一种红脉酸模的组织培养方法与流程

本发明涉及植物组织培养，尤其涉及一种红脉酸模的组织培养方法。

背景技术：

1、红脉酸模（rumex sanguineus），属于蓼科酸模属多年生草本植物。红脉酸模是一种优良的彩叶植物，叶片美丽，叶脉红色，春秋季观赏价值高，适宜布置花境边缘，或盆栽观赏。红脉酸模根茎可入药，亦可提取用作染料，且其嫩叶可食用，在西餐蔬菜市场中具有较高的应用价值。

2、然而，红脉酸模作为酸模属中具有独特观赏价值的物种，其组织培养技术尚无系统研究报道。现有酸模属植物的组培方法多针对特定近缘种或杂交种设计，由于不同物种间的基因型差异，直接套用现有方法难以保证红脉酸模的组培效率和再生质量。因此，开发一种适用于红脉酸模的高效、稳定的组培快繁方法，具有重要的现实意义和技术创新空间。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种红脉酸模的组织培养方法以及用于红脉酸模组织培养的培养基。

2、具体地，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供一种红脉酸模的组织培养方法，所述方法包括：以红脉酸模的腋芽作为外植体，依次进行诱导腋芽萌发培养、丛生芽增殖培养和诱导生根培养。

4、本发明的红脉酸模组织培养方法中，以生长健壮且无病虫害的红脉酸模母株的腋芽作为外植体进行组织培养。

5、本发明提供的红脉酸模组织培养方法的整体流程如下：对取自生长健壮且无病虫害的红脉酸模的腋芽消毒处理后，利用诱导培养基对腋芽进行诱导，在适宜的培养环境下，诱导腋芽萌发获得丛生芽。再利用增殖培养基对丛生芽进行增殖诱导，在适宜的培养环境下，丛生芽增殖形成丛生芽。将丛生芽分离成单株，在诱导生根的培养基上对单株进行生根诱导，形成生根苗。

6、上述组织培养方法中，诱导腋芽萌发培养使用的培养基以ms培养基为基本培养基并包括如下组分：6-ba 1.0-1.5mg/l，naa（萘乙酸）0.1-0.5mg/l，蔗糖 25-30g/l，琼脂5.0-5.5g/l；

7、丛生芽增殖培养使用的培养基以ms培养基为基本培养基并包括如下组分：6-ba0.1-0.5mg/l，蔗糖 25-30g/l，琼脂5.0-5.5g/l。

8、本发明发现，分别采用上述特定的培养基作为诱导腋芽萌发培养阶段和丛生芽增殖培养阶段的培养基，能够使得两个培养阶段很好地衔接和配合作用，有效提高丛生芽的分化情况，同时提高丛生芽的增殖效率。

9、其中，在诱导丛生芽增殖的培养基中,单独添加6-ba作为植物激素，与同时添加6-ba和naa配合作用比较:单独添加6-ba作为植物激素增殖效果较好，且不影响增殖过程中的丛生芽长势，故选择在诱导腋芽增殖的培养基中只添加6-ba一种激素。

10、在本发明的一些实施方式中，诱导腋芽萌发培养使用的培养基为在ms培养基中添加6-ba 1.0-1.5mg/l，naa 0.1-0.5mg/l，蔗糖 25-30g/l，琼脂5.0-5.5g/l得到；丛生芽增殖培养使用的培养基为在ms培养基中添加6-ba0.1-0.5mg/l，蔗糖 25-30g/l，琼脂5.0-5.5g/l得到。

11、上述组织培养方法中，诱导生根培养使用的培养基以1/2 ms培养基为基本培养基并包含如下组分：蔗糖25-30g/l，琼脂5.0-5.5g/l。

12、优选地，上述诱导生根的培养基中，不添加植物激素。

13、本发明发现，配合上述诱导腋芽萌发培养和丛生芽增殖培养，在诱导生根阶段，不添加植物激素即能够获得100%的生根率。丛生芽能够在生根培养基及自身合成的各类激素的共同作用下，促进生根形成小苗。

14、进一步优选地，诱导生根培养使用的培养基以1/2 ms培养基为基本培养基并包含如下组分：蔗糖25-30g/l，琼脂5.0-5.5g/l。

15、在本发明的一些实施方式中，诱导生根培养使用的培养基为在1/2 ms培养基中添加蔗糖25-30g/l，琼脂5.0-5.5g/l得到。

16、上述诱导腋芽萌发培养、丛生芽增殖培养和诱导生根培养使用的培养基的ph优选为5.8-6.0。

17、以上所述的组织培养方法中，诱导腋芽萌发培养、丛生芽增殖培养和诱导生根培养优选采用以下条件：培养温度为23-27℃，光照强度为1500-2300 lux，光照时长为9-10h/d。

