一种pH响应性两性霉素B衍生物及其制备方法和应用与流程

一种ph响应性两性霉素b衍生物及其制备方法和应用
技术领域
1.本发明属于药物化学制备技术领域，涉及一种ph响应性两性霉素b衍生物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.两性霉素b(amphotericin b，amb)是一种多烯大环内酯类抗真菌药物，于1955年从奥里诺科河内土壤中的结节状链霉菌(streptomyces nodosus)的代谢产物中首次被发现。临床上主要用于治疗白色念珠菌、新型隐球菌、酵母菌、毛霉菌和组织胞浆菌等引起的内脏或全身性真菌感染。然而，amb在水中的溶解度极差，口服生物利用度较低，并且会引起机体产生严重的毒副作用，尤其是溶血毒性和肾脏毒性。1958年，制剂研究者们为了改善amb的水溶性，推出了两性霉素b脱氧胆酸盐注射剂(fungizone)。但在临床使用中，多数患者都出现了恶心、发烧等各种急性不良反应以及肝肾毒性等副作用，长期使用后出现蛋白尿、低血钾等症状，大大的限制了其使用范围。为了减轻注射剂存在的毒副作用，研究者们后来开发出一系列amb的新型递药系统，如脂质体、微球、纳米球(聚合物胶束)等。目前临床上常用的三种制剂是两性霉素b脂质体(ambisome)、两性霉素b脂质复合体(abelcet)和两性霉素b胆固醇复合体(amphotec)。虽然这些新型药物载体可以改变amb在体内的分布情况，降低其肝肾毒性，但它们存在价格昂贵和成本较高等问题，以致限制了其广泛应用。
3.近几十年来，国外众多研究者致力于amb分子的结构修饰，合成出大量的amb衍生物，以期降低其毒性和改善其水溶性。基于真菌感染部位的微酸环境，采用ph响应性可降解基团对amb分子进行化学结构修饰，制备一种ph响应性amb衍生物。马来酸酐(ma)、柠康酸酐(ca)和2,3
‑
二甲基马来酸酐(dmma)可与含有氨基的化合物反应，通过生成的β
‑
羧酸酰胺键来保护氨基。该酰胺键可在酸性条件下发生水解反应，暴露出原有化合物的氨基基团，达到无痕降解的目的，这一特性可用于药物衍生物(前药)的酸敏释放。因此，本发明选取ma、ca和dmma作为酰化剂，与amb反应得到一种具有ph响应性可降解的新型amb衍生物，其与两性霉素b相比，肾毒性低、溶血作用小、安全性高。


技术实现要素：

4.有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种ph响应性两性霉素b衍生物；本发明的目的之二在于提供一种ph响应性两性霉素b衍生物的制备方法；本发明的目的之三在于提供一种ph响应性两性霉素b衍生物在制备用于抑制真菌生长或治疗真菌感染性疾病的药物中的应用；本发明的目的之四在于提供一种包含ph响应性两性霉素b衍生物的药物组合物。
5.为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
6.1.一种ph响应性两性霉素b衍生物，所述衍生物的结构式如下所示：
[0007][0008]
其中，r1为h或烷基；r2为h或烷基。
[0009]
优选的，所述r1为h或甲基；r2为h或甲基。
[0010]
进一步优选的，所述衍生物的结构式如下所示：
[0011]
[0012][0013]
2.上述ph响应性两性霉素b衍生物的制备方法，所述方法的反应式为：
[0014][0015]
优选的，所述方法包括以步骤：
[0016]
(1)将两性霉素b(amb)和酸酐溶解于有机溶剂中，在n2保护下于20～40℃下反应1～24h，蒸发除去溶剂得到固体产物；
[0017]
(2)将步骤(1)中所述固体产物加入甲醇进行分散，倒入不良溶剂中进行沉淀，过滤收集沉淀物；
[0018]
(3)对所述沉淀物重复进行步骤(2)中的操作，真空干燥即得黄色粉末状的两性霉素b衍生物。
[0019]
进一步优选的，步骤(1)中所述两性霉素b(amb)和酸酐的摩尔比为1:1～5；
[0020]
所述酸酐为马来酸酐(ma)、柠康酸酐(ca)或2,3
‑
二甲基马来酸酐(dmma)中的任意一种。
[0021]
优选的，步骤(1)中所述有机溶剂为二甲基亚砜(dmso)或n,n
‑
二甲基甲酰胺(dmf)；
[0022]
所述两性霉素b(amb)和有机溶剂的质量体积比为1:0.2～1，mg/ml。
[0023]
优选的，步骤(2)中所述不良溶剂为乙醚、甲基叔丁基醚、石油醚、正己烷或环己烷中的任意一种；
