微生态生物支架及其应用的制作方法

微生态生物支架及其应用
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2020年5月5日提交的美国临时申请no.63/020,407的优先权，其全部内容通过引用并入本文。


背景技术：

3.临床前研究和药物开发通常依赖于在平坦的培养皿中和人类疾病的动物模型中测试人类细胞的行为，以了解生理机能并预测药物在人体中的表现。这些模型可能过于简单，并且对人体中实际发生的复杂的网络连结相互作用提供了不充分的表述。
4.目前，大多数药物筛选发生在平坦的塑料培养皿或孔板上。小鼠、大鼠或人类细胞的个体细胞培养在这些平坦的塑料表面上生长，并且各种药物候选物被添加到这些培养物中，并且随着时间的推移监测细胞的行为。以这种方式筛选数以千计的化合物，并且选择最有希望的候选物以进行动物试验。通常，小鼠被选择为动物模型，因为其成本相对较低、易于处理并且能够培育出各种品系的小鼠。
5.虽然在塑料板上进行体外筛选是提炼药物候选物的过程中的重要部分，但塑料板上的细胞环境并不准确地反映真实的细胞微环境。塑料板上的细胞通常粘附在坚硬的塑料材料上，该细胞在那里粘合、生长和发挥2d功能，并且在静态条件下培养。此外，通常仅选择一种细胞系在板上生长，尽管细胞微环境是由紧密相连的各种不同类型的细胞组成的。因此，在用于各种目的(包括，例如提炼药物候选物)的细胞培养过程中需要准确反映更准确的细胞微环境的改进的工具和平台。


技术实现要素：

6.根据各种实施例，提供了一种具有生物组件的套件。该生物组件包括：基底；以及贴附到基底的生物支架；以及具有分隔件的加载板。分隔件包括：分隔件出口和分隔件入口，该分隔件出口和分隔件入口与生物支架流体连通；以及生物兼容的粘合剂，该粘合剂设置在基底与加载板之间，该粘合剂被配置成保持基底与加载板之间的流体不渗透的结合。
7.根据各种实施例，提供了一种具有生物组件的套件。生物组件包括基底和贴附到基底的生物支架。板包括分隔件和生物兼容的粘合剂，该分隔件具有内部容积并成形为将生物支架接收到该内部容积中，该粘合剂设置在基底与板之间，该粘合剂被配置成保持基底与加载板之间的结合；加载器，该加载器具有加载器入口和加载器出口，该加载器入口和加载器出口与生物支架流体连通；以及流体混合物，该流体混合物被配置成被注入生物支架。
8.根据各种实施例，提供了一种用于生成包含细胞的套件的方法。该方法包括：提供生物组件，该生物组件包括基底和贴附到基底的生物支架，其中，生物支架包括具有血管入口和血管出口的血管部件；提供加载板，该加载板包括分隔件，该分隔件包括分隔件出口和分隔件入口；将分隔件入口连接到血管入口并将分隔件出口连接到血管出口；将细胞附接到血管部件；以及灌流血管部件以形成细胞层。
9.根据各种实施例，提供了一种用于生成细胞培养物的方法。该方法包括：提供生物组件，该生物组件包括基底和贴附到基底的生物支架，其中，生物支架包括具有血管入口和血管出口的血管部件；提供板，该板包括分隔件，该分隔件包含内部容积；提供加载器，该加载器包括加载器入口和加载器出口；将带有血管部件的生物支架设置在分隔件的内部容积内；将加载器入口连接到血管入口并将加载器出口连接到血管出口；将细胞附接到血管部件；以及灌流血管部件以形成细胞层。
10.下面将详细讨论这些和其他方面及实施方案。前述信息和以下详细描述包括各方面和实施方案的说明性实例，并为理解所要求保护的方面和实施方案的性质和特征提供概述或框架。附图提供了对各方面和实施方案的说明和进一步理解，并且被结合到本说明书中并构成其一部分。
附图说明
11.附图并未按比例绘制。各个附图中相似的附图标记和名称表示相似的元件。为了清楚起见，并非每个部件都被标示在每个附图中。在附图中：
12.图1是根据各种实施例的生物组件套件的示意图。
13.图2是根据各种实施例的另一示例生物组件套件的示意图。
14.图3a是根据各种实施例的示例生物组件套件的示意图。
15.图3b是图3a的示例生物组件套件的另一示意图。
16.图3c和图3d分布是根据各种实施例的带有盖子的图3c和图3b的示例生物组件套件的示意图。
17.图4a是根据各种实施例的示例生物组件套件的示意图。
18.图4b是根据各种实施例的另一示例生物组件套件的示意图。
19.图4c是根据各种实施例的另一示例生物组件套件的示意图。
20.图4d是根据各种实施例的另一示例生物组件套件的示意图。
21.图4e是根据各种实施例的另一示例生物组件套件的示意图。
22.图5a是根据各种实施例的示例生物组件套件的示意图。
23.图5b是图5a的示例生物组件套件的另一示意图。
24.图6a、图6b、图6c示出了根据各种实施例的示例生物组件中的细胞加载的各个阶段。
25.图7a、图7b、图7c示出了根据各种实施例的具有生物支架阵列的示例生物组件中的细胞加载的各个阶段。
26.图8是根据各种实施例的用于生成细胞培养物的方法的流程图。
27.图9是根据各种实施例的用于生成细胞培养物的方法的另一流程图。
具体实施方式
28.目前，许多人一直在探索迁移试验，其涉及使用可渗透的、基于聚合物的transwell支持物。这些微孔支持物被放置在包含培养基的孔板的顶部上，细胞被添加到这些支持物中并被允许生长。然后，将化合物添加到包含平坦单层细胞的支持物中，并通过测量穿过transwell进入孔的化合物的浓度来评估化合物增加血管渗透性的能力。在一些情
况下，化合物会增加血管渗透性。在一些情况下，要测试的化合物穿过细胞层进入第二隔室。transwell是用于除了血管渗透性之外的其他读数的工具，诸如细胞迁移、促进气液相界面等。虽然这种试验通常用于研究血管渗透性，但由于缺乏关键特征(诸如多种细胞类型的存在、持续的灌流以及细胞外基质的化学和机械特征)的细胞环境的有限性，所以它不能正确地模仿体内化合物的运输行为。
29.虽然在小动物模型(诸如小鼠)中测试药物化合物的安全性和疗效是评估化合物整体安全性和疗效的重要步骤，但小鼠是用于开发人类疗法的非理想模型，因为小鼠不代表人类解剖学或生理学。数以千计的化合物在小鼠上被证明是有效的，但这些结果在人类临床试验中并没有转移过来，大多数药物在阶段ii失败。此外，小鼠与小鼠之间存在明显的差异，甚至在实验期间处理小鼠的方式也被证明会极大地影响结果。
30.根据各种实施例，本文描述了用于细胞培养的各种技术、平台和方法。根据各种实施例，所公开的平台、模板、配置和实施方案提供了更真实的细胞微环境，其可以改善用于提炼药物候选物的细胞培养过程。根据各种实施例，所公开的平台(在本文中也被称为生物支架)包含模仿人类解剖学和生理学的特征，导致生物模拟人类组织模型，从而获得更好的人类数据以了解药物候选物的安全性和疗效。根据各种实施例，所公开的生物支架可以包括细胞粘合性和细胞可降解材料。根据各种实施例，生物活性支架包括细胞粘合性和细胞可降解材料，其中细胞可以粘合、生长和迁移到它们可以通过分泌基质金属蛋白酶(mmps)和沉积它们自己的细胞外基质(ecm)而随时间重塑的基质上。
31.根据各种实施例，生物支架可以包含血管部件，这使细胞处于灌流条件下。根据各种实施例，可以将多于一种血管部件加入同一生物支架容积中。根据各种实施例，包括气体和液体的流体(诸如介质或血液)可以被引入血管部件。根据各种实施例，生物支架可以包含空腔，细胞或其他生物材料可以被引入该空腔。根据各种实施例，血管部件可以被限定为有界的空隙容积拓扑结构，其适合于包括液体和气体的流体流动。
32.根据各种实施例，包括生物支架的腔室被固定为包含入口和出口连接件，以经由注射泵、蠕动泵、气动泵或重力驱动流连接到灌流，或连接到动物的血液供应。根据各种实施例，这些入口和出口可以取决于血管化生物支架的架构被放置在腔室的任一侧。根据各种实施例，生物组件可以与加载设备(或加载器或加载板)组合，以便在生物支架的血管部件中进行灌流。根据各种实施例，生物组件和加载器可以与各种辅助部件一起组合，以形成生物组件套件。根据各种实施例，多个生物支架可以被放置在腔室中，这实现了生物支架的阵列化，以用于高通量实验。根据各种实施例，生物支架可以被配置成用作迷你器官，并且可以被移植以用于治疗用途。根据各种实施例，生物支架阵列中的每一个可以被配置成用作不同于生物支架阵列中的另一个的迷你器官，并且可以被移植以用于治疗用途。根据各种实施例，生物支架阵列中的每一个可以单独地且独立地以不同于生物支架阵列中的另一个的流体流速进行泵送。根据各种实施例，生物支架阵列中的每一个可以用不同的流体或流体混合物进行泵送，该流体或流体混合物是单独定制的，并且不同于生物支架阵列中的另一个。关于图1至图9，进一步详细描述了用于细胞培养的技术、平台和方法的各种配置、实施例和实施方案。根据各种实施例，本文公开的用于细胞培养的技术、平台和方法的各种配置、实施例和实施方案可以适用于关于以下图1至图9描述和介绍的示例实施例和配置中的任一个。
33.现在参考图1，其为根据各种实施例的生物组件套件100的示意图。根据各种实施例，生物组件套件100包括生物组件110、加载板120，并且可选地包括粘合剂180和/或辅助部件190。根据各种实施例，生物组件110包括生物支架130。根据各种实施例，生物组件110可选地包括基底140。根据各种实施例，生物支架130包括血管部件135。根据各种实施例，生物支架130可选地包括空隙138。根据各种实施例，加载板120包括分隔件150。根据各种实施例，分隔件150可以包括分隔件入口152和分隔件出口154。
34.根据各种实施例，生物组件110包括贴附或以其他方式布置在基底140上的生物支架130。根据各种实施例，生物支架130经由任何合适的结合技术贴附或以其他方式布置在基底140上，该结合技术例如包括但不限于将生物支架130共价结合到基底140的顶表面，该顶表面可以用硅烷或任何其他手段进行功能化以促进生物支架130与基底140之间的粘合力。根据各种实施例，粘合剂可以包括胶带、液体粘合剂/凝胶或者uv固化材料或者任何其他合适的材料。根据各种实施例，基底是与分隔件紧密接触的载玻片。根据各种实施例，生物支架130是水凝胶，其可以在没有共价结合的情况下布置在基底140上。根据各种实施例，生物支架130可以布置在基底140上。
35.根据各种实施例，基底140可以用作细胞培养环境中的基底。根据各种实施例，基底140可以是透明的玻璃或塑料或者任何其他合适的材料(例如但不限于聚碳酸酯、聚砜、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、环烯烃共聚物、聚乙烯、聚丙烯、玻璃、石英、云母、红外透明盐(诸如溴化钙、溴化钾))、或者这些材料中的任一种与任何其他材料的薄膜组合或与金属薄膜组合，以实现基于表面等离子体的测量。
36.根据各种实施例，生物支架130可以是凝胶、水凝胶、可聚合水凝胶，包括例如水和具有6kda、20重量％的聚(乙二醇)二丙烯酸酯(pegda)、在紫外线至可见光波长范围内吸收的锂酰基磷酸酯(lap)、明胶丙烯酸甲酯，或者任何其他合适的水凝胶材料，包括但不限于以下中的任一种：胶原蛋白甲基丙烯酸酯、丝质甲基丙烯酸酯、透明质酸甲基丙烯酸甲酯、硫酸软骨素丙烯酸甲酯、弹性蛋白甲基丙烯酸酯、丙烯酸纤维素、葡聚糖甲基丙烯酸酯、肝素甲基丙烯酸酯、nipaam甲基丙烯酸酯、壳聚糖甲基丙烯酸酯、聚乙二醇降冰片烯、聚乙二醇二硫酚、硫醇盐凝胶、巯基壳聚糖、硫酸盐化丝、基于peg的肽结合物或其任何组合。根据各种实施例，生物支架130可以包括任何材料，包括上文列出的可3d打印或可成型的材料，包括例如经由注入成型技术、快速铸造或牺牲成型。根据各种实施例，生物支架130可以经由围绕图案(诸如针或结构)的铸造而形成，该图案可以机械地、化学地和/或通过光诱导降解而移除。根据各种实施例，生物支架130可以经由围绕图案的铸造而形成，该图案可以机械地、化学地或通过光诱导降解而移除，随后使一个或多个碎片图案化，然后将这些碎片结合在一起。
37.根据各种实施例，生物支架130是可灌流的水凝胶。根据各种实施例，生物组件110可以包括亲水成分和疏水成分。根据各种实施例，生物支架130可以包括包含有机材料的预水凝胶溶液，例如酒石黄(黄色食品色素fd&c yellow 5，e102)、姜黄素(来自姜黄)、或花青素(来自蓝莓)，其中每一个可以产生水凝胶，以及具有例如从约5nm至100nm的直径的无机金纳米粒子，以用于生物相容性和光衰减特性，并且用于作为例如有效的光吸收添加剂的功能，以生成可灌流的水凝胶。根据各种实施例，生物支架130可以包括光吸收剂。根据各种实施例，光吸收剂可以是亲水的。根据各种实施例，亲水光吸收剂可以是以下一种：食品染
