一类含有稠合三环结构的化合物的制作方法

1.本发明涉及药物化学领域；具体地说，本发明涉及一类新型含有稠合三环的衍生物，其合成方法及其作为一种或多种蛋白激酶抑制剂在制备药物用于治疗肿瘤等相关疾病中的应用。


背景技术：

2.癌症亦称恶性肿瘤，是世界上发病率最高和死亡率最高的一种疾病之一，其特点是以细胞异常增殖及转移，在发病后短时间内或相对短时间内扩散，转移。传统的治疗方案包括切除(如果符合切除条件)，放疗，化疗。近年来发展起来的靶向治疗法，有降低毒性和对病人的负作用，及提高生存率等优点。但在使用靶向药物一段时间内又会产生抗药性，之后癌细胞的生长扩散就会异常迅猛。常见的癌症有：血癌，肺癌，肝癌，膀胱癌，直肠癌，胃癌，等等。
3.自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。许多疾病相继被列为自身免疫性疾病，值得提出的是，自身抗体的存在与自身免疫性疾病并非两个等同的概念，自身抗体可存在于无自身免疫性疾病的正常人特别是老年人，如抗甲状腺球蛋白抗体、甲状腺上皮细胞抗体、胃壁细胞抗体、细胞核dna抗体等。有时，受损或抗原性发生变化的组织可激发自身抗体的产生，如心肌缺血时，坏死的心肌可导致抗心肌自身抗体形成，但此抗体并无致病作用，是一种继发性免疫反应。临床上的表现有：(1)器官特异性自身免疫病，如慢性淋巴细胞性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、胰岛素依赖型糖尿病、重症肌无力、溃疡性结肠炎、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、肺出血肾炎综合征、寻常天疱疮、类天疱疮、原发性胆汁性肝硬化、多发性脑脊髓硬化症、急性特发性多神经炎等。(2)系统性自身免疫病，如红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病、系统性血管炎症、天疱疮、皮肌炎、溃疡性结肠炎等。
4.脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,syk)基因是1991年首次从猪脾cdna克隆出来，编码一种非受体型蛋白酪氨酸激酶。人类syk基因定位于9号染色体q22区，syk蛋白含635个氨基酸，在自身免疫性疾病和血液恶性肿瘤中作用重要，如syk基因可抑制乳腺癌、黑色素瘤和肝癌等恶性肿瘤细胞的增殖与迀移。目前，syk抑制剂已用于类风湿性关节炎、慢性淋巴细胞白血病等的临床ii/iii期实验。最近研究表明，使用syk抑制剂或者干扰syk基因的表达，可以有效地减缓肝纤维化/硬化的进程，具有很好地治疗作用(参见cn 105664178a)。
5.janus激酶(janus kinase，jak)是转导细胞因子信号从膜受体到stat转录因子的细胞质酪氨酸激酶，又称为janus激酶-信号传导及转录激活因子(janus-activated kinasesingal transducers and activators of transcriprion)。这是近年来新发现的一条与细胞因子密切相关的细胞内信号传导通路，参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要的生物学过程。janus激酶是一种非受体型酪氨酸蛋白激酶。有4个家族成员，分别是jak1、jak2、tyk2和jak3。前3者广泛存在于各种组织和细胞中，而jak3仅存在于骨髓
和淋巴系统。这些jak家族成员从c末端到n端依次都拥有7个同源结构域(jak homologydomain，jh)：jh1为激酶区，功能是编码激酶蛋白；jh2为激酶样区或“假”激酶区，对jh1的活性起调节作用；jh3～jh7组成一个四合一结构域，调节jak与受体的结合。科学研究表明，抑制jak可以成为有前途的抗癌药的靶点。
6.syk和jak属于不同的信号通路。用一个小分子同时靶向这两个靶点，具有优越性。portola pharmaceuticals公司开发的cerdulatinib是一款在研的，口服的，同时靶向脾酪氨酸激酶(syk)和janus激酶(jak)的抑制剂，用于治疗外周t细胞淋巴瘤(ptcl)。2018年美国临床肿瘤学会(asco)年会和欧洲血液学协会(eha)第23届大会上报告了该项研究的新数据。cerdulatinib表现出广泛的临床活性，所有患者的客观反应率为47％，并且耐受良好。asn002是由asana biosciences开发的syk-jak双通路抑制剂，2018年底被fda授予治疗中度至重度特应性皮炎的快速通道资格。
7.syk-jak双通路抑制剂有望在治疗淋巴瘤、固体瘤、特应性皮炎、关节炎、脱发症、红斑狼疮等疾病领域得到应用。
8.综上所述，开发新型的syk-jak双通路抑制剂具有重要的意义。


