减少配体渗漏的制作方法

减少配体渗漏
相关申请的交叉引用
1.本技术要求于2020年10月1日提交的美国实用专利申请no.17/061,246的优先权。上述引用的申请其全部公开内容都通过引用合并于此。序列表
2.本技术是和序列表提交的。该序列表以ascii格式通过efs-web以文本文件的形式提交。所述ascii副本创建于2020年10月1日，名为“immunicom-0515514-pct.txt”，大小为10.2kb，其全部内容通过引用合并于此。


背景技术：

3.单采术是一种医疗技术，该技术将病人的血液通过一种装置，该装置分离出一种或多种特定的成分，并将剩余的血液返回到循环系统中。因此，这是一种体外疗法。这种技术通常用于在献血中心收集血小板。
4.人体对炎症和细胞凋亡的控制是一个复杂的过程，由众多的调节蛋白管理。肿瘤坏死因子α(tnf-α)是一种有效的细胞因子，已被定性为一种抗肿瘤剂。tnf-α作用的自然控制是因为抑制性分子的存在，例如血浆中的可溶性tnf-α受体(stnf-rs)，如stnf-r1和stnf-r2。该可溶性受体可以结合并中和tnf-α。
5.从血液中去除stnf-rs的尝试导致了以下报告：潜在危险量的柱材料渗漏到病人的血液，去除stnf-rs的变数，副作用和并发症，这些都导致怀疑目前的单采术是否是一种实用的治疗方法。


技术实现要素：

6.希望提供一种“消减”免疫疗法，旨在从患者的循环中去除抑制性分子，从而实现人体的自然免疫反应，同时避免柱材料渗漏到处理过的血液成分中。在某些实施方案中，希望从患者的循环中去除stnf-rs，从而增强tnf-α对肿瘤细胞的活性。
7.公开了一种用于从流体中去除组分的柱。该柱包括具有横截面积的隔室、具有直径并设置在隔室内的珠子，以及偶联至珠子以及选择结合所述组分的配体。选择横截面积和珠子直径以保持隔室内的流体流速低于第一阈值。
8.公开了一种从患者血液中去除组分的方法。该方法包括以下步骤：从患者接收血液，将血液分离成至少两种血液组分，以及使组分之一的部分通过具有横截面积并包含直径的多个珠子以及偶联至珠子的选择结合该组分的配体。选择横截面积和珠子直径以将隔室内的血液组分的流速维持在第一阈值以下。该方法还包括将至少两种血液组分混合在一起并将混合的血液组分回输给患者的步骤。
9.公开了一种用于从流体中去除组分的配体。该配体包括至少两个单体，每个单体具有将偶联至组分的位点、两个单体之间的第一接头和偶联至单体之一并通过化学键偶联至基质的第二接头。
10.公开了一种用于从流体中去除组分的基质。基质具有偶联至基质的配体。配体可
包括至少两个单体，每个单体包括将偶联至组分的位点、偶联在两个单体之间的第一接头和与偶联至单体之一并通过化学键偶联至基质的第二接头。
11.公开了一种用于从流体中去除组分的柱。该柱具有隔室和设置在隔室内的基质。该基质具有偶联至基质的配体。配体可以包括至少两个单体，每个单体具有将偶联至组分的位点。偶联在两个单体之间的第一连接头和与偶联至单体之一并通过化学键偶联至基质的第二接头。
12.公开了一种从患者血液中去除目标组分的方法。该方法包括以下步骤：从患者接收血液，将血液分离成至少两种血液组分，以及使组分之一的部分接近配体。配体可以包括至少两个单体，每个单体具有将偶联至组分的位点。偶联在两个单体之间的第一接头和与偶联至单体之一并通过化学键偶联至基质的第二接头。该方法还包括将至少两种血液组分混合在一起并将混合的血液组分回输给患者的步骤。
13.公开了一种制备用于单采术的珠子的方法。该方法包括以下步骤：氧化基质，在包括部分肿瘤坏死因子α(tnf-α)的配体和所述氧化基质之间形成希夫碱；和将所述希夫碱转化为仲胺键。
14.本文公开的装置和方法已在体内和体外显示从血浆中有效地去除stnf-rs，对某些癌症肿瘤提供积极的临床效果，同时避免tnf-α从柱渗漏到回输给患者的血浆中的负面影响，如在当前可用的系统中所见。相同的设备和方法适用于其他目标组分和其他病症的治疗条件。
15.在一些方面，本文提供了一种用于从受试者的血液中去除目标组分的吸附剂，该吸附剂包括：包括表面的基质；包括胺键的接头；和包括tnf-α的配体；其中该接头连接到基质和配体上。
16.在一些方面，本文提供了一种用于从受试者的血液中去除tnf受体的吸附剂，其中该吸附剂包括：包括基质表面的基质；和包括单链tnf-α的配体；其中基质表面通过胺键(例如，仲胺键)连接到单链tnf-α。在一些实施例中，该基质表面包括多糖。
附图说明
17.图1描绘了示例性的单采术柱。
18.图2描绘了图1的单采术柱的示例性部分的放大图。
19.图3描绘了包括配体和基质的吸附剂的部分的示例性示意图。
20.图4描绘了通过流动经过配体的流体施加到吸附剂的力的概念图。
21.图5a-5b描绘了配体或其部分从吸附剂解离的概念图。
22.图6描绘了存在于柱流出物中的配体的稳定状态的数量的示意图。
23.图7描绘了存在于柱流出物中的配体在启动期间的数量的示意图。
24.图8a-8b描绘了根据本公开的某方面的包括三聚体的配体的示意性示例。
25.图9描绘了根据本公开的某些方面的2级柱。
26.图10a描绘了其中使用溴化氰来制备琼脂糖基质的过程。
27.图10b是由cnbr形成的氰酸酯与胺r-nh2反应以将配体连接至琼脂糖的化学方程式。
28.图10c是用于将配体连接至预先用n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)活化的琼脂糖的化学
方程式。
29.图10d是用于通过与先前在琼脂糖表面上形成的酰基咪唑形成胺键而将配体连接至琼脂糖的化学方程式。
30.图11是显示两种基本类型的生化键合化学的键能的条形图。
31.图12是用于使用氰基硼氢化钠(nacnbh3)将配体的伯胺连接到基质的示例性化学方程式。
32.图13描绘了通过酰胺键连接到丙烯酰胺基质的tnf配体(每对的左栏)和通过胺键连接到琼脂糖基质的tnf配体(每对的右栏)的渗漏率的基准测试的示例性比较。每种流速的丙烯酰胺和琼脂糖渗漏率之间的差异是显著的(p《0.05)。
33.图14描绘了比较用酰胺键连接至基质的单链tnf配体(sctnf)(txl、tx2和tx3)和用胺键连接至基质的sctnf配体(tx4、tx5、tx6和tx7)的实验数据的图。
具体实施方式
34.以下描述公开了单采术柱及其部分的实施例。在某些实施例中，柱与单采术机器结合使用，例如目前在献血中心使用的机器之一。典型的机器从患者身上提取全血并将血液分离成血液组分，例如红细胞、血小板和白细胞以及血浆。血液组分之一，例如血浆，可以通过柱从而去除目标物质。然后将处理过的血液组分和剩余的血液组分整合并重新引入患者的血流中。
35.下面阐述的详细描述旨在作为对主题技术的各种配置的描述，而不是旨在表示主题技术在实践中的唯一配置。附图并入本文并构成详细描述的一部分。详细描述包括具体细节，目的是提供对主题技术的透彻理解。然而，对于本领域的技术人员来说显而易见的是，可以在没有这些具体细节的情况下实践主题技术。在某些情况下，众所周知的结构和组成以框图形式显示以避免混淆主题技术的概念。为了便于理解，相似或基本相似的组成标有相同的元件编号。
36.如在本公开中所使用的，术语“患者”是指具有循环系统的任何脊椎动物生物体。患者可以是人。患者也可以是动物，例如狗或猫或任何其他哺乳动物。
37.如本公开中所使用的，术语“流体”是指组合物，其可包含一种或多种可混溶和/或不可混溶的液体组分、一种或多种溶解的气态组分和一种或多种固体或半固体组分。流体可以是生物流体，例如血液、血液组分或其一部分，例如血浆或血清，其可以包含细胞、抗体、细胞因子、肽、蛋白质和分子(例如stnf-rs)中的一种或多种.