料、酒石酸、日落黄fcf(黄色no.6)、亮蓝fcf(fd&c蓝色no.1)、靛蓝卡明(fd&c蓝色no.2)、快速绿fcf(fd&c绿色no.3)花青素、花青素、赤藓红(fd&c红色no.3)、诱惑红ac(fd&c红色no.40)、核黄素(维生素b2，e101，e101a，e106)、抗坏血酸(维生素c)、喹啉黄ws、酸性红(唑啉)、朱红色4r(e124)、专利蓝v(e131)、绿色s(e142)、黄色2g(e107)、橙色ggn(e111)、红色2g(e128)、焦糖色、苯酚红、甲基橙、4-硝基苯酚、nadh二钠盐或其任何组合。根据各种实施例，光吸收剂可以是疏水的。根据各种实施例，疏水光吸收剂可以是以下中的一种：姜黄素(e100)、姜黄、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、角黄素(酮类胡萝卜素)、胭脂虫提取物、红辣椒、藏红花、麦角钙化醇(维生素d2)、胆钙化醇(维生素d3)、橘红2、红木瓜提取物、番茄红素或其任何组合。
38.根据各种实施例，生物支架130包括一个或多个血管部件135。根据各种实施例，生物支架130与一个或多个血管部件135一起可以被3d打印或成型。根据各种实施例，一个或多个血管部件135包括血管入口和血管出口。根据各种实施例，一个或多个血管部件135包括一个或多个通道，这些通道可以在生物支架130内以树状结构的形式分支出来。根据各种实施例，一个或多个血管部件135的一个或多个通道可以包括可以例如形成为环形结的分支，其中，通道在生物支架130内的另一点处重新汇合。根据各种实施例，一个或多个血管部件135可以包括分支结构，这些分支结构可以从生物支架130的各个部分延伸，并终止于生物支架130内的其他部分。根据各种实施例，一个或多个血管部件135可以具有多尺度脉管系统，该多尺度脉管系统具有类似于人体器官的分支和锥度。
39.根据各种实施例，一个或多个血管部件135具有横截面或长宽比为任何形状的一个或多个通道，其横截面尺寸或宽度(例如，如果是圆形，则横截面尺寸为直径)的范围从约10pm至约1mm、100pm至约500pm、或者约800微米或更小、约500微米或更小、约400微米或更小、约300微米或更小或者200微米或更小。根据各种实施例，一个或多个血管部件135是可灌流的。根据各种实施例，一个或多个血管部件135的一个或多个通道响应于一个或多个血管部件135内的压力、机械、电气和/或化学刺激的增加而可扩张。根据各种实施例，一个或多个血管部件135的一个或多个通道响应于一个或多个血管部件135内的压力、机械、电气和/或化学刺激而可收缩。
40.根据各种实施例，一个或多个血管部件135可以包括收窄入口和收窄出口。根据各种实施例，一个或多个血管部件135可以包括一个或多个血管入口。根据各种实施例，一个或多个血管部件135可以包括一个或多个血管出口。根据各种实施例，一个或多个血管部件135中的每一个可以包括血管入口和血管出口。根据各种实施例，用于一个或多个血管部件135的第一血管部件的血管入口和血管出口被设置成相对于一个或多个血管部件135的第二血管部件的血管入口和血管出口正交或基本正交、平行或基本平行、或者呈0度至90度之间的角度。
41.根据各种实施例，一个或多个血管部件135中的每一个可以包括生物组件110中的腔室或隔室，细胞的可流动悬浮液注入该腔室或隔室。根据各种实施例，一个或多个血管部件135中的每一个可以包括生物组件110中的不同的腔室或不同的隔室类型，其中，不同的细胞类型被注入不同的隔室。
42.根据各种实施例，生物支架130可选地包括空隙138。根据各种实施例，一个或多个血管部件135布置在空隙138中。根据各种实施例，生物支架130包括一个或多个空隙138。
43.根据各种实施例，加载板120包括分隔件150，该分隔件包括分隔件入口152和分隔件出口154。根据各种实施例，分隔件入口152和分隔件出口154与加载板120的顶表面基本平行。根据各种实施例，分隔件入口152和分隔件出口154彼此相邻，并布置在加载板120的同一侧上。根据各种实施例，分隔件入口152和分隔件出口154布置在加载板120的不同侧上。根据各种实施例，分隔件入口152和分隔件出口154布置在加载板120的相对侧上。根据各种实施例，分隔件入口152和分隔件出口154具有锥化或逐渐锥化的尖端。
44.根据各种实施例，加载板120包括材料，该材料包括但不限于树脂、牙科树脂、生物相容性树脂、透明聚碳酸酯、透明丙烯酸、透明玻璃或塑料，或者任何其他合适的材料，例如但不限于聚碳酸酯、聚砜、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、环烯烃共聚物、聚乙烯、聚丙烯、玻璃、石英、云母、红外透明盐(诸如溴化钙、溴化钾)，或者其任何组合。
45.根据各种实施例，加载板120具有1mm至1,000mm之间的横向尺寸(例如，x或y方向)。根据各种实施例，加载板120在第一方向(例如，x方向)上在1mm至1,000mm之间，并且在第二方向(例如，x方向)上在1mm至1,000mm之间。根据各种实施例，加载板120的尺寸(例如，x方向和y方向)为1mm x 1mm、1mm x 10mm、1mm x 100mm、1mm x 1,000mm、10mm x 1mm、10mm x 10mm、10mm x 100mm、10mm x 1,000mm、100mm x 1mm、100mm x 10mm、100mm x 100mm、100mm x 1,000mm、1,000mm x 1mm、1,000mm x 10mm、1,000mm x 100mm、1,000mm x 1,000mm、130mm x 90mm、90mm x 130mm，或包括其任何横向尺寸，包括任何递增的整数或小数值。
46.根据各种实施例，分隔件150在x方向和y方向两者上的横向尺寸在加载板120的0.1％至10％、10％至20％、20％至30％、30％至40％、40％至50％、50％至60％、60％至70％、70％至80％、80％至90％、90％至99.9％之间，或包括其任何横向尺寸，包括其任何递增的整数或小数值。根据各种实施例，分隔件150的横向尺寸在0.1mm至999mm之间。根据各种实施例，分隔件150在x方向上在0.1至100mm、100至200mm、200至300mm、300至400mm、400至500mm、500至600mm、600至700mm、700至800mm、800至900mm、900至999mm之间，或包括其任何x值，包括任何增量的整数或小数值；并且在y方向上在0.1至100mm、100至200mm、200至300mm、300至400mm、400至500mm、500至600mm、600至700mm、700至800mm、800至900mm、900至999mm之间，或包括其任何y值，包括任何增量的整数或小数值。
47.根据各种实施例，加载板120包括多个分隔件150。根据各种实施例，多个分隔件150中的每一个包括分隔件入口152和分隔件出口154。根据各种实施例，加载板120包括1至1000个分隔件，包括3、4、6、12、24、48、96、192或384个分隔件150。根据各种实施例，多个分隔件150中的每一个包括至少一组且至多20组的分隔件入口152和分隔件出口154。
48.根据各种实施例，加载板120包括分隔件150，该分隔件包括内部容积。根据各种实施例，多个分隔件150中的每一个包括内部容积。根据各种实施例，多个分隔件150中的每一个成形为将生物组件110接收在内部容积中。
49.根据各种实施例，分隔件入口152和分隔件出口154与生物支架130流体连通。根据各种实施例，血管入口与分隔件入口152流体连通。根据各种实施例，血管出口与分隔件出口154流体连通。根据各种实施例，一个或多个血管入口中的每一个与相关的分隔件入口流体连通，并且一个或多个血管出口中的每一个与相关的分隔件出口流体连通。
50.根据各种实施例，生物组件110和分隔件的流体连通由生物组件110中的锥形收缩
部居间引导(mediated)，并在灌流期间以正常操作流体压力提供流体密封。根据各种实施例，流体密封是在分隔件150的入口152/出口154的较大尺寸与生物支架130的入口/出口的较小尺寸之间提供尺寸差。根据各种实施例，母体(生物支架130的入口/出口)与公体(分隔件150的入口152/出口154)之间的机械配合在公体与母体特征之间提供“过盈配合”。根据各种实施例，适配器可以用于在分隔件150的入口152/出口154与生物支架130的入口/出口之间提供流体密封。
51.根据各种实施例，灌流可以在各种灌流机制下发生，例如但不限于在重力流下，经由用于正压的泵或经由用于负压的真空抽吸。根据各种实施例，入口和出口处的正常操作流体压力在约-100kpa(负压，诸如抽吸)至约100kpa(正压，诸如泵送的流体、液体或气体)之间、在约-50kpa至约50kpa之间、在约-15kpa至约15kpa之间、在约-10kpa至约10kpa之间、在约-1kpa至约1kpa之间或者在约-0.1kpa至约0.1kpa之间，包括其间的任何范围。根据各种实施例，正常操作流体压力在约1pa至约100kpa之间、在约1pa至约50kpa之间、在约1pa至约15kpa之间、在约1pa至约10kpa之间、在约1pa至约1kpa之间或者在约1pa至约0.1kpa之间，包括其间的任何范围。根据各种实施例，正常操作流体压力在约-100kpa至约-1pa之间、在约-50kpa至约-1pa之间、在约-15kpa至约-1pa之间、在约-10kpa至约-1pa之间、在约-1kpa至约-1pa之间或者在约-0.1kpa至约-1pa之间，包括其间的任何范围。
52.根据各种实施例，灌流可以在不剪切生物支架130的脉管的细胞的流体流速下发生。根据各种实施例，灌流可以在约1nl/min至约100ml/min、约10nl/min至约10ml/min、约100nl/min至约1ml/min、约1pl/min至约1ml/min、约1pl/min至约100pl/min、或约10pl/min至约100pl/min、约1ml/min至约100ml/min之间、包括其间任何范围的流速下发生。根据各种实施例，灌流可以发生以模拟潮汐通气，这可能包括正压灌流，带有流量变化，如血液泵送(例如，模拟心脏跳动)或连续流或在不剪切生物支架b130的流态内。例如，可以模仿人吃饭的时候，用高葡萄糖介质执行灌流约3小时、约6小时、约9小时或约12小时，随后用低葡萄糖介质执行灌流约3小时、约6小时、约9小时或约12小时。
53.根据各种实施例，生物支架套件100可选地包括粘合剂180。根据各种实施例，生物支架套件100可选地包括夹持工具或机构以保持粘合。根据各种实施例，粘合剂180是设置在基底140与加载板120之间的生物兼容和/或细胞兼容的粘合剂。根据各种实施例，粘合剂180被配置成保持基底140与加载板120之间的流体不渗透的结合。根据各种实施例，粘合剂180包括可降解或可生物降解的材料。根据各种实施例，粘合剂180包括诸如但限于液体粘合剂的材料，诸如2-部分环氧树脂、光活化环氧树脂或氰基丙烯酸酯，或者胶带粘合剂，诸如丙烯酸胶带粘合剂，诸如3m lse9474。
54.根据各种实施例，粘合剂280具有与加载板120的横向尺寸相似的横向尺寸，并且其厚度在0.1pm至5mm之间，包括在0.1pm至1pm、1pm至10pm、10pm至100pm、100pm至1mm、或1mm至5mm之间，包括其间的任何厚度值。
55.根据各种实施例，生物支架套件100可选地包括辅助部件190。根据各种实施例，辅助部件190可以包括可以在生物组件110的一个或多个血管部件135内或空隙138内流动的任何材料。根据各种实施例，辅助部件190可以包括具有多种流体成分的流体混合物。根据各种实施例，辅助部件190可以包括流体混合物，该流体混合物包括液体、泡沫或二级预基质。根据各种实施例，辅助部件190可以包括可以注入生物组件110的流体混合物。
56.根据各种实施例，生物组件110的生物支架130的空隙138是具有一个或多个入口的可灌流或可注入空间。根据各种实施例，生物组件110的生物支架130的空隙138是具有一个或多个出口的可灌流或可注入空间。可替代地，并且根据各种实施例，空隙138可以没有入口或出口。根据各种实施例，辅助部件190(诸如流体混合物)可以被配置成与活细胞组合，该组合可注入空隙138。根据各种实施例，空隙138包括物理锚，辅助部件190(诸如流体混合物)被分配到该物理锚周围。
57.根据各种实施例，辅助部件190包括可灌流介质，例如完整的介质、带有氧气载体、带有红细胞、全人类血液和/或不凝结的去纤维化人类血液。根据各种实施例，辅助部件190可以包括流体或液体，例如但不限于胆汁、血液、尿液、淋巴和/或生物组件110的一个或多个血管部件135内或空隙138内的气体。根据各种实施例，辅助部件190可以包括可以形成实质组织的材料，例如但不限于肝脏、肾脏、胰腺、肺、心脏、间质组织，例如但不限于成纤维细胞、间质干细胞(msc)和其他产生基质和支持细胞。根据各种实施例，辅助部件190可以包括可以形成“人造肉”的材料，诸如那些看起来类似于神户牛肉的大理石结构。
58.根据各种实施例，辅助部件190可以包括细胞或细胞类型，其可以形成来自由内皮层、上皮层、平滑肌细胞层、顺序递送的平滑肌细胞层和内皮层、顺序递送的平滑肌细胞层和上皮层、顺序递送的平滑肌细胞层、凝胶层、内皮层或上皮层、顺序递送的周细胞层和内皮层或顺序递送的周细胞层和上皮层组成的列表的一个或多个层。