技术实现要素：

9.本发明的目的是提供一类新型的蛋白激酶抑制剂。
10.本发明的第一方面，提供了一种如下式(i)所示结构的化合物，或其光学异构体(包括消旋体、单一的对映异构体、可能的非对映异构体)，药学上可接受的盐，前药，氘代形式，水合物，溶剂合物：
[0011][0012]
其中“*”表示手性中心；在没有标明是r或s的情况下，带“*”的化合物表示消旋体，或r构型或s构型的光学异构体；
[0013]
r1选自下组：3-至8-元环烷基、3-至12-元杂环基(包括单环、螺环和并环)、芳基、杂芳基、or
b
、或nr
b
r
c
；在所述的r1中，各个环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选地被1-3个各自独立地选自下组的取代基取代：氘、卤素、cn、or
h
、nr
h
r
h
、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、nr
h
c(o)r
e
、s(o)2r
e
、s(o)2nr
h
r
h
、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、c
1-4
烷氧基取代的c
1-4
烷基、羟基取代的c
1-4
烷基、氰基取代的c
1-4
烷基、二(c
1-4
烷基)胺基取代的c
1-4
烷基、3-至6-元杂环基取代的c
1-4
烷基、芳基取代的c
1-4
烷基、杂芳基取代的c
1-4
烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、3-至8-元环烷基、
3-至8-元杂环基、芳基、或杂芳基，前提条件是所形成的化学结构是稳定的和有意义的；
[0014]
其中，r
b
和r
c
各自独立为氢、c
1-4
烷基、3-至8-元环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、杂芳基；
[0015]
各个r2各自独立为氘、卤素、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、or
h
、sr
h
、nr
h
r
h
、cn、c(o)r
e
、c(o)or
h
，c(o)nr
h
r
h
、oc(o)r
e
、nr
h
c(o)r
e
、或s(o)2r
e
；
[0016]
各个r3各自独立为氘、或c
1-4
烷基；或当两个r3同时连接到同一个碳原子上时，两个r3与其相连的碳原子共同形成羰基(c＝o)；所述的r3位于环上除n原子和g上的任意位点；
[0017]
j和g各自独立地为nr
f
、o、s、s(o)、s(o)2或cr
g
r
g
；
[0018]
n为0、1、2、或3；
[0019]
q为0、1、2、或3；
[0020]
r
f
为氢、c
1-8
烷基、c
1-8
卤代烷基、c
2-8
烯基、c
2-8
炔基、3-至8-元环烷基、3-至12-元杂环基、芳基、杂芳基、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、s(o)2r
e
、或s(o)2nr
h
r
h
；其中，各个烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选地且各自独立地被1-3个各自独立地选自下组的取代基取代：卤素、c
1-4
烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、3-至8-元环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、杂芳基、cn、no2、or
h
、sr
h
、nr
h
r
h
、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、nr
h
c(o)r
e
、s(o)2r
e
、或s(o)2nr
h
r
h
；
[0021]
各个r
e
各自独立地为选自下组的基团：氢、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、3-至8-元环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、或杂芳基；
[0022]
各个r
g
各自独立地选自下组：氢、氘、卤素、或c
1-4
烷基；或两个r
g
与其相连的碳原子共同形成羰基(c＝o)；或两个r
g
与其连接的同一个碳原子一起形成3-至8-元环状结构，此环状结构任选地含有0、1或2个选自n、o、s的杂原子；
[0023]
各个r
h
各自独立为氢、或c
1-4
烷基；或两个r
h
与其连接的氮原子一起形成3-至-8元杂环基，此杂环基含有1或2个n原子以及0或1个选自o、s的杂原子；
[0024]
其中，除非特别说明，各个上述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选地且各自独立地被1-3个各自独立地选自下组的取代基取代：氘、卤素、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、3-至8-元环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、杂芳基、cn、no2、or
h
、sr
h
、nr
h
r
h
、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、nr
h
c(o)r
e
、或s(o)2r
e
，前提条件是所形成的化学结构是稳定的和有意义的；其中r
e
和r
h
的定义如上所述；
[0025]
除非特别说明，上述的芳基为含有6-12个碳原子的芳香基团；杂芳基为5-至15-元杂芳香基团；环状结构为饱和的或不饱和的、含杂原子或不含杂原子的环状基团。
[0026]
在另一优选例中，所述的r1选自下组：3-至12-元杂环基、芳基、或杂芳基；其中，各个杂环基、芳基和杂芳基任选地被1-2个各自独立地选自下组的取代基取代：氘、卤素、cn、or
h
、nr
h
r
h
、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、nr
h
c(o)r
e
、s(o)2r
e
、s(o)2nr
h
r
h
、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、c
1-4
烷氧基取代的c
1-4
烷基、羟基取代的c
1-4
烷基、氰基取代的c
1-4
烷基、二(c
1-4
烷基)胺基取代的c
1-4
烷基、3-至6-元杂环基取代的c
1-4
烷基、芳基取代的c
1-4
烷基、杂芳基取代的c
1-4
烷基、3-至8-元环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、或杂芳基，前提条件是所形成的化学结构是稳定的和有意义的；
[0027]
各个r2各自独立为氢、氘、卤素、c
1-4
烷基、nr
h
r
h
、或nr
h
c(o)r
e
；
[0028]
各个r3各自独立为氢或c
1-4
烷基；或当两个r3同时连接到同一个碳原子上时，这两
个r3与其相连的碳原子共同形成羰基(c＝o)；
[0029]
n为0、1、或2；
[0030]
q为0、1、或2；
[0031]
其中r
e
和r
h
的定义如本发明第一方面中所述。
[0032]
在另一优选例中，式(i)为：
[0033][0034]
其中各个基团的定义如本发明第一方面中所述。
[0035]
在另一优选例中，式(iia)中的结构片段选自：
[0036][0037]
表示上述结构片段与式(iia)中其它结构的连接位点；
[0038]
其中，各个r2各自独立为氢、氘、卤素、c
1-2
烷基、nr
h
r
h
、或nr
h
c(o)r
e
；
[0039]
各个r3各自独立为氢或c
1-4
烷基；当两个r3连接在同一个碳原子上时，两个r3和连接它们的碳原子可以一起组成c＝o；
[0040]
n为0、1、或2；q为0或1；
[0041]
r
f
为氢、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、3-至8-元环烷基、3-至9-元杂环基、芳基、杂芳基、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、s(o)2r
e
、或s(o)2nr
h
r
h
；其中各个烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选地且各自独立地被1-3个各自独立地选自下组的取代基取代：氘、卤素、c
1-4
烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、3-至8-元环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、杂芳基、cn、no2、or
h
、sr
h
、nr
h
r
h
、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、nr
h
c(o)r
e
、s(o)2r
e
、或s(o)2nr
h
r
h
；
[0042]
r
e
和r
h
的定义如本发明第一方面中所述。
[0043]
在另一优选例中，式(i)为：
[0044][0045]
其中，r2为氢、氘、卤素、c
1-2
烷基、nr
h
r
h
、或nr
h
c(o)r
e
；
[0046]
r
f
为氢、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、3-至8-元环烷基、3-至9-元杂环基、芳基、杂芳基、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、s(o)2r
e
、或s(o)2nr
h
r
h
；其中各个烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选地且各自独立地被1-3个各自独立地选自下组的取代基取代：氘、卤素、c
1-4
烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、3-至8-元环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、杂芳基、cn、no2、or
h
、sr
h
、nr
h
r
h
、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、nr
h
c(o)r
e
、s(o)2r
e
、或s(o)2nr
h
r
h
；
[0047]
r1的定义如本发明第一方面中所述；r
e
和r
h
的定义如本发明第一方面中所述。
[0048]
在另一优选例中，式(i)为：
[0049][0050]
其中，r2为氢、氘、卤素、c
1-2
烷基、nr
h
r
h
、或nr
h
c(o)r
e
；
[0051]
r
f
为氢、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、3-至8-元环烷基、3-至9-元杂环基、芳基、杂芳基、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、s(o)2r
e
、或s(o)2nr
h
r
h
；其中各个烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选地且各自独立地被1-3个各自独立地选自下组的取代基取代：氘、卤素、c
1-4
烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、3-至8-元环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、杂芳基、cn、no2、or
h
、sr
h
、nr
h
r
h
、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、nr
h
c(o)r
e
、s(o)2r
e
、或s(o)2nr
h
r
h
；
[0052]
r1的定义如本发明第一方面中所述；r
e
和r
h
的定义如本发明第一方面中所述。
[0053]
在另一优选例中，所述的r2为氢、卤素、c
1-2
烷基；
[0054]
r
f
选自下组：氢、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、3-至8-元环烷基、3-至9-元杂环基、芳基、杂芳基、c(o)r
e
、或s(o)2r
e
；其中各个烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基任选地且各自独立地被1-3个各自独立地选自下组的取代基取代：氘、卤素、c
1-4
烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、3-至8-元环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、杂芳基、cn、no2、or
e
、sr
e
、nr
e
r
e
、c(o)r
e
、c(o)or
e
、c(o)nr
e
r
e
、nr
e
c(o)r
e
、s(o)2r
e
、或s(o)2nr
h
r
h
；
[0055]
r
e
和r
h
的定义如本发明第一方面中所述。
[0056]
在另一优选例中，式(i)为：
[0057][0058]
其中，r2为氢、卤素、c
1-2
烷基；
[0059]
s和t各自独立为1、2、或3；
[0060]
a为nr
k
、o、或cr
g
r
g
；其中r
k
为氢、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、羟基取代的c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基取代的c
1-4
烷基、二(c
1-4
烷基)胺基取代的c
1-4
烷基、3-至8-元环烷基、3-至9-元杂环基、芳基、杂芳基、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、s(o)2r
e
、或s(o)2nr
h
r
h
；
[0061]
r1的定义如本发明第一方面中所述；r
g
、r
e
、和r
h
的定义如本发明第一方面中所述。
[0062]
在另一优选例中，r1为3-至12-元杂环基；其中，所述的杂环基指饱和或部分不饱和的单环或多环杂环基；多环杂环基指包括螺环、稠环和桥环的杂环基；杂环基任选地被1-2个各自独立地选自下组的取代基取代：氘、卤素、cn、or
h
、nr
h
r
h
、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、nr
h
c(o)r
e
、s(o)2r
e
、s(o)2nr
h
r
h
、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、c
1-4
烷氧基取代的c
1-4
烷基、羟基取代的c
1-4
烷基、氰基取代的c
1-4
烷基、二(c
1-4
烷基)胺基取代的c
1-4
烷基、3-至6-元杂环基取代的c
1-4
烷基、芳基取代的c
1-4
烷基、杂芳基取代的c
1-4
烷基、3-至8-元环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、或杂芳基，前提条件是所形成的化学结构是稳定的和有意义的。
[0063]
在另一优选例中，r1选自下组：
[0064]
[0065]
表示上述结构片段与式(i)中其它结构的连接位点；
[0066]
其中，各个r
s
各自独立为氢、氘、卤素、c
1-4
烷基、cn、or
h
、nr
h
r
h
；或当两个r
s
同时连接到同一个碳原子上时，这两个r
s
与其相连的碳原子可以任选地共同形成羰基(c＝o)；
[0067]
或位于不同碳原子上的两个r
s
共同构成选自下组的结构：化学键、c
1-2
的亚烷基；
[0068]
b为nr
t
、o、或cr
w
r
w
；各个r
w
各自独立地选自下组：氢、氘、卤素、cn、or
h
、nr
h
r
h
、c(o)r
e
、c(o)or
h
、c(o)nr
h
r
h
、nr
h
c(o)r
e
、s(o)2r
e
、s(o)2nr
h
r
h
、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、c
1-4
烷氧基取代的c
1-4
烷基、羟基取代的c
1-4
烷基、氰基取代的c
1-4
烷基、二(c
1-4
烷基)胺基取代的c
1-4
烷基、3-至8-元环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、或杂芳基；或两个r
w
与其连接的同一个碳原子一起形成3-至8-元环状结构，此环状结构任选地含有0、1或2个选自nr
t
、o、s的环成员；
[0069]
各个r
t
各自独立地为氢、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、羟基取代的c
1-4
烷基、c
1-4
烷氧基取代的c
1-4
烷基、氰基取代的c
1-4
烷基、二(c
1-4
烷基)胺基取代的c
1-4
烷基、3-至8-元环烷基、3-至8-元杂环基、芳基、杂芳基、c(o)r
e
、或s(o)2r
e
；
[0070]
p为0、1、或2；
[0071]
u和v各自独立为0、1、或2；
[0072]
各个r
e
和r
h
的定义如本发明第一方面中所述。
[0073]
在另一优选例中，r1选自下组：
[0074][0075]
表示上述结构片段与式(i)中其它结构的连接位点。
[0076]
在另一优选例中，所述化合物选自下组：
[0077]
[0078]
[0079][0080]
本发明的第二方面，提供了一种如本发明第一方面所述的式(i)化合物，或其光学异构体，药学上可接受的盐，前药，氘代衍生物，水合物，溶剂合物的用途，其用于：
[0081]
(a)制备治疗与蛋白激酶活性或表达量相关的疾病的药物；
[0082]
(b)制备蛋白激酶靶向抑制剂；和/或
[0083]
(c)体外非治疗性地抑制蛋白激酶的活性；
[0084]
其中，所述的蛋白激酶选自下组：syk、jak1、jak2、jak3、tyk2等，或其组合。
[0085]
本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括：(i)有效量的如本发明第一方面所述的式i化合物，或其光学异构体，药学上可接受的盐，前药，氘代衍生物，水合物，溶剂合物；和(ii)药学上可接受的载体。
[0086]
本发明的第四方面，提供了一种如本发明第一方面所述的化合物的制备方法，包括步骤：
[0087][0088]
(1)用式c2化合物与dmf-dma反应，得到式c3化合物；
[0089][0090]
(2)用式c3化合物与naio4反应，得到式c4化合物；
[0091][0092]
(3)用式c4化合物与nh2nh2反应，得到式i化合物。
[0093]
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
[0094]
本发明人经过长期而深入的研究，意外地发现了一类结构新颖的含有稠合三环结构的化合物作为syk和jak激酶抑制剂，以及它们的制备方法和应用。本发明化合物可以应用于与syk、jak1、jak2、jak3、tyk2的活性相关的各种疾病的治疗。基于上述发现，发明人完
成了本发明。
[0095]
术语
[0096]
除特别说明之处，本文中提到的“或”具有与“和/或”相同的意义(指“或”以及“和”)。
[0097]
