一种体液顺铂荧光检测试剂盒

本发明涉及化学检测，具体为一种体液顺铂荧光检测试剂盒。

背景技术：

1、体液顺铂浓度测定依赖荧光信号数据的准确读取。体液成分复杂，体系内部存在游离氯离子和金属离子。在脱除氯离子的操作步骤中，加入银盐试剂会产生氯化银固体。氯化银固体在液体环境中发生聚团和沉降，遮盖仪器的检测光路，造成最终的荧光信号读取数据发生偏离。体液内存留的金属离子在检测体系内发生络合并引发副反应，破坏荧光信号转换过程的稳定性。顺铂分子自身无法直接输出光学信号，必须引入额外的响应物质完成分子浓度向荧光信号的转化。游离氯离子沉淀干扰和金属离子副反应干扰最终导致测得的体液顺铂浓度数值不准确。

2、因此，本发明提出一种体液顺铂荧光检测试剂盒，来解决现有技术的不足。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种体液顺铂荧光检测试剂盒，解决了脱氯步骤中产生的氯化银固体发生聚团和沉降遮盖检测光路、杂质金属离子引发副反应破坏荧光信号转换过程稳定性，以及顺铂分子无法直接输出光学信号导致最终顺铂浓度测定数值不准确的问题。

2、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

3、本发明提供一种体液顺铂荧光检测试剂盒，包括物理组合并独立分装的样本预处理液a、限量银盐脱氯液b、ph回调及金属屏蔽液d、硫醇响应液f和巯基荧光衍生化液g。

4、样本预处理液a由磺基水杨酸、硝酸钠与水混合得到。样本预处理液a中磺基水杨酸的浓度为3wt%～8wt%，硝酸钠的浓度为0.1mol/l～0.5mol/l。样本预处理液a的ph为2.5～4.0。样本预处理液a中加入作为ph调节剂的氢氧化钠水溶液。

5、限量银盐脱氯液b由硝酸银、硝酸钠、聚乙烯吡咯烷酮k30与水混合并调节体系ph至3.0～4.5得到。限量银盐脱氯液b中硝酸银的浓度为10mmol/l～50mmol/l，硝酸钠的浓度为0.05mol/l～0.3mol/l，聚乙烯吡咯烷酮k30的浓度为0.01wt%～0.2wt%。

6、ph回调及金属屏蔽液d由磷酸盐缓冲液与edta二钠、氟化钠和水混合并调节体系ph至6.0～6.8得到。ph回调及金属屏蔽液d中磷酸盐缓冲液的浓度为200mmol/l～500mmol/l，edta二钠的浓度为5.0mmol/l～10mmol/l，氟化钠的浓度为1.0mmol/l～20mmol/l。

7、硫醇响应液f由n-乙酰-l-半胱氨酸、氯化钠与水混合得到。硫醇响应液f中n-乙酰-l-半胱氨酸的浓度为10μmol/l～500μmol/l，氯化钠的浓度为0.1mmol/l～1.0mmol/l。硫醇响应液f的ph为3.5～4.0。硫醇响应液f中加入作为ph调节剂的盐酸水溶液。

8、巯基荧光衍生化液g由将monobromobimane溶解于二甲基亚砜中随后加入甲酸混合得到。巯基荧光衍生化液g中monobromobimane的浓度为0.05mmol/l～1.0mmol/l，甲酸的浓度为0.005wt%～0.02wt%。

9、体液顺铂荧光检测试剂盒还选择包括物理组合并独立分装的氯背景重建液c、铂响应封闭液e、游离巯基背景扣减液h、内标液i、顺铂标准加入液j和反应终止液k。

10、氯背景重建液c由氯化钠、硝酸钠、聚乙烯吡咯烷酮k30与水混合并调节体系ph至3.0～4.5得到。氯背景重建液c中氯化钠的浓度为0.2mmol/l～5.0mmol/l，硝酸钠的浓度为0.05mol/l～0.3mol/l，聚乙烯吡咯烷酮k30的浓度为0.005wt%～0.1wt%。

11、铂响应封闭液e由磷酸盐缓冲液与l-甲硫氨酸混合并调节体系ph至6.0～6.8得到。铂响应封闭液e中l-甲硫氨酸的浓度为10mmol/l～100mmol/l，磷酸盐缓冲液的浓度为20mmol/l～100mmol/l。

12、游离巯基背景扣减液h由氯化钠与水混合，并加入作为ph调节剂的盐酸水溶液调节体系ph至3.5～4.0得到。游离巯基背景扣减液h中氯化钠的浓度为0.1mmol/l～1.0mmol/l。

13、内标液i由内标染料与硼酸盐缓冲液混合并调节体系ph至7.8～8.6得到。内标染料为罗丹明b、罗丹明6g或磺酰罗丹明b中任意一种。内标液i中内标染料的浓度为0.02μmol/l～0.5μmol/l，硼酸盐缓冲液的浓度为100mmol/l～300mmol/l。