38.如在本公开中所使用的，短语“血液组分”是指从血液中可以分离的流体之一，例如通过离心分离。例如，血液可以分离成主要是红细胞的第一种血液组分，主要是血小板和白细胞的第二种血液组分，以及主要是血浆的第三种血液组分，但是其他类型的分离也是可能的，并且包括在这种定义中。
39.如在本公开中所使用的，术语“柱”是指一种设备，来自患者的流体通过该设备，其中该柱包含与该流体相互作用的材料。柱在尺寸和形状上可以具有各种配置并且包括一种或多种吸附剂、基质或配体。
40.如在本公开中所使用的，术语“基质”是指提供结构但不必要与基质附近的材料相互作用的物体。基质或基质表面可包含一种或多种有机材料，例如多糖，并且还可包括一种
或多种无机材料，例如金属、塑料、陶瓷或水。基质可以包括已经通过暴露于物质、处理和/或环境而转化为不同形式的部分，例如氧化物。基质可包括一层或多层，例如涂层或镀层。基质也可称为“支持物”。
41.在某些实施例中，基质包括颗粒(例如，珠子)。如在本公开中所使用的，术语“颗粒”用于描述基质的示例性结构实施例，而不排除其他几何形状或结构。颗粒(例如，珠子)可以是固体形式，例如实心球体，或具有结构，例如中空元件或开孔泡沫。颗粒可以包含简单的几何形状，例如球体或棒状，或更复杂的形状，例如“多臂星形”，例如儿童玩具杰克(child’s toy jack)。在某些实施例中，颗粒可包括旨在与粒子附近的材料相互作用的其他材料，例如配体或催化剂。在某些实施例中，颗粒包括珠子。
42.在某些实施例中，颗粒包括球体。在某些实施例中，包括球体的颗粒具有在约1-600μm范围内的均值、平均或绝对直径。在某些实施方案中，包括球体的颗粒具有在约45-165μm范围内或在约60-200μm范围内的均值、平均或绝对直径。颗粒可以是多孔的或无孔的。在一些实施例中，颗粒是多孔的并且包括具有均值、平均或绝对直径在约10nm至100nm范围内的孔。在一些实施例中，颗粒是纤维素，例如琼脂糖颗粒。在一些实施例中，颗粒是sepharose
tm
颗粒。
43.如本文所述，基质或颗粒(例如，珠子)通常包括表面。在一些实施例中，表面包括一种或多种碳。在某些实施方案中，表面在连接到配体之前包含一种或多种多糖。在某些实施方案中，表面在连接到配体之前包含一个或多个反应性碳。在某些实施方案中，表面在连接到配体之前包含一种或多种氧化多糖。在某些实施方案中，表面在连接到配体之前包含一个或多个醛基团。
44.在某些实施例中，基质或基质表面包含多糖。在某些实施例中，基质或基质表面包含交联多糖。在某些实施例中，基质或基质表面包含中性或带电荷的多糖。在一些实施例中，基质或基质表面包含纤维素(例如，琼脂糖)、木聚糖、葡聚糖、支链淀粉、淀粉等或其组合。在一些实施例中，基质或基质表面被修饰以包含化学活性连接官能团，其可以与配体分子相互作用以形成稳定的化学键。这方面的一个示例是通过将所述基质表面暴露于偏高碘酸钠进行表面活化，这导致甲酰基的形成，甲酰基可以参与含胺配体的还原胺化过程[见表2]。
[0045]
如在本公开中所使用的，术语“表面”包括3d形式的常规外部物理边界以及暴露于或可能接触流动经过和接近基质并且可以连接配体的任意部分基质(例如，不溶性基质)。
[0046]
如在本公开中所使用的，术语“直径”用于识别影响液体流过包含一个以上结构元件实例的体积的结构性实施方案的主要尺寸。在具有简单结构的实施方案中，例如实心球形珠子，直径可以是从一个表面到另一个表面的穿过中心的线的长度的常规定义。在具有内部结构的实施方案中，例如其中单个实例可填充体积的开孔泡沫，直径可以是通过泡沫的通道的平均宽度。在具有复杂结构(例如多臂星形)的实施方案中，直径可以是结构的实例彼此堆叠时的平均中心到中心间距。
[0047]
如在本公开中所使用的，短语“目标组分”是指配体旨在与其相互作用的化学、化合物和/或有机结构。示例相互作用可以包括捕获目标组分。特别地，目标组分可以是希望从通过柱的流体中去除的有机结构。在一些实施方案中，目标组分是可溶性受体，例如可溶性tnf受体。
[0048]
术语“配体”是指具有结合目标组分的亲和力的材料。一个示例是配体上的位点与全部或部分目标组分的结合。在某些实施方案中，配体不可分离地键合到基质上。目标组分与不可分离的键合配体的结合旨在将目标组分保留在基质上。
[0049]
如在本公开中所使用的，术语“可分离的”和“不可分离的”是指在过程中使分子附着于基质的预期功能，这与从该基质释放该分子难易程度有关。连接可以通过化学、物理或机械方式破坏。具有易于破坏的连接的分子且旨在在此过程中释放连接的分子的分子被认为是可分离的。具有相对强连接的分子且旨在在此过程中保留连接的分子的分子被认为是不可分离的。修改该连接，例如通过不可逆的化学变化，可以将可分离的分子转化为不可分离的分子而不影响分子的其他特性。
[0050]
如在本公开内容中使用的，术语“配体”是指有机结构，例如多肽或肽，其包括对目标组分具有结合亲和力的一种或多种元件。元件可包含一种或多种有机结构，例如重组单链tnf-α(sctnf-α)。元件可以串联连接或作为多臂分支连接。元件可以通过包括共价键、离子键、疏水键和范德华力的各种键合机制彼此偶联，并且可以包括化学物质、有机或无机化合物，或处于中间或末端位置的其他元素。配体可以是生物配体，例如天然存在的配体、合成配体(例如，人工制造的，例如，化学合成的)和/或重组产生的配体。
[0051]
在一些实施方案中，配体特异性结合生物受体。在一些实施方案中，配体是可溶性配体(例如，非膜结合的)。在一些实施方案中，配体包括配体的细胞外部分。在一些实施方案中，配体包括配体的受体结合部分。
[0052]
在某些实施方案中，配体包括tnf-α(例如，uniprotkb accession no.p01375)、其受体结合部分、其受体结合变体、其受体结合融合蛋白等及其组合。天然存在的tnf-α包括组装成同源三聚体的三个基本相同的单体，其可以是膜结合的或可溶的。可溶性tnf-α是通过从细胞表面切割tnf-α单体的跨膜部分而自然产生的。膜结合型和可溶性tnf-α均可与其同源受体(即tnfr1(tnf受体1型；tnfrsf1a；cd120a；p55/60)和tnfr2(tnf受体2型；tnfrsf1b；cd120b；p75/80)结合。因此，受体结合不需要tnf-α的跨膜部分。tnf-α二聚体和tnf-α三聚体都可以特异性结合tnfr1或tnfr2，无论受体是以可溶性形式还是膜结合形式存在。tnf-α二聚体可以通过重组表达tnf单体作为与例如抗体的fc部分的融合蛋白来制备，其中fc部分形成稳定的二聚体，进而稳定tnf分子的二聚体构型。
[0053]
在一些实施方案中，tnf-α被重组产生为单链二聚体或单链三聚体，其可以有效地结合tnfrl或tnfr2。单链(sc)tnf-α的非限制性示例包括美国专利no.8,927,205、美国专利申请公开no.us 2011/0162095和us 2014/0056843等，其受体结合衍生物和其受体结合部分，所有这些专利和专利申请公开均通过引用并入本文。
[0054]
在一些实施方案中，配体包括seq id no:1、2和/或3中的一个或多个的人源tnf-α序列、其二聚体、其三聚体或其受体结合部分或其衍生物，如下所示：
[0055]
(sssrtpsdkpvahvvanpqaegqlqwlnrranallangve lrdnqlvvpseglyliysqvlfkgqgcpsthvllthtisriavsyqtkvnllsaikspcqretpegaeakpwyepiylggvfqlekgdrlsaeinrpdyldfaesgqvyfgiial，seq id no:1)-[处理的tnf单体，来自genbank accession no.aqy77150.1]；