[0024]
所述甲醇与不良溶剂的体积比为1:10～50。
[0025]
3.上述ph响应性两性霉素b衍生物在制备用于抑制真菌生长或治疗真菌感染性疾病的药物中的应用。
[0026]
4.一种药物组合物，所述药物组合物包括上述ph响应性两性霉素b衍生物。
[0027]
优选的，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体，所述药学上可接受的载体为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰基卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、脱氧胆酸钠、胆固醇硫酸钠、胆固醇、蔗糖、琥珀酸二钠的水合物或生育酚中的任意一种。
[0028]
优选的，所述药物组合物的剂型为片剂、注射剂、注射用脂质体、注射用脂质复合物或注射用胆固醇硫酸酯复合物。
[0029]
本发明的有益效果在于：
[0030]
1、本发明公开了一种ph响应性两性霉素b衍生物，本发明采用马来酸酐(ma)、柠康酸酐(ca)或2,3
‑
二甲基马来酸酐(dmma)等作为酰化剂对两性霉素b分子进行化学结构修饰，设计出一种具有ph响应性且可降解的两性霉素b衍生物，其与两性霉素b相比，具有肾毒性低、溶血作用小、安全性高的特点，并表现出良好的抗菌活性，在抑制真菌生长或治疗真菌感染性疾病中具有良好的应用前景。
[0031]
2、本发明还公开了一种ph响应性两性霉素b衍生物的制备方法，该制备方法简单，是基于真菌感染部位的微酸环境，采用马来酸酐(ma)、柠康酸酐(ca)或2,3
‑
二甲基马来酸酐(dmma)等作为酰化剂对两性霉素b分子中海藻糖胺上的氨基进行修饰进行改性，在两性霉素b衍生物的设计合成方面具有一定创新性，为环境响应性可降解的amb衍生物的设计开发提供了新的研究思路。
[0032]
本发明的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本发明的实践中得到教导。本发明的目标和其他优点可以通过下面的说明书来实现和获得。
附图说明
[0033]
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作优选的详细描述，其中：
[0034]
图1为实施例1中制备的衍生物i
‑
1(ambma)的核磁图；
[0035]
图2为实施例2中制备的衍生物i
‑
2(ambca)的核磁图；
[0036]
图3为实施例3中制备的衍生物i
‑
3(ambdmma)的核磁图；
[0037]
图4为体外溶血试验溶血率曲线图；
[0038]
图5为急性毒性实验剂量
–
反应(死亡率)关系曲线；
[0039]
图6为体内隐球菌真菌负荷实验不同制剂组肺部感染水平；
[0040]
图7为体内隐球菌真菌负荷实验不同制剂组脑部感染水平；
[0041]
图8为体内白色念珠菌真菌负荷实验不同制剂组肾部感染水平；
[0042]
图9为本发明ph响应性两性霉素b衍生物的结构式。
具体实施方式
[0043]
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。需要说明的是，以下实施例中所提供的图示仅以示意方式说明本发明的基本构想，在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0044]
实施例1
[0045]
制备结构式为i
‑
1的ph响应性两性霉素b衍生物，i
‑
1的结构式为：
[0046][0047]
具体包括如下步骤：
[0048]
(1)称取20mg两性霉素b(amb)溶于5ml无水dmf，加入马来酸酐(ma，2.0eq.)搅拌使其溶解完全，在n2保护下于30℃下反应4h，50℃下减压旋转蒸发除去溶剂得到固体产物；
[0049]
(2)将步骤(1)中制备的固体产物加入甲醇(固体产物与甲醇的体积比为50:0.2，mg:ml)中溶解，倒入预冷至4℃的25ml甲基叔丁基醚中进行沉淀，过滤收集沉淀物
[0050]
(3)对上述沉淀物重复用甲醇及甲基叔丁基醚进行沉淀操作3次，过滤收集的沉淀物经过真空干燥，得到的黄色粉末状的即为结构式为i
‑
1的ph响应性两性霉素b衍生物(ambma)，其1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)谱图如图1所示。