18、以上所述的组织培养方法中，在诱导腋芽萌发培养前，对外植体进行消毒处理；

19、所述消毒处理包括：先以水冲洗后，75%酒精消毒和0.1%氯化汞溶液处理。

20、上述处理优选为浸泡震荡处理。

21、优选地，所述所述酒精消毒的时间为30-60s；所述氯化汞溶液处理的时间为4-8min。

22、优选地，在酒精消毒后、氯化汞溶液处理后，均以无菌水进行清洗外植体。

23、在本发明的一些实施方式中提供一种红脉酸模的组织培养方法，所述方法包括：外植体的获取和消毒、诱导腋芽萌发、丛生芽增殖以及诱导生根。

24、另一方面，本发明还提供用于红脉酸模组织培养的培养基，所述培养基包括诱导腋芽萌发培养基、丛生芽增殖培养基和诱导生根培养基；

25、其中，所述诱导腋芽萌发培养基以ms培养基为基本培养基并包括如下组分：6-ba1.0-1.5mg/l，naa 0.1-0.5mg/l，蔗糖 25-30g/l，琼脂5.0-5.5g/l；

26、所述丛生芽增殖培养基以ms培养基为基本培养基并包括如下组分：6-ba 0.1-0.5mg/l，蔗糖 25-30g/l，琼脂5.0-5.5g/l；

27、所述诱导生根培养基以1/2 ms培养基为基本培养基并包含如下组分：蔗糖25-30g/l，琼脂5.0-5.5g/l。

28、本发明还提供以上所述的用于红脉酸模组织培养的培养基在红脉酸模组织培养中的应用。

29、优选地，所述应用为以红脉酸模的腋芽作为外植体进行组织培养。

30、本发明的有益效果在于：本发明选择红脉酸模母株的腋芽作为外植体进行红脉酸模的组织培养，经过试验验证，腋芽为外植体进行诱导，丛生芽3-4周正常萌出，生长迅速；而以叶片为外植体时，虽然有愈伤组织形成，但未能诱导出不定芽。本发明还针对腋芽作为外植体开发了适宜的诱导腋芽萌发、丛生芽增殖以及诱导生根的培养培养基和培养方法，经过试验验证，在诱导腋芽萌发步骤中，分裂素6-ba和生长素naa的配合使用，在保证丛生芽的正常生长前提下，能缩短芽点的诱导时间，提高诱导率。此外，在丛生芽增殖阶段，选择单独使用分裂素6-ba，且6-ba的添加量较诱导腋芽的用量降低，既能保证植株茁壮的前提下，省去naa的使用，且能提高增殖率和生根率。利用本发明的红脉酸模组织培养方法，能够有效提高红脉酸模丛生芽的诱导成功率，提高红脉酸模的增殖系数和生根率，从而实现红脉酸模的快速繁殖，促进红脉酸模的商品化应用。

1.一种红脉酸模的组织培养方法，其特征在于，所述方法包括：以红脉酸模的腋芽作为外植体，依次进行诱导腋芽萌发、丛生芽增殖和诱导生根；诱导腋芽萌发培养的培养基组分同时包括6-ba和naa；丛生芽增殖培养的培养基组分仅包括6-ba ，未添加naa；6-ba在丛生芽增殖培养的培养基用量小于在诱导腋芽萌发培养的培养基用量。

2.根据权利要求1所述的红脉酸模的组织培养方法，其特征在于，所述外植体为叶柄基部腋芽。

3.根据权利要求1所述的红脉酸模的组织培养方法，其特征在于，所述诱导腋芽萌发培养使用的培养基以ms培养基为基本培养基并包括如下组分：6-ba 1.0-1.5mg/l，naa 0.1-0.5mg/l，蔗糖 25-30g/l，琼脂5.0-5.5g/l；

4.根据权利要求3所述的红脉酸模的组织培养方法，其特征在于，所述诱导腋芽萌发培养使用的培养基之中，6-ba 1.2mg/l，naa 0.3mg/l，蔗糖 25g/l，琼脂5.2g/l；

5.根据权利要求3所述的红脉酸模的组织培养方法，其特征在于，所述诱导生根培养使用的培养基以1/2 ms培养基为基本培养基并包含如下组分：蔗糖25-30g/l，琼脂5.0-5.5g/l。

6.根据权利要求5所述的红脉酸模的组织培养方法，其特征在于，诱导腋芽萌发培养、丛生芽增殖培养和诱导生根培养的培养基的ph均为5.8-6.0。

7.根据权利要求1~6任一项所述的红脉酸模的组织培养方法，其特征在于，诱导腋芽萌发培养、丛生芽增殖培养和诱导生根培养的培养温度为23-27℃，光照强度为1500-2300lux，光照时长为9-10h/d。

8.根据权利要求1~6任一项所述的红脉酸模的组织培养方法，其特征在于，在诱导腋芽萌发培养前，对外植体进行消毒处理；

9.用于红脉酸模组织培养的培养基，其特征在于，用于进行权利要求权利要求1~6任一项所述的红脉酸模的组织培养方法；所述培养基包括诱导腋芽萌发培养基、丛生芽增殖培养基和诱导生根培养基；

10.权利要求9所述的培养基在红脉酸模组织培养中的应用。