莫达非尼中间体及杂质的高效液相色谱检测方法与流程

本发明属于药物检测，具体涉及一种莫达非尼中间体及杂质的高效液相色谱检测方法。

背景技术：

1、莫达非尼是一种新型的α1受体激动剂，主要用于治疗自发性嗜睡症和发作性睡眠症。因莫达非尼不良反应小，疗效确切，于1998年和1999年先后在英国和美国获批上市，现已在20多个国家获得许可上市。2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸是合成莫达非尼的关键中间体，其质量直接影响终产品莫达非尼的安全性与有效性。

2、在2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸的制备过程中，2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸是合成2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸的原料，2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸是反应生成的副产物，具体反应方程式如下：

3、；

4、制备过程中，2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸与2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸均可能残留于2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸中，并随着后续步骤进入到莫达非尼终产品，且残留的2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸和2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸难以在后续工艺中去除；这不仅会影响莫达非尼的合成反应效率，还可能导致终产品质量不达标。从化学结构来看，2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸、2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸和2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸均含有2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸核心骨架，仅硫原子的氧化态存在微小差异；这种结构上的高度相似性使得三者的物理化学性质（如极性、疏水性等）相近，在常规色谱分析中易出现峰重叠和分离度不足的问题，进而导致杂质含量检测结果出现假阳性或定量不准确的问题。

5、目前，针对2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸及其工艺杂质2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸、2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸的专属定量检测方法尚未建立，现有莫达非尼成品检测技术难以实现三者的高效分离与精准定量，无法满足2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸生产过程中的质量控制需求，进而影响莫达非尼终产品的质量稳定性与临床应用安全性。

6、中国专利cn103412062a公开一种测定莫达非尼含量的高效液相色谱法，色谱条件为：c18(4.6×250mm 5μm)，流动相为甲醇和水混合组成的体积比为6:4，使用紫外检测器，检测波长为225nm；但是该专利仅测定了莫达非尼一种成分，且采用等度洗脱色谱条件，模式相对单一，强保留成分洗脱缓慢，色谱峰展宽，灵敏度较差，且极性相近的成分难以实现有效基线分离，易发生共洗脱，造成杂质检出遗漏，存在假阴性风险。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种莫达非尼中间体及杂质的高效液相色谱检测方法，该方法中主峰与各杂质峰的分离度优良，且具备良好的精密度、准确度、耐用性及稳定性，能够为2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸的质量控制提供可靠的分析手段，进而更有效地保障莫达非尼终产品的质量。

2、本发明所述的莫达非尼中间体及杂质的高效液相色谱检测方法采用高效液相色谱法分别对空白溶液、对照品溶液和供试品溶液进行检测，记录色谱图；按照峰面积归一化法分别计算供试品溶液中莫达非尼中间体及杂质的含量；其中，莫达非尼中间体为2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸，杂质为2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸或2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸中的至少一种；2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸的结构式如下：

3、；

4、2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸的结构式如下：

5、；

6、2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸的结构式如下：

7、。

8、空白溶液为乙腈与水的混合溶液，其中乙腈与水的体积比为15-65:35-85。

9、供试品溶液的配制方法为将2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸用空白溶液溶解并稀释，得到供试品溶液；供试品溶液中2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸的浓度为0.16-0.24mg/ml。

10、对照品溶液的制备方法为杂质贮备液用空白溶液稀释，摇匀，得到对照品溶液；对照品溶液中2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸和2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸的浓度均为0.05-2.0μg/ml。

11、杂质贮备液的制备方法为将2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸和2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸用空白溶液溶解并稀释，摇匀，得到杂质贮备液；杂质贮备液中2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸和2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸的浓度均为0.5-500μg/ml。

12、高效液相色谱的色谱条件包括流动相和梯度洗脱程序，流动相的流速为0.95-1.05ml/min，流动相为流动相a和流动相b，流动相a为磷酸盐缓冲液与乙腈的混合溶液，其中磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为73.75-76.25:23.75-26.25，磷酸盐缓冲液的浓度为0.02-0.05mol/l，ph值为2.1-2.5，磷酸盐缓冲液的制备方法为磷酸二氢钾加水溶解，再加磷酸调节ph，得到磷酸盐缓冲液；流动相b为乙腈；梯度洗脱程序见表1；

13、表1 梯度洗脱程序

14、

15、高效液相色谱的色谱条件还包括色谱柱、检测器、检测波长和柱温。

16、色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的c18柱。

17、检测器为pda检测器或紫外检测器。

18、检测波长为218-222nm，柱温为28-32℃。

19、2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸的制备方法包括如下步骤：

20、称取40g的2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸加入四口圆底烧瓶中，加入400ml水，加热至28-32℃，加入浓度为30wt%的氢氧化钠溶液（含氢氧化钠7g）并搅拌溶解，滴加双氧水，28-32℃下搅拌反应4小时，滴加盐酸溶液（浓度为12mol/l），调节ph值至2-3，反应1小时，抽滤，用100ml水洗涤，48-52℃下鼓风干燥或真空干燥至少16小时，得到产物，产物加入400ml乙酸乙酯中，73-77℃下回流2小时，降温析晶，抽滤，使用乙酸乙酯洗涤，48-52℃鼓风干燥或真空干燥至少16小时，得到2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸。

21、本发明莫达非尼中间体及杂质的高效液相色谱检测方法能够有效分离2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸与2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸、2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸的色谱峰，且具优异的精密度、准确度和耐用性，对于保障莫达非尼的生产质量与临床疗效具有重要意义。

22、本发明的有益效果如下：

23、（1）本发明针对2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸、2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸和2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸核心骨架相同和结构差异小导致的分离干扰问题，通过优化色谱柱选型、流动相组成及梯度洗脱程序，实现了主成分2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸与杂质2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸、2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸色谱峰的高效分离，有效避免了假阳性结果和定量误差，确保检测结果的准确性。

24、（2）本发明对已知关键杂质2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸和2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸、其他未知杂质以及2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸主成分含量均采用峰面积归一化法，操作简便且结果稳定。本发明高效液相色谱检测方法的精密度rsd（相对标准偏差）均小于5%，准确度的回收率为93.69-104.24%，线性相关系数r2≥0.998，满足药物杂质检测的严格要求。

25、（3）本发明的检测方法在柱温±2℃、检测波长±2nm、流动相流速±5%和初始流动相a中乙腈体积占比微调等条件下，仍能保持稳定的分离效果和定量准确性，且溶液在室温下放置120h内稳定性良好，无需苛刻的检测环境，操作简便高效，可直接应用于2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸生产过程中的中间控制环节，为莫达非尼终产品的质量保障提供了关键技术支撑。

26、（4）本发明通过对2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸中关键杂质2-[(二苯基甲基)磺酰基]乙酸和2-[(二苯基甲基)硫代]乙酸的精准检测，可有效把控杂质总含量在莫达非尼终产品中的实际残留量，能够规避因杂质带来的潜在安全性风险，同时保障莫达非尼合成工艺的稳定性，提升终产品的质量均一性，对推动新型中枢神经兴奋药物的产业化应用具有重要意义。本发明检测方法中主峰与各杂质峰的分离度优良，且具备良好的精密度、准确度、耐用性及稳定性，能够为2-[(二苯基甲基)亚磺酰基]乙酸的质量控制提供可靠的分析手段，进而更有效地保障莫达非尼终产品的质量，确保临床用药的安全性。