除特别说明之处，本发明的所有化合物之中，各手性碳原子(手性中心)可以任选地为r构型或s构型，或r构型和s构型的混合物。
[0098]
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“烷基”指只含碳原子的直链(即，无支链)或支链饱和烃基，或直链和支链组合的基团。当烷基前具有碳原子数限定(如c
1-10
)时，指所述的烷基含有1-10个碳原子。例如，c
1-8
烷基指含有1-8个碳原子的烷基，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。
[0099]
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“烯基”是指直链或支链，具有至少一个碳-碳双键的碳链基团。烯基可以是取代的或未取代的。当烯基前具有碳原子数限定(如c
2-8
)时，指所述的烯基含有2-8个碳原子。例如，c
2-8
烯基指含有2-8个碳原子烯基，包括乙烯基、丙烯基、1,2-丁烯基、2,3-丁烯基、丁二烯基、或类似基团。
[0100]
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“炔基”是指具有至少一个碳-碳三键的脂肪族碳氢基团。所述的炔基可以是直链或支链的，或其组合。当炔基前具有碳原子数限定(如c
2-8
炔基)时，指所述的炔基含有2-8个碳原子。例如，术语“c
2-8
炔基”指具有2-8个碳原子的直链或支链炔基，包括乙炔基、丙炔基、异丙炔基、丁炔基、异丁炔基、仲丁炔基、叔丁炔基、或类似基团。
[0101]
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“环烷基”指具有饱和的或部分饱和的单元环，二环或多环(稠环、桥环或螺环)环系基团。当某个环烷基前具有碳原子数限定(如c
3-10
)时，指所述的环烷基含有3-10个碳原子。在一些优选实施例中，术语“3-至8-元环烷基”指具有3-8个碳原子的饱和或部分饱和的单环或二环烷基，包括环丙基、环丁基、环戊基、环庚基、或类似基团。“螺环烷基”指单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的二环或多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。“稠环烷基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳二环或多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。“桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。所述环烷基所含原子全部为碳原子。如下是环烷基的一些例子，本发明并不仅局限下述的环烷基。
[0102]
[0103]
除非有相反陈述，否则下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。“芳基”指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于其它环状基团(包括饱和和不饱和环)，但不能含有杂原子如氮，氧，或硫，同时连接母体的点必须在具有共轭的π电子体系的环上的碳原子上。芳基可以是取代的或未取代的。如下是芳基的一些例子，本发明并不仅局限下述的芳基。
[0104][0105]“杂芳基”指包含一个到多个杂原子(任选自氮、氧和硫)的具有芳香性的单环或多环基团，或者包含杂环基(含一个到多个杂原子任选自氮、氧和硫)与芳基稠合形成的多环基团，且连接位点位于芳基上。杂芳基可以是任选取代的或未取代的。如下是杂芳基的一些例子，本发明并不仅局限下述的杂芳基。
[0106][0107]“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其中一个或多个环原子选自氮、氧或硫，其余环原子为碳。单环杂环基的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基。多环杂环基指包括螺环、稠环和桥环的杂环基。“螺环杂环基”指系统中的每个环与体系中的其他环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或硫，其余环原子为碳。“稠环杂环基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，而且其中一个或多个环原子选自氮、氧或硫，其余环原子为碳。“桥环杂环基”指任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，而且其中一个或多个环原子选自氮、氧或硫，其余环原子为碳。如果杂环基里同时有饱和环和芳环存在(比如说饱和环和芳环稠合在一起)，连接到母体的点一定是在饱和的环上。注：当
连接到母体的点在芳环上时，称为杂芳基，不称为杂环基。如下是杂环基的一些例子，本发明并不仅局限下述的杂环基。
[0108][0109]
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“卤素”指f、cl、br和i。
[0110]
如本文所用，术语“取代”(在有或无“任意地”修饰时)指特定的基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所取代。特定的取代基为在前文中相应描述的取代基，或各实施例中所出现的取代基。除非特别说明，某个任意取代的基团可以在该基团的任何可取代的位点上具有一个选自特定组的取代基，所述的取代基在各个位置上可以是相同或不同的。环状取代基，例如杂环基，可以与另一个环相连，例如环烷基，从而形成螺二环系，即两个环具有一个共用碳原子。本领域技术人员应理解，本发明所预期的取代基的组合是那些稳定的或化学上可实现的组合。所述取代基例如(但并不限于)：c
1-8
烷基、c
2-8
烯基、c
2-8
炔基、3-至8-元环烷基、3-至12-元杂环基，芳基、杂芳基、卤素、羟基、羧基(-cooh)、c
1-8
醛基、c
2-10
酰基、c
2-10
酯基、氨基。
[0111]
为了方便以及符合常规理解，术语“任意取代”或“任选取代”只适用于能够被取代基所取代的位点，而不包括那些化学上不能实现的取代。
[0112]
如本文所用，除非特别说明，术语“药学上可接受的盐”指适合与对象(例如，人)的组织接触，而不会产生不适度的副作用的盐。在一些实施例中，本发明的某一化合物的药学上可接受的盐包括具有酸性基团的本发明的化合物的盐(例如，钾盐，钠盐，镁盐，钙盐)或具有碱性基团的本发明的化合物的盐(例如，硫酸盐，盐酸盐，磷酸盐，硝酸盐，碳酸盐)。
[0113]
用途：
[0114]
本发明提供了一类式(i)化合物，或它们的氘代衍生物、它们的盐、异构体(对映异构体或非对映异构体，如果存在的情况下)、前药、水合物、溶剂合物、可药用载体或赋形剂用于抑制蛋白激酶的用途。这里所指的蛋白激酶包括syk、jak1、jak2、jak3、tyk2等，在内，但并不仅限于以上几种激酶。
[0115]
本发明化合物可用作一种或多种激酶抑制剂，例如一些实施例中，本发明中的某类化合物可用作syk、jak1、jak2、jak3、tyk2激酶抑制剂。
[0116]
在癌症病人体内，上述所提到的各种蛋白激酶的表达或活性都明显增高。这些过度表达和/或异常的蛋白激酶活性水平与肿瘤的发生发展直接关联。本发明化合物是这些蛋白激酶的单一和/或双重抑制剂。通过调节这些蛋白激酶活性得到预防、缓解或治愈疾病。所指疾病包括肝癌、直肠癌、膀胱癌、咽喉癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、乳腺癌、前列腺癌、神经胶质细胞瘤、卵巢癌、头颈部鳞癌、宫颈癌、食管癌、肾癌、胰腺
癌、结肠癌、皮肤癌、淋巴瘤、胃癌、多发性骨髓癌和实体瘤等等。
[0117]
从某种角度上说，双重蛋白激酶抑制剂同时干扰两种不同的激酶，所产生的抗肿瘤效果往往具有叠加性，因此具有更有效治疗各种癌症的潜力。
[0118]
本发明化合物可与生物制剂如pd-1抑制剂和作为组合药物治疗各种癌症及相关疾病。
[0119]
可将本发明化合物及其氘代衍生物，以及药学上可接受的盐或其异构体(如果存在的情况下)或其水合物和/或组合物与药学上可接受的赋形剂或载体配制在一起，得到的组合物可在体内给予哺乳动物，例如男人、妇女和动物，用于治疗病症、症状和疾病。组合物可以是：片剂、丸剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、胶囊、气雾剂、无菌注射液。无菌粉末等。一些实施例中，药学上可接受的赋形剂包括微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙、甘露醇、羟丙基-β-环糊精、β-环糊精(增加)、甘氨酸、崩解剂(如淀粉、交联羧甲基纤维素钠、复合硅酸盐和高分子聚乙二醇)，造粒粘合剂(如聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明胶和阿拉伯胶)和润滑剂(如硬脂酸镁、甘油和滑石粉)。在优选的实施方式中，所述药物组合物是适于口服的剂型，包括但不限于片剂、溶液剂、混悬液、胶囊剂、颗粒剂、粉剂。向患者施用本发明化合物或药物组合物的量不固定，通常按药用有效量给药。同时，实际给予的化合物的量可由医师根据实际情况决定，包括治疗的病症、选择的给药途径、给予的实际化合物、患者的个体情况等。本发明化合物的剂量取决于治疗的具体用途、给药方式、患者状态、医师判断。本发明化合物在药物组合物中的比例或浓度取决于多种因素，包括剂量、理化性质、给药途径等。
[0120]
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。
[0121]
化合物的通用合成方法
[0122]
本发明的式(i)化合物可以通过以下方法制备得到，各步骤的试剂和条件可以选用本领域进行该类制备方法常规的试剂或条件，反应物、溶剂、碱、所用化合物的量、反应温度、反应所需时间等不限于下面的解释。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便的制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易地进行。
[0123]
在本发明的制备方法中，各反应通常在惰性溶剂中，反应温度通常为-20～150℃(优选0～120℃下进行。各步反应时间通常为0.5～48h，较佳地为2～12h。
[0124]
反应式1描述了中间体1-a-5-1和1-a5-2的通用合成方法：
[0125]
反应式1:
[0126][0127]
反应式2描述了中间体2-b3-1和2-b3-2的通用合成方法：
[0128]
反应式2:
[0129][0130]
化合物iia是化合物i的一部分。反应式3描述了化合物iia的通用合成方法：
[0131]
反应式3:
[0132][0133]
化合物iib是化合物i的一部分。反应式4描述了化合物iib的通用合成方法：
[0134]
反应式4:
[0135][0136]
反应式5描述了化合物iia的另一种通用合成方法：
[0137]
反应式5:
[0138][0139]
上述反应式1-5中r2、r
f
、和q的定义同上文中所述。
[0140]
药物组合物和施用方法
[0141]
由于本发明化合物具有优异的对一系列蛋白激酶的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解与egfr、egfr(c797s)、alk、和hpk1等蛋白激酶活性或表达量相关的疾病。
[0142]
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有5-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
[0143]“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
[0144]
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。
[0145]
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
[0146]
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
[0147]
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
[0148]
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
[0149]
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
[0150]
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
[0151]
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
[0152]
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
[0153]
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选5～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
[0154]
本发明的主要优点包括：
[0155]
1.提供了一种如式(i)所示的化合物。
[0156]
2.提供了一种结构新颖的syk、jak1、jak2、jak3、tyk2等蛋白激酶的抑制剂，及其制备和应用，所述的抑制剂在极低浓度下即可抑制上述蛋白激酶的活性。
[0157]
3.提供了一类治疗与syk、jak1、jak2、jak3、tyk2等，等蛋白激酶活性相关疾病的药物组合物。
[0158]
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
[0159]
实施例1:化合物1r的制备
[0160][0161]
化合物1r-a是根据专利wo2018108084里的实验步骤制备的。室温下向甲醇(10ml)中加入化合物1r-a(200mg,0.85mmol)和钯碳催化剂(10％,50mg)，该反应混合物在室温和1大气压的氢气氛围下反应过夜。tlc监测反应完成。反应混合物经过硅藻土过滤，滤液经减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(dcm:meoh＝60:1)分离纯化得棕色固体化合物1r-b(150mg,收率86％)。
[0162]
将化合物1r-b(100mg,0.48mmol)溶于乙腈(10ml)中，然后在冰浴下依次加入2,4-二氯-6-甲基嘧啶-5-羧酸甲酯(1r-c,118mg,0.54mmol)和二异丙基乙基胺(125mg,0.97mmol)。反应混合物缓慢升至室温反应3小时。tlc监测反应完毕。反应液减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:乙酸乙酯＝50:1)分离纯化得淡黄色固体化合物1r-d(145mg,收率76％)。
[0163]
将化合物1r-d(145mg,0.37mmol)溶于乙腈(10ml)中，然后依次加入2-(哌啶-4-基)乙腈盐酸盐(1r-e,72mg,0.45mmol)和二异丙基乙基胺(144mg,1.11mmol)。反应混合物在60℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。反应混合物减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:乙酸乙酯＝30:1)分离纯化得淡黄色固体化合物1r-f(136mg,收率77％)。
[0164]
将化合物1r-f(60mg,0.13mmol)溶于dmf(5ml)中，然后加入dmf-dma(0.2ml)。反应混合物在130℃下搅拌过夜。tlc监测反应完毕。将反应液倒入适量的饱和氯化钠溶液中，再用乙酸乙酯萃取(3x30ml)。合并的有机相用无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，所得滤液经减压浓缩后得粗品化合物1r-g(不经纯化直接用于下步反应)。
[0165]
将粗品化合物1r-g(67mg,0.13mmol)溶于甲醇(5ml)中，冰浴下分批加入高碘酸钠(134mg,0.63mmol)。反应混合物升至室温搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤，所
得到的滤液减压浓缩得粗品化合物1r-h(不经纯化直接用于下步反应)。
[0166]
将粗品化合物1r-h(62mg，0.13mmol)溶于乙醇(5ml)中，然后加入水合肼(16mg，0.26mmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤得滤饼，滤饼再经制备型薄板层析分离纯化得黄色固体化合物1r(2.2mg,收率3.7％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.76(s,1h),11.15(s,1h),7.88(s,1h),7.28(d,j＝2.3hz,1h),7.06(dd,j＝8.7,2.4hz,1h),6.89(d,j＝8.9hz,1h),4.85-4.62(br.,2h),4.24(dd,j＝10.6,2.6hz,1h),3.97(dd,j＝11.0,3.2hz,1h),3.90-3.84(m,2h),3.68-3.55(m,2h),3.18(t,j＝10.7hz,1h),3.14-3.07(m,1h),3.03-2.98(m,2h),2.71-2.65(m,1h),2.55(d,j＝6.7hz,2h),2.01-1.93(m,1h),1.82(d,j＝11.4hz,2h),1.28-1.20(m,2h).
[0167]
实施例2:化合物2r的制备
[0168][0169]
化合物2r-a是根据专利wo2018108084里的实验步骤制备的。将化合物2r-a(2.0g,5.96mmol)溶于二氯甲烷(15ml)中，冰浴下加入盐酸二氧六环溶液(4m,2ml)。反应混合物升至室温搅拌过夜。tlc监测反应完毕。将反应液减压浓缩得黄色固体化合物2r-b(1.32g,收率81％)。
[0170]
将化合物2r-b(80mg,0.34mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，冰浴下依次加入甲基磺酰氯(2r-c,58mg,0.51mmol)和三乙胺(103mg,1.02mmol)。反应混合物升至室温搅拌2小时。tlc监测反应完毕。向反应液中加入水(30ml)，再用二氯甲烷萃取(3x30ml)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷：乙酸乙酯＝10:1)分离纯化得黄色固体化合物2r-d(75mg,收率70％)。
[0171]
化合物2r-i是从2r-d出发根据化合物1r-h的制备步骤合成得到的。
[0172]
将化合物2r-i(60mg,0.11mmol)溶于乙醇(5ml)中，然后加入水合肼(20mg,0.32mmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤得滤饼，滤饼再经制备型薄板层析分离纯化得黄色固体化合物2r(3.0mg,收率5.2％)。ms m/z 552.4[m h]