[0051]
实施例2
[0052]
制备结构式为i
‑
2的ph响应性两性霉素b衍生物，i
‑
2的结构式为：
[0053][0054]
具体包括如下步骤：
[0055]
(1)称取10mg两性霉素b(amb)溶于3ml无水dmf，加入柠康酸酐(ca，1.2eq.)，搅拌使其溶解完全，在n2保护下于25℃下反应2h，50℃下减压旋转蒸发除去溶剂得到固体产物；
[0056]
(2)将步骤(1)中制备的固体产物加入甲醇(固体产物与甲醇的体积比为100:1，mg:ml)中溶解，倒入预冷至4℃的20ml甲基叔丁基醚中进行沉淀，过滤收集沉淀物
[0057]
(3)对上述沉淀物重复用甲醇及甲基叔丁基醚进行沉淀操作3次，过滤收集的沉淀物经过真空干燥，得到的黄色粉末状的即为结构式为i
‑
2的ph响应性两性霉素b衍生物(ambca)，其1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)谱图如图2所示。
[0058]
实施例3
[0059]
制备结构式为i
‑
3的ph响应性两性霉素b衍生物，i
‑
3的结构式为：
[0060][0061]
具体包括如下步骤：
[0062]
(1)称取50mg两性霉素b(amb)溶于10ml无水dmf，加入2,3
‑
二甲基马来酸酐(dmma，3.0eq.)，搅拌使其溶解完全，在n2保护下于35℃下反应20h，50℃下减压旋转蒸发除去溶剂得到固体产物；
[0063]
(2)将步骤(1)中制备的固体产物加入甲醇(固体产物与甲醇的体积比为50:1，mg:ml)中溶解，倒入预冷至4℃的50ml甲基叔丁基醚中进行沉淀，过滤收集沉淀物；
[0064]
(3)对上述沉淀物重复用甲醇及甲基叔丁基醚进行沉淀操作3次，过滤收集的沉淀物经过真空干燥，得到的黄色粉末状的即为结构式为i
‑
3的ph响应性两性霉素b衍生物(ambdmma)，其1h nmr(400mhz，dmso
‑
d6)谱图如图3所示。
[0065]
另外上述实施例中采用的n,n
‑
二甲基甲酰胺(dmf)可以用二甲基亚砜(dmso)替换，其添加量与两性霉素b(amb)的体积质量比为0.2～1:1，ml:mg；采用的甲基叔丁基醚可以用其它不良溶剂(如乙醚、石油醚、正己烷或环己烷中的任意一种)代替，其添加量与甲醇的体积比为10～50:1，上述替换操作并不影响制备效果。
[0066]
在上述制备过程中，两性霉素b(amb)与添加的酸酐化合物的摩尔比可以在1:1～5之间，两性霉素b(amb)与添加的有机溶剂的质量体积比可以在1:0.2～1，mg/ml，两性霉素b(amb)和酸酐在氮气下反应的温度可以在20～40℃之间、反应时间在1～24h，添加的甲醇和不良溶剂之间的体积比可以在1:10～50之间，上述条件的变化均不改变制备形成的产物。
[0067]
实施例4
[0068]
对实施例1～3中制备的ph响应性两性霉素b衍生物进行性能测试：
[0069]
1、体外溶血试验
[0070]
测试两性霉素b和通式为i
‑
1、i
‑
2和i
‑
3的两性霉素b衍生物的溶血性，主要方法如下：
[0071]
(1)取新鲜鼠血1.5ml置于2ml抗凝管中，2000rpm离心10min，除去上层血清，取红细胞层加入20ml生理盐水，混匀，1500rpm离心15min，除去上清液，取红细胞层继续用生理盐水洗涤至上清液不显红色为止，将红细胞配成2％的混悬液(rbc)；
[0072]
(2)取0.5ml rbc液和0.5ml待测化合物溶液(称取1mg待测产物(两性霉素b和通式为i
‑
1、i
‑
2和i
‑
3的两性霉素b衍生物)用1ml dmso溶解，再用生理盐水稀释至目标浓度梯度—40μg/ml、20μg/ml、15μg/ml、10μg/ml、5μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml、0.2μg/ml)至2ml离心管中混合均匀，同时以纯化水和生理盐水分别作为阳性对照和阴性对照，将离心管放置在37
±
0.5℃的恒温培养箱中孵育3h，随后于2000rpm离心10min，观察溶血情况，同时吸取上
清液在574nm下测定吸光度值(abs)；
[0073]
(3)溶血率计算公式：溶血率％＝(abs
样品
–
abs
阴
)/(abs
阳
–
abs
阴
)
×
100％
[0074]
两性霉素b(amb)、通式为i
‑
