一种用于胰腺癌免疫治疗的工程化外泌体及制备方法

技术特征：
1.一种用于胰腺癌免疫治疗的工程化外泌体，其特征在于：所述的工程化外泌体（exo-acd11b-cgamp-il-12 mrna）形貌为碟状，含有cd63外泌体特征蛋白质，平均直径为100 nm；可以激活cgas-sting通路，激活效应t细胞；逆转肿瘤微环境，将m2型巨噬细胞极化为m1型，抑制胰腺癌的增长。2.根据权利要求1所述的一种用于胰腺癌免疫治疗的工程化外泌体的制备方法，包括以下步骤：1）将巨噬细胞thp-1传到细胞培养瓶中，用含有0.1 mg/ml pma的rmpi1640与细胞孵育过夜，细胞由悬浮状态转化成贴壁状态；再用含有0.4 mg/ml lps的opti mem培养基与细胞孵育，细胞转化成m1巨噬细胞；2）取步骤1）中的上清液依次进行电转、离心、过滤，超速离心，获得纯化外泌体；其中上清液采用细胞纳米穿孔技术提取外泌体，过滤采用0.22 μm的滤膜过滤，滤过液用100000 g的超速离心机离心；3）负载治疗性药物和表面修饰：将cgamp与il-12 mrna负载至步骤2)的纯化外泌体内，再加入cd11b抗体孵育，孵育之后的混合液用超滤管4℃离心，再加入pbs离心洗涤未负载的治疗性药物及未修饰的cd11b抗体，获得工程化外泌体（exo-acd11b-cgamp-il-12 mrna）。3.根据权利要求2所述的工程化外泌体的制备方法，其特征在于步骤3的靶向治疗性药负载采用细胞纳米穿孔技术装载药物的过程为：将取收集好的纯化外泌体以蛋白浓度2 mg/ml 500 μl附着于纳米通道阵列的芯片表面上，将cgamp以浓度100 ng/ml、il-12mrna 50 ng/ml各500 μl，加入缓冲液通道，在220 v的瞬间脉冲下，将cgamp与il-12mrna负载于纯化外泌体中，得到载药的工程化外泌体（exo-cgamp-il-12 mrna）。4.根据权利要求1所述的工程化外泌体（exo-acd11b-cgamp-il-12 mrna）在制备治疗胰腺癌疾病药物中的用途。

技术总结
本发明提供了一种用于胰腺癌免疫治疗的工程化外泌体及制备方法；巨噬细胞表面过表达CD11b分子，利用M1巨噬细胞来源的外泌体进行工程化改造，实现药物靶向递送至巨噬细胞，在其表面连接CD11b抗体，并在其中负载cGAMP分子以及IL-12 mRNA，激活cGAS-STING通路，刺激巨噬细胞产生IFNs，激活效应T细胞，同时，实现肿瘤微环境中M2巨噬细胞极化为M1巨噬细胞，实现胰腺癌的高效治疗。本发明通过对外泌体进行一系列工程化改造，提高外泌体对胰腺癌的治疗效果。果。果。


技术研发人员：杨照罡 孙漫 张欢 崔雅欣 滕乐生 刘洛桐 陈嘉怡 王思邈 邢建铭
受保护的技术使用者：吉林大学
技术研发日：2023.04.11
技术公布日：2023/7/6