59.根据各种实施例，生物支架套件100可以包括具有一个或多个血管部件135的生物支架130，该血管部件已经包括来自由内皮层、上皮层、平滑肌细胞层、顺序递送的平滑肌细胞层和内皮层、顺序递送的平滑肌细胞层和上皮层、顺序递送的平滑肌细胞层、凝胶层、内皮层或上皮层、顺序递送的周细胞层和内皮层或顺序递送的周细胞层和上皮层组成的列表的细胞或细胞类型(例如，已经有内衬)。
60.根据各种实施例，辅助部件190包括3d打印材料，例如但不限于生物组件110的生物支架130内的间质细胞，诸如成纤维细胞、hmscs和内皮细胞。根据各种实施例，辅助部件190包括生物基质材料，例如但不限于纤维蛋白原、甲基丙烯酸纤维蛋白原、人工基底膜、甲基丙烯酸胶原蛋白、甲基丙烯酸丝、甲基丙烯酸透明质酸、甲基丙烯酸硫酸软骨素、甲基丙烯酸弹性蛋白、丙烯酸纤维素、甲基丙烯酸葡聚糖、甲基丙烯酸肝素、甲基丙烯酸nipaam、甲基丙烯酸壳聚糖、聚乙二醇降冰片、聚乙二醇二硫醇、硫酸盐化明胶、硫酸盐化壳聚糖、硫酸盐化丝、基于peg的肽结合物或其任何组合。
61.根据各种实施例，辅助部件190可以包括在生物支架套件100中，并在以下温度下低温保存：例如低于10℃、0℃、-10℃、-25℃、-50℃、-75℃、-100℃、-150℃、-200℃、-250℃或-270℃。
62.根据各种实施例，生物支架系统包括可以通过添加特定的细胞或ecm来适应组织类型而定制的生物组件110。根据各种实施例，生物组件110包括具有架构的空白生物支架，由此辅助部件190的注入细胞可以占位、增殖、迁移、侵入脉管系统，如转移。根据各种实施例，生物支架系统可以在类似于化疗药物的外源性因素控制下进行定制。根据各种实施例，生物组件110包括空白生物支架，其架构可以注入任何类型的细胞，以获得具有该特定注入细胞类型的细胞培养物的试验。根据各种实施例，生物组件110包括空白生物支架，其架构被注入癌细胞以获得癌细胞侵入试验。根据各种实施例，生物组件110包括空白生物支架，
其架构被注入肝细胞以获得肝脏毒理学筛选平台。根据各种实施例，生物组件110包括空白生物支架，其架构被注入心脏细胞以获得心脏毒理学筛选平台。根据各种实施例，生物组件110包括空白生物支架，其架构被注入肾脏细胞以获得肾脏毒理学筛选平台。根据各种实施例，生物组件110包括空白生物支架，其架构被注入脑细胞以获得脑毒理学筛选平台。根据各种实施例，生物组件110包括空白生物支架，其架构被注入肠道细胞以获得肠道毒理学或肠道渗透性筛选平台。根据各种实施例，生物组件110包括空白生物支架，其架构被注入肺部细胞以获得肺部毒理学或气体运输筛选平台。根据各种实施例，生物组件110提供适合于高重复性和高通量筛选的相同的组织架构。
63.根据各种实施例，生物支架系统包括多个生物组件110，其中多个生物组件110中的每一个可以通过添加特定的细胞或ecm来定制以适应不同的组织类型。根据各种实施例，生物支架系统包括多个生物组件110，其中多个生物组件110中的每一个可以通过添加特定的细胞或ecm来定制以包括同一组织类型。
64.根据各种实施例，多个生物组件110中的每一个可以以单个流体流速对生物组件110中每一个进行灌流，这实现了生物组件的阵列化以用于高通量实验。根据各种实施例，多个生物组件110中的每一个可以独立地以不同的流体流速和/或不同的压力对生物组件110中的每一个进行灌流。即，多个生物组件110中的每一个可以单独地且独立地以与多个生物组件110中的另一个不同的在入口和出口处的流体流速或不同压力组合进行泵送。
65.根据各种实施例，多个生物组件110中的每一个可以用相同的流体或流体混合物进行泵送，以用于灌流多个生物组件110。根据各种实施例，多个生物组件110中的每一个可以用单独定制的且与多个生物组件110中的另一个不同的不同流体或流体混合物进行泵送。根据各种实施例，多个生物组件110中的每一个可以被配置成用作迷你器官，并可以被移植以用于治疗用途。根据各种实施例，多个生物组件110中的每一个可以被配置成用作不同于多个生物组件110中的另一个的迷你器官，并且可以被移植以用于治疗用途。
66.根据各种实施例，生物组件110是基本透明的。根据各种实施例，生物组件110是透明的，并且适合于用可见光、荧光和/或冷光进行成像。根据各种实施例，生物组件110是透明的，并且适合于在经由振动切片机、显微切片机或低温恒温器切片后进行组织学、免疫组织化学或免疫荧光染色之后成像。根据各种实施例，生物组件110包括作为非细胞化区域的区域，该区域为成像提供光导管。
67.图2是根据各种实施例的生物支架套件200的示意图。根据各种实施例，生物支架套件200包括生物组件210、板220、加载器260，并且可以可选地包括粘合剂280和/或辅助部件290。根据各种实施例，生物组件210包括生物支架230。根据各种实施例，生物组件210可选地包括基底240。根据各种实施例，生物支架230包括血管部件235。根据各种实施例，生物支架230可选地包括空隙238。根据各种实施例，平板220包括分隔件250。根据各种实施例，加载器260可以包括加载器入口262和加载器出口264。
68.根据各种实施例，生物组件210包括贴附或以其他方式布置在基底240上的生物支架230。根据各种实施例，生物支架230经由任何合适的结合技术贴附或以其他方式布置在基底240上，该结合技术包括例如但不限于将生物支架230共价结合到基底240的顶表面，该顶表面可以用硅烷或任何其他手段进行功能化以促进生物支架230与基底240之间的粘合。根据各种实施例，粘合剂可以包括胶带、液体粘合剂/凝胶或者uv固化材料或者任何其他合
适的材料。根据各种实施例，基底是与分隔件紧密接触的载玻片。根据各种实施例，生物支架230是水凝胶，其可以在没有共价结合的情况下布置在基底240上。根据各种实施例，生物支架230可以布置在基底240上。
69.根据各种实施例，基底240包括与基底140相同的材料，并因此将不进一步详细描述。
70.根据各种实施例，生物支架230包括与生物支架130相同的材料，并因此将不进一步详细描述。
71.根据各种实施例，生物支架230包括一个或多个血管部件235。根据各种实施例，生物支架230与一个或多个血管部件235一起可以被3d打印或成型。根据各种实施例，一个或多个血管部件235包括血管入口和血管出口。根据各种实施例，一个或多个血管部件235包括一个或多个通道，这些通道可以在生物支架230内分支出来。根据各种实施例，一个或多个血管部件235的一个或多个通道可以包括可以例如形成为环形结的分支，其中，通道在生物支架230内的另一点处重新汇合。根据各种实施例，一个或多个血管部件235可以包括分支结构，这些分支结构可以从生物支架230的各个部分延伸，并终止于生物支架230内的其他部分。根据各种实施例，一个或多个血管部件235可以具有多尺度脉管系统，该多尺度脉管系统具有类似于人体器官的分支和锥度。
72.根据各种实施例，一个或多个血管部件235具有横截面或长宽比为任何形状的一个或多个通道，其横截面尺寸或宽度(例如，如果是圆形，则横截面尺寸为直径)的范围为约5pm至约5mm、约10pm至约3mm、约10pm至约1mm、约20pm至约500pm、约50pm至约500pm、约50pm至约1mm、或者约50pm至约3mm，包括其间的任何范围。
73.根据各种实施例，一个或多个血管部件235具有横截面或长宽比为任何形状的一个或多个通道，其横截面尺寸或宽度(例如，如果是圆形，则横截面尺寸为直径)为约800pm或更少、约500pm或更少、约400pm或更少、约300pm或更少、约200pm或更少、约100pm或更少、或者约50pm或更少。根据各种实施例，一个或多个血管部件235是可灌流的。根据各种实施例，一个或多个血管部件235的一个或多个通道响应于一个或多个血管部件235内的压力、机械、电气和/或化学刺激的增加而可扩张。根据各种实施例，一个或多个血管部件235的一个或多个通道响应于一个或多个血管部件235内的压力、机械、电气和/或化学刺激而可收缩。
74.根据各种实施例，一个或多个血管部件235可以包括收窄入口和收窄出口。根据各种实施例，一个或多个血管部件235可以包括一个或多个血管入口。根据各种实施例，一个或多个血管部件235可以包括一个或多个血管出口。根据各种实施例，一个或多个血管部件235中的每一个可以包括血管入口和血管出口。根据各种实施例，用于一个或多个血管部件235的第一血管部件的血管入口和血管出口被设置成与一个或多个血管部件235的第二血管部件的血管入口和血管出口基本正交。
75.根据各种实施例，一个或多个血管部件235中的每一个可以包括生物组件210中的腔室或隔室，细胞的可流动悬浮液被注入该腔室或隔室。根据各种实施例，一个或多个血管部件235中的每一个可以包括生物组件210中的不同的腔室或不同的隔室类型，其中不同的细胞类型被注入不同的隔室。
76.根据各种实施例，生物支架230可选地包括空隙238。根据各种实施例，一个或多个
100kpa(负压，诸如抽吸)至约100kpa(正压，诸如泵送的流体、液体或气体)之间、在约-50kpa至约50kpa之间、在约-15kpa至约15kpa之间、在约-10kpa至约10kpa之间或者在约-1kpa至约1kpa之间。
88.根据各种实施例，灌流可以在不剪切生物支架230的流体流速下发生。例如，灌流可以发生以模仿潮汐通气，这可能包括正压灌流，带有流量变化，如血液泵送(例如，模仿心脏跳动)或连续流或在不剪切生物支架230的流态内。例如，可以模仿人吃饭的时候，用高葡萄糖介质执行灌流约3小时、约6小时、约9小时或约12小时，随后用低葡萄糖介质执行灌流约3小时、约6小时、约9小时或约12小时。
89.根据各种实施例，生物支架套件200可选地包括粘合剂280。根据各种实施例，粘合剂280是设置在基底240与板220之间的生物兼容的粘合剂。根据各种实施例，粘合剂280被配置成保持基底240与板220之间的流体不渗透的结合。根据各种实施例，粘合剂280包括可降解或可生物降解的材料。
90.根据各种实施例，粘合剂280包括与粘合剂180相同的材料，并因此将不进一步详细描述。
91.根据各种实施例，生物支架套件200可选地包括辅助部件290。根据各种实施例，辅助部件290可以包括可以在生物组件210的一个或多个血管部件235内或空隙238内流动的任何材料。根据各种实施例，辅助部件290可以包括具有多种流体成分的流体混合物。根据各种实施例，辅助部件290可以包括流体混合物，该流体混合物包括液体、泡沫或二级预基质。根据各种实施例，辅助部件290可以包括可以注入生物组件210的流体混合物。
92.根据各种实施例，生物组件210的生物支架230的空隙238是具有一个或多个入口的可灌流或可注入空间。根据各种实施例，生物组件210的生物支架230的空隙238是具有一个或多个出口的可灌流或可注入空间。根据各种实施例，辅助部件290(诸如流体混合物)可以被配置成与活细胞组合，该组合可以注入空隙238。根据各种实施例，空隙238包括物理锚，辅助部件290(诸如流体混合物)被分配到该物理锚周围。
93.根据各种实施例，辅助部件290包括可灌流介质，例如完整的介质、带有氧气载体、带有红细胞、全人类血液和/或不凝结的去纤维化人类血液。根据各种实施例，辅助部件290可以包括流体或液体，例如但不限于胆汁、血液、尿液、淋巴和/或生物组件210的一个或多个血管部件235内或空隙238内的气体。根据各种实施例，辅助部件290可以包括可以形成实质组织的材料，例如但不限于肝脏、肾脏、胰腺、肺、心脏、间质组织，例如但不限于成纤维细胞、间质干细胞(msc)和其他产生基质和支持细胞。根据各种实施例，辅助部件290可以包括可以形成“人造肉”的材料，诸如那些看起来类似于神户牛肉的大理石结构。
94.根据各种实施例，辅助部件190可以包括细胞或细胞类型，其可以形成来自由内皮层、上皮层、平滑肌细胞层、顺序递送的平滑肌细胞层和内皮层、顺序递送的平滑肌细胞层和上皮层、顺序递送的平滑肌细胞层、凝胶层、内皮层或上皮层、顺序递送的周细胞层和内皮层或顺序递送的周细胞层和上皮层组成的列表的一个或多个层。
95.根据各种实施例，辅助部件290包括3d打印材料，例如但不限于生物组件210的生物支架230内的间质细胞，诸如成纤维细胞、hmscs和内皮细胞。
96.根据各种实施例，辅助部件290可以包括在生物支架套件200中，并在以下温度下低温保存：例如低于10℃、0℃、-10℃、-25℃、-50℃、-75℃、-100℃、-150℃、-200℃、-250℃
或-270℃。