1的两性霉素b衍生物(ambma)、通式为i
‑
2的两性霉素b衍生物(ambca)和通式为i
‑
3的两性霉素b衍生物(ambdmma)溶血率测定结果与已有的研究结果一致，amb具有较强的溶血作用，浓度为0.5和1μg/ml时即可观察到明显的溶血现象，溶血率分别为16.7％和52.3％；当浓度增加至5μg/ml时，amb的溶血率高达100％。在同样的浓度下，ambma未观察到溶血现象，但ambca开始出现溶血现象，溶血率为36.7％；当浓度增加至20μg/ml时，ambma的溶血率为29.1％，而ambca的溶血率达到95.4％。由此可见，ambma和ambca能够在一定程度上降低amb的溶血毒性。ambdmma对rbc的溶血作用明显低于amb，当浓度增加至300μg/ml时，ambdmma的溶血率为66.7％，约为相同溶血率下amb浓度的200倍。两性霉素b(amb)、通式为i
‑
1的两性霉素b衍生物(ambma)、通式为i
‑
2的两性霉素b衍生物(ambca)和通式为i
‑
3的两性霉素b衍生物(ambdmma)溶液溶血率曲线图如图4所示。从图4可知，通式为i
‑
1的两性霉素b衍生物(ambma)、通式为i
‑
2的两性霉素b衍生物(ambca)能够在一定程度上降低amb的溶血毒性，通式为i
‑
3的两性霉素b衍生物(ambdmma)大幅度降低amb的溶血毒性。
[0075]
2、体外药效学评价
[0076]
采用微板稀释法测定通式为i
‑
1、i
‑
2或i
‑
3的两性霉素b衍生物及两性霉素b(amb)原药对普通隐球菌的最低抑菌浓度(mic)，具体方法如下所示：
[0077]
(1)取无菌的96孔板，将浓度为1
×
103cfu/ml的普通隐球菌菌悬液接种至各孔中，待菌在孔中平衡30min后，第一孔加入100μl药液(采用ypd培养基稀释amb/ambma/ambca/ambdmma至浓度为32μg/ml)，然后采用二倍稀释法稀释amb/ambma/ambca/ambdmma至16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml、0.25μg/ml和0.125μg/ml系列浓度；
[0078]
(2)每个浓度设置2个复孔，同时设置两组对照组，一组阳性对照，只加菌不加药，用于考察普通隐球菌的在该条件下的生长状况；另一组阴性对照，只加药不加菌，用于考察药液是否存在杂菌污染；
[0079]
(3)将接种好的96孔板放入30
±
0.5℃下的恒温培养箱中培养，48小时后取出96孔板观察，并使用酶标仪测定各孔在630nm波长下的吸光度(od值)，判断其抑菌能力。
[0080]
培养48小时后，观察96孔板每孔内隐球菌的生长状况，将mic定义为某个小孔内完全抑制隐球菌生长的最低药物浓度。通过观察可知，阳性对照组的每孔呈现浑浊状态，说明隐球菌在该培养条件下能正常生长；而阴性对照组每孔呈现澄清透明状态，说明无杂菌生长，且操作过程中没有引入其它杂菌。两性霉素b(amb)、通式为i
‑
1的两性霉素b衍生物(ambma)、通式为i
‑
2的两性霉素b衍生物(ambca)和通式为i
‑
3的两性霉素b衍生物(ambdmma)的mic测定结果如表1所示。
[0081]
表1 amb、ambma、ambca和ambdmma的mic测定结果
[0082][0083]
注：
‑
：表示无菌生长； ：表示有菌生长
[0084]
3、急性毒性实验
[0085]
参考davis s a等(davis s a,vincent b m,endo m m,et al.nontoxic antimicrobials that evade drug resistance[j].nature chemical biology,2015,11(7):481
‑
487.)的实验方法，具体如下：
[0086]
(1)将健康的昆明小鼠(每只小鼠的体重在18～22g之间)随机分组，每组五只，给药途径为尾静脉注射；
[0087]
(2)给药后，观察并记录各组小鼠出现的急性毒性反应及一周内的死亡情况，死亡小鼠及时进行解剖，观察并记录各主要脏器(肝、脾、肺和肾)的病变情况。未死亡小鼠在观察期结束后亦进行解剖，观察其主要脏器有无异常。然后以受试药物剂量(mg/kg)为横坐标，死亡率(％)为纵坐标，作剂量
–
反应(死亡率)关系曲线，如图5所示。从图5可知，给予小鼠amb
‑
