一种洗护美妆用生物药品的制备方法与流程

本发明涉及生物医药与洗护美妆，具体为一种洗护美妆用生物药品的制备方法。

背景技术：

1、随着合成生物学技术的发展，重组胶原蛋白、重组弹性蛋白及功能性生物活性多肽等大分子生物活性物已广泛应用于洗护美妆产品，用以发挥抗皱、修复、屏障重建等功效，其功效发挥高度依赖于天然三维空间构象，人体皮肤角质层在正常生理条件下仅允许分子量较小的物质有效穿透，大分子生物活性物由于分子量大、流体力学半径大，难以通过被动扩散穿越该屏障；

2、目前业内针对上述问题主要采用两类技术路线，一类是酶切降解促渗方案，通过蛋白酶将大分子降解为寡肽或多肽片段以降低分子量，但该过程会破坏蛋白原有的肽链折叠及分子间氢键网络，导致产物丧失三维空间构象所支撑的生物活性，难以兼顾渗透效率与活性保留，另一类是纯物理载体包裹方案，现有技术普遍认为大分子蛋白活性物仅能依赖表面包裹或静电吸附方式递送，本申请突破该偏见，首次通过分子层面动态共价交联实现蛋白体积主动压缩后再行脂质包裹，从根本上提升装载率并隔绝配方成分干扰，且在洗护配方中的表面活性剂、乙醇、盐类等成分作用下易发生破乳或解吸附，导致蛋白提前释放；

3、此外，现有冻干工艺主要针对注射级纯水相制剂设计，难以适应洗护美妆产品复杂基质的分散与稳定需求，蛋白在常温开封反复使用条件下易发生氧化降解或聚集失活，导致产品功效衰减，因此，现有技术难以同时兼顾大分子生物活性物的渗透效率、空间结构完整性及常温稳定性，为此，我们提出一种洗护美妆用生物药品的制备方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种洗护美妆用生物药品的制备方法。

2、本发明中所述蛋白类原料是指重组蛋白或重组多肽等大分子生物活性物，包括但不限于重组胶原蛋白、重组弹性蛋白及功能性生物活性多肽。

3、本发明要解决的技术问题是：如何在不破坏蛋白类原料三维空间构象的前提下，提高其经皮渗透效率，并使含有该蛋白类原料的生物药品在洗护美妆产品的常温流通及开封反复使用条件下保持稳定性；

4、为解决上述技术问题，本发明提供一种洗护美妆用生物药品的制备方法，包括：将蛋白类原料溶解于缓冲液中，配制成蛋白溶液，向蛋白溶液中加入动态共价键修饰试剂，使动态共价键修饰试剂与蛋白类原料分子表面的活性基团反应，在蛋白类原料分子内和分子间形成多个动态共价交联点，使蛋白类原料分子由松散伸展构象转变为纳米级致密超分子结构，得到构象压缩中间体，对构象压缩中间体进行纯化，去除未反应的游离修饰试剂，将神经酰胺、胆甾醇和游离脂肪酸溶解于有机溶剂中，形成脂质有机相，与纯化后的构象压缩中间体溶液混合，使脂质分子在水相中自组装形成包裹构象压缩中间体的囊泡，对囊泡进行均质化处理，形成具有多层脂质液晶壳层结构的核壳复合微囊，得到微囊化悬液，对微囊化悬液进行干燥处理，得到洗护美妆用生物药品，所述动态共价交联点在弱酸性环境中保持稳定，在ph由弱酸性向中性过渡且还原性物质浓度升高的环境中发生断裂，解除对蛋白类原料分子的构象约束，使蛋白类原料分子恢复天然三维空间构象；

5、采用上述技术方案，与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

6、1.本发明通过可逆动态共价键对蛋白类原料分子进行分子内和分子间多点交联，实现体积压缩而非分子降解，使流体力学半径显著缩小，同时保留其一级序列及潜在天然构象信息，克服了现有酶切降解方案中渗透效率提升与生物活性保留难以兼得的问题；

7、2.本发明利用皮肤角质层与活性表皮层之间天然存在的ph梯度及氧化还原电位差异作为触发动态共价键断裂的信号，无需额外添加激活成分即可实现蛋白类原料在递送部位的原位复性，实现渗透态与活性态的时空分离及自动转换；