[0056]
tnf-α的三聚体形式示例：(mcgshhhhhhgsassssrtpsdkpvahvvanpqaegqlqwlnrra
nallangvelrdnqlvvpseglyliysqvlfkgqgcpsthvllthtisriavsyqtkvnllsaikspcqretpegaeakpwyepiylggvfqlekgdrlsaeinrpdyldfaesgqvyfgiialgggsgggsgggsgggsssrtpsdkpvahvvanpqaegqlqwlnrranallangvelrdnqlvvpseglyliysqvlfkgqgcpsthvllthtisriavsyqtkvnllsaikspcqretpegaeakpwyepiylggvfqlekgdrlsaeinrpdyldfaesgqvyfgiialgggsgggsgggsgggsssrtpsdkpvahvvanpqaegqlqwlnrranallangvelrdnqlvvpseglyliysqvlfkgqgcpsthvllthtisriavsyqtkvnllsaikspcqretpegaeakpwyepiylggvfqlekgdrlsaeinrpdyldfaesgqvyfgiial，seq id no:2)；和
[0057]
tnf-α的另一种三聚体形式示例：(gsassssrtpsdkpvahvvanpqaegqlqwlnrranallangvelrdnqlvvpseglyliysqvlfkgqgcpsthvllthtisriavsyqtkvnllsaikspcqretpegaeakpwyepiylggvfqlekgdrlsaeinrpdyldfaesgqvyfgiialgggsgggsgggsgggsssrtpsdkpvahvvanpqaegqlqwlnrranallangvelrdnqlvvpseglyliysqvlfkgqgcpsthvllthtisriavsyqtkvnllsaikspcqretpegaeakpwyepiylggvfqlekgdrlsaeinrpdyldfaesgqvyfgiialgggsgggsgggsgggsssrtpsdkpvahvvanpqaegqlqwlnrranallangvelrdnqlvvpseglyliysqvlfkgqgcpsthvllthtisriavsyqtkvnllsaikspcqretpegaeakpwyepiylggvfqlekgdrlsaeinrpdyldfaesgqvyfgiial，seq id no:3)。
[0058]
单链tnf-α可包括结构nh2-t
1-l
1-t
2-l
2-t
3-cooh，其中t
l
、t2和t3包含tnf单体、其衍生物或当组装成二聚体或三聚体构型时能够与tnf受体结合的其部分的多肽序列；l1和l2包括单体连接区；nh2代表配体的n端，cooh代表配体的c端。
[0059]
在一些实施方案中，tnf单体的衍生物包括一个或多个保守氨基酸取代，使得当与天然的tnf单体相比，tnf单体的衍生物保留以相对高的亲和力特异性结合tnf受体的能力。保守氨基酸取代可包括氨基酸类似物。
[0060]
在一些实施方案中，配体包括接头或连接元件。如本公开中所用，短语“接头”或“连接元件”是指在两个不同结构(例如，配体和基质；配体和基质表面等)之间偶联的化合物或结构。
[0061]
在一些实施例中，接头包括合适的肽接头。在一些实施方案中，接头包括含有甘氨酸(g)和/或丝氨酸(s)氨基酸的肽接头。在某些实施方案中，肽接头包含一个或多个单元(例如，1至20个单元)的gggs或ggggs，及其组合。在某些实施例中，肽接头包含(gggs)n或(ggggs)n，其中n为1、2、3、4、5或6。在一些实施例中，一个或两个单体缺少连接区域，或包括单一的共价键。
[0062]
在一些实施方案中，接头包括一个或多个彼此共价键合的碳。
[0063]
在某些实施方案中，tnf-α配体或其单体包括tnf-α配体或其单体的受体结合部分。tnf-α配体的衍生物或单体的受体结合能力可以使用合适的方法来确定，其非限制性示
例包括使用板包被的重组tnf受体(例如，fc受体)和标记的(例如，组氨酸标记的、flag标记的)重组tnf-α配体的elisa，或使用表达tnf受体的细胞的基于流式细胞术的方法，该方法包括使该细胞与标记的重组tnf-α接触。随后的结合检测和/或定量可以使用针对标记的配体的标签抗体进行。这样的方法在本领域被认为是常规的。使用此类传统方法，无需过多实验即可测试包括保守氨基酸取代、添加或缺失的重组tnf-α配体的受体结合能力。
[0064]
因此，在一些实施方案中，tnf-α配体或其受体结合衍生物或变体是以至少约1x10-6
、1x10-7
、1x10-8
或1x10-9
的亲和力(kd)结合其同源受体的配体。在某些实施方案中，配体包含tnf-α、其受体结合二聚体、其受体结合三聚体、或其受体结合衍生物或部分，其以至少约1x10-6
、1x10-7
、1x10-8
或1x10-9
的亲和力(kd)特异性结合其同源受体(例如tnfr1或tnfr2)。在某些实施方案中，配体包括人tnf-α、其受体结合二聚体、其受体结合三聚体或其受体结合衍生物或部分，其以至少约1x10-6
、1x10-7
、1x10-8
或1x10-9
m的亲和力(kd)特异性结合其同源受体(例如人tnfrsf1a或人tnfrsf1b)。
[0065]
术语“特异性结合”或“特异地结合”是指优先于结合其他分子或其他肽而结合目标组分(例如，受体)的配体，如通过例如合适的体外实验(例如，elisa、免疫印迹、流式细胞术等)所确定。特异性结合相比于非特异性结合的区别为约2倍或更多、约10倍或更多、约100倍或更多、1000倍或更多、10,000倍或更多、100,000倍或更多，或1,000,000倍或更多。
[0066]
如在本公开中所使用的，短语“结合”或“结合元件”是指将连接到目标组分的化合物或化学结构(例如，配体或配体)。在tnf-r目标组分的示例中，结合元件可以是包括对tnf-rs具有亲和力从而结合至tnf-rs的位点的部分tnf。
[0067]
如在本公开中所使用的，术语“渗漏”是指配体或其部分从吸附剂或基质中损失或分离(例如，解离)。
[0068]
如在本公开中所使用的，术语“有毒的”是指通过柱的出口流出的流体含有一定量的被认为具有不可接受的风险的物质。如果血液是从患者那里收集并经过处理然后回输给患者的情况下，则经过处理的血液中的某种物质的水平将充分高于从患者那里收集的血液中的物质水平，如果回输给患者会被认为是对患者的风险。
[0069]
图1描绘了根据本公开的某些方面的示例性单采术柱100。柱100包括主体110，主体110包括具有入口130和出口134的隔室120。在图1的示例中，隔室120通常是直圆柱体，其中入口130和出口134都是平面圆盘。在某些实施例中，隔室120的横截面形状可以是椭圆形、矩形或其他规则或不规则或非平面几何形状。在某些实施例中，入口130和出口134之一或两者的尺寸和形状可以不同于隔室120的标称横截面的尺寸和形状。
[0070]
隔室120具有从入口130到出口134的理想流动路径140，其在图1的示例中是一条直线。在某些实施例中，流动路径140可具有弯曲部分、拐角或其他几何特征。隔室120在沿流动路径140的点处具有垂直于流动路径140的横截面积。在某些实施例中，隔室120可在沿流动路径140的不同点处具有不同的横截面积。
[0071]