97.根据各种实施例，生物支架系统包括可以通过添加特定的细胞或ecm来适应组织类型而定制的生物组件210。根据各种实施例，生物组件210包括具有架构的空白生物支架，由此辅助部件290的注入细胞可以占位、增殖、迁移、侵入脉管系统，如转移。根据各种实施例，生物支架系统可以在类似于化疗药物的外源性因素控制下进行定制。根据各种实施例，生物组装210包括空白生物支架，其架构可以注入任何类型的细胞，以获得具有该特定注入细胞类型的细胞培养物的试验。根据各种实施例，生物组件210包括空白生物支架，其架构被注入癌细胞以获得癌细胞侵入试验。根据各种实施例，生物组件210包括空白生物支架，其架构被注入肝细胞以获得肝脏毒理学筛选平台。根据各种实施例，生物组件210包括空白生物支架，其架构被注入心脏细胞以获得心脏毒理学筛选平台。根据各种实施例，生物组件210包括空白生物支架，其架构被注入肾脏细胞以获得肾脏毒理学筛选平台。根据各种实施例，生物组件210包括空白生物支架，其架构被注入脑细胞以获得脑毒理学筛选平台。根据各种实施例，生物组件210包括空白生物支架，其架构被注入肠道细胞以获得肠道毒理学或肠道渗透性筛选平台。根据各种实施例，生物组件210包括空白生物支架，其架构被注入肺部细胞以获得肺部毒理学或气体运输筛选平台。根据各种实施例，生物组件210提供合于高重复性和高通量筛选的相同的组织架构。
98.根据各种实施例，生物组件210是基本透明的。根据各种实施例，生物组件210是透明的，并且适合于用可见光、荧光和/或冷光进行成像。根据各种实施例，生物组件210是透明的，并且适合于在经由振动切片机、显微切片机或低温恒温器切片后进行组织学、免疫组织化学或免疫荧光染色之后成像。根据各种实施例，生物组件210包括作为非细胞化区域的区域，该区域为成像提供光导管。
99.根据各种实施例，加载器260可以包括与多个分隔件250中的每一个相关的至少一个加载器入口262和至少一个加载器出口262。根据各种实施例，加载器260还包括流体入口通道和流体出口通道。根据各种实施例，流体入口通道与加载器入口262流体连通。根据各种实施例，流体出口通道与加载器出口264流体连通。根据各种实施例，流体入口通道与多于一个加载器入口262流体连通。根据各种实施例，流体出口通道与多于一个加载器出口264流体连通。
100.根据各种实施例，一个加载器的流体出口用作同一设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。根据各种实施例，一个加载器的流体出口用作不同设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。根据各种实施例，一个加载器的流体出口用作同一设备和/或不同设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。关于图4a至图4e，将进一步详细描述各种示例连接方案。根据各种实施例，一个加载器的流体出口可以用作同一设备上的一个或多个备用加载器的流体入口，例如图4d的互连件456d-1。根据各种实施例，一个加载器的流体出口用作不同设备上的一个或多个备用加载器的流体入口，例如图4e的互连件456e。根据各种实施例，一个生物支架可以通过在加载板中加入从出口行进到入口的内部通道(而不是如关于图4c所示的连接管)连接到同一加载板内的另一生物支架。
101.图3a是根据各种实施例的生物支架套件300的示意图。图3b是图3a的生物支架套件300的另一示意图。图3a的生物支架套件300的示意图是图3b所示的组装的生物支架套件300的分解图。
102.如图3a和图3b所示，生物支架套件300包括生物组件310、加载板320和粘合剂380。根据各种实施例，生物组件310包括生物支架330。根据各种实施例，生物组件310包括基底340。根据各种实施例，生物支架330包括血管部件335。根据各种实施例，加载板320包括分隔件350。根据各种实施例，分隔件350可以包括分隔件入口352和分隔件出口354。
103.根据各种实施例，分隔件350可以具有配置用于入口或出口的开口。根据各种实施例，生物支架330可以化学地结合到分隔件开口(例如，没有分隔件入口352或出口354)。根据各种实施例，化学结合可以导致生物支架330与分隔件350之间的密封，以用于实现流体混合物流过这两个部件。
104.根据各种实施例，生物支架套件300还可以包括辅助部件。根据各种实施例，生物支架套件300包括与生物支架套件100相同的材料，并且因此除非另有描述，否则将不进一步详细描述。如图3a和图3b所示，管328连接到分隔件入口352和分隔件出口354，并被配置成灌流辅助部件。
105.根据各种实施例，生物组件310包括贴附或以其他方式布置在基底340上的生物支架330。根据各种实施例，生物支架330经由任何合适的结合技术贴附或以其他方式布置在基底340上，该结合技术包括例如但不限于将生物支架330共价结合到基底340的顶表面，该顶表面可以用硅烷或任何其他手段进行功能化以促进生物支架330与基底340之间的粘合。根据各种实施例，粘合剂可以包括胶带、液体粘合剂/凝胶或者uv固化材料或者任何其他合适的材料。根据各种实施例，基底是与分隔件紧密接触的载玻片。根据各种实施例，生物支架330是水凝胶，其可以在没有共价结合的情况下布置在基底340上。根据各种实施例，生物支架330可以布置在基底340上。
106.根据各种实施例，基底340可以用作细胞培养环境中的基底。根据各种实施例，基底340可以是透明的玻璃或塑料或者任何其他合适的材料(例如但不限于聚碳酸酯、聚砜、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、环烯烃共聚物、聚乙烯、聚丙烯、玻璃、石英、云母、红外透明盐(诸如溴化钙、溴化钾))、或者这些材料中的任一种与任何其他材料的薄膜组合或与金属薄膜组合，以实现基于表面等离子体的测量。
107.根据各种实施例，生物支架330包括与生物支架130相同的材料，并因此将不进一步详细描述。
108.根据各种实施例，生物支架330包括一个或多个血管部件335。在图3a中，生物支架330被示出为包括两个血管部件335。根据各种实施例，血管部件335包括两个血管入口和两个血管出口。根据各种实施例，血管部件335可以包括一个或多个通道，这些通道可以在生物支架330内分支为树状结构。根据各种实施例，血管部件335的一个或多个通道可以包括可以例如形成为环形结的分支，其中，通道在生物支架330内的另一点处重新汇合。根据各种实施例，血管部件335可以包括分支结构，这些分支结构可以从生物支架330的各个部分延伸，并终止于生物支架330内的其他部分。根据各种实施例，一个或多个血管部件335可以具有多尺度脉管系统，该多尺度脉管系统具有类似于人体器官的分支和锥度。
109.根据各种实施例，部件335具有横截面或长宽比为任何形状的一个或多个通道，其横截面尺寸或宽度(例如，如果是圆形，则横截面尺寸为直径)的范围在约10pm至约1mm、100pm至约500pm、或约800微米或更小、约500微米或更小、约400微米或更小、约300微米或更小或者200微米或更小。根据各种实施例，血管部件335是可灌流的。根据各种实施例，血
管部件335的一个或多个通道响应于一个或多个血管部件335内的压力、机械、电气和/或化学刺激的增加而可扩张。根据各种实施例，一个或多个血管部件335的一个或多个通道响应于一个或多个血管部件335内的压力、机械、电气和/或化学刺激而可收缩。
110.根据各种实施例，血管部件335可以包括收窄入口和收窄出口。根据各种实施例，用于血管部件335的第一血管部件的血管入口和血管出口被设置成与血管部件335的第二血管部件的血管入口和血管出口基本正交。
111.根据各种实施例，血管部件335中的每一个可以包括生物组件310中的腔室或隔室，细胞的可流动悬浮液被注入该腔室或隔室中。根据各种实施例，血管部件335中的每一个可以包括生物组件310中的不同的腔室或不同的隔室类型，其中不同的细胞类型被注入不同的隔室。根据各种实施例，生物支架330可选地包括空隙。
112.根据各种实施例，加载板320包括分隔件350，该分隔件包括分隔件入口352和分隔件出口354。根据各种实施例，分隔件入口352和分隔件出口354与加载板320的顶表面基本平行。根据各种实施例，分隔件入口352和分隔件出口354彼此相邻，并布置在加载板320的同一侧上。根据各种实施例，分隔件入口352和分隔件出口354布置在加载板320的不同侧上。根据各种实施例，分隔件入口352和分隔件出口354布置在加载板320的相对侧上。根据各种实施例，分隔件入口352和分隔件出口354具有锥化或逐渐锥化的尖端。
113.根据各种实施例，加载板320包括多个分隔件350。根据各种实施例，多个分隔件350中的每一个包括分隔件入口352和分隔件出口354。根据各种实施例，加载板320包括1至1000个分隔件，包括3、4、6、12、24、48、96、192或384个分隔件350。根据各种实施例，多个分隔件350中的每一个包括至少一组且至多20组的分隔件入口352和分隔件出口354。
114.根据各种实施例，加载板320包括分隔件350，该分隔件包括内部容积355。根据各种实施例，多个分隔件350中的每一个包括内部容积355。根据各种实施例，多个分隔件350中的每一个成形为将生物组件310接收在内部容积355中。
115.根据各种实施例，分隔件入口352和分隔件出口354与生物支架330流体连通。根据各种实施例，血管入口与分隔件入口352流体连通。根据各种实施例，血管出口与分隔件出口354流体连通。根据各种实施例，一个或多个血管入口中的每一个与相关的分隔件入口流体连通，并且一个或多个血管出口中的每一个与相关的分隔件出口流体连通。
116.根据各种实施例，生物组件310和分隔件的流体连通由生物组件310中的锥形收缩部居间引导，并在灌流期间以正常操作流体压力提供流体密封。根据各种实施例，流体密封是在分隔件350的入口352/出口354的较大尺寸与生物支架330的入口/出口的较小尺寸之间提供尺寸差。根据各种实施例，母体(生物支架330的入口/出口)与公体(分隔件350的入口352/出口354)之间的机械配合在公体与母体特征之间提供过盈配合。根据各种实施例，适配器可以用于在分隔件350的入口352/出口354与生物支架330的入口/出口之间提供流体密封。
117.根据各种实施例，灌流可以在各种灌流机制下发生，例如但不限于在重力流下，经由用于正压的泵或经由用于负压的真空抽吸。根据各种实施例，正常操作流体压力在约-100kpa(负压，诸如抽吸)至约100kpa(正压，诸如泵送的流体、液体或气体)之间、在约-50kpa至约50kpa之间、在约-15kpa至约15kpa之间、在约-10kpa至约10kpa之间或者在约-1kpa至约1kpa之间。
118.根据各种实施例，生物支架套件300包括粘合剂380。根据各种实施例，粘合剂380是设置在基底340与加载板320之间的生物兼容的粘合剂。根据各种实施例，粘合剂380被配置成保持基底340与加载板320之间的流体不渗透的结合。根据各种实施例，粘合剂380包括可降解或可生物降解的材料。
119.根据各种实施例，粘合剂380包括与粘合剂180相同的材料，并因此将不进一步详细描述。
120.根据各种实施例，生物支架套件300可选地包括辅助部件。根据各种实施例，辅助部件可以包括可以在血管部件335内流动的任何材料。根据各种实施例，辅助部件可以包括具有多种流体成分的流体混合物。根据各种实施例，辅助部件可以包括流体混合物，该流体混合物包括液体、泡沫或二级预基质。根据各种实施例，辅助部件可以包括可以注入生物组件310的流体混合物。
121.根据各种实施例，生物组件310的生物支架330的血管部件335是具有一个或多个入口的可灌流或可注入空间。根据各种实施例，血管部件335是具有一个或多个出口的可灌流或可注入空间。根据各种实施例，辅助部件(诸如流体混合物)可以在注入血管部件335之前与活细胞组合。根据各种实施例，血管部件335包括物理锚，辅助部件(诸如流体混合物)被分配到该物理锚周围。
122.根据各种实施例，辅助部件与辅助部件190相同，并因此将不进一步详细讨论。
123.根据各种实施例，生物支架系统包括可以通过添加特定的细胞或ecm来适应组织类型而定制的生物组件310。根据各种实施例，生物组件310包括具有架构的空白生物支架，由此辅助部件的注入细胞可以占位、增殖、迁移、侵入血管，如转移。根据各种实施例，生物支架系统可以在类似于化疗药物的外源性因素控制下进行定制。根据各种实施例，生物组件310包括空白生物支架，其架构可以注入任何类型的细胞，以获得具有该特定注入细胞类型的细胞培养物的试验。根据各种实施例，生物组件310包括空白生物支架，其架构被注入癌细胞以获得癌细胞侵入试验。根据各种实施例，生物组件310包括空白生物支架，其架构被注入肝细胞以获得肝脏毒理学筛选平台。根据各种实施例，生物组件310提供适合于高重复性和高通量筛选的相同的组织架构。
124.根据各种实施例，生物组件310是基本透明的。根据各种实施例，生物组件310是透明的，并且适合于用可见光、荧光和/或冷光进行成像。根据各种实施例，生物组件310包括作为非细胞化区域的区域，该区域为成像提供光导管。