lip 5mg/kg剂量时，所有小鼠均立即死亡，主要表现为痉挛抽搐、呼吸困难、大小便失禁等中毒症状；继续提高给药剂量至16.7mg/kg，ambma
‑
lip、ambca
‑
lip和ambdmma
‑
lip三组小鼠均未出现毒性反应，死亡率为0％；当给药剂量为24.1mg/kg时，ambma
‑
lip、ambdmma
‑
lip组小鼠仍未出现明显的毒性反应，而ambca
‑
lip组小鼠的死亡率为40％；当给药剂量提高至28.9mg/kg时，ambma
‑
lip组小鼠出现严重的中毒症状，死亡率为40％，而ambca
‑
lip组小鼠的死亡率为80％；当给药剂量提高至34.7mg/kg时，ambma
‑
lip组和ambca
‑
lip组小鼠的死亡数量均超过一半，死亡率分别为60％和80％；当给药剂量提高至50mg/kg时，ambma
‑
lip组和ambca
‑
lip组小鼠的全部死亡，死亡率为100％，而ambdmma
‑
lip仍未出现死亡情况，死亡率为0％。以上结果显示，与amb
‑
lip相比，ambma
‑
lip、ambca
‑
lip和ambdmma
‑
lip的急性毒性均大大降低，其中ambdmma
‑
lip减毒效果最佳，表明本发明两性霉素b分子上的氨基经酸酐修饰后，所得的衍生物可以在一定程度上降低amb的急性毒性作用。。
[0088]
4、体内药效学评价
[0089]
体内隐球菌真菌负荷实验：采用尾静脉注射新型隐球菌建立小鼠真菌感染模型，具体方法如下：
[0090]
(1)挑取h99隐球菌单菌落于3ml的ypd液体培养基内，30℃摇床过夜培养。待其生长至对数期时，吸取适量菌液离心，弃上清后加入pbs重悬，离心洗涤两次后用灭菌后的生理盐水配置成浓度为1
×
106cfu/g的菌液，通过小鼠尾静脉注射菌液造模(剂量100μl/20g)。感染24h后，连续给药3天，每次给药间隔24h；
[0091]
(2)将两性霉素b(amb)、通式为i
‑
1的两性霉素b衍生物(ambma)、通式为i
‑
2的两性霉素b衍生物(ambca)和通式为i
‑
3的两性霉素b衍生物(ambdmma)制备成脂质体制剂(amb
‑
lip/ambma
‑
lip/ambca
‑
lip/ambdmma
‑
lip)，按照2mg/kg的剂量尾静脉注射给药；
[0092]
(3)第3天给药24h后，于无菌操作台解剖感染小鼠和同批次正常小鼠，分别取出肺和脑组织，用灭菌过的生理盐水洗净，并用滤纸吸干水分；
[0093]
(4)称重后按组织重量(g)与生理盐水体积(ml)1:3的比例添加生理盐水进行匀浆，将得到的匀浆原液稀释10和100两个倍数后，吸取50μl分别涂布在ypd固体培养基上，放置于30℃恒温培养箱中培养48h；
[0094]
(5)培养结束后取出各组培养板，观察并拍照对比感染小鼠和正常小鼠两组的肺、脑组织真菌负荷情况，并将培养板上菌落数计数。
[0095]
肺部真菌负荷结果如图6所示，脑部真菌负荷结果如图7所示。从图6和图7可知，当给药剂量为2mg/kg时，与未治疗组相比，amb
‑
lip组在肺和脑组织中真菌负荷数分别降低了4和3个数量级，表现出良好的治疗效果。与未治疗组(untreated)相比，ambca
‑
lip组在肺和脑组织中真菌负荷数分别降低了3和1.5个数量级，ambma
‑
lip组的肺部真菌负荷量未有数量级的明显变化，脑部仅降低了0.3个数量级，ambda
‑
lip组在肺和脑组织中真菌负荷数均降低了0.5个数量级，治疗水平较amdca
‑
lip弱一些，较ambma
‑
lip强一些。以上结果表明，本发明制备的通式为i
‑
1的两性霉素b衍生物(ambma)、通式为i
‑
2的两性霉素b衍生物(ambca)和通式为i
‑
3的两性霉素b衍生物(ambdmma)制备成脂质体制剂(ambma
‑
lip、ambca
‑
lip和ambdmma
‑
lip)依然具有较好的抗菌效果。
[0096]
5、体内白色念珠菌真菌负荷实验：
[0097]
采用尾静脉注射atcc90028白色念珠菌建立小鼠真菌感染模型，具体方法如下所示：
[0098]
(1)挑取atcc90028白色念珠菌单菌落于3ml的ypd液体培养基内，30℃摇床过夜培养，待其生长至对数期时，吸取适量菌液离心，弃上清后加入pbs重悬，离心洗涤两次后用灭菌后的生理盐水配置成浓度为1
×
106cfu/g的菌液，通过小鼠尾静脉注射菌液造模(剂量100μl/20g)；
[0099]