在某些实施例中，流体进入入口端132并被输送到入口130。类似地，在某些实施例中，从出口134出来的流体被输送到出口端136。在使用中，柱可以定向在任何方向，包括倒置，从而图1中的重力方向可以在任何方向。
[0072]
在某些实施方案中，入口130和出口134之一或两者包括多孔晶片，通常称为“玻璃料”，其通过将聚乙烯珠熔化在一起而制成。选择珠子的直径和压缩程度以产生平均孔径。
在某些实施例中，平均孔径为20微米。在某些实施例中，玻璃料通过烧结包含金属或陶瓷的珠子而形成，具有相同的效果。
[0073]
通常希望为玻璃料选择平均孔径，该孔径允许进入流体中存在的最大元件通过入口130和出口134，从而避免柱100的堵塞。还希望选择将诸如图2的珠子150之类的基质保留在隔室120内的平均孔径。
[0074]
图2描绘了根据本公开的某些方面的图1的单采术柱100的示例性部分的放大图，在图1中标识为“a”。在某些实施例中，隔室120至少部分地填充有基质，例如图2中所示的多个珠子150。在某些实施例中，珠子150是球形的，其直径可以在10-10000微米、20-1000微米、30-500微米、40-250微米、45-165微米、75-125微米的范围内或其他直径范围内。在某些实施例中，珠子150可具有25、50、75、100、125或150微米的共同标称直径或其他标称直径。在某些实施例中，珠子150可包括多个标称直径。
[0075]
当流体从入口130流向出口134时，流体的实际流动路径将是回旋路径，例如通过珠150床的路径142。路径142的长度通常长于理想流动路径140的长度。可以计算或估计路径142的长度。
[0076]
在某些实施例中，隔室120可以包含包括开孔泡沫的基质。基质的单个实例可以填充隔室120或整个横截面面积和部分长度的隔室120。在这种情况下，基质的“直径”可以是通过泡沫的通道的平均宽度，因为该通道宽度将决定液体通过基质的流速，以类似于球形珠子的直径如何决定液体通过填充有珠子150的隔室120的流速的方式。类似地，通过开孔泡沫的实际流动路径将是盘旋的并且与理想的路径140(如珠子150的示例所描述的)具有大体相同的关系。
[0077]
柱100的流速可以使用真实路径142或理想流动路径140中的任一者来计算。这种长度不同的一个影响是沿着路径142的平均速度将高于使用理想化路径140计算的平均流体速度。第二，沿着路径142的瞬时速度可能变化。路径142穿过具有基于珠子150的局部填充安排的可变开口面积的通道。即使不是不可能，也很难准确地预测沿着通过柱100的隔室120的实际众多流动路径142的每个点的实际流速。检测速度相关特性的实验，例如配体的渗漏，必须按照图6进一步讨论的那样进行。
[0078]
图3描绘了部分吸附剂151的示例性示意图。在该示例中，吸附剂151包括基质152和基质表面154。在某些实施方案中，基质表面154是材料的氧化形式形成基质152。在其他实施例中，不存在基质表面154并且基质152的材料暴露在该表面上。在其他实施例中，基质表面154由包括与基质152的材料不同的材料的涂层代替。
[0079]
在某些实施例中，基质表面154连接至配体，该配体已被选择以结合要从流体中去除的目标组分。在某些实施方案中，该流体是血液或其部分例如血浆，待除去的目标组分是tnf受体，并且配体结合到部分tnf受体。
[0080]
柱100的尺寸可以部分地基于路径长度(图2的140或142)的选择以提供流体和配体之间的所需的接触时间。假定存在多个实际流动路径142，每个可能具有不同的长度，则沿着每个路径142的实际接触时间可能相应地不同。所需的接触时间通常是最短接触时间。结合流速和横截面积使用理想路径140的长度将为柱100提供最短接触时间。
[0081]
在某些实施方案中，配体包括一种或多种偶联至基质表面154的配体300。在该示例中，目标组分是可溶性tnf受体并且配体300包括tnf-α三聚体310。在某些实施方案中，配
体300包括偶联在三聚体310和基质表面154之间的接头320。在某些实施例中，官能团330可以布置在配体300内。
[0082]
在图3的示例性配体300中，三聚体310和接头320之间有键350，接头320和官能团330之间有键352，官能团330和表面涂层154之间有键354。一些配体可能具有额外的内部结构的同时，其他配体可能会省略其中的某些结构。配体300的这种结构仅作为示例来说明概念，其不限于具体结构。在某些实施例中，键354可以直接位于接头320和表面涂层154之间。键350、352、354可以是单或双离子键或共价键。键350、352、354中的每一个都具有键强度，其中施加超过键强度的力将破坏键。
[0083]
不同类型的键具有不同的强度。表1(来源：t.l.cottrell,the strengths of chemical bonds,2d ed.,butterworth,london,1958；b.deb.darwent,national standard reference data series,national bureau of standards,no.31,washington,1970；s.w.benson,j.chem.educ.42:502(1965)；和j.a.kerr,chem.rev.66:465(1966))列出了各种元件之间的键强度的选定值。键强度受键的类型和周边化学结构的影响，其影响方式可能出乎意料。例如，表1的第1行说明碳-氮键的键强度大于当碳连接有第二个氮且该氮连接有氧时的相同键的强度。同样，碳和氧之间的双键(第5行)比单键(第4行)弱。因此，不能仅根据键强度来预测渗漏。表1
–
键解离能键δhf
298
(kj/mol)c-n770nc-no121n-o630c-o1077c＝o749oc＝o532
[0084]
回到图3，键354的强度可能是有关配体渗漏的限制方面。加强键354可以减少渗漏。在加强配体至基质的键的示例中，使用多糖基质并氧化基质表面，例如使用无机盐如偏高碘酸钠(naio4)。然后将基质暴露于配体，于是配体的伯胺与氧化的基质表面层形成希夫碱。这是一个相对较弱且可逆的双键。通过暴露于温和的还原剂，例如氰基硼氢化钠(nabh3cn)，该键被转化为不可逆单键，例如胺键。
[0085]
图4描绘了根据本公开的某些方面的通过流过配体300的流体施加到示例配体即配体300的力的概念示图。流体流动的特性取决于许多因素，例如流体的粘度、悬浮在流体中的固体或半固体组分、以及流体和基质表面154之间的粘附。在某些实施例中，流体的流动可以是层流的，特别是紧邻基质表面154，具有与距基质表面154的距离相关的速度梯度。在某些实施方案中，流体的流动可以是部分湍流的。
[0086]
根据流体流动的特性，力被施加到配体300的任何结构，例如三聚体310、接头320或官能团330。这些力之后可以在配体300的键处产生剪切力和力矩。在图4的概念结构中，剪切力fs1和力矩m1在键354处产生，剪切力fs2和力矩m2在键352处产生，剪切力fs3和力矩m3在键350处产生。
[0087]
图5a描绘了根据本公开的某些方面的配体300的内部键断裂的概念示图。在该示
例中，图4中所示的剪切力fs3或力矩m3之一(如图4所示)已经在键350中产生超过该特定键强度的应力。当这种情况发生时，键350“断裂”并且包含部分三聚体310的配体片段301与配体300的剩余部分分离。在某些实施例中，断裂350a可能位于接头320的界面处而在其他实施例中，该断裂可能发生在三聚体310的界面处或中间位置处。通常，降低示例配体(配体300)附近的流体速度将减少配体渗漏到流体中。
[0088]
