一种沉香精油及其制备方法与应用与流程

1.本发明属于天然产物提取技术领域，具体涉及一种沉香精油及其制备方法与应用。


背景技术：

2.作为中医常用药的沉香，在古代医典对沉香药效的记载比比皆是。其主要来源是瑞香科(thymelaeaceae)植物白木香〔aquilaria sinensis(lour.)gilg.〕含有树脂的木材，是我国特有的一种热带亚热带常绿乔木，亦为我国珍贵药用植物，别名土沉香、女儿香、莞香、海南沉香。当沉香木受到外伤或特定真菌感染刺激后，会分泌大量树脂帮助愈合，期间将会产生浓郁香气的组织物。沉香主要含有倍半萜类、色酮类、芳香族类、脂肪酸类等成分，具有抗菌、镇静、解痉、镇痛、抗炎、平喘、降压、抗肿瘤等药理作用。沉香主要用于制作香品、香水、配方中药及其他产品。用其制作的熏香产品有清新空气、抑菌、提神等作用，可防止传染病的流行，甚至对呼吸道疾病、心脏病及心绞痛等都有很好的缓解、治疗作用，同时沉香的香味可使人感觉全身舒畅，经脉柔顺，气机调和，因此沉香有十分重要的应用价值。
3.沉香的应用很大一部分是以精油的形式实现的。沉香精油在精油产品中属于最珍贵的产品，它的应用价值也相应最高，多用于化妆品和医药行业。现有提取沉香精油的方法较多，主要研究集中如何提高其提取率，经典的提取工艺主要包括水蒸汽提取法和溶剂萃取法等；新兴提取技术主要包括：超临界萃取、亚临界萃取和微波辅助萃取、超声波辅助萃取等。
4.cn 114231359 a公开了一种沉香提取物的制备方法，沉香与乙醇溶液研磨处理，并以微波辐照获得沉香固液混合物，经过超临界流体萃取、多级逆流萃取等步骤，得到的沉香精油不仅增加其提取率，而且所含的有效成分含量高。cn 104087420 b公开了一种提高沉香叶中挥发油抗氧化活性的亚临界萃取方法，沉香叶进行清洁、干燥并去除枝条，再烘至接近绝干，然后烘至恒重，粉碎得到沉香叶粉末，再置于萃取釜中加入去离子水进行亚临界萃取，静置冷却后进行抽滤，然后将残渣重复提取一次，合并两次提取液，再经减压浓缩得到浓缩液，然后加入nacl进行破乳，以乙醚萃取后收集乙醚层，再将收集到的乙醚层用na2so4进行脱水，经减压浓缩后即得到沉香叶挥发油具有显著提高的抗氧化效果。
5.上述这些提取工艺一般是通过减少对特定活性物质带来的不利影响和根据活性物质的性质来改进提取工艺(如提取溶剂的选择等)来实现的，但现有的提取方法中，存在着一系列的问题。一方面如原材拣选过程的繁琐，沉香品质的参差，整体投入的资金巨大；另一方面如沉香精油提取周期的冗长，实际提取率和有效成分含量低，容易混入残留的植物蜡、树脂和色素等杂质，影响沉香精油的色泽和纯度，破坏沉香精油的品质。最终导致原材与成品两端的不平衡，造成天然资源和能耗的浪费。
6.cn 102703562 a公开了一种利用菌群发酵促进沉香油提取的方法，利用沉香内生菌中多种优势真菌与沉香材料进行混合发酵，以提升沉香精油的产率。然而纯化分离的多种产香优势菌，仅是参与了沉香木原料的香气组织物的产生，实际上并未说明沉香精油能
完全转化，因此精油得率仍不理想。


