苯硼酸靶向的氨氯地平纳米脂质体及其制备方法和应用

本发明属于医药，涉及苯硼酸靶向的氨氯地平纳米脂质体及其制备方法和应用。

背景技术：

1、氨氯地平(amlodipine，alp)作为经典的二氢吡啶类钙通道阻滞剂，在临床上常用于高血压及心绞痛的治疗。近年来，其在抗肿瘤领域的潜在价值逐渐受到关注。最新研究显示，氨氯地平不仅可以通过抑制ca2+内流，下调钙蛋白依赖性激酶的活性，抑制肿瘤细胞的dna合成和有丝分裂，而且还可间接通过抑制血管内皮生长因子受体(vegfr)的磷酸化，阻碍血管内皮细胞的迁移和管腔形成，从而抑制肿瘤血管生成。此外，氨氯地平还可通过调控肿瘤微环境抑制肿瘤的生长，转移与侵袭。因此，推动氨氯地平从心血管治疗药物向抗肿瘤领域的拓展，既体现了“老药新用”策略的潜力，也具有广泛的临床应用价值。然而，由于氨氯地平通过阻止ca2+进入血管平滑肌细胞，减少外周血管阻力降低血压，因此，在抗肿瘤应用时，降血压的药理作用就会成为不可忽视和避免的副作用。

2、在生理条件下苯硼酸(pba)可以与唾液酸残基结合形成稳定的环状硼酸酯复合物，且结合的选择性高于其它糖分子。因此，通过pba结构靶向肿瘤表面过表达的唾液酸残基的策略已成为靶向肿瘤药物递送和肿瘤荧光检测的有效手段。

3、脂质体(lipo)，作为一种常见的药物递送系统载体，对降低药物毒性，增加细胞摄取和靶向分布，提高肿瘤治疗效果具有显著的应用价值。脂质体通常依赖于被动靶向机制作用于肿瘤，这也导致其在其他组织也有分布，因此，通过靶向基团修饰脂质体，实现脂质体药物被动靶向与主动靶向的联合，对克服脂质体纳米药物的非靶点分布具有重要意义。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种苯硼酸靶向的氨氯地平纳米脂质体及其制备方法和应用，所述的纳米脂质体为苯硼酸修饰胆固醇(chol)后负载氨氯地平的纳米脂质体，所述的纳米脂质体用于药物的靶向肿瘤递送，该药物递送系统不仅避免了氨氯地平在抗肿瘤时降血压的副作用，而且具有较好的肿瘤部位分布和抑制肿瘤活性，可以用于制备抗肿瘤的药物。

2、本发明的目的可通过以下技术方案实现：

3、本发明提供一种苯硼酸-胆固醇(pba-chol)，其具有式(i)所示的结构：

4、

5、其中，r为-nh-、-o-、-nh(ch2)n-、-o(ch2)n-、-coo-；

6、n＝1-5；

7、进一步地，r在苯基的2、3或4位取代。

8、优选地，本发明的苯硼酸-胆固醇为氨基苯硼酸-胆固醇。

9、所述的氨基苯硼酸-胆固醇的结构为：

10、

11、进一步地，本发明提供所述的苯硼酸-胆固醇的制备方法，包括如下步骤：

12、a.将胆固醇，丁二酸酐，4-(二甲氨基)吡啶和二氯甲烷置于反应容器中，搅拌反应后，停止反应。反应液水洗、干燥、浓缩、分离纯化，得产物丁二酸酐-胆固醇。

13、b.将丁二酸酐-胆固醇，氨基苯硼酸或羟基苯硼酸，1-羟基苯并三唑和二氯甲烷置于反应容器中搅拌至完全溶解。冰浴下将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的二氯甲烷溶液滴加至反应体系中，室温反应后，停止反应。反应液水洗、干燥、浓缩、分离纯化，得苯硼酸-胆固醇。

