一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中N-甲基吡咯烷酮的检测方法与流程

本发明涉及药品检测，更具体而言，涉及一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的检测方法。

背景技术：

1、玛巴洛沙韦（baloxavir marboxil）是一种新型帽依赖性核酸内切酶抑制剂，通过靶向抑制流感病毒mrna复制过程中的关键酶，对甲型和乙型流感病毒及其相关亚型均表现出显著的抗病毒活性，该药物适用于既往健康的成人和5岁及以上儿童单纯性甲型和乙型流感患者，亦可用于存在流感相关并发症高风险的成人和12岁及以上儿童患者，临床应用前景广阔。

2、在原料药合成工艺中，n-甲基吡咯烷酮（n-methylpyrrolidone,nmp）作为一种高沸点极性非质子溶剂，常被用于促进关键反应步骤的进行。然而，由于其沸点较高（约202℃），在常规干燥条件下难以完全去除，易在终产品中残留。根据国际人用药品注册技术协调会（ich）q3c《杂质：残留溶剂指导原则》的规定，n-甲基吡咯烷酮属于第二类溶剂（应限制使用的溶剂），其每日允许暴露量（pde）为5.3mg/天，对应的制剂中浓度限度为530ppm。为确保患者用药安全，必须对该溶剂残留量进行严格监控。

3、目前，各国药典（包括《中国药典》《美国药典》《欧洲药典》等）均未收载玛巴洛沙韦中残留溶剂n-甲基吡咯烷酮的检测方法，亦未见相关文献报道。现有分析方法多集中于该药物主成分含量测定或其他有关物质检查，缺乏针对n-甲基吡咯烷酮残留的特异性、灵敏性检测手段。因此，亟需建立一种操作简便、灵敏度高、准确性好的检测方法，用于测定玛巴洛沙韦原料药及其制剂中n-甲基吡咯烷酮的残留量，以填补技术空白，为药品质量控制提供科学依据，切实保障临床用药的安全性和有效性。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一，为此，本发明的一个方面的目的在于，提供一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的检测方法，所述检测方法使用高效液相色谱仪进行，检测方法的具体操作步骤为：

2、s1.供试品溶液：取玛巴洛沙韦，精密称定，加溶剂①超声溶解后，用溶剂②定量稀释，使玛巴洛沙韦析出，过滤后取续滤液制成供试品溶液；

3、s2.对照品溶液：取n-甲基吡咯烷酮对照品适量，用溶剂③定量稀释制成对照品溶液；

4、s3.调节仪器：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相a，流动相b，调节柱温，调节流动相流速，调节检测波长，调节进样体积，采用梯度洗脱；

5、s4.测定：精密量取s1～s2制成的各溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

6、残留溶剂一般采用气相色谱法检测，本发明发现，采用气相色谱法直接进样方式对玛巴洛沙韦中残留溶剂n-甲基吡咯烷酮进行检测时，因进样口温度较高，供试品在高温状态下分解，分解产物干扰n-甲基吡咯烷酮检测，本发明中采用高效液相色谱法检测玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮，可避免气相色谱法检测时供试品的降解干扰问题。

7、优选的，所述s1中供试品溶液的浓度为5～15mg/ml。

8、优选的，所述s1中溶剂①为乙腈。

9、优选的，所述s1中溶剂②为水。

10、优选的，所述s2中对照品溶液的浓度为2.7～8.0μg/ml。

11、优选的，所述s2中溶剂③为20%乙腈溶液。

12、优选的，所述s3中色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，规格为venusilmp c18，250mm×4.6mm，5μm。

13、优选的，所述s3中流动相a为0.05%磷酸溶液，所述流动相b为100%乙腈。

14、优选的，所述s3中调节柱温为20～30℃，调节流动相流速为0.9～1.1ml/min，调节检测波长为200nm，调节进样体积为10μl。

15、优选的，所述s3中梯度洗脱流动相的总体积为100%计，

16、在第0～10min，所述的流动相a的体积为91%～95%，所述的流动相b的体积为9%～5%。

17、在第10～11min，所述的流动相a的体积由91%～95%递减为8%～12%，所述的流动相b的体积由9%～5%递增为92%～88%；

18、在第11～41min，所述的流动相a的体积为8%～12%，所述的流动相b的体积为92%～88%；

19、在第41～42min，所述的流动相a的体积由8%～12%递增为91%～95%，所述的流动相b的体积由92%～88%递减为9%～5%；

20、在第42～60min，所述的流动相a的体积为91%～95%，所述的流动相b的体积为9%～5%。

21、本发明所具有的有益效果如下：

22、专属性强：通过对色谱条件的系统优化，使空白溶剂及供试品中其他组分均不干扰n-甲基吡咯烷酮的测定峰，确保了检测结果的专属性和可靠性，有效避免了假阳性或定量偏差。

23、设备普及度高、操作简便：本发明采用常规高效液相色谱仪，无需使用气相色谱-质谱联用等昂贵或复杂设备，仪器配置简单，操作流程便捷，适合在常规药品质量控制实验室推广使用。

24、分析速度快、检测效率高：本发明方法色谱运行时间短，可快速完成单次样品分析，显著提高检测通量，满足工业化生产中批次放行检测的效率需求。

25、准确度高、重复性好：方法学验证结果表明，该检测方法在线性、精密度、回收率等方面均满足ich及药典对残留溶剂分析方法的要求，能够准确反映玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的实际残留水平。

26、有效降低用药安全风险：本发明填补了目前各国药典及文献中尚无玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮残留检测方法的空白，为原料药及制剂的质量控制提供了可靠的技术手段，有助于将n-甲基吡咯烷酮残留量严格控制在安全限度（pde 5.3mg/天，浓度530ppm）以下，切实保障患者用药安全。

27、综上，本发明具有设备简单、成本低廉、专属性好、准确度高、操作便捷等综合优势，可快速、简便、准确地控制玛巴洛沙韦中残留溶剂n-甲基吡咯烷酮的含量，具有良好的工业应用前景和社会效益。

28、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

1.一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的检测方法，其特征在于：所述检测方法使用高效液相色谱仪进行，检测方法的具体操作步骤为：

2.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的检测方法，其特征在于：所述s1中供试品溶液的浓度为5～15mg/ml。

3.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的检测方法，其特征在于：所述s1中溶剂①为乙腈。

4.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的检测方法，其特征在于：所述s1中溶剂②为水。

5.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的检测方法，其特征在于：所述s2中对照品溶液的浓度为2.7～8.0μg/ml。

6.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的检测方法，其特征在于：所述s2中溶剂③为20%乙腈溶液。

7.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的检测方法，其特征在于：所述s3中色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，规格为venusil mp c18，250mm×4.6mm，5μm。

8.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的检测方法，其特征在于：所述s3中流动相a为0.05%磷酸溶液，所述流动相b为100%乙腈。

9.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的检测方法，其特征在于：所述s3中调节柱温为20～30℃，调节流动相流速为0.9～1.1ml/min，调节检测波长为200nm，调节进样体积为10μl。

10.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法测定玛巴洛沙韦中n-甲基吡咯烷酮的检测方法，其特征在于：所述s3中梯度洗脱流动相的总体积为100%计，