在图4的剪切力fs2和m2在键350断裂之前超过键352的强度的情况下，则键352将首先断裂。这将导致几乎相同的情况，其中分离的片段301包含原始配体300的较大部分。在这两种情况下，分离的部分302包括部分三聚体310。
[0089]
图5b描绘了根据本公开的某些方面的配体300和基质表面154之间的键断裂的概念示图。在该示例中，断裂354a可以在官能团330和基质表面154之间。在其他情况下，部分基质表面154可能已经从剩余基质表面154脱离或官能团330中的键可能是分离点。在所有情况下，整个配体300被认为已经作为部分302与珠子150分离。在配体300包括tnf-α的情况下，分离的片段301、302可以被认为是sctnf-α。
[0090]
图6描绘了根据本公开的某些方面的曲线示图600，基于通过柱的液体流速，流出物(即源自柱的“渗漏”)中存在的配体的稳态数量。这种类型的实验可用于确定柱的特定设计方面，例如隔室的横截面积和颗粒类型、几何形状和尺寸(例如，珠子直径)。由于配体最弱键的强度取决于配体的结构以及其与基质的结合方式，并且隔室内的局部流体速度因基质类型而异，因此没有从基质分离配体的标准速度阈值。流出流体中配体的数量的确定可以使用合适的实验室过程来确定，例如分析色谱法，选择该过程以检测渗漏的部分配体。在图3的示例配体中，优选检测三聚体310，因为它将存在于从基质152解离的配体300的任何片段中。
[0091]
在概念上，并且不受理论的束缚，图6说明了不含任何配体的流体，该流体在一定流速范围内流入柱中，并且在流出柱的流体中检测配体的水平。流速高达v1时，流出流体中没有可测出的配体数量。高于该流速时，流出物中的配体数量开始增加，表明在柱隔室内某个位置的局部流体速度已超过阈值，在该阈值时在配体的键之一上产生的力正超过该键强度，从而使配体或配体或其部分与基质解离。
[0092]
从概念上讲，流出物中的配体数量可以线性增加，或者如图6所示，当局部流体速度超过阈值时在体积增加的隔室中呈指数增加。在某些情况下，曲线610中可能存在不连续性(图6中未显示)，例如由改变流动路径并在相同总流速下产生更高局部速度的基质机械压缩引起。
[0093]
在这个示例中，处于或高于v2流速的流出流体中存在的配体的数量被认为是“有毒的”。在低于有毒的水平的情况下可测量的配体的数量，例如在流速高于v1而低于v2时流体中存在的数量，可能是可接受的。在某些实施例中，选择流出流体中可接受的配体的预定水平。
[0094]
图7描绘了根据本公开的某些方面，在启动期间柱的流出物中存在的配体的数量的曲线示图700。曲线710描绘了当泵在时间t1启动时，通过柱的流速。本示例中的泵创建了一个接近阶跃函数的流量曲线，它急剧上升到目标流量(右侧的y轴)。即使柱预先填充有流体，该流动曲线也可能在柱内产生瞬态压力波，这可能会在配体上产生剪切力和力矩，参考图4所述，它们大于稳定状态量级。因此，与稳定状态流动期间相比，柱隔室中配体的键强度
可能被超过很多，导致在初始流出物中分离的配体片段激增，如曲线720所示。流出流体中的配体数量描绘在曲线720中，其对应于左侧y轴)，该曲线在时间t2处达到峰值，然后降低至与曲线710的稳定状态流速相当的稳态水平。在该示例中，毒性水平730高于稳态值但曲线720的激增超过毒性值。
[0095]
可以通过控制泵的加速以缓慢上升到目标流速而在流出物中配体水平没有激增来避免这种激增效应。可接受的上升速率取决于几个因素，例如流体的粘度、入口和出口的孔径、色谱柱横截面积和珠子尺寸。在某些实施方案中，如果配体水平增加的初始流体被转移并且不回输到患者体内，则该激增可能是可接受的。
[0096]
回到图1的柱100的考量，考虑到启动时压力或流量的激增，可能需要某些特征来减轻或避免这些影响。在某些实施方式中，入口130和等效的出口134可相对于柱100的主体110移动。在某些实施方式中，弹簧(图1中未示出)向入口130施加偏置力。在某些实施方式中，在入口130的周边和主体110的内壁之间存在滑动密封，以防止流体绕过入口130。在某些实施方案中，存在靠近入口130周边密封的通道(图1中未显示)，通道通过入口130相对于主体110的位移而未被覆盖，从而允许流体在入口130周围旁路流动。这种旁路流动可以减少冲击压力激增，这将结合图7进一步讨论。
[0097]
在某些实施例中，流体流过隔室120的方向是“向上”，即与重力相反，并且流动的流体可能导致图2的部分珠子150彼此分离，例如，“漂浮”。施加到出口134的足够偏置力可防止这种分离并促进柱100在“倒置”位置的正确操作。
[0098]
在某些实施例中，启动期间的流体激增可在隔室120中产生压力波，该压力波压缩图2的珠子150，导致柱100的性能永久退化。入口130在流动方向上的移动可以使入口130与流动控制件(图1中未示出)接触，流动控制件掩盖入口130的多孔区域的部分从而限制经过入口130的流动。在初始流速激增的情况下，这种限制可以限制隔室120内流体速度的上升速率，从而避免珠子150的压缩。或者，出口134在流动方向上的移动可以通过允许在压力激增期间分离珠子150来避免压缩珠子。在这两种情况下，在压力激增消散后，弹簧将入口130或出口134返回到原始位置。
[0099]
图8a描绘了根据本公开的某些方面的包含三聚体810的配体800的示意性示例。三聚体810具有有机结构的三个单体812，例如tnf-α，彼此靠近排列。每个单体812包括一个或多个位点，该位点具有一种将耦合至流体的部分目标组分的结构，例如血浆中的tnfr1，其接近单体812。单体812a通过接头结构832耦合到基质830，该接头结构形成至单体812a和基质832的每一个的化学键(例如离子键或共价键)。单体812b和812c通过电磁引力，例如范德华力或氢键，耦合至812a。与离子键或共价键不同，电磁吸引力不是由化学键产生的，并且相对较弱，因此更容易受到干扰。因此，在比将单体812a与基材832分离所需的作用力水平更低的水平下，单体812b和812c可以与单体812a分离。
[0100]
图8b描绘了根据本公开的某些方面的包含三聚体860的配体850的示意性示例。三聚体860具有有机结构的三个单体812，例如tnf-α，彼此通过接头833偶联以形成单链结构，该单链结构在单体812其中之一的一端通过接头结构832偶联至基质830。由于接头832、833与每一侧的结构形成化学键，因此需要比从基质830分离配体860的任何部分(例如单体812之一)更高水平的作用力将配体800的一部分(例如单体812b或812c)与基质830分离。因此，与在相同条件下(例如流体粘度和相对速度、温度、基质组成和单体结构)的一部分配体800
的渗漏相比，以这种形式形成三聚体860提供了对配体850的一部分渗漏到靠近基质832流过的流体中的增强的阻力。
[0101]
图9描绘了根据本公开的某些方面的2级柱900。在某些实施方案中，第一级901通常是图1的柱，具有外壳110，包含第一基质910的隔室120，例如将捕获流入入口端132的流体组分的配体。出口端136耦合到第二级902的入口端132b，第二级具有包含具有第二作用(例如捕获从基质910分离的配体片段)的第二基质920的隔室120b。第二级902是意在降低基质910的配体存在于流出出口端136b的流体中的风险。
[0102]
表2(来源：g.t.hermanson et al.,immobilized affinity ligand techniques,academic press,inc.,1992harcourt brace&company)列出了抗体免疫球蛋白g(igg)的漏出或“渗漏”，该抗体免疫球蛋白g连接在包含琼脂糖的支持物上，琼脂糖是分子生物学中经常用于通过电泳分离大分子的多糖聚合物。igg用碘125(
