川牛膝皂苷B在制备重塑牙根发育微环境/促进根尖诱导成形的制剂中的应用

本申请涉及生物医药，具体涉及川牛膝皂苷b（cyaonoside b）在制备重塑牙根发育微环境/促进根尖诱导成形的制剂中的应用。

背景技术：

1、年轻恒牙在牙根未完全发育成熟时，常因龋病、外伤或发育畸形等原因导致牙髓坏死或根尖周炎症，进而造成牙根发育停滞。正常牙根发育完成后，根尖孔会自然闭合，但年轻恒牙的根尖常常呈现“喇叭口”状、平行状或内聚状，根尖孔尚未形成天然屏障。一旦牙髓坏死，牙根发育即告终止，给患牙的长期保留带来极大困难。

2、根尖诱导成形术（apexification）是目前临床上针对牙根未完全形成的年轻恒牙发生牙髓坏死或根尖周炎时采用的治疗技术，通过药物及手术控制感染并诱导根尖硬组织沉积，促使牙根继续发育。该技术的核心在于应用药物诱导根尖部牙髓和（或）根尖周组织形成硬组织，使根尖孔缩小或封闭。目前临床上常用的根尖诱导药物主要包括氢氧化钙制剂和vitapex糊剂等。然而，这些传统药物存在诸多不足：氢氧化钙稳定性差、易吸收，且治疗周期长；vitapex糊剂虽然兼具抗菌活性和良好的操作性，但其诱导根尖成形的机制尚未完全明确，且其促进根尖硬组织形成的能力有限。因此，开发一种能够高效、稳定地诱导根尖钙化屏障形成的新型药物，具有重要的临床意义。

3、c-kit（又称kit/cd117）是一种受体酪氨酸激酶，其与配体干细胞因子（scf）结合后可促进细胞增殖、分化和祖细胞募集。研究表明，pdgfrβ+/c-kit+牙髓细胞具有牙髓干细胞的潜能，能够在体外和体内形成牙本质样结构。然而，目前尚未有报道将c-kit信号通路的调控应用于根尖诱导成形术。

4、川牛膝皂苷b（cyaonoside b）是一种皂苷类化合物，可从单胞菌中分离获得。迄今为止，尚无关于cyaonoside b用于根尖诱导成形术的任何报道。

技术实现思路

1、针对上述存在的技术局限性，本申请提出了川牛膝皂苷b（cyaonoside b）在制备重塑牙根发育微环境/促进根尖诱导成形的制剂中的应用；其克服了背景技术中提到的不足和缺陷。

2、为实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：

3、本申请的发明点是提供川牛膝皂苷b（cyaonoside b）在制备重塑牙根发育微环境/促进根尖诱导成形的制剂中的应用。

4、可选地，上述的应用，所述川牛膝皂苷b（cyaonoside b）在牙根发育微环境中通过介导c-kit信号通路，促进根尖区钙化屏障的形成与根尖孔的闭合。

5、可选地，上述的应用，所述制剂为注射液，用于在根管治疗后注射至根尖孔区域。

6、可选地，上述的应用，所述制剂中cyaonoside b的浓度为5-300μm，优选为25-200μm，更优选为50μm。

7、本申请的第二个发明点是提供了一种用于根尖诱导成形的药物组合物，所述药物组合物包含有效量的川牛膝皂苷b（cyaonoside b）作为活性成分，以及药学上可接受的载体。

8、可选地，上述的药物组合物，所述药物组合物为注射剂型，用于局部注射至根尖孔区域。

9、可选地，上述的药物组合物，所述川牛膝皂苷b（cyaonoside b）的有效浓度为5-300μm，优选为25-200μm，更优选为50μm。

10、本申请的第三个发明点是提供了一种用于筛选根尖诱导成形制剂的细胞模型，所述模型使用牙胚原代上皮细胞，以c-kit信号通路为靶点，以细胞增殖活力为指标，通过cck-8或实时细胞分析（rtca）方法，评估待测药物介导c-kit通路促进根尖发育微环境重塑的活性。