。
[0173]
实施例3:化合物3r的制备
[0174][0175]
化合物3r-b是从2r-b出发根据化合物2r-d的制备步骤合成得到的。
[0176]
化合物3r-g是从3r-b出发根据化合物1r-h的制备步骤合成得到的。
[0177]
将化合物3r-g(50mg,0.09mmol)溶于乙醇(5ml)中，然后加入水合肼(16mg，0.26mmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤得滤饼，滤饼再经制备型薄板层析分离纯化得黄色固体化合物3r(5.0mg,收率10％)。ms m/z 566.7[m h]

。
[0178]
实施例4:化合物4r的制备
[0179]
[0180]
化合物4r-b是从2r-b出发根据化合物2r-d的制备步骤合成得到的。
[0181]
化合物4r-g是从4r-b出发根据化合物1r-h的制备步骤合成得到的。
[0182]
将化合物4r-g(52mg,0.09mmol)溶于乙醇(5ml)中，然后加入水合肼(16mg，0.26mmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤得滤饼，滤饼再经制备型薄板层析分离纯化得黄色固体化合物4r(5.1mg,收率10％)。ms m/z 578.7[m h]

。
[0183]
实施例5:化合物5r的制备
[0184][0185]
将化合物2r-b(100mg,0.43mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，冰浴下加入醋酸酐(5r-a,87mg,0.85mmol)。反应混合物升至室温搅拌过夜。tlc监测反应完毕。向反应液中加入适量饱和碳酸氢钠水溶液，用二氯甲烷萃取(3x30ml)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷：乙酸乙酯＝20:1)分离纯化得黄色固体化合物5r-b(73mg,收率73％)。
[0186]
化合物5r-g是从5r-b出发根据化合物1r-h的制备步骤合成得到的。
[0187]
将化合物5r-g(50mg,0.09mmol)溶于乙醇(5ml)中，然后加入水合肼(18mg，0.28mmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤得滤饼，滤饼再经制备型薄板层析分离纯化得黄色固体化合物5r(2.1mg,收率4.3％)。ms m/z 516.4[m h]