125.图3c和图3d是根据各种实施例的具有盖子302的生物组装套件300的示意图。根据各种实施例，如图3c和图3d所示，盖子302被配置成可移除地覆盖或关闭分隔件350，使得内部容积355被封闭。根据各种实施例，盖子302可以是用于密封的紧密配合件，也可以是松弛配合件，使得可以容易地执行液体/细胞/生物材料的添加。根据各种实施例，生物组件套件300的有盖分隔件350可以在内部容积355内保持期望的操作参数，例如，以防止生物组件310中的流体混合物蒸发或干燥。使用盖子(诸如盖子302)或类似类型的机构或配置可以在本文讨论的关于图4至图7所示和描述的任何实施例中应用和使用。
126.图4a是根据各种实施例的示例生物支架套件400a的示意图。如图4a所示，以俯视图示出的生物支架套件400a包括生物组件410a，该生物组件包括生物支架430a和加载板420a。根据各种实施例，生物支架430a包括两个血管部件435a。根据各种实施例，加载板
420a包括分隔件450a，这些分隔件均具有内部容积455a。如图4a所示，分隔件450a中的每一个包括分隔件入口452a和分隔件出口454a。
127.根据各种实施例，生物支架套件400a还可以包括辅助部件。根据各种实施例，管328连接到分隔件入口452a和分隔件出口454a，并被配置成灌流辅助部件。根据各种实施例，生物支架套件400a与生物支架套件300相同或基本相似，并因此将不进一步详细描述。
128.图4b是根据各种实施例的另一示例生物支架套件400b的示意图。根据各种实施例，生物支架套件400b与图4a所示的生物支架套件400a基本相似。如图4b所示，以立体图示出的生物支架套件400b包括生物组件410b，该生物组件包括生物支架430b和加载板420b。根据各种实施例，生物支架430b包括单个血管部件435b。根据各种实施例，分隔件450b中的每一个包括单个分隔件入口452b和单个分隔件出口454b。根据各种实施例，关于图4b所示和描述的生物支架套件400b与关于图4a所示和描述的生物支架套件400a相似，除了分隔件450b中的每一个包括单个分隔件入口452b和单个分隔件出口454b，而分隔件450b中的每一个包括两个分隔件入口452b和两个分隔件出口454b。
129.图4c是根据各种实施例的另一示例生物支架套件400c的示意图。如图4c所示，以俯视图示出的生物支架套件400c包括生物组件410c，该生物组件包括布置在加载板420c的单个分隔件450c(图4c中的中心分隔件)内的两个生物支架430c1和430c2。根据各种实施例，生物支架430c1和430c2均包括单个血管部件，分别为435c1和435c2。根据各种实施例，分隔件450c中的每一个包括分隔件入口452c和分隔件出口454c。如图4c所示，分隔件入口452c连接到单个血管部件435c1的入口，然后单个血管部件435c1的出口经由互连件456c连接到单个血管部件435c2的入口，并且单个血管部件435c2的出口连接到分隔件出口454c。根据各种实施例，图4c示出了形成在单个分隔件450c内的相邻的生物支架430c1与430c2之间的菊花链结构。菊花链结构被限定为连接方案，其中多个设备或部件被依次连接。例如，菊花链不同的设备或同一设备内的不同加载器在本文所示和描述的所有实施方案中是常见的。根据各种实施例，图4c所示的菊花链结构或配置允许在单个生物组件410c内连接两个生物支架430c1和430c2以流体连通，并因此该结构可配置成使相同流体或流体混合物以单一速率流动。根据各种实施例，与中心分隔件相邻的分隔件450c可以被配置成使不同的或相同的流体或流体混合物以不同的(且独立)流速或相同的流速流动。根据各种实施例，以不同的流速且独立地流动包括使用单独的可控泵、泵送机构或抽吸机构。
130.图4d是根据各种实施例的另一示例生物支架套件400d的示意图。如图4d所示，以俯视图示出的生物支架套件400d包括生物组件410d和加载板420d。根据各种实施例，加载板420d包括三个分隔件450d1、450d2和450d3。根据各种实施例，生物组件410d包括三个生物支架430d1、430d2和430d3，如图4d所示，这三个生物支架布置在相应的分隔件450d1、450d2和450d3中的每一个内。尽管示出为仅包括三组分隔件和生物支架，但根据各种实施例，可以使用任何数量的分隔件和生物支架。
131.根据各种实施例，如图4d所示，生物支架430d1、430d2和430d3分别包括血管部件435d1、435d2和435d3。尽管示出为在生物支架中的每一个中包括单个血管部件，但根据各种实施例，在生物支架中的每一个中可以包括任何数量的血管部件。根据各种实施例，加载板420d包括分隔件入口452d和分隔件出口454d。如图4c所示，分隔件入口452d连接到血管部件435d1的入口，血管部件435d1的出口经由互连件456d-1连接到血管部件435d2的入口，
血管部件435d2的出口经由互连件456d-2连接到血管部件435d3的入口，并且血管部件435d3的出口连接到分隔件出口454d。根据各种实施例，图4d示出了形成在生物支架430d1、430d2与430d3之间的菊花链结构，这些生物支架存在于其相应的分隔件450d1、450d2和450d3内。根据各种实施例，图4d所示的菊花链结构或配置允许连接三个生物支架430d1、430d2和430d3，这三个生物支架布置在三个单独的分隔件450d1、450d2和450d3内以流体连通。根据各种实施例，图4d的结构可配置成使用泵、泵送机构或抽吸机构使相同流体或流体混合物以单一速率流动经由入口452d和出口454d。
132.图4e是根据各种实施例的另一示例生物支架套件400e的示意图。如图4e所示，以俯视图示出的生物支架套件400e包括两个生物支架套件400e1和400e2，它们经由互连件456e连接。根据各种实施例，图4e示出了形成在相邻生物支架套件之间的菊花链结构。尽管示出为仅包括两个生物支架套件，但任何数量的生物支架套件可以互连或菊花链连接。根据各种实施例，生物支架套件400e1或400e2可以用生物支架套件100、200、300、400a、400b、400c或400d中的任一个替换，和/或可以以任何可能的配置连接或互连以流体连通，例如，经由任何泵、泵送机构或抽吸机构使相同的流体或流体混合物或不同的流体或流体混合物以单一速率或可以独立控制的不同速率流动。换言之，所公开的配置、实施例和各种实施方案类型或本文所描述的配置方案只是为了说明实施例和示例的各种可能的组合，并因此这些绝不是仅限于说明和示例。根据各种实施例，可以采用和适用各种公开的结构的任何可能的组合和排列组合，并因此仅受本领域技术人员的想象力的限制。
133.图5a是根据各种实施例的生物支架套件500的示意图。图5b是图5a的生物支架套件500的另一示意图。图5a的生物支架套件500的示意图是图5b所示的组装的生物支架套件500的分解图。
134.如图5a和图5b所示，生物支架套件500包括生物组件510、板520、加载器560，并且可以可选地包括粘合剂和/或辅助部件。根据各种实施例，生物组件510包括生物支架530。如图5a所示，生物组件510包括基底540。根据各种实施例，生物支架530包括血管部件535。根据各种实施例，生物支架530可选地包括空隙。根据各种实施例，板520包括分隔件550。根据各种实施例，加载器560包括加载器入口562和加载器出口564。根据各种实施例，加载器560包括流体入口通道566和流体出口通道568。如图5a所示，生物支架套件500还可以包括有助于固定流体入口和出口的各种其他部件569。
135.根据各种实施例，生物支架530包括与生物支架130相同的材料，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，生物支架530包括一个或多个血管部件535，尽管在图5a中仅示出了一个血管部件535。根据各种实施例，生物支架530与一个或多个血管部件535一起可以被3d打印或成型。根据各种实施例，一个或多个血管部件535中的每一个包括血管入口和血管出口。根据各种实施例，一个或多个血管部件535包括一个或多个通道，这些通道可以在生物支架530内分支为树状结构。根据各种实施例，一个或多个血管部件535的一个或多个通道可以包括可以例如形成环形结的分支，其中，通道在生物支架530内的另一点处重新汇合。根据各种实施例，一个或多个血管部件535可以包括分支结构，这些分支结构可以从生物支架530的各个部分延伸，并终止于生物支架530的其他部分。根据各种实施例，一个或多个血管部件535可以具有多尺度脉管系统，该多尺度脉管系统具有类似于人体器官的分支和锥度。
136.根据各种实施例，一个或多个血管部件535具有横截面或长宽比为任何形状的一个或多个通道，其横截面尺寸或宽度(例如，如果是圆形，则横截面尺寸为直径)的范围在约10pm至约1mm、100pm至约500pm、或者约800微米或更小、约500微米或更小、约400微米或更小、约300微米或更小或者200微米或更小。根据各种实施例，一个或多个血管部件535是可灌流的。根据各种实施例，一个或多个血管部件535的一个或多个通道响应于一个或多个血管部件535内的压力、机械、电气和/或化学刺激的增加而可扩张。根据各种实施例，一个或多个血管部件535的一个或多个通道响应于一个或多个血管部件535内的压力、机械、电气和/或化学刺激而可收缩。
137.根据各种实施例，一个或多个血管部件535可以包括收窄入口和收窄出口。根据各种实施例，一个或多个血管部件535可以包括一个或多个血管入口。根据各种实施例，一个或多个血管部件535可以包括一个或多个血管出口。根据各种实施例，一个或多个血管部件535中的每一个可以包括血管入口和血管出口。根据各种实施例，用于一个或多个血管部件535的第一血管部件的血管入口和血管出口被设置成相对于一个或多个血管部件535的第二血管部件的血管入口和血管出口正交或基本正交、平行或基本平行、或呈0度至90度之间的角度。
138.根据各种实施例，一个或多个血管部件535中的每一个可以包括生物组件510中的腔室或隔室，细胞的可流动悬浮液被注入该腔室或隔室。根据各种实施例，一个或多个血管部件535中的每一个可以包括生物组件510中的不同的腔室或不同的隔室类型，其中不同的细胞类型被注入不同的隔室。
139.根据各种实施例，生物支架530可选地包括空隙。根据各种实施例，一个或多个血管部件535布置在空隙中。
140.根据各种实施例，板520包括分隔件550，该分隔件包括内部容积555。根据各种实施例，分隔件550成形为将生物组件510接收在内部容积555中。如图5a所示，板520包括布置成阵列的多个分隔件550。根据各种实施例，多个分隔件550中的每一个包括内部容积555。根据各种实施例，板520包括1至1000个分隔件，包括3、4、6、12、24、48、96、192或384个分隔件550。
141.根据各种实施例，加载器560包括加载器入口562和加载器出口564。根据各种实施例，加载器入口562和加载器出口564与板520的顶表面基本正交。根据各种实施例，加载器入口562和加载器出口564与加载器560的顶表面基本正交。根据各种实施例，加载器入口562和加载器出口564彼此相邻，并布置在加载器560的同一侧上。根据各种实施例，加载器入口562和加载器出口564布置在加载器560的不同侧上。根据各种实施例，加载器入口562和加载器出口564布置在加载器560的相对侧上。根据各种实施例，加载器入口562和加载器出口564布置在加载器560的顶表面上。根据各种实施例，加载器入口562和加载器出口564布置在加载器560的底表面上。根据各种实施例，加载器入口562和加载器出口564具有锥化或逐渐锥化的尖端。
142.根据各种实施例，加载器560可以包括多于一个加载器入口562和多于一个加载器出口564。根据各种实施例，加载器560可以包括多达384组加载器入口562和加载器出口564。根据各种实施例，加载器560可以被配置成与包括1至1000个分隔件(包括3、4、6、12、24、48、96、192或384个分隔件550)的板520一起工作。
143.根据各种实施例，加载器入口562和加载器出口564与生物支架530流体连通。根据各种实施例，血管入口与加载器入口562流体连通。根据各种实施例，血管出口与加载器出口564流体连通。根据各种实施例，一个或多个血管入口中的每一个与相关的加载器入口562流体连通，并且一个或多个血管出口中的每一个与相关的加载器出口564流体连通。
144.根据各种实施例，生物组件510和加载器的流体连通由生物组件510中的锥形收缩部居间引导，并在灌流期间以正常操作流体压力提供流体密封。根据各种实施例，灌流可以在各种灌流机制下发生，例如但不限于在重力流下，经由用于正压的泵或经由用于负压的真空抽吸。根据各种实施例，正常操作流体压力在约-100kpa(负压，诸如抽吸)至约100kpa(正压，诸如泵送的流体、液体或气体)之间、在约-50kpa至约50kpa之间、在约-15kpa至约15kpa之间、在约-10kpa至约10kpa之间或者在约-1kpa至约1kpa之间。