125
i)标记，这是一种通常在放射免疫测定和其他涉及体外蛋白质的伽马计数过程中用于标记抗体的放射性同位素。使用不同的方法将标记的igg连接到琼脂糖上，如图10a-10d中所述。以每分钟计数(cpm)测量，针对样本和在28天内从基质渗漏的igg测量初始放射性量，然后进行比较以提供标准化比较。表2
–
通过各种耦联方法制备的固定化igg亲和支持物中
125
i标记的igg渗漏**表2中使用的“r”是蛋白质或多肽。
[0103]
从表2中可以看出，标准化渗漏在使用胺将配体连接至基质的各种方法中变化了一个数量级。表中的第一个条目与图10a-10b中描述的过程相关。cnbr-琼脂糖、cdi-琼脂糖和还原胺化的渗漏率都相似，尤其是考虑到这些是本质上具有标准偏差范围的实验测量时。基于这种类型的基准表征，结合类型之间的微小差异并不能预测还原胺化会产生比其他连接方法明显更少的渗漏。这与在图14的数据中观察到的渗漏大量减少(2个数量级)形成对比并在下面进一步讨论。
[0104]
图10a描绘了根据本公开的某些方面，其中使用溴化氰(cnbr)来制备琼脂糖基质的过程。琼脂糖暴露于氢氧化钠(naoh)，氢氧化钠与琼脂糖上的羟基反应形成氰酸酯m-o-c-n≡c。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但可能是形成希夫碱然后通过用氰基硼氢化钠处理以还原胺化进行转化产生更高强度的键。
[0105]
图10b是cnbr形成的氰酸酯与r-nh2的胺反应以通过形成异脲衍生物将蛋白质配体连接到琼脂糖上的化学方程式，其与表2的第一条目有关。
[0106]
图10c是通过与nhs酯形成胺键，将蛋白质配体连接到预先用n-羟基琥珀酰亚胺
(nhs)活化的琼脂糖的化学方程式，这与表2的第四条目有关。
[0107]
图10d是通过与先前在琼脂糖表面上形成的酰基咪唑形成酰胺键而将蛋白质配体连接至琼脂糖的化学方程式。
[0108]
图11是根据本公开的某些方面的键能图1000，两种基本类型的生化键化学-胺和酰胺，以千焦耳每摩尔(kj/mol)测量。数据来自i.i.marochkin et al.，酰胺键的解离焓值：effect of substitution on nac bond strength,comp and theo chem 991(2012)182 191,和j.lalev
é
e et al.,n-h and r(c-h)bond dissociation enthalpies of aliphatic amines,j.am.chem.soc.2002,124,9613 9621。虽然胺的平均键能低于酰胺的键能，但酰胺的散射1020比胺的散射1010宽得多。因此，人们不会期望两种化学物质的实际键能不同。
[0109]
基于现有的实验室数据，在表1和图11中提供的示例，不可能基于化学或制备序列预测配体与基质的连接强度。基于图11的教科书数据，人们会认为胺键比酰胺键弱。
[0110]
图12是根据本公开内容的某些方面的用于将蛋白质配体连接至基质的示例性化学方程式。例如包含多糖的基质表面已经被氧化以在基质表面上产生甲酰基。暴露于伯胺会在表面产生希夫碱，这种键很容易可逆，因此不适合作为与基质的不可分离键。随后暴露于氰基硼氢化钠(nabh3cn或nacnbh3)会将希夫碱转化为强的不可逆仲胺键。
[0111]
图13描绘了根据本公开的某些方面的基质和结合类型的两种组合的基准测试渗漏率的示例性比较1300。左侧的一组的柱是使用丙烯酰胺珠子的柱进行测量，其中使用酰胺键将tnf-α配体连接至珠子。右侧的一组柱是使用琼脂糖珠子的同一柱进行测量，其中使用胺键将tnf-α配体连接到珠子，例如由图12的方程式形成。“丝(whisker)”条表示对各个列的数据集进行多次测量的统计散点。可以看出，与图11所示的趋势相反，胺键允许较少的渗漏，即已形成配体与基质的更强连接。值得注意的是，与单个多肽的多重连接可以增加整体键强度，所述多肽具有两个或更多个连接至基质表面的连接。这种可能性在此示例中被降低了，因为在胺连接的情况下，总容量超过结合配体的摩尔量七倍(数据未显示)，相比之下，在酰胺连接的情况下，总容量超过10倍。因此，每种情况下的配体密度都大大低于可用的活性位点。两个系统之间的差异对于所有流速都具有统计学意义(p《0.05)。在不同的流速下测量了渗漏，表明对于结合类型和基质的两种组合，在较低流速下渗漏率均明显降低。
[0112]
图14描绘了根据本公开的某些方面的比较两个系统的渗漏的实验数据的图1100。去除stnfr的治疗在单个患者的六个连续疗程中重复施用，疗程数据按时间顺序由组tx1-tx6显示。该处理使用tnf-α作为本文公开的柱中的配体，因此流出物中的sctnf-α是渗漏的指标。在每个疗程期间，以30分钟的间隔(每个处理5次)对处理过的血浆(柱的流出物)中的sctnf-α水平进行采样，测量并绘制为条形柱1110。前三个疗程(tx1-tx3)在组1120中，使用柱系统a进行，该柱系统包含通过酰胺键与基质结合的配体。可以看出，在tx1-tx3期间流出物中sctnf-α的初始水平(d1)在250-350皮克/微升(pg/ml)的范围内，随后的水平在每次治疗过程中单调下降达到最终水平20-40mg/pl范围内。1130组的疗程tx4-tx7，使用如本文所述的柱系统b进行，其中系统b包括具有氧化表面的基质和通过不可逆仲胺键结合到基质上的相同配体。每个疗程tx4-tx7流出物中sctnf-α的所有五项测量值均低于20pg/ml，大多数低于5pg/ml。
[0113]
渗漏速率是当血液成分流过包含吸附剂的柱时，在一段时间内从基质解离的配体
的量。渗漏率通常由一段时间后柱流出物中检测到的配体量决定。初始渗漏速率是在配体与血液制品以预定流速(例如，10ml/分钟)首次接触预定时间段(例如，1至10分钟)后测量的渗漏速率。可以使用合适的单采术系统测量渗漏率，该系统包括含有配体的柱，其中患者的血液或血液组分(例如，血浆或血清)流过该柱。可使用合适的检测方法确定渗漏率或初始渗漏率。
[0114]
在某些实施方案中，吸附剂包括抗从基质表面解离的配体。可以通过测量渗漏率或初始渗漏率来确定配体与基质的解离。在某些实施方案中，配体包含将配体连接至基质的键(例如，胺键)。在某些实施方案中，配体包含将配体连接至基质的接头。在一些实施方案中，通过胺键或通过包含胺键的接头连接至基质的配体比通过另一种类型的键连接至基质的配体更耐解离。在某些实施方案中，相对于通过选自酰胺键、双键、三键、nc-no、c-o、c＝o、oc＝o、oc-n、n-n、n＝n、s-s等或其组合连接到相同基质的相同配体，配体对从基质解离的抗性高至少2倍、至少5倍或至少10倍。在某些实施方案中，相对于包括通过酰胺键或包含酰胺键的接头连接到相同基质的相同配体的另一配体，配体对从基质解离的抵抗力高至少2倍、至少5倍或至少10倍。
[0115]
在某些实施方案中，本文描述的配体表现出配体基质的初始渗漏速率在10ml/min的流速下小于约50pg/ml、小于约10pg/min、小于约7pg/ml、小于约5pg/min，或小于约2pg/ml。在一些实施例中，本文所述的配体表现出当以10ml/min的流速测量约1至10分钟、1至5分钟或约2-3分钟的时间段时，配体从基质的初始渗漏率小于约50pg/ml、小于约25pg/ml、小于约20pg/ml、小于约10pg/ml或小于约5pg/ml。
[0116]