14、所述步骤b中，所述的氨基苯硼酸为2-氨基苯硼酸，3-氨基苯硼酸、4-氨基苯硼酸，优选3-氨基苯硼酸。

15、本发明提供一种苯硼酸靶向的氨氯地平纳米脂质体，所述的脂质体包括苯硼酸-胆固醇、磷脂和氨氯地平。

16、其中所述氨氯地平为左旋氨氯地平((s)-alp)，右旋氨氯地平或消旋氨氯地平，优选左旋氨氯地平。

17、其中所述磷脂为大豆磷脂，鞘磷脂，蛋黄卵磷脂，氢化大豆磷脂，磷脂酰乙醇胺，二棕榈酰磷脂酰胆碱，优选大豆磷脂，鞘磷脂或蛋黄卵磷脂，优选蛋黄卵磷脂。

18、其中所述磷脂与苯硼酸-胆固醇的质量比为10:3-30:1，优选20:3-30:1，最优选10:1-40：3。

19、其中所述磷脂与氨氯地平的质量比为10:1-5：2，优选5：1-10:1，最优选6:1-15：2。

20、其中所述苯硼酸-胆固醇与氨氯地平的质量比为1:1-1:4，优选1:1-3:4，更优选为3:4-3:5。

21、本发明提供所述的苯硼酸靶向的氨氯地平纳米脂质体的制备方法：

22、称取处方量的磷脂、苯硼酸-胆固醇、氨氯地平加入无水乙醇，涡旋超声溶解，然后除去无水乙醇，得干燥薄膜。加入去离子水，涡旋超声溶解，水化，超声，即得。

23、具体方法包括：

24、称取处方量的磷脂、苯硼酸-胆固醇、氨氯地平于50ml的圆底烧瓶中，加入无水乙醇，涡旋超声20-30min溶解。在75-100rpm，45℃下真空旋蒸至无水乙醇完全挥发，升温至50℃，继续真空旋蒸，得到均匀的干燥薄膜。加入去离子水，涡旋超声5-10min溶解，50-60℃水化30 -60min，在300-400w，探头超声10 -30min，工作2s，停1s，最终得载氨氯地平的纳米脂质体。

25、所述的氨氯地平与无水乙醇的质量体积(mg/ml)比为1-2:1。

26、所述的无水乙醇与去离子水的体积比为：1:1-2。

27、其中所述磷脂为大豆磷脂，鞘磷脂，蛋黄卵磷脂，氢化大豆磷脂，磷脂酰乙醇胺，二棕榈酰磷脂酰胆碱，优选大豆磷脂，鞘磷脂或蛋黄卵磷脂，优选蛋黄卵磷脂。

28、其中所述磷脂与苯硼酸-胆固醇的质量比为10:3-30:1，优选20:3-30:1，最优选10:1-40：3。

29、其中所述磷脂与氨氯地平的质量比为10:1-5:2，优选5:1-10:1，最优选6:1-15:2。

30、其中所述苯硼酸-胆固醇与氨氯地平的质量比为1:1-1:4，最优选1:1-3:4，更优选为3:4-3:5。

31、根据本发明的一个具体实施例，所述纳米脂质体制备的最佳原料配比为：磷脂与苯硼酸-胆固醇的质量比为10:1-40:3；磷脂与氨氯地平的质量比为6:1-15：2，苯硼酸-胆固醇与氨氯地平的质量比为3:4-3:5时，经薄膜分散法制备的纳米脂质体分布均匀，分散性好，包封率高，且载药量大。

32、本发明提供了所述的苯硼酸靶向的氨氯地平纳米脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用。

33、所述的肿瘤为高表达唾液酸分子的实体瘤或血液肿瘤。

34、进一步的，所述肿瘤可以是但不限于多发性骨髓瘤、结直肠癌、肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌或前列腺癌。

35、本发明的有益效果是：

36、本发明提供了一种新型的带有靶向基团的纳米脂质体，该脂质体纳米粒包含磷脂、氨氯地平和苯硼酸-胆固醇，其粒径小于150nm，pdi小于0.5，且具有较高的包封率、载药量和稳定性。同时，相比于无苯硼酸靶头的纳米脂质体，该纳米脂质体可以靶向递送氨氯地平至肿瘤部位，实现药物对肿瘤的精确治疗，避免不必要的毒副作用。本发明制备的苯硼酸靶向纳米脂质体，工艺简单，具有良好的安全性和生物相容性，可用于肿瘤的靶向治疗。