8、3.本发明以神经酰胺、胆甾醇及游离脂肪酸构建的仿生脂质液晶壳层包裹于构象压缩中间体外部，形成核壳复合微囊结构，相较于现有纯物理包裹方案，能够更有效地隔绝洗护配方中表面活性剂、乙醇、盐类等成分的影响，提升产品在常温非冷链流通及开封反复使用条件下的稳定性。

1.一种洗护美妆用生物药品的制备方法，其特征在于，包括：将蛋白类原料溶解于缓冲液中，配制成蛋白溶液，向所述蛋白溶液中加入动态共价键修饰试剂，使所述动态共价键修饰试剂与所述蛋白类原料分子表面的活性基团反应，在所述蛋白类原料分子内和分子间形成多个动态共价交联点，使所述蛋白类原料分子由松散伸展构象转变为纳米级致密超分子结构，得到构象压缩中间体，所述动态共价键修饰试剂选自苯硼酸衍生物、含二硫键交联结构的双功能试剂中的一种，且所述纯化后的构象压缩中间体的溶液与所述脂质有机相按体积比1:1~1:3、在60~70℃条件下混合，使脂质分子自组装形成包裹所述构象压缩中间体的初始囊泡，克服了现有纯物理包裹方案中活性物装载率低、易受表面活性剂/乙醇/盐类破坏的技术偏见，对所述构象压缩中间体进行纯化，去除未反应的游离修饰试剂，得到纯化后的构象压缩中间体，将神经酰胺、胆甾醇和游离脂肪酸溶解于有机溶剂中，形成脂质有机相，将所述纯化后的构象压缩中间体的溶液作为水相，与所述脂质有机相混合，使脂质分子在水相中自组装形成包裹所述构象压缩中间体的囊泡，对所述囊泡进行均质化处理，形成具有多层脂质液晶壳层结构的核壳复合微囊，得到微囊化悬液，对所述微囊化悬液进行干燥处理，得到洗护美妆用生物药品，所述动态共价交联点在弱酸性环境中保持稳定，在ph由弱酸性向中性过渡且还原性物质浓度升高的环境中发生断裂，解除对所述蛋白类原料分子的构象约束，使所述蛋白类原料分子恢复天然三维空间构象。

2.根据权利要求1所述的一种洗护美妆用生物药品的制备方法，其特征在于：所述动态共价键修饰试剂为苯硼酸衍生物，所述苯硼酸衍生物与所述蛋白类原料分子表面的二醇基团反应形成硼酸酯键。

3.根据权利要求1所述的一种洗护美妆用生物药品的制备方法，其特征在于：所述动态共价键修饰试剂为含二硫键交联结构的双功能试剂，所述双功能试剂与所述蛋白类原料分子表面的巯基发生二硫键交换反应形成二硫键。

4.根据权利要求1所述的一种洗护美妆用生物药品的制备方法，其特征在于：所述缓冲液的ph为7.0~8.0，蛋白溶液的浓度为1~10mg/ml，摩尔比为1:5~1:20，反应温度为20~37℃，反应时间为1~4小时。

5.根据权利要求1所述的一种洗护美妆用生物药品的制备方法，其特征在于：对所述构象压缩中间体进行纯化时，采用截留分子量为10~30kda的超滤膜进行超滤，得到的所述纯化后的构象压缩中间体的粒径为5~50nm。

6.根据权利要求1所述的一种洗护美妆用生物药品的制备方法，其特征在于：所述神经酰胺、所述胆甾醇和所述游离脂肪酸的摩尔比为0.5~1.5:0.3~1.0。

7.根据权利要求1所述的一种洗护美妆用生物药品的制备方法，其特征在于：所述纯化后的构象压缩中间体的溶液与所述脂质有机相的体积比为1:1~1:3，混合温度为60~70℃。

8.根据权利要求1所述的一种洗护美妆用生物药品的制备方法，其特征在于：对所述囊泡进行均质化处理时，处理压力为800~1500bar，循环处理次数为3~8次，均质化处理后还包括对所述微囊化悬液进行离心处理，去除未包封的游离脂质和游离蛋白类原料。

9.根据权利要求1所述的一种洗护美妆用生物药品的制备方法，其特征在于：所述蛋白类原料选自重组胶原蛋白、重组弹性蛋白、功能性生物活性多肽中的一种。

10.一种洗护美妆用生物药品，其特征在于，由权利要求1至9中任一项所述的制备方法制得。