14、顺铂标准加入液j由顺铂、氯化钠与水混合并调节体系ph至5.0～7.0得到。顺铂标准加入液j中顺铂的浓度为0.05μmol/l～10μmol/l，氯化钠的浓度为10mmol/l～150mmol/l。加入硝酸钠时，顺铂标准加入液j由顺铂、硝酸钠、氯化钠与水混合并调节体系ph至5.0～7.0得到，加入硝酸钠的浓度为100mmol/l。

15、反应终止液k由乙酸盐缓冲液与水混合并调节体系ph至4.0～5.0得到。反应终止液k中乙酸盐缓冲液的浓度为20mmol/l～200mmol/l。

16、体液顺铂荧光检测试剂盒通过多组分液体的物理组合完成检测。限量银盐脱氯液b投加硝酸银结合氯离子生成氯化银固体，利用聚乙烯吡咯烷酮k30维持固体悬浮状态。ph回调及金属屏蔽液d投加edta二钠和氟化钠同金属离子发生络合反应。硫醇响应液f提供n-乙酰-l-半胱氨酸同顺铂发生取代反应。巯基荧光衍生化液g内monobromobimane分子同剩余的n-乙酰-l-半胱氨酸分子结合产生荧光信号，最终读取荧光信号数据计算顺铂浓度。

17、本发明提供了一种体液顺铂荧光检测试剂盒。具备以下有益效果：

18、1、本发明通过限量银盐脱氯液b投加硝酸银结合氯离子生成氯化银固体，消除氯离子干扰，并利用聚乙烯吡咯烷酮k30维持固体悬浮状态，防止沉淀物影响荧光信号数据读取。

19、2、本发明通过ph回调及金属屏蔽液d投加edta二钠和氟化钠，同体系内金属离子发生络合反应，消除杂质金属离子干扰，保障荧光信号转换过程稳定。

20、3、本发明通过硫醇响应液f投加n-乙酰-l-半胱氨酸同顺铂发生取代反应，配合巯基荧光衍生化液g内monobromobimane分子同剩余的n-乙酰-l-半胱氨酸分子结合产生荧光信号，完成顺铂浓度测定计算。

1.一种体液顺铂荧光检测试剂盒，其特征在于，包括物理组合并独立分装的样本预处理液a、限量银盐脱氯液b、ph回调及金属屏蔽液d、硫醇响应液f和巯基荧光衍生化液g；分别包含如下组分：

2.根据权利要求1所述的一种体液顺铂荧光检测试剂盒，其特征在于，所述样本预处理液a中，磺基水杨酸的浓度为3wt%～8wt%，硝酸钠的浓度为0.1mol/l～0.5mol/l；

3.根据权利要求2所述的一种体液顺铂荧光检测试剂盒，其特征在于，所述样本预处理液a的ph为2.5～4.0；所述限量银盐脱氯液b的ph为3.0～4.5；所述ph回调及金属屏蔽液d的ph为6.0～6.8；所述硫醇响应液f的ph为3.5～4.0；

4.根据权利要求3所述的一种体液顺铂荧光检测试剂盒，其特征在于，所述限量银盐脱氯液b由所述硝酸银、硝酸钠、聚乙烯吡咯烷酮k30与水混合并调节体系ph至3.0～4.5得到；

5.根据权利要求4所述的一种体液顺铂荧光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括物理组合并独立分装的氯背景重建液c、铂响应封闭液e、游离巯基背景扣减液h、内标液i、顺铂标准加入液j和反应终止液k中任意一种或多种；

6.根据权利要求5所述的一种体液顺铂荧光检测试剂盒，其特征在于，所述氯背景重建液c中，氯化钠的浓度为0.2mmol/l～5.0mmol/l，硝酸钠的浓度为0.05mol/l～0.3mol/l，聚乙烯吡咯烷酮k30的浓度为0.005wt%～0.1wt%；

7.根据权利要求6所述的一种体液顺铂荧光检测试剂盒，其特征在于，所述氯背景重建液c的ph为3.0～4.5；所述铂响应封闭液e的ph为6.0～6.8；所述游离巯基背景扣减液h的ph为3.5～4.0；所述内标液i的ph为7.8～8.6；所述顺铂标准加入液j的ph为5.0～7.0；所述反应终止液k的ph为4.0～5.0。

8.根据权利要求7所述的一种体液顺铂荧光检测试剂盒，其特征在于，所述氯背景重建液c由所述氯化钠、硝酸钠、聚乙烯吡咯烷酮k30与水混合并调节体系ph至3.0～4.5得到；

9.根据权利要求8所述的一种体液顺铂荧光检测试剂盒，其特征在于，当包含所述顺铂标准加入液j时，所述顺铂标准加入液j中还包含浓度为100mmol/l的硝酸钠。

10.根据权利要求9所述的一种体液顺铂荧光检测试剂盒，其特征在于，当包含所述顺铂标准加入液j时，所述顺铂标准加入液j由所述顺铂、所述硝酸钠、所述氯化钠与水混合并调节体系ph至5.0～7.0得到。