨髁间孔、胫骨髁间隆突孔存在后，保护孔道开口并剖开附近松质骨，显露骨端内的孔道结构及内容物；将显露完成的骨骼标本放入容器盒中，在容器盒中加入树脂，并没过骨骼标本，维持1
‑
2天，使树脂逐渐进入到骨骼标本内部；将上述的容器盒放入30℃的恒温箱内5天，待树脂完全硬化后去掉容器盒，取出与树脂融合为一体的标本；标本聚合硬化后，切除边缘多余的树脂，然后用打磨抛光标本边缘，完成标本制作。
125.申请人对本实施例所选取的所有符合要求的标本都进行了上述的解剖操作，解剖结果显示，骨内lc通道的存在、走向具有普遍性。
126.实施例3
127.本实施例提供一种小儿骨内lc通路展示标本的制作方法，本实施例中病例、影像资料及人体标本均来自山东大学齐鲁医院及山东大学齐鲁医院青岛院区。
128.于2017年5月
‑
2020年3月间影像中心数据库儿童患者共50例(50膝)膝关节ct1mm薄层平扫 三维重建，30例(30膝)膝关节mri1mm薄层平扫或增强影像。包括膝关节损伤、盘状半月板、骨髓炎、下肢骨软骨瘤、膝关节恶性肿瘤患者及一般查体者。ct资料主要用于展示胫骨髁间隆突孔及股骨髁间孔在儿童的普遍存在性，及lc通路在骨骺及干骺端中存在的通道性质，mri资料主要用于展示lc通路内容物性质及走行。
129.纳入标准：1.完整清晰的膝关节ct平扫及三维重建影像，ct扫描为薄层平扫,至多为1mm一层，同时拥有冠状位、矢状位及三维立体重建影像；或完整清晰的1mm薄层膝关节
mri平扫或增强，于影像上可清晰显示lc通路者，mri应为连续序列,至少包括t1wi，t2wi序列；2.年龄2
‑
14岁，且骺线未闭合者；3.儿童胫骨髁间区域及股骨髁间窝应结构已发育完好,且不存在明显骨骺损伤，及先天性膝关节发育不良病变；4.影像上存在明显骨骺及骺板。
130.除外标准：1.股骨远端/胫骨近端干骺端或骨骺完整性因受外伤、肿瘤等因素而被破坏,使干骺端、骺板或骨骺显示不全者；2.mri上没有任何层面扫及lc通路，或观测者不能100％确定lc通路者；3.因先天性疾病导致膝关节发育不良，相关固有结构缺失者；4.膝关节及周围尚未发育完全者；5.行膝关节手术或破坏膝关节结构的有创检查者。
131.依上述纳入及排除标准，随机纳入2017年5月
‑
2020年3月影像中心数据库50例(50膝)儿童ct薄层平扫及三维重建，其中包括男26例，女24例；年龄(9.5
±
2.3)岁(范围：2～14岁)。本组50例中左膝28例(56％)，右膝22例(44％)。其中对侧有疾患的健康膝关节(影像判断)38例(76％)，膝关节损伤5例(10％)，盘状半月板4例(10％)，肿瘤2例(4％)，骨髓炎1例(2％)。
132.30例儿童膝关节mri平扫或增强，其中男17例，女13例；年龄(9.2
±
3.5)岁(范围：2～14岁)，其中膝关节软组织损伤22例(73.3％)，盘状半月板5例(16.7％)未抵达骺生长板的胫骨或股骨肿瘤3例(10％)。
133.取得小儿膝关节标本后，解剖前影像观察及解剖方法与成人相仿(即与实施例2中的解剖方法相同)。但找到股骨髁间孔及胫骨髁间隆突孔的确切位置后，应保护两孔道及其内容结构，并于旁矢状切开股骨及胫骨骨骺，暴露骨骺及干骺端内的孔道结构及内容物，并显露孔道在骨骺中的穿行方式、纵贯程度，是否达及干骺端等，从而确定儿童lc通路中主要解剖学结构，纵贯骨骺的程度，与干骺端的关系等；
134.将显露完成的骨骼标本放入容器盒中，在容器盒中加入树脂，并没过骨骼标本，维持1
‑
2天，使树脂逐渐进入到骨骼标本内部；将上述的容器盒放入30℃的恒温箱内3天，待树脂硬化后去掉包埋盒，取出与树脂融合为一体的标本；标本聚合硬化后，切除边缘多余的树脂，然后用打磨抛光标本边缘，完成标本制作。
135.申请人对本实施例所选取的所有符合要求的标本都进行了上述的解剖操作，解剖结果显示，骨内lc通道的存在、走向及对骺板的贯穿具有普遍性。
136.显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。