用于全氟辛烷磺酸检测的Apt-AuPtNPs探针及其制备方法、应用和产品

本发明涉及全氟辛烷磺酸检测，尤其是涉及一种用于全氟辛烷磺酸检测的apt-aupt nps探针及其制备方法、应用和产品。

背景技术：

1、全氟烷基化合物(perfluoroalkylated substances，pfass)是一类新型持久性有机污染物，具有环境持久性、长距离迁移性、生物累积性，以及发育毒性、免疫毒性、神经毒性、致癌性等多种潜在健康风险。由于具有高水溶性和低挥发性，水体已成为pfass在环境中的重要汇聚地之一。因此，对水体pfass进行筛查和监测具有重要意义。

2、目前常规的pfass检测主要依赖于液相色谱/质谱，存在设备昂贵、预处理过程繁琐、操作复杂、难以现场快速筛查等问题，限制了其广泛应用。

3、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于全氟辛烷磺酸检测的apt-aupt nps探针，以解决传统pfos检测方法依赖大型设备、操作复杂、难以现场快速筛查，以及传统试纸条检测灵敏度和可靠性不足等问题。

2、为了实现以上目的，特采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供了一种用于全氟辛烷磺酸检测的apt-aupt nps探针，所述apt-aupt nps探针为表面修饰有全氟辛烷磺酸适配体的aupt nps；所述aupt nps为表面铂修饰的金纳米颗粒；所述全氟辛烷磺酸适配体的核酸序列如seq id no.1所示。

4、作为进一步技术方案，所述全氟辛烷磺酸适配体的5’端带巯基修饰，通过au-s键修饰于aupt nps上。

5、第二方面，本发明提供了上述apt-aupt nps探针的制备方法，包括以下步骤：

6、将5’端带巯基修饰的全氟辛烷磺酸适配体和aupt nps于溶液中混合，反应后获得初步键合的apt-aupt nps探针，之后经pbs缓冲液陈化处理后重悬于稳定剂工作液中，获得稳定的apt-aupt nps探针；

7、所述稳定剂工作液包括10-30 mm na3po4·12h2o、2%-8%（w/v）bsa、0.10%-0.50%（v/v）tween-20和5%-15%（w/v）蔗糖；优选地，所述稳定剂工作液包括20 mm na3po4·12h2o、5%（w/v）bsa、0.25%（v/v）tween-20和10%（w/v）蔗糖。

8、第三方面，本发明提供了上述apt-aupt nps探针在全氟辛烷磺酸检测中的应用。

9、第四方面，本发明提供了一种全氟辛烷磺酸检测试纸条，包括依次叠压设的样品垫、共轭垫、检测垫和吸水垫；

10、所述共轭垫上负载所述的apt-aupt nps探针；

11、沿样品层析方向，所述检测垫上依次设置有检测线和质控线；所述检测线包被有bg4抗体；所述质控线包被有捕捉dna，用于捕获全氟辛烷磺酸适配体。

12、作为进一步技术方案，所述捕捉dna的3’端带生物素修饰；所述质控线修饰有链霉亲和素；捕捉dna通过生物素-链霉亲和素体系固定于质控线上；

13、所述捕捉dna的核酸序列如seq id no.2所示。

14、作为进一步技术方案，所述bg4抗体的包被浓度为0.1-1.0 mg/ml，优选为0.5 mg/ml；

15、所述捕捉dna的包被浓度为2.5-15 μm，优选为10 μm；

16、所述apt-aupt nps探针的包埋体积为5-15 μl/cm，优选为10 μl/cm；所述apt-aupt nps探针的包埋浓度为0.5-15 mg/ml，优选为10 mg/ml。

17、第五方面，本发明提供了一种采用所述全氟辛烷磺酸检测试纸条检测全氟辛烷磺酸的方法，包括以下步骤：

18、将待测样品滴加于全氟辛烷磺酸检测试纸条的样品垫上，待待测样品层析至吸水垫区域，检测线线和质控线线显色稳定后，根据检测线颜色深浅及其光密度值，实现pfos的可视化和半定量检测。

