一种高生物利用度的桑黄提取物脂质体及制备方法、应用

1.本发明涉及一种高生物利用度的桑黄提取物脂质体及制备方法、应用。


背景技术：

2.桑黄，又称桑耳、桑臣和胡孙眼，在分类学上隶属于担子菌门basidiomycota、伞菌纲agaricomycetes、锈革菌目hymenochaetales、锈革菌科hymenochaetaceae、桑黄属sanghuangporus，是一类珍贵的药用真菌，分布于全国多省区，生长于柳树、桦树、杨树等阔叶树的树桩或树干上或倒木上，主要包括桑树桑黄、杨树桑黄和鲍姆桑黄等，药用部位为桑黄的子实体。现代研究发现，桑黄中含有多糖、黄酮、三萜、多酚类、吡喃酮类和呋喃类等多种活性物质，因具有抗氧化、免疫调节、降血糖和抗肿瘤多种功效。最新研究表明,桑黄具有独特的抗癌功效,是目前国际公认的生物抗癌药剂中效率最高的一种药用真菌。
3.然而，由于桑黄显著的药理活性以及桑黄市场需求日益扩大,而桑黄产量在很大程度上取决于桑黄菌种的优劣,因而生产上迫切需要建立确保桑黄质量且高效合理用法。桑黄种植难度大、生长周期长，高品质桑黄的生长过程中需投入大量人力、物力、财力。因此使用方法提高桑黄的活性成分利用率是目前研究的热点，目前桑黄提取方法有热水浸提法、减压提取法、超声提取法，通过实验对比发现，这些方法桑黄复合提取物的出膏率均较低，且提取物中有效成分含量均较低。稳定性差和生物可利用率差严重影响了桑黄提取物的广泛应用,随着近年来人们对桑黄提取物在药品、功能食品、保健食品的应用，探索一种能提高生物利用度的桑黄提取物利用方法是大势所趋。
4.李宁等公开了一种小分子水制备桑黄提取物的方法,作为物质基础研究，该制备方法下制备的桑黄复合提取物出膏率高，提取物中有效成分纯度高，有效提高桑黄利用率，但该发明未说明中桑黄提取物在体内的稳定性和生物可利用度。如何在保证桑黄提取物的稳定性同时提高其生物可利用度仍需深入探索。