145.根据各种实施例，生物支架套件500可选地包括辅助部件。根据各种实施例，生物支架套件500与关于图2描述的生物支架套件200相同或基本相似，并因此将不进一步详细描述。
146.根据各种实施例，加载器560可以包括与多个分隔件550的每一个相关的至少一个加载器入口562和至少一个加载器出口562。根据各种实施例，加载器260还包括流体入口通道566和流体出口通道568。根据各种实施例，加载器260还包括多于一个流体入口通道566和多于一个流体出口通道568。如图5a所示，流体入口通道566和流体出口通道568中的每一个与多于一个加载器入口562和出口564流体连通。根据各种实施例，流体入口通道566与加载器入口562流体连通。根据各种实施例，流体出口通道568与加载器出口564流体连通。根据各种实施例，流体入口通道566与多于一个加载器入口562流体连通。根据各种实施例，流体出口通道568与多于一个加载器出口564流体连通。根据各种实施例，一个加载器的流体出口用作同一设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。根据各种实施例，一个加载器的流体出口用作不同设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。根据各种实施例，一个加载器的流体出口用作同一设备和/或不同设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。根据各种实施例，生物支架套件500的单个入口与一个或多个流体入口通道(诸如流体入口通道566)串联和/或并联地流体连通。根据各种实施例，生物支架套件500的单个入口经由一个或多个流体入口通道(诸如流体入口通道566)与一个或多个生物支架530串联和/或并联地流体连通。根据各种实施例，生物支架套件500的单个出口与一个或多个流体出口通道(诸如流体出口通道568)串联和/或并联地流体连通。根据各种实施例，生物支架套件500的单个出口经由一个或多个流体出口通道(诸如流体出口通道568)与一个或多个生物支架530串联和/或并联地流体连通。
147.图6a、图6b、图6c示出了根据各种实施例的示例生物组件610中的细胞加载的各个阶段。如图6a所示，生物组件610包括生物支架630，该生物支架包括血管部件635和空隙638。根据各种实施例，血管部件635包括血管入口637和血管出口639。根据各种实施例，生物组件610、生物支架630、血管部件635、血管入口637、血管出口639和空隙638与关于图1和图2描述的生物组件110和/或210、生物支架130和/或230、血管部件135和/或235、血管入口、血管出口和空隙相似或相同，并因此将不进一步详细描述。如图6b所示，各种细胞或细胞类型690可以经由使用移液管602被布置在生物组件610的空隙638中。图6c示出了根据各种实施例的在空隙638中具有各种细胞或细胞类型690的生物组件610，该生物组件可以用
于细胞培养。
148.图7a、图7b、图7c示出了根据各种实施例的在具有生物支架730的阵列的示例生物组件710中的细胞加载的各个阶段。如图7a所示，生物组件710包括生物支架730的阵列，其中生物支架730中的每一个包括血管部件735和空隙738。根据各种实施例，血管部件735中的每一个包括血管入口737和血管出口739。根据各种实施例，生物组件710、生物支架730、血管部件735、血管入口737、血管出口739和空隙738与关于图1和图2描述的生物组件110和/或210、生物支架130和/或230、血管部件135和/或235、血管入口、血管出口和空隙相似或相同，并因此将不进一步详细描述。如图7b所示，各种细胞或细胞类型790可以经由使用移液管702被布置在生物组合体710中的每一个的空隙738中的每一个中。图7c示出了根据各种实施例的在空隙738中具有各种细胞或细胞类型790的生物组件710，该生物组件可以用于细胞培养，例如在高通量实验中。
149.图8是根据各种实施例的用于生成细胞培养物的方法s100的流程图。根据各种实施例，方法s100包括在步骤s110提供包括基底和贴附到基底的生物支架的生物组件。根据各种实施例，基底是玻璃。根据各种实施例，生物支架是水凝胶。根据各种实施例，包括血管部件的生物支架是3d打印的。根据各种实施例，生物组件与生物组件110、210和/或310相似，并因此将不进一步详细描述。
150.根据各种实施例，生物支架包括具有血管入口和血管出口的血管部件。根据各种实施例，血管部件与血管部件135、235、335、435a和/或435b相似，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，血管入口与关于图1至图7描述的血管入口相似，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，血管出口与关于图1至图7描述的血管出口相似，并因此将不进一步详细描述。
151.根据各种实施例，基底与基底140、240和/或340相似，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，生物支架与生物支架130、230和/或330相似，并因此将不进一步详细描述。
152.如图8所示，方法s100包括在步骤s120提供包括分隔件的加载板，该分隔件包括分隔件出口和分隔件入口。根据各种实施例，加载板与加载板120、320、420a和/或420b相似，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，分隔件入口与分隔件入口152、352、452a和/或452b相似，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，分隔件出口与分隔件出口154、354、454a和/或454b相似，并因此将不进一步详细描述。
153.如图8所示，方法s100包括在步骤s130将分隔件入口连接到血管入口并将分隔件出口连接到血管出口。根据各种实施例，当生物支架被移动到加载板的分隔件的内部容积时，将分隔件入口连接到血管入口并将分隔件出口连接到血管出口。根据各种实施例，将分隔件入口连接到血管入口和将分隔件出口连接到血管出口发生在密封连接件中，在分隔件与血管入口和出口之间存在不可渗透的交接部。
154.如图8所示，方法s100包括在步骤s140将细胞附接到血管部件。根据各种实施例，血管入口与分隔件入口流体连通。根据各种实施例，血管出口与分隔件出口流体连通。根据各种实施例，血管部件包括收窄入口和/或收窄出口。根据各种实施例，血管部件包括一个或多个血管入口。根据各种实施例，血管部件包括一个或多个血管出口。根据各种实施例，生物支架包括多于一个血管部件。根据各种实施例，多于一个血管部件中的每一个包括血
管入口和血管出口。根据各种实施例，分隔件入口和分隔件出口与加载板的顶表面基本平行。根据各种实施例，分隔件包括多于一个分隔件入口和多于一个分隔件出口，并且其中，一个或多个血管入口中的每一个与相关的分隔件入口流体连通，并且一个或多个血管出口中的每一个与相关的分隔件出口流体连通。根据各种实施例，生物支架和分隔件的流体连通由生物支架中的锥形收缩部居间引导，并以正常操作流体压力提供流体密封。根据各种实施例，正常操作流体压力在-100kpa至100kpa之间。根据各种实施例，正常操作流体压力在-15kpa至15kpa之间。根据各种实施例，正常操作流体压力在-10kpa至10kpa之间。
155.根据各种实施例，该方法还包括将流体混合物注入生物支架，其中，流体混合物包括多种流体成分。根据各种实施例，流体混合物包括液体、泡沫或二级预基质。
156.根据各种实施例，生物支架包括空隙。根据各种实施例，空隙是具有一个或多个入口的可灌流或可注入空间。根据各种实施例，空隙是具有一个或多个出口的可灌流或可注入空间。根据各种实施例，流体混合物被配置成与活细胞组合，该组合可注入空隙。根据各种实施例，空隙包括物理锚。根据各种实施例，血管部件布置在空隙中。根据各种实施例，生物支架是基本透明的。根据各种实施例，加载板包括多个分隔件。根据各种实施例，多个分隔件中的每一个包括分隔件入口和分隔件出口。根据各种实施例，用于第一血管部件的血管入口和血管出口被设置成与第二血管部件的血管入口和血管出口基本正交。根据各种实施例，加载板包括1至1000个分隔件，包括3、4、6、12、24、48、96、192或384个分隔件。根据各种实施例，分隔件包括至少一组且至多20组分隔件入口和分隔件出口。
157.根据各种实施例，细胞可以是可以形成来自由内皮层、上皮层、平滑肌细胞层、顺序递送的平滑肌细胞层和内皮层、顺序递送的平滑肌细胞层和上皮层、顺序递送的平滑肌细胞层、凝胶层、内皮层或上皮层、顺序递送的周细胞层和内皮层或顺序递送的周细胞层和上皮层组成的列表的一个或多个层的任何细胞或细胞类型。
158.如图8所示，方法s100包括在步骤s150灌流血管部件以形成细胞层。根据各种实施例，细胞层可以包括内皮层、上皮层、平滑肌细胞层、顺序递送的平滑肌细胞层和内皮层、顺序递送的平滑肌细胞层和上皮层、顺序递送的平滑肌细胞层、凝胶层、内皮层或上皮层、顺序递送的周细胞层和内皮层或顺序递送的周细胞层和上皮层中的一个或多个。
159.根据各种实施例，方法s100可选地包括在步骤s160将具有或不具有水凝胶材料的个体细胞或多细胞聚集体添加到生物支架的空隙。
160.图9是根据各种实施例的用于生成细胞培养物的方法s200的另一流程图。根据各种实施例，方法s200包括在步骤s210提供包括基底和贴附到基底的生物支架的生物组件。根据各种实施例，基底是玻璃。根据各种实施例，生物支架是水凝胶。根据各种实施例，包括血管部件的生物支架是3d打印的。根据各种实施例，生物组件与生物组件110、210和/或310相似，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，基底与基底140、240和/或340相似，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，生物支架与生物支架130、230和/或330相似，并因此将不进一步详细描述。
161.根据各种实施例，生物支架包括具有血管入口和血管出口的血管部件。根据各种实施例，血管部件与血管部件135、235、335、435a和/或435b相似，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，血管入口与关于图1至图7描述的血管入口相似，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，血管出口与关于图1至图7描述的血管出口相似，并因此将不进一
步详细描述。
162.如图9所示，方法s200包括在步骤s220提供包括分隔件的板，该分隔件包括内部容积。根据各种实施例，板与板220和/或520相似，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，内部容积与内部容积255和/或355相似，并因此将不进一步详细描述。
163.如图9所示，方法s200包括在步骤s230提供包括加载器入口和加载器出口的加载器。根据各种实施例，加载器与加载器260和/或560相似，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，加载器入口与加载器入口262和/或562相似，并因此将不进一步详细描述。根据各种实施例，分隔件出口与加载器出口264和/或564相似，并因此将不进一步详细描述。
164.如图9所示，方法s200包括在步骤s240将带有血管部件的生物支架设置在分隔件的内部容积内。
165.如图9所示，方法s200包括在步骤s250将加载器入口连接到血管入口并将加载器出口连接到血管出口。根据各种实施例，其中，血管入口与加载器入口流体连通。根据各种实施例，血管出口与加载器出口流体连通。根据各种实施例，血管部件包括收窄入口和/或收窄出口。
166.根据各种实施例，血管部件包括一个或多个血管入口。根据各种实施例，血管部件包括一个或多个血管出口。根据各种实施例，生物支架包括多于一个血管部件。根据各种实施例，多于一个血管部件中的每一个包括血管入口和血管出口。
167.根据各种实施例，加载器入口和加载器出口与板的顶表面基本正交。根据各种实施例，加载器包括多于一个加载器入口和多于一个加载器出口。根据各种实施例，血管入口中的每一个与相关的加载器入口流体连通，并且血管出口中的每一个与相关的加载器出口流体连通。
168.根据各种实施例，生物支架和加载器的流体连通由生物支架中的锥形收缩部居间引导，并以正常操作流体压力提供流体密封。根据各种实施例，正常操作流体压力在-100kpa至100kpa之间。根据各种实施例，正常操作流体压力在-15kpa至15kpa之间。根据各种实施例，正常操作流体压力在-10kpa至10kpa之间。
