二甲双胍在提升杜梨组培苗生根的应用、方法及培养基

本发明属于果树组培苗生根培养,特别涉及一种二甲双胍在提升杜梨组培苗生根的应用、方法及培养基。

背景技术：

1、杜梨（

pyrus betulifoliabunge）是北方地区梨树栽培的常用砧木，具有抗旱、抗病、耐盐碱等诸多优良特性。杜梨常规繁殖以播种为主，实生后代遗传变异性大，难以保留亲本的优良性状。组织培养技术在保留亲本的优良性状的同时，还具有不受季节限制、繁殖系数高、苗木整齐一致等优点，是实现果树种苗工厂化生产的有效途径。

2、杜梨组织培养一般包括无菌外植体建立、继代培养、增殖培养和生根驯化移栽四个环节，其中试管苗生根驯化移栽是组培繁殖的关键技术环节，生根质量直接影响移栽成活率。杜梨组培苗离体生根能力受生根诱导方式和培养基成分的影响。目前，梨组培苗生根诱导主要依赖生长素类物质，常用的生长素包括吲哚乙酸（iaa）、吲哚丁酸（iba）和萘乙酸（naa）等，现有技术中，杜梨组培苗生根培养多采用1/2ms培养基添加适宜浓度的iba或iaa，一般14天开始生根，其生根率为60%左右，生根效率有较大的提升空间。

3、二甲双胍（metformin，met），是一种广泛应用于临床治疗ⅱ型糖尿病的双胍类降糖药物。关于二甲双胍在果树组培苗生根领域的研究仍为空白。因此，探索二甲双胍在杜梨组培苗生根培养中的应用，对于丰富梨砧木组培生根诱导的植物生长调节剂种类、提高生根效率具有重要的理论意义和实践价值。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种二甲双胍在提升杜梨组培苗生根的应用、方法及培养基，解决了现有技术中杜梨组培苗生根率低、生根周期长的技术问题。

2、发明所采用的技术方案是：一种利用二甲双胍提升杜梨组培苗生根效果的方法，其技术要点是，包括以下步骤：

3、（1）选取经继代培养、株高至少为3.5 cm、粗度至少为2 mm、叶片数至少为10片的健壮杜梨组培苗，保留3～4片叶；

4、（2）将所述杜梨组培苗接种至生根培养基中，在22±2℃、光照2200 lx、光周期16h/8h的条件下培养30天；

5、所述生根培养基以1/2ms培养基为基础培养基，并添加5～20 mg/l的二甲双胍，所述二甲双胍过滤除菌后加入。

6、上述方案中，所述生根培养基还包括25 g/l蔗糖、6 g/l琼脂、2 g/l聚乙烯醇（pva）、1 mg/l吲哚乙酸（iaa）和0.5 mg/l吲哚丁酸（iba）。

7、上述方案中，所述二甲双胍的添加量为10 mg/l。

8、上述方案中，步骤（1）中所述继代培养基组成为：ms培养基4.4 g/l、蔗糖30 g/l、琼脂6 g/l、聚乙烯醇（pva）2 g/l、6-苄氨基嘌呤（6-ba）1 mg/l、吲哚丁酸（iba）0.1 mg/l。

9、一种用于杜梨组培苗生根的培养基，其技术要点是，所述培养基以1/2ms培养基为基础培养基，并添加5～20 mg/l的二甲双胍，所述二甲双胍过滤除菌后加入。

10、上述方案中，所述培养基还包括25 g/l蔗糖、6 g/l琼脂、2 g/l聚乙烯醇（pva）、1mg/l吲哚乙酸（iaa）和0.5 mg/l吲哚丁酸（iba）。

11、上述方案中，所述二甲双胍的添加量为10 mg/l。

12、一种二甲双胍在提升杜梨组培苗生根效果中的应用，其技术要点是，将二甲双胍作为生根促进剂添加到杜梨组培苗的生根培养基中，所述二甲双胍的添加量为5～20 mg/l，所述二甲双胍过滤除菌后加入。

13、上述方案中，与不添加二甲双胍的生根培养基相比，添加二甲双胍使杜梨组培苗的生根率提高至83.67%～89.04%，生根时间提早2～3天。

14、与现有技术相比，本发明的有益效果是：（1）在添加met培养基中的组培苗比传统生根培养基中的组培苗提早生根3天；（2）提高杜梨组培苗生根率：传统生根培养基的生根率约为60.00%，添加met后杜梨组培苗生根率达83.67%~89.04%。（3）在添加met培养基中的组培苗比传统生根培养基中的组培苗生根条数增加，根长增加，一级根和二级根数量也都增多。（4）10mg/lmet培养基为最适浓度，比传统培养基平均生根条数增加1.3条，其中生根的杜梨组培苗一级根平均长度增加3.81mm，二级根数增加1.7条，总根数增加3.6条。生根率达89.04%，比传统培养基生根率高近30%；（5）操作简便、成本低廉：met为常用药物，成本低，易获取，可直接添加到生根培养基中。

1.一种利用二甲双胍提升杜梨组培苗生根效果的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的利用二甲双胍提升杜梨组培苗生根效果的方法，其特征在于，所述生根培养基还包括25 g/l蔗糖、6 g/l琼脂、2 g/l聚乙烯醇（pva）、1 mg/l吲哚乙酸（iaa）和0.5 mg/l吲哚丁酸（iba）。

3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述二甲双胍的添加量为10 mg/l。

4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述继代培养基组成为：ms培养基4.4 g/l、蔗糖30 g/l、琼脂6 g/l、聚乙烯醇（pva）2 g/l、6-苄氨基嘌呤（6-ba）1 mg/l、吲哚丁酸（iba）0.1 mg/l。

5.一种用于杜梨组培苗生根的培养基，其特征在于，所述培养基以1/2ms培养基为基础培养基，并添加5～20 mg/l的二甲双胍，所述二甲双胍过滤除菌后加入。

6.根据权利要求5所述的用于杜梨组培苗生根的培养基，其特征在于，所述培养基还包括25 g/l蔗糖、6 g/l琼脂、2 g/l聚乙烯醇（pva）、1 mg/l吲哚乙酸（iaa）和0.5 mg/l吲哚丁酸（iba）。

7.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于，所述二甲双胍的添加量为10 mg/l。

8.一种二甲双胍在提升杜梨组培苗生根效果中的应用，其特征在于，将二甲双胍作为生根促进剂添加到杜梨组培苗的生根培养基中，所述二甲双胍的添加量为5～20 mg/l，所述二甲双胍过滤除菌后加入。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，与不添加二甲双胍的生根培养基相比，添加二甲双胍使杜梨组培苗的生根率提高至83.67%～89.04%，生根时间提早2～3天。