技术实现要素：

5.本发明为了克服现有技术不足而提供了一种高生物利用度的桑黄提取物脂质体及制备方法、应用。通过采用脂质体包埋桑黄提取物，可提高桑黄提取物在体内的稳定性和生物可利用度。
6.为实现上述目的，所提供的技术方案为：一种高生物利用度的桑黄提取物脂质体，由下列的制备方法制得：（a）将桑黄洗净、晾干、破碎成粉末100-200目，并与无水乙醇按1:10～1:20（g/ml）混合均匀，再依次进行超声处理、微波提取以及过滤，然后浓缩至完全去除乙醇溶液后进行冷冻干燥，制得桑黄提取物；（b）将脂质体材料溶解在有机溶剂中，通过减压旋转蒸发干燥并用作油相，将油相 在ph 3.5的柠檬酸盐缓冲液中进行水合和超声崩解，制备空脂质体；（c）将上述空脂质体与桑黄提取物混合并溶解于 ph4~ 7.5的磷酸盐缓冲液水相
中；（d）在水浴中超声处理以形成w/o载有桑黄提取物的脂质体。
7.一种高生物利用度的桑黄提取物脂质体的制备方法，包括以下步骤：（a）将桑黄洗净、晾干、破碎成粉末100-200目，并与无水乙醇按1:10～1:20（g/ml）混合均匀，再依次进行超声处理、微波提取以及过滤，然后浓缩至完全去除乙醇溶液后进行冷冻干燥，制得桑黄提取物；（b）将脂质体材料溶解在有机溶剂中，通过减压旋转蒸发干燥并用作油相，将油相 在ph 3.5的柠檬酸盐缓冲液中进行水合和超声崩解，制备空脂质体；（c）将上述空脂质体与桑黄提取物混合并溶解于ph4~ 7.5的磷酸盐缓冲液水相中；（d）在水浴中超声处理以形成w/o载有桑黄提取物的脂质体。
8.进一步地，所述的在步骤（a）中超声处理时的温度在50-70℃，优选50-65℃，用旋转蒸发仪浓缩，浓缩时的温度在45-55℃，优选45-50℃，转速在50-80r/min，优选50-75r/min。
9.进一步地，所述的在步骤（b）中有机溶剂为氯仿、乙酸乙酯、石油醚、1,3-丁二醇、甲醇中的一种或几种，优选为氯仿、1,3-丁二醇、甲醇中的一种或几种。
10.进一步地，所述的在步骤（b）中脂质体材料为大豆卵磷脂、磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、十八氨、硬脂酸、蛋黄卵磷脂、胆酸钠、胆固醇和任选的功能性长循环材料中的一种或几种，优选为为胆固醇和大豆卵磷脂。
[0011] 进一步地，所述在步骤（c）中将空脂质体50mg桑黄提取物混合并溶解10 mlph7.4的磷酸盐缓冲液。
[0012]
进一步地，所述在步骤（c）的水相中还含有调节ph成分的盐酸、醋酸、三乙醇胺、氢氧化钠、精氨酸或磷酸盐中的一种或几种，优选为盐酸、醋酸、或磷酸盐一种或几种。
[0013]
进一步地，所述在步骤（c）中所述水相ph为4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0或7.5。
[0014]
优选的，所述桑黄提取物脂质体为混悬液，置于4℃储存。
[0015]
由上所述的一种高生物利用度的桑黄提取物脂质体在制备不同剂型的抗肿瘤药物方面的应用。药物剂型为口服剂，包括片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液。
[0016]
由上所述的一种高生物利用度的桑黄提取物脂质体在制备保健品领域的应用。
[0017]
脂质体是一种在两个亲水层之间夹有亲脂双层的纳米药物，在许多不同的健康领域发挥着关键作用。此外，脂质体给药系统以其缓释、高稳定性、降低药物毒性和靶向性等优点成为药学领域的研究热点，已被用于心血管疾病患者的治疗。疾病、神经退行性疾病、糖尿病、癌症和炎症。近年来，国内外已有成熟的脂质体药物上市，如盐酸多柔比星脂质体注射液。除此之外，tyroservatide-paclitaxel脂质体成为增强肿瘤靶向和协同抗肿瘤作用的有效递送策略。本发明试验将桑黄提取物脂质体的冻干粉,便于保存和作为食品、医药保健品和化妆品的原料进行使用。
[0018]
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用乙醇-水为溶剂溶解香辛料粉，然后在超声处理后进行微波、闪氏提取技术，旋转蒸发仪后得到桑黄提取物，温度适宜多种成分提取，提取效率高，桑黄中的有效成分完整保留。
[0019]
本发明提高了桑黄提取物的负载量，且可以降低储运过程中的有效成分挤压、破损而降低活性；桑黄提取物嵌于脂质体的微孔结构中，可进一步降低活性组分的化学降解性能从而提高生物利用度和稳定性。本发明制备方法采用了ph梯度法，采用本方法制成的桑黄提取物脂质体包埋率高达70%-85%，根据处理方法不同，可获得粒径范围90~280nm的脂质体。采用脂质体包埋桑黄提取物，可提高桑黄提取物在体内的稳定性和生物可利用度。
[0020]
本发明采用以桑黄为原料制备出稳定性较好的脂质体，所制备的脂质体具有良好的包封率，且粒径可控。同时，所制备的脂质体还具有抗肿瘤的作用，此脂质体可以用于制备抗肿瘤有关疾病的药物。本发明工艺合理、质量可控，为桑黄给药新剂型研究奠定基础。
附图说明
[0021]
图1是本发明实施例桑黄提取物脂质体的粒径分布曲线。