11、本申请的第四个发明点是提供了一种根尖诱导成形的方法，所述方法包括在牙齿发育期个体的根尖孔区域，注射有效量的川牛膝皂苷b（cyaonoside b），以介导c-kit信号通路，重塑牙根发育微环境，从而促进根尖区钙化组织的沉积与根尖孔的生理性闭合。

12、可选地，上述的方法，所述川牛膝皂苷b（cyaonoside b）的注射体积为1-5μl，注射浓度为5-300μm，优选为25-200μm，更优选为50μm。

13、与现有技术相比，本发明具有以下显著优点和有益效果：

14、第一，本发明首次将cyaonoside b应用于根尖诱导成形领域。现有技术中尚无任何关于cyaonoside b用于促进根尖钙化屏障形成或根尖孔闭合的报道。本发明通过系统的分子动力学模拟、体外细胞实验和体内动物实验，首次揭示了cyaonoside b在根尖诱导成形中的优异效果。

15、第二，本发明的作用机制明确。本发明通过分子动力学模拟证实，cyaonoside b能够与c-kit受体蛋白形成稳定的复合物构象，其结合自由能（dg）为-125.376 kj/mol，表明二者结合在热力学上高度有利。范德华作用（-181.062 kj/mol）和分子力学总相互作用（-173.743 kj/mol）是驱动结合的核心因素。这一明确的作用机制为药物的合理设计和临床应用提供了坚实的理论基础。

16、第三，本发明的药物组合物具有优异的体外促增殖活性。通过cck-8细胞增殖和细胞毒性实验以及实时细胞分析（rtca）发现，在0-50 μm浓度区间内，cyaonoside b对牙胚原代上皮细胞的促增殖作用呈浓度依赖性，50 μm浓度下细胞增殖速度最快，且无明显细胞毒性。这说明cyaonoside b能够在安全范围内有效激活c-kit信号通路，促进牙根发育微环境中的细胞增殖。

17、第四，本发明的药物组合物在体内具有显著的根尖诱导成形效果。在小鼠年轻恒牙根尖诱导成形术模型中，经根尖孔注射50 μm cyaonoside b后连续观察4周，microct图像显示药物干预组根尖孔处钙化物显著增多，根尖孔基本闭合；he和masson染色进一步证实药物诱导组根尖孔处形成大量钙化物，钙化屏障完整。而对照组根尖孔大小与健康牙齿相比未出现显著变化。这一结果表明，cyaonoside b能够在体内有效诱导根尖区钙化屏障的形成，实现根尖孔的生理性闭合。

18、第五，本发明提供了全新的根尖诱导成形策略。传统根尖诱导药物（如氢氧化钙、vitapex等）主要通过营造碱性环境和抗菌作用间接促进硬组织形成，作用机制较为被动。而本发明通过cyaonoside b直接介导c-kit信号通路，主动重塑牙根发育微环境，从分子层面精准调控根尖区细胞的增殖与分化，实现了根尖诱导成形的主动干预。

1.川牛膝皂苷b（cyaonoside b）在制备促进根尖诱导成形的制剂中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述川牛膝皂苷b（cyaonoside b）在牙根发育微环境中通过介导c-kit信号通路，促进根尖区钙化屏障的形成与根尖孔的闭合。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述制剂为注射液，用于在根管治疗后注射至根尖孔区域。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述制剂中cyaonoside b的浓度为5-300μm。

5.一种用于筛选根尖诱导成形制剂的细胞模型，其特征在于，所述模型使用牙胚原代上皮细胞，以c-kit信号通路为靶点，以细胞增殖活力为指标，通过cck-8或实时细胞分析（rtca）方法，评估待测药物介导c-kit通路促进根尖发育微环境重塑的活性。