(2)感染24h后，连续给药3天，每次给药间隔24h，将两性霉素b(amb)、通式为i
‑
1的两性霉素b衍生物(ambma)、通式为i
‑
2的两性霉素b衍生物(ambca)和通式为i
‑
3的两性霉素b衍生物(ambdmma)制备成脂质体制剂(amb
‑
lip/ambma
‑
lip/ambca
‑
lip/ambdmma
‑
lip)，按照2mg/kg的剂量尾静脉注射给药，第3天给药24h后，于无菌操作台解剖感染小鼠和同批次正常小鼠，取出肾组织，用灭菌过的生理盐水洗净，并用滤纸吸干水分；
[0100]
(3)称重后按组织重量(g)与生理盐水体积(ml)1:3的比例添加生理盐水进行匀浆。将得到的匀浆原液稀释10和100两个倍数后，吸取50μl分别涂布在ypd固体培养基上，放置于30℃恒温培养箱中培养48h；
[0101]
(4)培养结束后取出各组培养板，观察并拍照对比感染小鼠和正常小鼠两组的肾组织真菌负荷情况，并将培养板上菌落数计数，肾部真菌负荷结果如图8所示。从图8可知，当给药剂量为2mg/kg时，与未治疗组(untreated)相比，amb
‑
lip组在肾组织中真菌负荷数降低了2.5个数量级，表现出良好的治疗效果。与未治疗组相比，ambca
‑
lip组在肾组织中真菌负荷数降低了2.1个数量级，ambma
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lip组在肾组织中真菌负荷量降低了0.7个数量级，ambda
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lip组在肾组织中真菌负荷数均降低了1.6个数量级，治疗水平较amdca
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lip弱一些，较ambma
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lip强一些。以上结果表明，本发明制备的通式为i
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1的两性霉素b衍生物(ambma)、
通式为i
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2的两性霉素b衍生物(ambca)和通式为i
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3的两性霉素b衍生物(ambdmma)制备成脂质体制剂(ambma
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lip、ambca
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lip和ambdmma
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lip)同样具体良好的抗菌效果。
[0102]
同样的，根据本发明的方法制备的其它ph响应性两性霉素b衍生物同样具有肾毒性低、溶血作用小、安全性高的特点，在制备用于抑制真菌生长或治疗真菌感染性疾病的药物中有着广泛的应用，可以将其与药学上可接受的载体(大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰基卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、脱氧胆酸钠、胆固醇硫酸钠、胆固醇、蔗糖、琥珀酸二钠(或者琥珀酸二钠的六水合物)或生育酚中的任意一种)制备形成片剂、注射剂、注射用脂质体、注射用脂质复合物或注射用胆固醇硫酸酯复合物形式的药物组合物。
[0103]
综上所述，本发明的衍生物通过对两性霉素b分子中海藻糖胺上的氨基进行修饰，得到一种新型结构的两性霉素b衍生物(其结构式如图9所示，其中r1为h或烷基；r2为h或烷基)，其与未修饰前的两性霉素b相比，具有肾毒性低、溶血作用小、安全性高的特点。另外本发明还提供了该衍生物的制备方法，同样具有产率高，制备的衍生物具有较好的抗真菌效果，在治疗全身性深部真菌感染方面具有广阔的市场前景。
[0104]
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。