[0022]
图2是本发明实施例的包封率曲线。
[0023]
图3是本发明实施例的载药率曲线。
[0024]
图4是本发明桑黄提取物脂质体的体外药物释放曲线。
实施方式
[0025] 下面结合图1～图4和实施例对本发明的技术方案做进一步的说明。
[0026]
实施例1一种高生物利用度的桑黄提取物脂质体可由以下的制备方法制得，其制备方法包括以下步骤：（a）将桑黄洗净-晾干-破碎成粉末，并与无水乙醇按1:15（g/ml）混合均匀，再依次进行超声处理（50℃）、微波提取以及过滤，然后用旋转蒸发仪（45℃，55 r/min）浓缩至完全去除乙醇溶液后进行冷冻干燥，制得桑黄提取物；（b）将脂质体材料胆固醇溶解在有机溶剂氯仿中，通过减压旋转蒸发干燥并用作油相，将油相在ph 3.5的柠檬酸盐缓冲液中进行水合和超声崩解，制备空脂质体；（c）将上述空脂质体与50mg桑黄提取物混合并溶解于10 ml ph 7.4 的磷酸盐缓冲液；（d）在水浴中超声处理以形成w/o载有桑黄提取物的脂质体。
[0027]
所述桑黄提取物脂质体为混悬液，置于4℃储存。
[0028]
由上所制备的一种高生物利用度的桑黄提取物脂质体在制备不同剂型的抗肿瘤药物方面的应用。药物剂型为口服剂，包括片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液。
[0029] 由上所制备的一种高生物利用度的桑黄提取物脂质体在制备保健品领域的应用。
[0030]
实施例2一种高生物利用度的桑黄提取物脂质体的制备方法，包括以下步骤：（a）将桑黄洗净-晾干-破碎成粉末，并与无水乙醇按1:15（g/ml）混合均匀，再依次进行超声处理（55℃）、微波提取以及过滤，然后用旋转蒸发仪（50℃，60 r/min）浓缩至完全去除乙醇溶液后进行冷冻干燥，制得桑黄提取物；（b）将脂质体材料大豆卵磷脂溶解在有机溶剂1,3-丁二醇；通过减压旋转蒸发干
燥并用作油相，将油相在ph 3.5的柠檬酸盐缓冲液中进行水合和超声崩解，制备空脂质体；（c）将上述空脂质体与50mg桑黄提取物混合并溶解于10 ml ph 7.4 的氢氧化钠缓冲液（d）在水浴中超声处理以形成w/o载有桑黄提取物的脂质体。
[0031]
实施例3一种高生物利用度的桑黄提取物脂质体的制备方法，包括以下步骤：（a）将桑黄洗净-晾干-破碎成粉末，并与无水乙醇按1:15（g/ml）混合均匀，再依次进行超声处理（60℃）、微波提取以及过滤，然后用旋转蒸发仪（55℃，65 r/min）浓缩至完全去除乙醇溶液后进行冷冻干燥，制得桑黄提取物；（b）将脂质体材料胆固醇和大豆卵磷脂溶解在有机溶剂甲醇；通过减压旋转蒸发干燥并用作油相，将油相在ph 3.5的柠檬酸盐缓冲液中进行水合和超声崩解，制备空脂质体；（c）将上述空脂质体与50mg桑黄提取物混合并溶解于10 ml ph 7.4 的磷酸盐缓冲液（d）在水浴中超声处理以形成w/o载有桑黄提取物的脂质体。
[0032]
测试例1包封率和载药量的测定取6份实施例1制得的桑黄提取物脂质体样品以及6份脂质体样品分别进行包封率测定，包封率测定方法如下：(1)取2ml桑黄提取物脂质体在离心机中（4000r/min、30min）离心处理，然后取上清液，hplc法测定游离药量w1;取离心后沉淀物，真空干燥后精密称定质量w，取脂质体混悬液1 ml,置于100 ml量瓶中，甲醇超声处理3 min后定容，过0.45 μm微孔滤膜，取5 ml续滤液，置于10 ml量瓶中，流动相定容，即得。
[0033]
测定总药量w0，计算包封率、载药量，公式分别为包封率=[(w
0-w1)/w0]
×
100%、载药量=[(w
0-w1)/w]
×
100%测试例2药动学参数测定将体重23-28g雄性icr小鼠分为4组（空白组、模型组、高剂量组及低剂量组），每组五只；明暗交替12h，断绝粮食和水；，给药前1h称重。分别为桑黄提取物组、桑黄提取物脂质体组，给药剂量采用两种药物的总药量为5mg/kg。于特定时间点0 .083，0 .4，0 .2，1，2，4，8，12，24，48h眼眶取血0 .3ml于涂肝素钠的ep管中，12000rpm离心3min，取上清贮存于-80℃。用酶标仪测定小鼠血浆中的药物浓度，计算药动学参数。药动学参数如表1。
[0034] 。
。
[0041] 由表3可以看出，桑黄提取物脂质体对肺癌细胞a549的活性均有较好的抑制作用，可将桑黄提取物脂质体用于预防和治疗肺癌的药物制备，增加长白瑞香的医药用途。
[0042] 测试例6atp释放测定取对数生长期细胞a549 肺癌细胞以每孔100000个细胞铺于24孔板中，贴壁12h，按实施例1、实施例2和实施例3的方法制备桑黄提取物脂质体，用培养基稀释脂质体混悬液至脂质体包含总药量为5μg/ml，培养箱中孵育24小时，使用atp试剂盒测定细胞在培养基中释放的atp浓度。实验结果如表4。
[0043]
。
[0044]
由表4可知，桑黄提取物脂质体能够在体外诱导atp的释放。
[0045]
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。