169.根据各种实施例，该方法还包括将流体混合物注入生物支架，其中，流体混合物包括多种流体成分。根据各种实施例，流体混合物包括液体、泡沫或二级预基质。
170.根据各种实施例，生物支架包括空隙，其中，血管部件布置在空隙中。根据各种实施例，空隙是具有一个或多个入口的可灌流或可注入空间。根据各种实施例，空隙是具有一个或多个出口的可灌流或可注入空间。根据各种实施例，流体混合物被配置成与活细胞组合，该组合可注入空隙。根据各种实施例，空隙包括物理锚。根据各种实施例，生物支架是基本透明的。根据各种实施例，生物支架还包括亲水成分和疏水成分。
171.根据各种实施例，板包括多个分隔件。根据各种实施例，至少一个加载器入口和至少一个加载器出口与多个分隔件中的每一个相关联。根据各种实施例，用于第一血管部件的血管入口和血管出口被设置成与第二血管部件的血管入口和血管出口基本正交。根据各种实施例，板包括1至1000个分隔件，包括3、4、6、12、24、48、96、192或384个分隔件。根据各种实施例，加载器包括多达384组加载器入口和加载器出口。
172.根据各种实施例，加载器还包括流体入口通道和流体出口通道。根据各种实施例，流体入口通道与加载器入口流体连通。根据各种实施例，流体出口通道与加载器出口流体
连通。根据各种实施例，流体入口通道与多于一个加载器入口流体连通。根据各种实施例，流体出口通道与多于一个加载器出口流体连通。
173.根据各种实施例，一个加载器的流体出口用作同一设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。根据各种实施例，一个加载器的流体出口用作不同设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。根据各种实施例，一个加载器的流体出口用作同一设备和/或不同设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。
174.如图9所示，方法s200包括在步骤s260将细胞粘合到血管部件。根据各种实施例，细胞可以是可以形成来自由内皮层、上皮层、平滑肌细胞层、顺序递送的平滑肌细胞层和内皮层、顺序递送的平滑肌细胞层和上皮层、顺序递送的平滑肌细胞层、凝胶层、内皮层或上皮层、顺序递送的周细胞层和内皮层或顺序递送的周细胞层和上皮层组成的列表的一个或多个层的任何细胞或细胞类型。
175.如图9所示，方法s200包括在步骤s270灌流血管部件以形成细胞层。根据各种实施例，细胞层可以包括内皮层、上皮层、平滑肌细胞层、顺序递送的平滑肌细胞层和内皮层、顺序递送的平滑肌细胞层和上皮层、顺序递送的平滑肌细胞层、凝胶层、内皮层或上皮层、顺序递送的周细胞层和内皮层或顺序递送的周细胞层和上皮层中的一个或多个。
176.根据各种实施例，方法s200可选地包括在步骤s280将具有或不具有水凝胶材料的个体细胞或多细胞聚集体添加到生物支架的空隙。
177.实施例的叙述
178.实施例1：一种套件，包括生物组件，该生物组件包括基底；以及生物支架，该生物支架贴附到基底；以及加载板，该加载板包括：分隔件，该分隔件包括分隔件出口和分隔件入口，分隔件出口和分隔件入口与生物支架流体连通；以及生物兼容的粘合剂，该粘合剂设置在基底与加载板之间，该粘合剂被配置成保持基底与加载板之间的流体不渗透的结合。
179.实施例2：实施例1的套件，还包括配置成注入生物支架的流体混合物。
180.实施例3：任一前述实施例的套件，其中，基底是玻璃，其中，生物支架共价结合到基底。
181.实施例4：任一前述实施例的套件，其中，生物支架是水凝胶。
182.实施例5：任一前述实施例的套件，其中，生物支架是3d打印的。
183.实施例6：任一前述实施例的套件，其中，生物支架包括具有血管入口和血管出口的血管部件。
184.实施例7：实施例6的套件，其中，血管入口与分隔件入口流体连通。
185.实施例8：实施例7的套件，其中，血管出口与分隔件出口流体连通。
186.实施例9：实施例6的套件，其中，血管部件包括收窄入口和/或收窄出口。
187.实施例10：实施例6的套件，其中，血管部件包括一个或多个血管入口。
188.实施例11：实施例10的套件，其中，血管部件包括一个或多个血管出口。
189.实施例12：实施例6的套件，其中，生物支架包括多于一个血管部件。
190.实施例13：实施例12的套件，其中，多于一个血管部件中的每一个包括血管入口和血管出口。
191.实施例14：任一前述实施例的套件，其中，分隔件入口和分隔件出口与加载板的顶表面基本平行。
192.实施例15：实施例11的套件，其中，分隔件包括多于一个分隔件入口和多于一个分隔件出口，并且其中，一个或多个血管入口中的每一个与相关的分隔件入口流体连通，并且一个或多个血管出口中的每一个与相关的分隔件出口流体连通。
193.实施例16：任一前述实施例的套件，其中，生物支架和分隔件的流体连通由生物支架中的锥形收缩部居间引导，并以正常操作流体压力提供流体密封。
194.实施例17：实施例16的套件，其中，正常操作流体压力在-100kpa至100kpa之间。
195.实施例18：实施例16的套件，其中，正常操作流体压力在-15kpa至15kpa之间。
196.实施例19：任一前述实施例16的套件，其中，正常操作流体压力在-10kpa至10kpa之间。
197.实施例20：实施例2的套件，其中，流体混合物包括多种流体成分。
198.实施例21：实施例2的套件，其中，流体混合物包括液体、泡沫或二级预基质。
199.实施例22：实施例2的套件，其中，生物支架包括空隙。
200.实施例23：实施例22的套件，其中，空隙是具有一个或多个入口的可灌流或可注入空间。
201.实施例24：实施例23的套件，其中，空隙是具有一个或多个出口的可灌流或可注入空间。
202.实施例25：实施例22的套件，其中，流体混合物被配置成与活细胞组合，该组合可注入空隙。
203.实施例26：实施例22的套件，其中，空隙包括物理锚。
204.实施例27：实施例22的套件，其中，血管部件布置在空隙中。
205.实施例28：任一前述实施例的套件，其中，生物支架是基本透明的。
206.实施例29：任一前述实施例的套件，其中，生物支架还包括亲水成分和疏水成分。
207.实施例30：任一前述实施例的套件，其中，加载板包括多个分隔件。
208.实施例31：实施例30的套件，其中，多个分隔件中的每一个包括分隔件入口和分隔件出口。
209.实施例32：实施例12的套件，其中，用于第一血管部件的血管入口和血管出口被设置成与第二血管部件的血管入口和血管出口基本正交。
210.实施例33：任一前述实施例的套件，其中，加载板包括3至384个分隔件。
211.实施例34：任一前述实施例的套件，其中，分隔件包括多达384组分隔件入口和分隔件出口。
212.实施例35：一种套件，包括生物组件，该生物组件包括：基底；生物支架，该生物支架贴附到基底；板，该板包括分隔件，该分隔件包括内部容积，并成形为将生物支架接收在内部容积中；以及生物兼容的粘合剂，该粘合剂设置在基底与板之间，该粘合剂被配置成保持基底与板之间的结合；加载器，该加载器包括加载器入口和加载器出口，加载器入口和加载器出口与生物支架流体连通；以及流体混合物，该流体混合物被配置成注入生物支架。
213.实施例36：实施例35的套件，其中，基底是玻璃，其中，生物支架共价结合到基底。
214.实施例37：任一前述实施例的套件，其中，生物支架是水凝胶。
215.实施例38：任一前述实施例的套件，其中，生物支架包括血管部件。
216.实施例39：实施例38的套件，其中，包括血管部件的生物支架是3d打印的。
217.实施例40：实施例38的套件，其中，血管部件包括血管入口和血管出口。
218.实施例41：实施例40的套件，其中，血管入口与加载器入口流体连通。
219.实施例42：实施例41的套件，其中，血管出口与加载器出口流体连通。
220.实施例43：实施例38的套件，其中，血管部件包括收窄入口和/或收窄出口。
221.实施例44：实施例38的套件，其中，血管部件包括一个或多个血管入口。
222.实施例45：实施例44的套件，其中，血管部件包括一个或多个血管出口。
223.实施例46：任一前述实施例的套件，其中，生物支架包括多于一个血管部件。
224.实施例47：实施例46的套件，其中，多于一个血管部件中的每一个包括血管入口和血管出口。
225.实施例48：任一前述实施例的套件，其中，加载器入口和加载器出口与板的顶表面基本正交。
226.实施例49：实施例47的套件，其中，加载器包括多于一个加载器入口和多于一个加载器出口，并且其中，血管入口中的每一个与相关的加载器入口流体连通，并且血管出口中的每一个与相关的加载器出口流体连通。
227.实施例50：任一前述实施例的套件，其中，生物支架和加载器的流体连通由生物支架中的锥形收缩部居间引导，并以正常操作流体压力提供流体密封。
228.实施例51：实施例50的套件，其中，正常操作流体压力在-100kpa至100kpa之间。
229.实施例52：实施例50的套件，其中，正常操作流体压力在-15kpa至15kpa之间。
230.实施例53：实施例50的套件，其中，正常操作流体压力在-10kpa至10kpa之间。
231.实施例54：任一前述实施例的套件，其中，流体混合物包括多种流体成分。
232.实施例55：任一前述实施例的套件，其中，流体混合物包括液体、泡沫或二级预基质。
233.实施例56：任一前述实施例的套件，其中，生物支架包括空隙，其中，血管部件布置在空隙中。
234.实施例57：实施例56的套件，其中，空隙是具有一个或多个入口的可灌流或可注入空间。
235.实施例58：实施例57的套件，其中，空隙是具有一个或多个出口的可灌流或可注入空间。
236.实施例59：实施例56的套件，其中，流体混合物被配置成与活细胞组合，该组合可注入空隙。
237.实施例60：实施例56的套件，其中，空隙包括物理锚。
238.实施例61：任一前述实施例的套件，其中，生物支架是基本透明的。
239.实施例62：任一前述实施例的套件，其中，生物支架还包括亲水成分和疏水成分。
240.实施例63：任一前述实施例的套件，其中，板包括多个分隔件。
241.实施例64：实施例63的套件，其中，至少一个加载器入口和至少一个加载器出口与多个分隔件中的每一个相关联。
242.实施例65：实施例45的套件，其中，用于第一血管部件的血管入口和血管出口被设置成与第二血管部件的血管入口和血管出口基本正交。
243.实施例66：任一前述实施例的套件，其中，加载器包括3至384个分隔件。
244.实施例67：任一前述实施例的套件，其中，加载器包括多达384组加载器入口和加载器出口。
245.实施例68：任一前述实施例的套件，其中，加载器还包括流体入口通道和流体出口通道。
246.实施例69：实施例68的套件，其中，流体入口通道与加载器入口流体连通。
247.实施例70：实施例69的套件，其中，流体出口通道与加载器出口流体连通。
248.实施例71：实施例68的套件，其中，流体入口通道与多于一个加载器入口流体连通。
249.实施例72：实施例68的套件，其中，流体出口通道与多于一个加载器出口流体连通。
250.实施例73：实施例68的套件，其中，一个加载器的流体出口用作同一设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。
251.实施例74：实施例68的套件，其中，一个加载器的流体出口用作不同设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。
252.实施例75：实施例68的套件，其中，一个加载器的流体出口用作同一设备和/或不同设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。
253.实施例76：一种用于生成包含细胞的套件的方法，该方法包括：提供包括基底和贴附到基底的生物支架的生物组件，其中，生物支架包括具有血管入口和血管出口的血管部件；提供包括分隔件的加载板，该分隔件包括分隔件出口和分隔件入口；将分隔件入口连接到血管入口并将分隔件出口连接到血管出口；将细胞附接到血管部件；以及灌流血管部件以形成细胞层。
254.实施例77：实施例76的方法，其中，细胞层包括内皮层。
255.实施例78：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括上皮层。
256.实施例79：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括平滑肌细胞层。
257.实施例80：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括顺序递送的平滑肌细胞层和内皮层。
258.实施例81：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括顺序递送的平滑肌细胞层和上皮层。
