一种金毛狗脊组培苗的培养方法与流程

本发明涉及组培，具体涉及一种金毛狗脊组培苗的培养方法。

背景技术：

1、金毛狗脊为蚌壳蕨科金毛狗脊属多年生树形蕨类植物，其根茎入药，具有补肝肾、强腰膝、除风湿等功效，是我国传统中药材之一。近年来，随着中医药市场的不断发展和金毛狗脊药用价值的深入开发，市场对该药材的需求量持续增长，年需求量已达数千吨。由于长期过度采挖，加之金毛狗脊自然繁殖能力有限、生境破坏严重，其野生资源已濒临枯竭，被列入《国家重点保护野生植物名录》，保护级别为二级。因此，开展金毛狗脊的人工繁育研究，特别是通过组织培养技术实现种苗的规模化生产，对于缓解野生资源压力、满足市场需求具有重要意义。

2、目前，金毛狗脊的组织培养研究已有一定基础，主要集中在利用孢子、根状茎等外植体进行离体培养方面。现有公开技术主要涉及以下几个方向：

3、在孢子繁育方面，已有通过孢子萌发获得原叶体、进而诱导孢子体的技术路线。例如，苏钰琴等（cn105230492a）公开了一种金毛狗脊孢子组培繁育方法，包括孢子囊消毒、萌发培养基培养、增殖培养基诱导丛生原叶体、分化培养基诱导幼孢子体、生根培养基培养成孢子体等步骤，建立了从孢子到完整植株的培养流程。此外，也有通过原叶体增殖途径实现快速繁殖的技术方案，采用含天然有机添加物的培养基促进原叶体增殖。

4、在愈伤组织和ggb途径方面，有研究以根状茎为外植体，通过诱导愈伤组织分化不定芽进而获得再生植株，以及通过绿色球状小体（ggb）途径建立离体繁殖体系。这些途径具有增殖效率较高的优点，但愈伤组织途径存在一定的遗传不稳定风险。

5、但现有技术的研究重点多集中在孢子萌发、原叶体增殖和孢子体分化等前期阶段，而对组培苗的生根壮苗阶段的研究较鲜少，导致组培苗质量一致性差、根系发育不良、苗体弱小、叶片数少等问题，制约了种苗的规模化生产。

技术实现思路

1、本发明的目的是为满足组培苗的规模化生产需求与优质需求等，提供了一种金毛狗脊组培苗的培养方法。

2、本发明的技术方案：

3、一种金毛狗脊组培苗的培养方法，包括如下步骤：

4、（1）配制生根壮苗培养基：在基本培养基中至少添加naa、iba中的一种，获得生根壮苗培养基；所述基本培养基为ms、1/2ms、1/4ms中的任意一种；

5、（2）培养：将金毛狗脊组培苗接种于生根壮苗培养基中，于室温条件下培养60-65天，培养期间每日光照8-10h。

6、在步骤（1）中，所述生根壮苗培养基中naa的浓度为0-0.5 mg/l，优选地为0.3-0.5mg/l，更优选地为0.5 mg/l。

7、在步骤（1）中，所述生根壮苗培养基中iba的浓度为0-0.5 mg/l，优选地为0-0.3mg/l，更优选地为0.3 mg/l。

8、优选地，在步骤（1）中，所述基本培养基为1/4ms。

9、更优选地，所述生根壮苗培养基的配方：1/4ms+naa 0.5mg/l+iba 0.3mg/l。

10、所述室温是指温度23-26℃。

11、本发明的有益效果：

12、采用本发明培养方法，使组培苗的生根率达100%，金毛狗脊组培苗材料均一性好，可显著促进根系发育和苗体生长。

13、本发明所用培养基成分为常规组培原料，无需添加昂贵添加剂，操作简便，适合金毛狗脊种苗的规模化生产应用。

14、本发明中虽然naa（萘乙酸）和iba（吲哚丁酸）均属于生长素类植物生长调节剂，但naa与iba在本发明中能够功能互补、协同增效的作用，其中naa能够有效促进根原基的分化，增加诱导根的数量；iba能够促进根的伸长生长。两者配合使用能够实现“根数多、根长足”的综合效果，同时，naa和iba通过不同的转运和代谢途径进入细胞，共同提高局部生长素浓度，协同激活不定根发育；而若选择6-ba、kt等细胞分裂素等会抑制根原基的形成。

15、同时，本发明中naa和iba共同作用可有效调控内源激素平衡，而在金毛狗脊组织培养苗的生长发育过程中，内源激素的动态变化对植株的形态建成具有重要调控作用，主要表现在naa与iba共同处理可提高植物体内iaa（内源生长素）含量，同时降低aba（脱落酸）、ga3（赤霉素）等抑制生根的激素水平，提高iaa/aba和iaa/ga3的比值，从而解除对根原基形成的抑制，促进的根原的增殖分化与生长，并通过叶片数、根数、根长、色素含量等直接指标得以有效表现。

1.一种金毛狗脊组培苗的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的一种金毛狗脊组培苗的培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述生根壮苗培养基中naa的浓度为0-0.5 mg/l。

3.如权利要求2所述的一种金毛狗脊组培苗的培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述生根壮苗培养基中naa的浓度为0.3-0.5 mg/l。

4.如权利要求3所述的一种金毛狗脊组培苗的培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述生根壮苗培养基中naa的浓度为0.5 mg/l。

5.如权利要求1所述的一种金毛狗脊组培苗的培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述生根壮苗培养基中iba的浓度为0-0.5 mg/l。

6.如权利要求5所述的一种金毛狗脊组培苗的培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述生根壮苗培养基中iba的浓度为0-0.3 mg/l。

7.如权利要求6所述的一种金毛狗脊组培苗的培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述生根壮苗培养基中iba的浓度为0.3 mg/l。

8.如权利要求1所述的一种金毛狗脊组培苗的培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述基本培养基为1/4ms。

9.如权利要求1所述的一种金毛狗脊组培苗的培养方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述生根壮苗培养基的配方：1/4ms+naa 0.5mg/l+iba 0.3mg/l。