。
[0188]
实施例6:化合物6r的制备
[0189][0190]
将化合物2r-b(100mg,0.37mmol)溶于二氯乙烷(10ml)中，加入37％甲醛水溶液(1ml)，再加入2滴醋酸，室温下搅拌30分钟。然后加入氰基硼氢化钠(58mg,0.92mmol)，室温下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。反应混合物在减压条件下浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝60:1)分离纯化得黄色固体6r-a(82mg,收率89％)。
[0191]
化合物6r-f是从6r-a出发根据化合物1r-h的制备步骤合成得到的。
[0192]
将化合物6h(50mg，0.01mmol)溶于乙醇(5ml)中，然后加入水合肼(19mg，0.30mmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤得滤饼，滤饼用乙腈打浆，过滤得黄色固体化合物6r(11.0mg,收率23％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.75(s,1h),11.13(s,1h),7.87(s,1h),7.26(s,1h),7.04(dd,j＝8.6,1.9hz,1h),6.88(d,j＝8.8hz,1h),4.85-4.62(br.,2h),4.25(dd,j＝10.6,2.2hz,1h),3.95-3.88(m,1h),3.69(d,j＝11.4hz,1h),3.08-2.94(m,3h),2.86(d,j＝10.8hz,1h),2.79(d,j＝10.2hz,1h),2.68-2.58(m,1h),2.54(d,j＝6.7hz,2h),2.22(s,3h),2.13-2.03(m,1h),2.02-1.94(m,1h),1.82(d,j＝11.8hz,2h),1.69(t,j＝10.6hz,1h),1.28-1.20(m,2h)。ms m/z 488.6[m h]

。
[0193]
实施例7:化合物6s的制备
[0194][0195]
化合物6s-b是从6s-a出发根据化合物2r-b的制备步骤合成得到的。
[0196]
化合物6s-c是从6s-b出发根据化合物6r-a的制备步骤合成得到的。
[0197]
化合物6s-h是从6s-c出发根据化合物1r-h的制备步骤合成得到的。
[0198]
将化合物6s-h(55mg，0.11mmol)溶于乙醇(5ml)中，然后加入水合肼(21mg，0.33mmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤得滤饼，滤饼用乙腈打浆，过滤得黄色固体化合物6s(13.0mg,收率24％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ12.75(br.s,1h),11.13(s,1h),7.87(s,1h),7.26(d,j＝2.3hz,1h),7.04(dd,j＝8.7,2.4hz,1h),6.88(d,j＝8.9hz,1h),4.85-4.62(br.,2h),4.25(dd,j＝10.6,2.7hz,1h),3.95-3.88(m,1h),3.69(d,j＝11.5hz,1h),3.07-2.94(m,3h),2.86(d,j＝10.2hz,1h),2.79(d,j＝10.2hz,1h),2.68-2.58(m,1h),2.54(d,j＝6.7hz,2h),2.22(s,3h),2.12-2.04(m,1h),2.03-1.94(m,1h),1.82(d,j＝10.7hz,2h),1.69(t,j＝10.6hz,1h),1.28-1.20(m,2h)。ms m/z 488.6[m h]

。
[0199]
实施例8:化合物7r的制备
[0200][0201]
向化合物2r-b(150mg,0.55mmol)的二氯乙烷(10ml)溶液中依次加入7r-a(111mg,1.10mmol)和2滴醋酸。反应混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入氰基硼氢化钠(87mg,1.38mmol)。反应混合物在室温下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。反应液在减压条件下浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝60:1)分离纯化得黄色固体7r-b(130mg,收率74％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ6.61(d,j＝8.5hz,1h),6.28-6.18(m,2h),4.14(dd,j＝10.5,2.6hz,1h),4.10-3.91(m,3h),3.60(d,j＝11.6hz,1h),3.45-3.32(m,2h),3.11-3.00(m,2h),2.89(d,j＝10.5hz,1h),2.79-2.70(m,1h),2.57-2.42(m,2h),2.04(t,j＝10.5hz,1h),1.79(d,j＝12.3hz,2h),1.66-1.54(m,2h)。
[0202]
化合物7r-g是从7r-b出发根据化合物1r-h的制备步骤合成得到的。
[0203]
将化合物7r-g(126mg，0.22mmol)溶于乙醇(8ml)中，然后加水合肼(41mg，0.66mmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤得滤饼，滤饼用乙腈打浆，过滤得黄色固体化合物7r(57.5mg,收率47％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.74(bs,1h),11.14(s,1h),7.87(s,1h),7.25(d,j＝1.9hz,1h),7.04(dd,j＝8.7,2.1hz,1h),6.87(d,j＝8.9hz,1h),4.85-4.62(br.,2h),4.27(dd,j＝10.5,2.1hz,1h),4.33-4.21(m,3h),3.72(d,j＝11.3hz,1h),3.27(d,j＝11.5hz,2h),3.05-2.90(m,5h),2.66-2.53(m,3h),2.43(t,j＝11.3hz,1h),2.34-2.24(m,1h),2.02-1.94(m,1h),1.91-1.79(m,3h),1.73(d,j＝12.1hz,2h),1.49-1.37(m,2h),1.28-1.20(m,2h)。ms m/z 558.8[m h]

。
[0204]
实施例9:化合物8r的制备
[0205][0206]
将化合物2r-b(150mg，0.55mmol)溶于dmf(6ml)中，然后依次加入碘化钠(17mg,0.11mmol)，碳酸钾(229mg，1.66mmol)和2-溴乙醇(8r-a,103mg,0.83mmol)。反应混合物在50℃下搅拌过夜。tlc监测反应完毕。向反应混合物中加水(30ml)，用乙酸乙酯萃取(3x30ml)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液在减压条件下浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷：乙酸乙酯＝3:1)分离纯化得黄色固体化合物8r-b(130mg,收率84％)。
[0207]
化合物8r-g是从8r-b出发根据化合物1r-h的制备步骤合成得到的。
[0208]
将化合物8r-g(110mg，0.21mmol)溶于乙醇(8ml)中，然后加水合肼(39mg，0.62mmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤得滤饼，滤饼用乙腈打浆，过滤得黄色固体化合物8r(38.0mg,收率36％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.75(s,1h),11.14(s,1h),7.87(s,1h),7.26(s,1h),7.04(d,j＝8.0hz,1h),6.88(d,j＝8.7hz,1h),4.85-4.62(br.,2h),4.46(s,1h),4.25(d,j＝9.5hz,1h),3.91(t,j＝9.7hz,1h),3.68(d,j＝11.1hz,1h),3.60-3.50(m,2h),3.06-2.95(m,4h),2.92(d,j＝10.3hz,1h),2.66-2.58(m,1h),2.55(d,j＝6.4hz,2h),2.48-2.40(m,2h),2.18(t,j＝10.6hz,1h),2.02-1.94(m,1h),1.85-1.78(m,3h),1.28-1.20(m,2h)。ms m/z 518.7[m h]

。
[0209]
实施例10:化合物9r的制备
[0210][0211]
将化合物9r-a(1.04g，1.81mmol，采用化合物5r的制备步骤合成得到)溶于二氯甲烷/甲醇(v/v＝20/20ml)中，冰浴下滴加hcl的1,4-二氧六环溶液(4.0m，2ml)。反应混合物
于室温下搅拌过夜。tlc监测反应完毕。反应液减压除去溶剂，加入二氯甲烷(20ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)，室温搅拌0.5h，再用二氯甲烷萃取(3x20ml)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)分离纯化得到黄色固体化合物9r(825mg，收率96％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.75(bs,1h),11.12(s,1h),7.86(s,1h),7.23(d,j＝2.5hz,1h),7.03(dd,j＝8.7,2.5hz,1h),6.84(d,j＝8.9hz,1h),4.85-4.62(br.,2h),4.22(dd,j＝10.6,2.6hz,1h),3.92-3.84(m,1h),3.63-3.57(m,1h),3.05-2.88(m,5h),2.77-2.70(m,1h),2.54(d,j＝6.6hz,2h),2.53-2.51(m,1h),2.30(t,j＝11.7hz,1h),2.03-1.92(m,1h),1.85-1.78(m,2h),1.25-1.19(m,2h)。msm/z 474.7[m h]