259.实施例82：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括顺序递送的平滑肌细胞层、凝胶层、内皮层或上皮层。
260.实施例83：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括顺序递送的周细胞层和内皮层。
261.实施例84：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括顺序递送的周细胞层和上皮层。
262.实施例85：任一前述实施例的方法，其中，基底是玻璃。
263.实施例86：任一前述实施例的方法，其中，生物支架是水凝胶。
264.实施例87：任一前述实施例的方法，其中，生物支架包括血管部件。
265.实施例88：实施例87的方法，其中，包括血管部件的生物支架是3d打印的。
266.实施例89：实施例87的方法，其中，血管部件包括血管入口和血管出口。
267.实施例90：实施例89的方法，其中，血管入口与分隔件入口流体连通。
268.实施例91：实施例90的方法，其中，血管出口与分隔件出口流体连通。
269.实施例92：实施例87的方法，其中，血管部件包括收窄入口和/或收窄出口。
270.实施例93：实施例87的方法，其中，血管部件包括一个或多个血管入口。
271.实施例94：实施例93的方法，其中，血管部件包括一个或多个血管出口。
272.实施例95：任一前述实施例的方法，其中，生物支架包括多于一个血管部件。
273.实施例96：实施例95的方法，其中，多于一个血管部件中的每一个包括血管入口和血管出口。
274.实施例97：任一前述实施例的方法，其中，分隔件入口和分隔件出口与加载板的顶表面基本平行。
275.实施例98：实施例94的方法，其中，分隔件包括多于一个分隔件入口和多于一个分隔件出口，并且其中，一个或多个血管入口中的每一个与相关的分隔件入口流体连通，并且一个或多个血管出口中的每一个与相关的分隔件出口流体连通。
276.实施例99：任一前述实施例的方法，其中，生物支架和分隔件的流体连通由生物支架中的锥形收缩部居间引导，并以正常操作流体压力提供流体密封。
277.实施例100：实施例99的方法，其中，正常操作流体压力在-100kpa至100kpa之间。
278.实施例101：实施例99的方法，其中，正常操作流体压力在-15kpa至15kpa之间。
279.实施例102：实施例99的方法，其中，正常操作流体压力在-10kpa至10kpa之间。
280.实施例103：任一前述实施例的方法，还包括将流体混合物注入生物支架，其中，流体混合物包括多种流体成分。
281.实施例104：任一前述实施例的方法，其中，流体混合物包括液体、泡沫或二级预基质。
282.实施例105：任一前述实施例的方法，其中，生物支架包括空隙。
283.实施例106：实施例105的方法，其中，空隙是具有一个或多个入口的可灌流或可注入空间。
284.实施例107：实施例106的方法，其中，空隙是具有一个或多个出口的可灌流或可注入空间。
285.实施例108：实施例105的方法，其中，流体混合物被配置成与活细胞组合，该组合可注入空隙。
286.实施例109：实施例105的方法，其中，空隙包括物理锚。
287.实施例110：实施例105的方法，其中，血管部件布置在空隙中。
288.实施例111：任一前述实施例的方法，其中，生物支架是基本透明的。
289.实施例112：任一前述实施例的方法，其中，生物支架还包括亲水成分和疏水成分。
290.实施例113：任一前述实施例的方法，其中，加载板包括多个分隔件。
291.实施例114：实施例113的方法，其中，多个分隔件中的每一个包括分隔件入口和分隔件出口。
292.实施例115：任一前述实施例95的方法，其中，用于第一血管部件的血管入口和血管出口被设置成与第二血管部件的血管入口和血管出口基本正交。
293.实施例116：任一前述实施例的方法，其中，加载板包括3至384个分隔件。
294.实施例117：任一前述实施例的方法，其中，分隔件包括多达20组分隔件入口和分隔件出口。
295.实施例118：一种用于生成细胞培养物的方法，该方法包括：提供包括基底和贴附到基底的生物支架的生物组件，其中，该生物支架包括具有血管入口和血管出口的血管部件；提供包括分隔件的板，该分隔件包括内部容积；提供包括加载器入口和加载器出口的加载器；将带有血管部件的生物支架设置在分隔件的内部容积内；将加载器入口连接到血管入口并将加载器出口连接到血管出口；将细胞附接到血管部件；以及灌流血管部件以形成细胞层。
296.实施例119：实施例118的方法，其中，细胞层包括内皮层。
297.实施例120：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括上皮层。
298.实施例121：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括平滑肌细胞层。
299.实施例122：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括顺序递送的平滑肌细胞层和内皮层。
300.实施例123：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括顺序递送的平滑肌细胞层和上皮层。
301.实施例124：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括顺序递送的平滑肌细胞层、凝胶层、内皮层或上皮层。
302.实施例125：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括顺序递送的周细胞层和内皮层。
303.实施例126：任一前述实施例的方法，其中，细胞层包括顺序递送的周细胞层和上皮层。
304.实施例127：任一前述实施例的方法，其中，基底是玻璃。
305.实施例128：任一前述实施例的方法，其中，生物支架是水凝胶。
306.实施例129：任一前述实施例的方法，其中，生物支架包括血管部件。
307.实施例130：实施例129的方法，其中，包括血管部件的生物支架是3d打印的。
308.实施例131：实施例129的方法，其中，血管部件包括血管入口和血管出口。
309.实施例132：实施例131的方法，其中，血管入口与加载器入口流体连通。
310.实施例133：实施例132的方法，其中，血管出口与加载器出口流体连通。
311.实施例134：实施例129的方法，其中，血管部件包括收窄入口和/或收窄出口。
312.实施例135：实施例129的方法，其中，血管部件包括一个或多个血管入口。
313.实施例136：实施例135的方法，其中，血管部件包括一个或多个血管出口。
314.实施例137：任一前述实施例的方法，其中，生物支架包括多于一个血管部件。
315.实施例138：实施例137的方法，其中，多于一个血管部件中的每一个包括血管入口和血管出口。
316.实施例139：任一前述实施例的方法，其中，加载器入口和加载器出口与板的顶表面基本正交。
317.实施例140：实施例138的方法，其中，加载器包括多于一个加载器入口和多于一个加载器出口，并且其中，血管入口中的每一个与相关的加载器入口流体连通，并且血管出口中每一个与相关的加载器出口流体连通。
318.实施例141：任一前述实施例的方法，其中，生物支架和加载器的流体连通由生物支架中的锥形收缩部居间引导，并以正常操作流体压力提供流体密封。
319.实施例142：实施例141的方法，其中，正常操作流体压力在-100kpa至100kpa之间。
320.实施例143：实施例141的方法，其中，正常操作流体压力在-15kpa至15kpa之间。
321.实施例144：实施例141的方法，其中，正常操作流体压力在-10kpa至10kpa之间。
322.实施例145：任一前述实施例的方法，还包括将流体混合物注入生物支架，其中，流体混合物包括多种流体成分。
323.实施例146：实施例145的方法，其中，流体混合物包括液体、泡沫或二级预基质。
324.实施例147：任一前述实施例的方法，其中，生物支架包括空隙，其中，血管部件布置在空隙中。
325.实施例148：实施例147的方法，其中，空隙是具有一个或多个入口的可灌流或可注入空间。
326.实施例149：实施例148的方法，其中，空隙是具有一个或多个出口的可灌流或可注入空间。
327.实施例150：实施例147的方法，其中，流体混合物被配置成与活细胞组合，该组合可注入空隙。
328.实施例151：实施例147的方法，其中，空隙包括物理锚。
329.实施例152：任一前述实施例的方法，其中，生物支架是基本透明的。
330.实施例153：任一前述实施例的方法，其中，生物支架还包括亲水成分和疏水成分。
331.实施例154：任一前述实施例的方法，其中，板包括多个分隔件。
332.实施例155：实施例154的方法，其中，至少一个加载器入口和至少一个加载器出口与多个分隔件中的每一个相关联。
333.实施例156：实施例136的方法，其中，用于第一血管部件的血管入口和血管出口被设置成与第二血管部件的血管入口和血管出口基本正交。
334.实施例157：任一前述实施例的方法，其中，加载板包括3至384个分隔件。
335.实施例158：任一前述实施例的方法，其中，加载器包括多达384组加载器入口和加载器出口。
336.实施例159：任一前述实施例的方法，其中，加载器还包括流体入口通道和流体出口通道。
337.实施例160：实施例159的方法，其中，流体入口通道与加载器入口流体连通。
338.实施例161：实施例160的方法，其中，流体出口通道与加载器出口流体连通。
339.实施例162：实施例159的方法，其中，流体入口通道与多于一个加载器入口流体连通。
340.实施例163：实施例159的方法，其中，流体出口通道与多于一个加载器出口流体连通。
341.实施例164：实施例159的方法，其中，一个加载器的流体出口用作同一设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。
342.实施例165：实施例159的方法，其中，一个加载器的流体出口用作不同设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。
343.实施例166：实施例159的方法，其中，一个加载器的流体出口用作同一设备和/或不同设备上的一个或多个备用加载器的流体入口。
344.实施例167：实施例33的套件，其中，加载板包括3、4、6、12、24、48、96、192或384个分隔件。
345.实施例168：实施例66的套件，其中，加载板包括3、4、6、12、24、48、96、192或384个分隔件。
346.实施例169：实施例116的方法，其中，加载板包括3、4、6、12、24、48、96、192或384个分隔件。
347.实施例170：实施例157的方法，其中，加载板包括3、4、6、12、24、48、96、192或384个分隔件。
348.实施例171：实施例76的方法，还包括将具有或不具有水凝胶材料的个体细胞或多细胞聚集体添加到生物支架的空隙。
349.实施例172：实施例118的方法，还包括将具有或不具有水凝胶材料的个体细胞或多细胞聚集体添加到生物支架的空隙。
350.虽然本说明书包含许多具体的实施细节，但这些不应被解释为对任何发明的范围或可能要求保护的范围的限制，而是对特定发明的特定实施方案的特征的描述。本说明书中在单独实施方案的背景下描述的某些特征也可以在单一实施方案中组合实施。反之，在单一实施方案背景下描述的各种特征也可以在多个实施方案中单独实施或以任何合适的子组合实施。此外，尽管上文描述的特征可能被描述为在某些组合中起作用，甚至最初也是这样要求保护的，但在一些情况下，来自所要求保护的组合的一个或多个特征可以从该组合中去除，并且所要求保护的组合可以涉及子组合或子组合的变体。
351.类似地，虽然在附图中以特定的顺序描述了操作，但这不应被理解为要求以所示的特定顺序或按顺序执行这样的操作，或执行所有所示的操作，以实现期望结果。在一些情况下，多任务和并行处理可能是有利的。此外，上文描述的实施方案中的各种系统部件的分离不应被理解为在所有实施方案中需要这样的分离，而应当理解，所描述的程序部件和系统通常可以一起集成在单个软件产品中，或者封装成多个软件产品。
352.对“或”的引用可以被解释为具有包容性，使得使用“或”描述的任何术语可以表示单个、多于一个以及所有所描述的术语中的任一个。称号“第一”、“第二”、“第三”等不一定意味着表示排序，并且通常仅用于区分类似或相似的项目或元件。
353.本公开中描述的实施方案的各种修改对于本领域的技术人员来说可能是显而易见的，并且在不脱离本公开的精神和范围的情况下，本文定义的通用原则可以应用于其他实施方案。因此，权利要求并不旨在限于本文所示的实施方案，而是赋予与本公开、原则和本文所公开的新颖特征相一致的最宽泛的范围。