所公开的血液过滤柱的示例是在通过从血液中去除特定血液组分(例如stnf-rs)来治疗患者的背景下呈现的，从而使患者的免疫系统能够识别和攻击某些被stnf-r掩盖的肿瘤。通过仔细控制柱内的流体速度以避免对配体造成机械损伤，可以防止配体(尤其是本示例中的tnf-α)渗漏的先前限制性副作用。随着这种遗留风险的消除，使用这种形式的单采术成为一种可行且安全的方法来治疗已证明用其他疗法难以治疗的病症。
[0117]
本技术包括被提供以使本领域普通技术人员能够实践本文描述的各个方面的描述。虽然前面已经描述了什么被认为是最佳模式和/或其他示例，但是应当理解，对这些方面的各种修改对于本领域技术人员来说将是显而易见的，并且本文定义的一般原理可以应用于其他方面。应当理解，所公开的过程中的步骤或框的特定顺序或层级是示例性方法的说明。基于设计偏好，可以理解过程中步骤或块的特定顺序或层次结构可以重新排列。随附的方法权利要求以示例顺序呈现各个步骤的元素，并不意味着限于呈现的特定顺序或层次结构。因此，权利要求不旨在限于本文所示的方面，而是符合与权利要求表述一致的全部范围。示例性实施方案
[0118]
在一个实施方案中，柱具有带横截面积的隔室、具有一定直径并设置在隔室内的珠子，以及与珠子偶联并被选择以结合组分的配体。选择横截面积和珠子直径以保持隔室内的流体流速低于第一阈值。所述配体可包含配体，其中配体可包含tnf-α或其部分或功能片段或功能变体，或tnf-α的三聚体。可以选择第一阈值以便将流出出口的流体中的配体的数量维持在预定水平以下。可以选择第一阈值以便将流体作用到配体的力维持在第二阈值以下，从而减少配体渗漏到流体中。配体可以包括具有强度的键并且将该力维持在第二阈
值以下可以避免破坏该键。珠子可包含琼脂糖并且键可包含胺键。该力可以包括剪切力和力矩中的一个或多个，并且第二阈值可以包括与剪切力相关的第三阈值和与力矩相关的第四阈值中的一个或多个。隔室还可以包括入口、出口和从入口到出口的流动路径，其中流动路径的长度可以被选择以提供流体和配体之间的接触时间。珠子可包括多个珠子。配体可包含分别偶联至多个珠子中每个的多个部分配体。配体可以不可分离地偶联至珠子。
[0119]
在一个实施方案中，一种方法包括以下步骤中的一个或多个步骤：从患者接收血液，将血液分离成至少两种血液组分，使其中一种血液组分的一部分通过具有横截面积并且包含多个珠子的隔室，所述珠子具有一定直径，配体偶联至所述珠子并且被选择以结合所述组分，其中选择横截面积和珠子直径以保持隔室内的血液组分的流速低于第一阈值，将至少两种血液组分混合在一起，并将混合的血液组分回输患者。可以选择第一阈值以便将流体作用到配体的力维持在第二阈值以下。配体可以包括具有强度的键并且将该力维持在第二阈值以下可以避免破坏该键。该力可以包括剪切力和力矩中的一个或多个，并且第二阈值可以包括与剪切力相关的第三阈值和与力矩相关的第四阈值中的一个或多个。配体可以不可分离地偶联至珠子。
[0120]
在某些实施方案中，配体包含一个或多个接头或接头元件。
[0121]
接头可以共价连接到基质表面和配体上。在一些实施方案中，接头包括至少一个碳(例如，基质表面的碳)和至少一个氮(例如，配体的氮)。在一些实施方案中，接头的至少一个碳衍生自基质表面。在一些实施方案中，接头的至少一个碳衍生自基质表面的甲酰基。在一些实施方案中，接头的至少一个氮源自配体。在某些实施方案中，接头的氮衍生自配体的伯胺。在某些实施方案中，接头包含至少两个碳和一个氮。在某些实施方案中，接头包含一个碳和一个氮。在某些实施方案中，接头包含单个共价键，其将衍生自基质表面的碳偶联至衍生自配体的伯胺的氮。在一些实施方案中，接头不包含氧。在某些实施方案中，接头不包含双键或三键。在某些实施方案中，接头不包含羰基。在某些实施方案中，接头不包含硫。在某些实施方案中，吸附剂包含一个或多个接头(例如，多个接头)。在一些实施方案中，接头包含如下所示的结构(i)：其中m是基质或基质表面(例如，琼脂糖珠)，r是配体(例如，sctnf-α)，并且r2不存在、是烷基、取代的烷基、单糖或ch2。在某些实施方案中，接头包含结构m-r
2-ch
2-nh-r
3-r或m-ch
2-nh-r，其中m是基质或基质表面(例如，琼脂糖珠)，r是配体(例如，sctnf-α)，并且r2和r3中的每一个独立地不存在、是烷基或取代的烷基。在一些实施方案中，m(以上结构(i)的)或r2包含单糖、多糖或纤维素。在某些实施方案中，r2存在时，不是o(氧)。在一些实方案中，r3包含氨基酸或氨基酸侧链。在某些实施方案中，基质或基质表面通过胺(例如，仲胺)连接至配体。
[0122]
在一个实施方案中，吸附剂包括基质、接头和配体，其中接头连接到基质和配体上，从而将基质偶联到配体上。
[0123]
在一个实施方案中，柱包含隔室，其中颗粒布置在隔室内，该颗粒包含颗粒和结合至基质的配体，配体包含至少两个单体，每个单体包含将结合目标组分的位点，两个单体之间的第一接头，和一个单体与基质之间的第二接头。
[0124]
在一个实施方案中，一种方法包括以下步骤中的一个或多个：从患者接收血液，将血液分离成至少两种血液组分，使一种血液组分的一部分靠近配体，所述配体包含至少两种单体，两种单体各自包含将偶联至组分的位点和通过两个单体之间的化学键偶联的第一接头和通过单体之一和基质之间的化学键偶联的第二接头，将至少两种血液组分混合在一起，将混合后的血液组分回输给患者。
[0125]
在一个实施方案中，一种方法包括以下步骤中的一个或多个：氧化基质，在包含部分tnf-α的配体和氧化的基质之间形成希夫碱，以及将希夫碱转化为仲胺键.
[0126]
如果有标题和副标题的话，只是为了方便而使用，并不限制本发明。
[0127]
除非特别说明，否则以单数形式提及元素并不意指“一个且仅一个”，而是“一个或多个”。使用冠词“一”和“一个”应被解释为等同于短语“至少一个”。除非另有特别说明，术语“一组”和“一些”是指一个或多个。
[0128]
本公开中使用的诸如“顶部”、“底部”、“上部”、“下部”、“左”、“右”、“前”、“后”等术语应理解为指到任意参考系，而不是普通的引力参考系。因此，顶面、底面、前表面和后表面可以在重力参照系中向上、向下、对角或水平延伸。
[0129]
阳性代词(例如，他的)包括阴性和中性(例如，她和它的)，反之亦然。贯穿本公开描述的各个方面的元素的所有结构和功能等价物，其为本领域普通技术人员已知或日后变得已知，通过引用明确地并入本文，并且旨在包含在权利要求中。此外，本文所公开的任何内容均无意公开给公众，无论此类公开是否在权利要求中明确叙述。权利要求的内容不得根据35u.s.c.
§
112,sixth paragraph的规定进行解释，除非该元素使用短语“方法”明确叙述，或者在方法权利要求的情况下，该元素使用短语“操作”来叙述。
[0130]
诸如“方面”的短语并不暗示这样的方面对于主题技术是必要的或者这样的方面适用于主题技术的所有配置。与一个方面有关的公开可适用于所有配置，或一个或多个配置。诸如方面的短语可以指一个或多个方面，反之亦然。诸如“实施方案”的短语并不意味着这样的实施方案对于主题技术是必要的或者这样的实施方案适用于主题技术的所有配置。涉及一个实施方案的公开可以适用于所有实施方案，或者一个或多个实施方案。诸如实施方案的短语可以指代一个或多个实施方案，反之亦然。
[0131]
此处使用的词“示例性”是指“用作示例或说明”。本文中描述为“示例性”的任何方面或设计不一定被解释为优于或优于其他方面或设计。
[0132]
本公开中所描述的各个方面的元素的所有结构和功能等价物，其为本领域普通技术人员已知或日后变得已知，通过引用明确并入本文，并且意在包含在权利要求中。此外，本文所公开的任何内容均无意公开给公众，无论此类公开是否在权利要求中明确叙述。权利要求的内容不得根据35u.s.c.