。
[0212]
实施例11:化合物10r的制备
[0213][0214]
室温下向甲醇(2ml)中加入化合物9r(60mg，0.13mmol)，n-甲基-4-哌啶酮(10r-a,43mg，0.38mmol)和钯碳催化剂(10％，10mg)。该反应混合物在室温和1大气压的氢气氛围下搅拌过夜。tlc监测反应完成。反应混合物经过硅藻土过滤，滤液经减压浓缩除去溶剂。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)分离纯化得黄色固体化合物10r(14mg，收率19％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.75(s,1h),11.14(s,1h),7.87(s,1h),7.25(d,j＝2.4hz,1h),7.03(dd,j＝8.9,2.4hz,1h),6.87(d,j＝9.0hz,1h),4.85-4.62(br.,2h),4.26(dd,j＝10.5,2.6hz,1h),3.95-3.88(m,1h),3.75-3.65(m,1h),3.07-2.79(m,7h),2.61-2.56(m,1h),2.54(d,j＝6.6hz,2h),2.53-2.51(m,1h),2.32-2.26(m,1h),2.25-2.15(m,4h),2.02-1.94(m,2h),1.88(t,j＝10.4hz,1h),1.85-1.79(m,2h),1.79-1.73(m,2h),1.52-1.40(m,2h),1.28-1.22(m,2h)。ms m/z 571.8[m h]

。
[0215]
实施例12:化合物11r的制备
[0216]
[0217]
将化合物9r(60mg，0.13mmol)溶于dmf(1ml)中，加入二异丙基乙基胺(33mg，0.25mmol)，再在0℃下滴加丙烯酰氯(11r-a,14mg，0.16mmol)。滴加完毕后，反应液在0℃下搅拌1小时。tlc监测反应完毕。向反应液中加入水(5ml)，以二氯甲烷萃取(3x10ml)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)分离纯化得到黄色固体化合物11r(33mg，收率49％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.75(s,1h),11.14(s,1h),7.86(s,1h),7.28(d,j＝11.2hz,1h),7.06(t,j＝9.2hz,1h),6.93(d,j＝8.9hz,1h),6.91-6.84(m,1h),6.16(dd,j＝16.7,2.3hz,1h),5.73(dd,j＝10.4,2.3hz,1h),4.85-4.62(br.,2h),4.55-4.45(m,1h),4.37(t,j＝13.1hz,1h),4.25-4.14(m,1h),4.00-3.92(m,1h),3.88-3.79(m,1h),3.31-3.22(m,1h),3.06-2.93(m,3h),2.92-2.82(m,1h),2.65-2.57(m,1h),2.55(d,j＝6.6hz,2h),2.01-1.92(m,1h),1.82(d,j＝12.7hz,2h),1.27-1.20(m,2h)。ms m/z 528.5[m h]

。
[0218]
实施例13:化合物12r的制备
[0219][0220]
将化合物9r(60mg，0.13mmol)，2-丁炔酸(12r-a,11mg，0.13mmol)，n-甲基咪唑(36mg，0.44mmol)溶于乙腈(1ml)中，再加入四甲基氯代脲六氟磷酸酯(43mg，0.15mmol)。反应混合物于室温下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。向反应混合物中加入水(5ml)，用二氯甲烷萃取(3x10ml)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)分离纯化得到黄色固体化合物12r(28mg，收率41％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.75(s,1h),11.14(s,1h),7.87(s,1h),7.29(dd,j＝10.0,2.5hz,1h),7.10-7.03(m,1h),6.94(d,j＝8.5hz,1h),4.85-4.62(br.,2h),4.43-4.26(m,3h),4.00-3.92(m,1h),3.92-3.83(m,1h),3.30-2.93(m,4h),2.91-2.59(m,1h),2.58-2.52(m,3h),2.06(d,j＝2.3hz,3h),2.02-1.94(m,1h),1.85-1.79(m,2h),1.26-1.22(m,2h)。ms m/z 540.5[m h]

。
[0221]
实施例14:化合物13r的制备
[0222][0223]
将化合物9r(60mg，0.13mmol)，碘乙烷(13r-a,20mg，0.13mmol)溶于dmf(2ml)中，再加入无水碳酸钾(36mg，0.26mmol)。反应混合物在90℃下搅拌过夜。tlc监测反应完毕。向反应混合物中加入水(5ml)，用二氯甲烷萃取(3x10ml)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)分离纯化得到黄色固体化合物13r(25mg，收率39％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.75(s,1h),11.14(s,1h),7.87(s,1h),7.26(d,j＝2.4hz,1h),7.04(dd,j＝8.8,2.5hz,1h),6.87(d,j＝9.0hz,1h),4.85-4.60(br.,2h),4.27(dd,j＝10.7,2.7hz,1h),3.95-3.86(m,1h),3.73-3.66(m,1h),3.05-2.94(m,4h),2.90(d,j＝10.1hz,1h),2.64-2.59(m,1h),2.54(d,j＝6.6hz,2h),2.42-2.33(m,2h),2.11-2.04(m,1h),2.02-1.92(m,1h),1.85-1.79(m,2h),1.67(t,j＝10.8hz,1h),1.29-1.20(m,2h),1.03(t,j＝7.2hz,3h)。ms m/z 502.5[m h]

。
[0224]
实施例15:化合物14r的制备
[0225][0226]
将化合物9r(60mg，0.13mmol)，溴乙腈(14r-a,15mg，0.13mmol)溶于dmf(1ml)中，再加入碳酸钾(35mg，0.25mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时。tlc监测反应完毕。向反应混合物中加入水(5ml)，再用二氯甲烷萃取(3x10ml)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)分离纯化得到黄色固体化合物14r(26mg，收率39％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ10.81(s,1h),9.73(s,1h),7.82(s,1h),7.35(d,j＝2.5hz,1h),7.09(dd,j＝8.8,2.5hz,1h),6.77(d,j＝8.8hz,1h),5.00-4.93(br.,2h),4.21(dd,j＝10.6,2.7hz,1h),4.09-4.01(m,1h),3.76-3.71(m,1h),3.60(s,2h),3.26-3.19(m,1h),2.99-2.88(m,3h),2.88-2.81(m,1h),2.80-2.76(m,1h),2.70-2.65(m,1h),2.35(d,j＝6.7hz,2h),2.27(t,j＝10.5hz,1h),2.05-1.92(m,3h),1.37-1.32(m,2h)。ms m/z 513.5[m h]

。
[0227]
实施例16:化合物15r的制备
[0228][0229]
将化合物9r(60mg，0.13mmol)，2-氯乙基甲基醚(15r-a,15mg，0.13mmol)溶于dmf(2ml)中，再加入二异丙基乙基胺(50mg，0.39mmol)。反应混合物在90℃下搅拌过夜。tlc监测反应完毕。向反应混合物中加入水(5ml)，再用二氯甲烷萃取(3x10ml)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化得到黄色固体化合物15r(13mg，收率19％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.75(s,1h),11.14(s,1h),7.87(s,1h),7.26(d,j＝2.6hz,1h),7.04(dd,j＝8.9,2.4hz,1h),6.87(d,j＝9.2hz,1h),4.85-4.60(br.,2h),4.25(dd,j＝10.5,2.7hz,1h),3.96-3.88(m,1h),3.71-3.66(m,1h),3.47(t,j＝5.8hz,2h),3.25(s,3h),3.05-2.95(m,4h),2.94-2.88(m,1h),2.65-2.58(m,1h),2.57-2.52(m,4h),2.23-2.17(m,1h),2.03-1.93(m,1h),1.86-1.77(m,3h),1.28-1.22(m,2h)。ms m/z 532.6[m h]

。
[0230]
实施例17:化合物16r的制备
[0231][0232]
将化合物9r(100mg，0.21mmol)，2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯(16r-a,49mg，0.21mmol)溶于dmf(3ml)中，再加入二异丙基乙基胺(81mg,0.63mmol)。反应混合物在60℃下搅拌2小时。tlc监测反应完毕。向反应混合物中加入水(5ml)，再用二氯甲烷萃取(3x10ml)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)分离纯化得到黄色固体化合物16r(42mg，收率36％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.75(s,1h),11.14(s,1h),7.87(s,1h),7.27(s,1h),7.04(d,j＝8.7hz,1h),6.89(d,j＝8.8hz,1h),4.85-4.60(br.,2h),4.30-4.23(m,1h),3.95-3.87(m,1h),3.75-3.68(m,1h),3.27(q,j＝10.3hz,2h),3.10-2.93(m,5h),2.69-2.61(m,1h),2.61-2.56(m,1h),2.54(d,j＝6.7hz,2h),2.18(t,j＝11.0hz,1h),2.03-1.93(m,1h),1.86-1.78(m,2h),1.29-1.17(m,2h)。ms m/z 556.5[m h]

。
[0233]
实施例18:化合物17r的制备
[0234][0235]
将化合物9r(60mg，0.13mmol)，3-溴吡啶(17r-a,23mg，0.14mmol)，叔丁醇钠(24mg，0.23mmol)，pd2(dba)3(12mg，0.013mmol)和binap(16mg，0.026mmol)溶于甲苯(2ml)中。反应混合物在110℃和氮气氛围下搅拌过夜。tlc监测反应完毕。待反应混合物冷却至室温，加入水(5ml)，用乙酸乙酯萃取(3x10ml)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷：甲醇＝10:1)分离纯化得到黄色固体化合物17r(16mg，收率23％)。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ10.85(s,1h),10.35(s,1h),8.38(s,1h),8.17(d,j＝3.5hz,1h),7.83(s,1h),7.38(d,j＝2.5hz,1h),7.29-7.25(m,1h),7.24-7.19(m,1h),7.12(dd,j＝8.7,2.5hz,1h),6.83(d,j＝8.8hz,1h),5.05-4.85(br.,2h),4.31(dd,j＝10.6,2.7hz,1h),4.15-4.09(m,1h),3.88-3.80(m,1h),3.78-3.72(m,1h),3.63-3.56(m,1h),3.38-3.30(m,1h),3.09-2.88(m,4h),2.66(t,j＝11.1hz,1h),2.35(d,j＝6.7hz,2h),2.06-1.90(m,3h),1.41-1.30(m,2h)。ms m/z 551.6[m h]