19、第六方面，本发明提供了一种全氟辛烷磺酸检测试剂盒，包括所述的apt-auptnps探针、tmb、h2o2溶液和ph为4.0-5.0的缓冲液。

20、第七方面，本发明提供了一种采用所述全氟辛烷磺酸检测试剂盒检测全氟辛烷磺酸的方法，包括以下步骤：

21、将apt-aupt nps探针与缓冲液混合获得apt-aupt nps探针溶液，再与待测样品混合孵育；当待测样品中含有全氟辛烷磺酸时，全氟辛烷磺酸与适配体结合并诱导适配体构象重排，减弱适配体对aupt nps表面催化位点的空间屏蔽作用；随后依次加入tmb和h2o2溶液进行显色反应生成oxtmb，之后于652 nm处测定反应体系的吸光度值，或者使用红外热像仪记录反应体系的温度变化值，根据所述吸光度值或者温度变化值检测待测样品中全氟辛烷磺酸的浓度。

22、相较于现有技术，本发明具有如下有益效果：

23、本发明提供的apt-aupt nps探针能够特异性结合全氟辛烷磺酸，结合后诱导适配体发生构象重排，形成可被bg4抗体识别的g-四链体结构，从而用于构建全氟辛烷磺酸检测试纸条；apt-aupt nps探针还具有类过氧化物酶活性，可催化tmb-h2o2体系生成蓝色氧化态tmb（oxtmb），实现pfos比色检测；同时，生成的oxtmb在808 nm近红外光照射下产生光热效应，可将颜色信号进一步转化为温度信号，实现pfos的光热定量。本发明提供的apt-auptnps探针具有良好的选择性、抗干扰能力、准确性、重复性和储存稳定性，能够实现全氟辛烷磺酸试纸条、比色和光热三模式的检测，且三种检测模式在0 nm-100 mm范围内均表现出良好的线性响应，试纸条、比色和光热模式的检出限分别为7.34 pm、6.47 pm和2.63 pm，并可用于环境水样和生物样本的检测，表现出优异的可靠性和实用性。

1. 一种用于全氟辛烷磺酸检测的apt-aupt nps探针，其特征在于，所述apt-aupt nps探针为表面修饰有全氟辛烷磺酸适配体的aupt nps；所述aupt nps为表面铂修饰的金纳米颗粒；所述全氟辛烷磺酸适配体的核酸序列如seq id no.1所示。

2. 根据权利要求1所述的apt-aupt nps探针，其特征在于，所述全氟辛烷磺酸适配体的5’端带巯基修饰，通过au-s键修饰于aupt nps上。

3. 权利要求1或2所述apt-aupt nps探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4. 权利要求1或2所述的apt-aupt nps探针在全氟辛烷磺酸检测中的应用。

5.一种全氟辛烷磺酸检测试纸条，其特征在于，包括依次叠压设的样品垫、共轭垫、检测垫和吸水垫；

6.根据权利要求5所述的全氟辛烷磺酸检测试纸条，其特征在于，所述捕捉dna的3’端带生物素修饰；所述质控线修饰有链霉亲和素；捕捉dna通过生物素-链霉亲和素体系固定于质控线上；

7. 根据权利要求5所述的全氟辛烷磺酸检测试纸条，其特征在于，所述bg4抗体的包被浓度为0.1-1.0 mg/ml，优选为0.5 mg/ml；

8.一种采用权利要求5-7任一项所述全氟辛烷磺酸检测试纸条检测全氟辛烷磺酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

9. 一种全氟辛烷磺酸检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的apt-auptnps探针、tmb、h2o2溶液和ph为4.0-5.0的缓冲液。

10.一种采用权利要求9所述的全氟辛烷磺酸检测试剂盒检测全氟辛烷磺酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：