§
112,sixth paragraph的规定进行解释，除非使用短语“方法用于”明确引用元素，或者在方法权利要求的情况下，使用短语“步骤用于”引用元素。此外，就说明书或权利要求中使用的术语“包括”、“具有”等而言，此类术语旨在以类似于术语“包含”的方式包含在内，因为“包含”是在权利要求中用作过渡词时解释。
[0133]
尽管已经详细地描述和说明了本公开的实施方案，但是应该清楚地理解，这只是
说明和示例，而不是限制，本发明的范围本发明仅受所附权利要求的限制。其他实施例a1.一种用于从流体中去除组分的柱，该柱包括：包括横截面积的隔室；具有一定直径并设置在隔室内的珠子；和配体偶联到珠子上并被选择结合组分；其中选择横截面积和珠子直径以保持隔室内的流体流速低于第一阈值。a2.实施例a1的柱，其中珠子包含多个配体。a3.实施例a2或a2的柱，其中所述配体包含部分肿瘤坏死因子α(tnf-α)。a4.实施方案a1至a3中任一项的柱，其中所述配体包含部分tnf-α的三聚体。a5.实施方案a1至a4中任一项的柱，其中选择第一阈值以将流出出口的流体中的配体数量维持在预定水平以下。a6.实施方案a1至a5中任一项的柱，其中选择第一阈值以便将流体施加到配体的力维持在第二阈值以下，从而减少配体渗漏到流体中。a7.实施方案a1至a6中任一项的柱，其中：配体包含具有强度的键；和将力保持在第二个阈值以下可以避免破坏该键。a8.实施方案a1至a7中任一项的柱，其中：珠子包含琼脂糖；和该键包括胺键。a9.实施方案a1至a8中任一项的柱，其中：该力包括剪切力和力矩中的一个或多个；和第二阈值包括与剪切力相关的第三阈值和与力矩相关的第四阈值中的一个或多个。a10.实施方案a1至a9中任一项的柱，其中：隔室还包括入口、出口以及从入口到出口的流动路径。流动路径具有长度；和选择该长度以提供流体和配体之间的接触时间。a11.实施方案a1至a10中任一项的柱，其中：珠子包括多个珠子；和配体包含分别偶联至多个珠子中的每一个的多个部分配体。a12.实施方案a1至a11中任一项的柱，其中配体不可分离地偶联至珠子。b1.一种从患者血液中去除目标组分的方法，包括以下步骤：从病人那里接受血液；将血液分离成至少两种血液组分；使血液组分之一的部分通过隔室，该隔室具有一定的横截面积并包含多个具有一定直径的珠子，并且选择偶联至该珠子的配体以结合该组分，其中选择横截面积和珠子直径将隔室内的血液组分的流速维持在第一阈值以下；将至少两种血液组分混合在一起；和
将混合的血液组分回输给患者。b2.实施方案b1的方法，其中选择第一阈值以便将流体作用到配体的力维持在第二阈值以下。b3.实施方案b1或b2的方法，其中：配体包含具有强度的键；和将力保持在第二个阈值以下可以避免破坏该键。b4.实施方案b1至b3中任一项的方法，其中：该力包括剪切力和力矩中的一个或多个；和第二阈值包括与剪切力相关的第三阈值和与力矩相关的第四阈值中的一个或多个。b5.实施方案b1至b4中任一项的方法，其中配体不可分离地偶联至珠子。c1.一种用于从流体中去除组分的配体，该配体包含：至少两个单体，每个单体包含将耦合到该组分的位点；第一接头通过两个单体之间的化学键偶联；和第二接头通过单体之一和基质之间的化学键偶联。c2.实施方案c1的配体，其中配体包含三个且仅包含三个单体。c3.实施方案c1或c2的配体，其中配体包含两个且仅两个第一接头。c4.实施方案c1至c3中任一项的配体，其中所述配体包含一个且仅一个第二接头。c5.实施方案c1至c4中任一项的配体，其中第二接头包含胺键。c6.实施方案c1至c5中任一项的配体，其中单体包含将结合细胞因子受体的位点。c7.实施方案c1至c4中任一项的配体，其中单体包含肿瘤坏死因子α(tnf-α)。d1.一种用于从流体中去除组分的珠子，该珠子包括：基质；和与基质偶联的配体，该配体包括：至少两个单体，每个单体包含一个将耦合到该组分的位点；连接在两个单体之间的第一接头；和第二接头与单体之一偶联并通过化学键与基质偶联。d2.实施方案d1的珠子，其中基质被部分氧化。d3.实施方案d1或d2的珠子，其中基质包含多糖。d4.实施方案d1至d3中任一项的珠子，其中第二接头的化学键包含胺键。e1.一种用于从流体中去除组分的柱，该柱包括：隔室；设置在隔室内的珠子，该珠子包括：基质；和与基质偶联的配体，该配体包括：至少两个单体，每个单体包含一个将耦合到该组分的位点；第一接头通过两个单体之间的化学键偶联；和第二接头通过单体之一和基质之间的化学键偶联。f1.一种从患者血液中去除目标组分的方法，包括以下步骤：
从患者那里接受血液；将血液分离成至少两种血液组分；使靠近配体的血液组分之一的部分通过，所述配体包括：至少两个单体，每个单体包含一个将偶联到该组分的位点；第一接头通过两个单体之间的化学键偶联；和第二接头通过单体之一和基质之间的化学键偶联；将至少两种血液组分混合在一起；和将混合的血液组分回输给患者。g1.一种单采术颗粒的制备方法，包括以下步骤：氧化基质；在包含部分肿瘤坏死因子α(tnf-α)的配体和氧化基质之间形成希夫碱；和将希夫碱转化为仲胺键。g2.实施方案g1的方法，其中氧化基质的步骤包括将基质暴露于无机盐。g3.实施方案g2的方法，其中无机盐包括偏高碘酸钠。g4.实施方案g1至g3中任一项的方法，其中将希夫碱转化为仲胺键的步骤包括将基质暴露于还原剂。g5.实施方案g1至g4中任一项的方法，其中还原剂包括氰基硼氢化钠。h1.一种用于从受试者血液中去除目标组分的吸附剂，所述吸附剂包括：包含表面的基质；包含胺键的接头；和包含tnf-α的配体；其中接头连接到基质和配体上。h2.实施方案h1的吸附剂，其中吸附剂包含结构(i)：其中m是基质，r是配体，接头是-r
2-ch2-nh，其中r2不存在、烷基或取代的烷基。h3.实施方案h2的吸附剂，其中r2是ch2。h4.实施方案h1至h3中任一项的吸附剂，其中所述基质包含多个配体。h5.实施方案h1至h4中任一项的吸附剂，其中基质包含颗粒或珠子。h6.实施方案h1至h5中任一项的吸附剂，其中所述基质包含多糖。h7.实施方案h1至h6中任一项的吸附剂，其中所述基质包含纤维素。h8.实施方案h1至h7中任一项的吸附剂，其中基质具有在约60-200μm范围内的均值、平均或绝对直径。h9.实施方案h1至h8中任一项的吸附剂，其中基质具有在约45-165μm范围内的均值、平均或绝对直径。
h10.实施方案h1至h9中任一项的吸附剂，其中基质是多孔的。h11.实施方案h1至h10中任一项的吸附剂，其中所述配体包含三聚体，所述三聚体包含tnf超家族配体的至少三个单体。h12.实施方案h11的吸附剂，其中三种单体中的至少两种相同。h13.实施方案h1至h12中任一项的吸附剂，其中配体包含单链tnf-α。h14.实施方案h1至h13中任一项的吸附剂，其中接头的n衍生自配体的伯胺。h15.实施方案h1至h14中任一项的吸附剂，其中接头的ch2衍生自基质。h16.实施方案h1至h15中任一项的吸附剂，其中配体与基质的比率为至少50:1。h17.实施方案h1至h11中任一项的吸附剂，其中相对于连接至第二基质的第二配体，配体对从基质的解离的抵抗力高至少2倍、至少5倍或至少10倍通过选自酰胺键、双键、三键、nc-no、c-o、c＝o、oc＝o、oc-n、n-n、n＝n和s-s的键。h18.实施方案h1至h17中任一项的吸附剂，其中在10ml/min的流速下配体从基质的初始渗漏速率小于约10ng/min，或小于约5ng/min。h19.实施方案h1至h18中任一项的吸附剂，其中当以10ml/min的流速测量约2分钟的时间段时，配体从基质的初始渗漏速率小于约50pg/ml、小于约25pg/ml、小于约20pg/ml、小于约10pg/ml，或小于约5pg/ml。i1.一种制备实施方案h1至h19中任一项的吸附剂的方法，包括：使包含配体和基质表面的混合物与氰基硼氢化钠接触，其中配体包含至少一种伯胺且基质表面包含至少一个醛部分，从而产生实施方案h1-h19中任一项的吸附剂。i2.实施方案i的方法，还包括在接触之前氧化基质表面，从而形成至少一个醛部分。j1.一种用于从受试者血液中去除tnf受体的吸附剂，所述吸附剂包括：包括基质表面的基质；和包含单链tnf-α的配体；其中基质表面通过胺键连接到单链tnf-α。j2.实施方案j1的吸附剂，其中胺键是仲胺键。