。
[0236]
实施例19:化合物18r的制备
[0237][0238]
将化合物18r-a(400mg,0.82mmol)溶于乙腈(5ml)中，然后依次加入六亚甲基亚胺(18r-b,81mg,0.82mmol)和二异丙基乙基胺(317mg,2.46mmol)。反应混合物在60℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。反应混合物减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)分离纯化得淡黄色固体化合物18r-c(326mg,收率72％)。
[0239]
将化合物18r-c(300mg,0.54mmol)溶于dmf(10ml)中，然后加入dmf-dma(2ml)。反应混合物在130℃下搅拌过夜。tlc监测反应完毕。将反应液减压浓缩后得粗品化合物18r-d(不经纯化直接用于下步反应)。
[0240]
将粗品化合物18r-d(329mg,0.54mmol)溶于甲醇(5ml)中，冰浴下分批加入高碘酸钠(347mg,1.62mmol)。反应混合物升至室温搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤，所得到的滤液减压浓缩得粗品化合物18r-e(不经纯化直接用于下步反应)。
[0241]
将粗品化合物18r-e(306mg，0.54mmol)溶于乙醇(5ml)中，然后加入水合肼(68mg，1.08mmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液减压蒸馏，所得粗品经制备型薄板层析分离纯化得黄色固体化合物18r-f(56mg,收率19％)。
[0242]
将化合物18r-f(56mg,0.10mmol)溶于甲醇(5ml)中，再加入hcl的二氧六环溶液(4.0m,1ml)。反应混合物在40℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。反应混合物冷却至室温后减压浓缩。将所得混合物溶于少量甲醇中，用氨水将ph值调至7～8，再减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1,2％氨水)分离纯化得到淡黄色固体化合物18r-g(44mg,收率98％)。ms m/z 449.2[m h]

。
[0243]
将化合物18r-g(20mg,0.04mmol)，多聚甲醛(3mg,0.09mmol)，无水氯化锌(19mg,0.14mmol)溶于甲醇(3ml)中，再加入氰基硼氢化钠(9mg,0.14mmol)。将反应混合物加热至60℃搅拌1小时。tlc监测反应完毕。反应混合物冷却至室温后减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1,2％氨水)分离纯化得到黄色固体化合物18r(14mg,收率68％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ10.81(s,1h),9.66(s,1h),7.81(s,1h),7.47(d,j＝1.8hz,1h),7.14(dd,j＝8.7,2.0hz,1h),6.75(d,j＝8.8hz,1h),4.23-4.16(m,1h),4.05-3.99(m,1h),3.89-3.77(m,4h),3.69-3.63(m,1h),3.25-3.16(m,1h),2.99-2.92(m,1h),2.89-2.77(m,2h),2.36(s,3h),2.43-2.19(m,1h),1.89-1.79(m,5h),1.62-1.55(m,4h)。ms m/z 463.5[m h]

。
[0244]
实施例20:化合物19r的制备
[0245][0246]
化合物18r-g(23mg,0.05mmol)和2-溴乙醇(8r-a,6mg,0.05mmol)溶于dmf(2ml)中，再加入碳酸钾(21mg,0.15mmol)。反应混合液在60℃下加热搅拌过夜。tlc监测反应完毕。将反应混合物过滤，滤液减压浓缩，所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1,2％氨水)分离纯化得到黄色固体化合物19r(10mg,收率40％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ11.04(s,1h),7.86(s,1h),7.47(d,j＝2.3hz,1h),7.13(dd,j＝8.8,2.2hz,1h),6.74(d,j＝8.8hz,1h),4.34(t,2h),4.17(dd,j＝10.5,2.5hz,1h),4.05-3.96(m,3h),3.88-3.76(m,4h),3.66-3.61(m,1h),3.19-3.13(m,1h),3.09-2.94(m,3h),2.71-2.64(m,1h),2.53(t,j
＝11.1hz,1h),1.90-1.77(m,4h),1.59-1.54(m,4h)。ms m/z 493.4[m h]

。
[0247]
实施例21:化合物20r的制备
[0248][0249]
将化合物20r-a(200mg,1.13mmol)溶于dmso(5ml)中，然后依次加入化合物(r)-1-boc-3-羟甲基哌嗪(20r-b,244mg,1.13mmol)和氢氧化钾(190mg,3.39mmol)。反应混合物室温搅拌1小时，再加热至60℃搅拌2小时。tlc监测反应完毕。将反应液倒入适量的饱和氯化钠溶液中，再用乙酸乙酯萃取(3x30ml)。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷)分离纯化得淡黄色固体化合物20r-c(316mg,收率79％)。
[0250]
室温下向甲醇(10ml)中加入化合物20r-c(300mg,0.42mmol)和钯碳催化剂(10％,40mg)，该反应混合物在40℃和1大气压的氢气氛围下搅拌0.5小时。tlc监测反应完毕。反应混合物经过硅藻土过滤，所得滤液经减压浓缩得到粗品。该粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)分离纯化得淡黄色固体化合物20r-d(180mg,收率62％)。
[0251]
将化合物20r-d(180mg,0.56mmol)溶于乙腈(5ml)中，然后依次加入2,4-二氯-6-甲基嘧啶-5-羧酸甲酯(1r-c,123mg,0.56mmol)和二异丙基乙基胺(217mg,1.68mmol)。反应混合物在60℃下搅拌过夜。tlc监测反应完毕。反应液减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)分离纯化得淡黄色固体化合物20r-e(164mg,收率58％)。
[0252]
将化合物20r-e(164mg,0.32mmol)溶于乙腈(5ml)中，然后依次加入2-(哌啶-4-基)乙腈盐酸盐(1r-e,51mg,0.32mmol)和二异丙基乙基胺(124mg,0.96mmol)。反应混合物在60℃下搅拌1小时。tlc监测反应完毕。反应混合物减压浓缩。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)分离纯化得淡黄色固体化合物20r-f(160mg,收率83％)。
[0253]
将化合物20r-f(160mg,0.27mmol)溶于dmf(3ml)中，然后加入dmf-dma(1ml)。反应
混合物在130℃下搅拌过夜。tlc监测反应完毕。将反应液经减压浓缩后得粗品化合物20r-g(不经纯化直接用于下步反应)。
[0254]
将粗品化合物20r-g(174mg,0.27mmol)溶于甲醇(5ml)中，冰浴下分批加入高碘酸钠(172mg,0.82mmol)。反应混合物升至室温搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤，所得到的滤液减压浓缩得粗品化合物20r-h(不经纯化直接用于下步反应)。
[0255]
将粗品化合物20r-h(163mg，0.27mmol)溶于乙醇(5ml)中，然后加入水合肼(33mg，0.53mmol)。反应混合物在80℃下搅拌5小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤得滤饼，滤饼再经制备型薄板层析分离纯化得黄色固体化合物20r-i(67mg,收率42％)。
[0256]
将化合物20r-i(67mg,0.11mmol)溶于甲醇(5ml)中，再加入hcl的二氧六环溶液(4.0m,1ml)。反应混合物在40℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。反应混合物冷却至室温后减压浓缩。将所得混合物溶于少量甲醇中，用氨水将ph值调至7～8，再减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1,2％氨水)分离纯化得到淡黄色固体化合物20r-j(47mg,收率84％)。ms m/z 449.2[m h]

。
[0257]
将化合物20r-j(47mg,0.10mmol)，多聚甲醛(6mg,0.19mmol)，无水氯化锌(39mg,0.29mmol)溶于甲醇(3ml)中，再加入氰基硼氢化钠(18mg,0.29mmol)。将反应混合物加热至60℃搅拌1小时。tlc监测反应完毕。反应混合物冷却至室温后减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1,2％氨水)分离纯化得到黄色固体化合物20r(31mg,收率64％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ12.79(s,1h),11.21(s,1h),7.89(s,1h),7.16(dd,j＝15.0,2.4hz,1h),7.05(s,1h),4.99-4.48(br.,2h),4.20(dd,j＝10.8,2.6hz,1h),4.10-4.04(m,1h),3.60-3.52(m,1h),3.18-3.11(m,1h),3.09-2.96(m,3h),2.70-2.61(m,2h),2.55(d,j＝6.6hz,2h),2.40-2.33(m,1h),2.30-2.23(m,1h),2.20(s,3h),2.03-1.95(m,1h),1.83(d,j＝12.2hz,2h),1.29-1.19(m,2h)。ms m/z 506.3[m h]

。
[0258]
实施例22:化合物21s的制备
[0259][0260]
将化合物21s-a(300mg,0.86mmol)溶于甲醇(5ml)中，再加入hcl的二氧六环溶液(4.0m,5ml)。反应混合物在室温下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。反应液减压除去溶剂，加入二氯甲烷(10ml)和饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)，室温搅拌0.5h，再用二氯甲烷萃取
(3x10ml)。合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩。所得到的黄色固体化合物21s-b直接用于下一步反应。ms m/z 250.2[m h]

。
[0261]
将化合物21s-b(214mg,0.86mmol)，多聚甲醛(52mg,1.72mmol)，无水氯化锌(351mg,2.58mmol)溶于甲醇(10ml)中，再加入氰基硼氢化钠(162mg,2.58mmol)。将反应混合物加热至60℃搅拌1小时。tlc监测反应完毕。反应混合物冷却至室温后减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷:甲醇＝30:1,2％氨水)分离纯化得到黄色固体化合物21s-c(226mg,收率100％)。ms m/z 264.4[m h]

。
[0262]
室温下向甲醇(5ml)中加入化合物21s-c(226mg,0.86mmol)和钯碳催化剂(10％,100mg)。该反应混合物在室温氢气氛围下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。反应混合物经过硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到粗品。该粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1)分离纯化得到化合物21s-d(130mg,三步收率65％)。ms m/z 234.3[m h]

。
[0263]
将化合物21s-d(130mg,0.56mmol)和化合物1r-c(123mg,0.56mmol)溶于乙腈(5ml)中，冰盐浴下逐滴加入二异丙基乙基胺(0.28ml,1.68mmol)。搅拌半小时后升至室温，室温下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应混合物减压浓缩(低温)。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)分离纯化得黄色化合物21s-e(100mg,收率43％)。ms m/z 418.4[m h]

。
[0264]
将化合物21s-e(100mg,0.24mmol)和化合物1r-e(59mg,0.48mmol)溶于乙腈(5ml)中，再滴加入二异丙基乙基胺(0.28ml,1.68mmol)。反应混合物在60℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应混合物减压浓缩。所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)分离纯化得黄色固体化合物21s-f(92mg,收率76％)。ms m/z 506.7[m h]

。
[0265]
将化合物21s-f(92mg,0.18mmol)溶于dmf(2ml)中，然后加入dmf-dma(393mg,3.30mmol)。反应混合物在130℃下搅拌过夜。tlc监测反应完毕。将反应液减压浓缩后得粗品化合物21s-g(不经纯化直接用于下步反应)。
[0266]
将粗品化合物21s-g(102mg,0.18mmol)溶于甲醇(5ml)中，冰浴下分批加入高碘酸钠(195mg,0.91mmol)。反应混合物升至室温搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液过滤，所得到的滤液减压浓缩得粗品化合物21s-h(不经纯化直接用于下步反应)。
[0267]
将粗品化合物21s-h(94mg，0.18mmol)溶于乙醇(5ml)中，然后加入水合肼(113mg，1.80mmol)。反应混合物在80℃下搅拌3小时。tlc监测反应完毕。将反应液减压浓缩，所得粗品经制备型薄板层析(二氯甲烷:甲醇＝15:1)分离纯化得淡黄色固体化合物21s(6mg,收率6％)。ms m/z 502.4[m h]

。
[0268]
实施例23:激酶活性抑制实验
[0269]
1.syk激酶活性抑制实验
[0270]
方法1：采用caliper迁移率变动检测技术(caliper mobility shift assay)测定syk蛋白激酶活性。将化合物用dmso溶解后用激酶缓冲液(20mm hepes,0.01％triton x-100，5mmmgcl2，1mm mncl2，2mm dtt)稀释，在384孔板中加入5μl的5倍反应终浓度的化合物(10％dmso)。加入10μl的2.5倍酶(用syk)溶液后在室温下孵育10分钟，再加入10μl的2.5倍底物(peptide fam-p22和atp)溶液。28℃下孵育30分钟，后加25μl终止液(ph 7.5的100mm hepes,0.015％brij-35，0.2％coating reagent#3，50mm edta)终止反应。caliper ez reader ii(caliper life sciences)上读取转化率数据。把转化率转化成抑制率数据(％
抑制率＝(max-转化率)/(max-min)*100)。其中max是指dmso对照的转化率，min是指无酶活对照的转化率。以化合物浓度和抑制率为横纵坐标，绘制曲线，使用xlfitexcel add-in version4.3.1软件拟合曲线并计算ic
50
。
[0271]
方法2：利用caliper mobility shift assay方法检测化合物对激酶syk的抑制效果，化合物测试终浓度为1000nm起始，3倍稀释，7个或8个浓度。使用分液器echo 550向384孔反应板中转移250nl的100倍终浓度化合物，加入10μl终浓度为1nm syk的激酶溶液，室温预孵育10分钟(阴性对照孔含10μl激酶缓冲液和250nl 100％dmso；阳性对照孔含10μl的激酶溶液和250nl 100％dmso)。在syk上加入15μl终浓度为4μm的atp和3μm底物22号肽混合溶液起始反应，室温反应30分钟，加入30μl含edta的终止检测液停止激酶反应。用caliper ez reader读取转化率。换算抑制率％＝(阳性对照转化率均值％-样品转化率％/(阳性对照转化率均值％-阴性对照转化率均值％)。其中：阴性对照孔，代表没有酶活孔的转化率读数；阳性对照孔，代表没有化合物抑制孔的转化率读数。以浓度的log值作为x轴，百分比抑制率为y轴，采用分析软件graphpad prism 5的log(inhibitor)vs.response-variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic
50
值。计算公式：y＝bottom (top-bottom)/(1 10^((logic
50-x)*hillslope))。
[0272]
部分代表性化合物的活性如表1所示。ic
50
值通过以下方式表示：
[0273]
a:ic
50
值≤20nm；b:20nm<ic
50
值≤50nm；c:50nm<ic
50
值≤100nm；d:ic
50
值>100nm。
[0274]
表1.syk激酶活性抑制(ic
50
，nm)
[0275][0276]
2.jak2激酶活性抑制实验
[0277]
方法1：激酶jak2酶活抑制ic
50
评价实验：缓冲液是由如下成分配置的：50mm hepes,ph 7.5，0.00015％brij-35。将化合物在100％dmso中配置成浓度梯度，并用缓冲液稀释成10％dmso,加入384孔板。例如化合物起始浓度为250nm，则用100％dmso配制成12.5μm，并梯度稀释5或6个浓度，再用缓冲液稀释10倍，配成含10％dmso的化合物中间稀释体，转移5μl到384孔板。jak2酶用以下缓冲液稀释成最佳浓度：50mm hepes,ph 7.5，0.00015％brij-35，2mm dtt。转移10μl到384孔板中，与化合物孵育10-15分钟。底物用以下缓冲液稀释成最佳浓度：50mm hepes,ph 7.5，0.00015％brij-35，10mm mgcl2，km下的三磷酸腺苷。加入10μl到384孔板起始反应，并于28℃反应1小时。然后用caliper reader读取转化率，计算抑制率。公式如下：percent inhibition＝(max-conversion)/(max-min)*100。其中max是指dmso对照的转化率，min是指无酶活对照的转化率。用xlfit excel add-in version 5.4.0.8拟合ic
50
值。拟合公式:y＝bottom (top-bottom)/(1 (ic
50
/x)^hillslope)。
[0278]
方法2：利用caliper mobility shift assay方法检测化合物对激酶jak2的抑制效果，化合物测试终浓度为200nm起始，3倍稀释，7个或8个浓度。使用分液器echo 550向384孔反应板中转移250nl的100倍终浓度化合物，加入10μl终浓度为0.25nm jak2的激酶溶液，室温预孵育10分钟(阴性对照孔含10μl激酶缓冲液和250nl 100％dmso；阳性对照孔含10μl的激酶溶液和250nl 100％dmso)。在jak2上加入15μl终浓度为11.4μm的atp和3μm底物22号肽混合溶液起始反应，室温反应15分钟，加入30μl含edta的终止检测液停止激酶反应。用caliper ez reader读取转化率。换算抑制率％＝(阳性对照转化率均值％-样品转化率％/(阳性对照转化率均值％-阴性对照转化率均值％)。其中：阴性对照孔，代表没有酶活孔的转化率读数；阳性对照孔，代表没有化合物抑制孔的转化率读数。以浓度的log值作为x轴，百分比抑制率为y轴，采用分析软件graphpad prism 5的log(inhibitor)vs.response-variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic
50
值。计算公式：y＝bottom (top-bottom)/(1 10^((logic
50-x)*hillslope))。
[0279]
部分代表性化合物的活性如表2所示。ic
50
值通过以下方式表示：
[0280]
a:ic
50
值≤5nm；b:5nm<ic
50
值≤20nm；c:20nm<ic
50
值≤100nm；d:ic
50
值>100nm。
[0281]
表2.jak2激酶活性抑制(ic
50
，nm)
[0282][0283][0284]
在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。