技术实现要素：

7.为克服现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种沉香精油及其制备方法与应用，不仅提高沉香精油的提取率，而且所含的有效成分含量高，品质纯正，色泽佳，气味优越。
8.为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
9.一种沉香精油的制备方法，包括如下步骤：
10.s1：按照重量份数，取20～40份沉香木进行粉碎处理的沉香木粉，置于塑料圆桶中；
11.s2：从已纯化的米曲霉菌、黑曲霉菌、绿色木霉菌的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基pda分别接种至单独的250ml马铃薯-葡萄糖液体培养基pdb，于25～35℃有氧条件下，100～150rpm/min摇瓶培养5～7天，作为活化发酵液，再从各霉菌的活化发酵液取50～100ml，分别接种至1l马铃薯-葡萄糖液体培养基pdb进行扩大培养，于25～35℃有氧条件下，100～150rpm/min摇瓶培养5～7天，得到各霉菌的发酵液；
12.s3：按照重量份数，取1～3份米曲霉菌、1～3份黑曲霉菌、3～6份绿色木霉菌的上述发酵液，与s1所得的沉香木粉混合，加入48～75份水后搅拌均匀，于25～35℃密闭条件下发酵3～7天，期间每天搅拌2次，获得发酵沉香物料；
13.s4：将发酵沉香物料转移到萃取釜，通入超临界co2流体，进行第一次超临界流体萃取；收集产物，得到萃取物a和发酵沉香物料渣；
14.s5：将发酵沉香物料渣转移到萃取釜，加入6～10倍重量95％的乙醇溶液，进行第二次萃取，收集产物，得到萃取物b和发酵沉香物料渣；
15.s6：萃取物b过滤后真空减压回收溶剂，合并萃取物a，得到沉香精油。
16.进一步的，步骤s1中所述沉香木粉的颗粒大小控制在0.1～1mm。
17.进一步的，步骤s4中所述超临界流体萃取的萃取温度为30～50℃，萃取压力为20～30mpa，萃取时间为2～3h。
18.进一步的，步骤s5中所述第二次萃取的温度为40～50℃。
19.优选地，s4-s6选用的超临界co2萃取法可更改为水提取法，将发酵沉香物料全部转移到萃取容器内，加入2～3倍重量纯净水，在80～90℃水浴提取1～2h，收集产物。
20.一种沉香精油，按照上述步骤制备而成。
21.一种复方精油，包括上述沉香精油。
22.一种沉香精油的应用，应用在制备具备安神助眠、抗疲劳、防癌、保护心血管等作用的食品、药品、保健品等产品中。
23.进一步的，所述产品可以为滴丸，胶囊等。
24.现有研究表明，将沉香木粉碎后，放到大缸里发酵一段时间后，可以提高沉香精油提取率，但因该方法只适用于特定的气候，产品质量也难于稳定。本发明利用复合霉菌为活性发酵剂，促进沉香前期发酵，增大其活性物质的浸出；经过超临界co2流体技术，提高沉香精油的提取率，保持有效成分的丰富度，根本上改善沉香精油的品质。
25.所含沉香精油品质纯度高的原因可能为：一是发酵充分促进沉香材料中的白木成
分得到有效反应并转化；二是复合霉菌发酵液的代谢产物，如产生的酶类(如纤维素酶、果胶酶、糖化酶等)，能在温和条件下分解沉香组织，提高沉香有效物质的浸出。沉香木粉经生物酶类处理后，其表面及结构组织内壁出现明显孔洞，增加了沉香精油的溶出通道，有效提高沉香精油的溶出量；三是复合霉菌的甄选搭配和协同增效，绿色木霉是所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好。而曲霉产的β-葡萄糖苷酶活性高，其与木霉产纤维素酶按适宜比例搭配使用，能有效提高纤维素的降解效率。因此混合菌体发酵产酶活性一定条件下优于菌种单独发酵，出色的组合搭配也能提高沉香有效物质的浸出。所含沉香精油的口感和香气更好的原因可能为：沉香在发酵过程中产生了其它风味物质提升了沉香精油的香气，同时沉香中苦辛刺激的物质降解，或其它新生成的风味物质起到了矫正口感的作用。
26.相比现有技术，本发明的有益效果在于：
27.(1)本发明利用复合霉菌为活性发酵剂，既促进沉香材料中的白木成分得到有效转化，又在复合霉菌的甄选搭配和协同增效下，发酵液温和地分解沉香组织，充分降解植物组织中细胞壁的结构，使其表面及组织内壁出现明显孔洞，增加了沉香精油的溶出通道，提高沉香有效物质的浸出，进而极大程度增加沉香精油所含有效成分的功效性，并有利于后续萃取技术的开展，保证沉香精油的提取品质。
28.(2)本发明通过对发酵沉香物料，采取超临界co2流体萃取技术，区别于加入助溶剂的方法，实现对沉香活性物质最大程度分离提纯，不仅提高沉香精油的提取率，而且所含的有效成分含量高，品质纯正且稳定，色泽佳。同时改善沉香苦辛的口感，赋予沉香精油更为醇厚的木质香，工艺实操性强，具有优异的经济实用性和环保性。
具体实施方式
29.以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
30.若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
31.实施例1
32.一种沉香精油的制备方法，包括如下步骤：
33.(1)按照重量份数，取30份沉香木进行粉碎处理的沉香木粉，颗粒大小控制在0.5mm，置于塑料圆桶中。
34.(2)从已纯化的米曲霉菌、黑曲霉菌、绿色木霉菌的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(pda)分别接种至单独的250ml马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)，于30℃有氧条件下150rpm/min摇瓶培养7天，作为活化发酵液。再从各霉菌的活化发酵液取100ml，分别接种至1l马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)进行扩大培养，于30℃有氧条件下150rpm/min摇瓶培养7天，得到各霉菌的发酵液。
35.(3)按照重量份数，取2份米曲霉菌、2份黑曲霉菌、5份绿色木霉菌的上述发酵液，与步骤(1)所得的沉香木粉混合，加入61份水后搅拌均匀，于30℃密闭条件下发酵5天，期间每天搅拌2次，获得发酵沉香物料。
36.(4)将发酵沉香物料转移到萃取釜，通入超临界co2流体，进行第一次超临界流体萃取，萃取温度为45℃，萃取压力为30mpa，萃取时间为2.5h；收集产物，得到萃取物a和发酵
沉香物料渣。
37.(5)将发酵沉香物料渣转移到萃取釜，加入8倍重量95％的乙醇溶液，在45℃下进行第二次萃取，收集产物，得到萃取物b和发酵沉香物料渣。
38.(6)萃取物b过滤后真空减压回收溶剂，合并萃取物a，得到沉香精油；沉香精油提取得率为6.49％。
39.实施例2
40.一种具有优异的安神助眠、抗疲劳作用的沉香复方精油，按重量计，包含沉香精油80份、檀香麝香复合精油20份，制备方法如下步骤：
41.(1)按照重量份数，取30份沉香木进行粉碎处理的沉香木粉，颗粒大小控制在1mm，置于塑料圆桶中。
42.(2)从已纯化的米曲霉菌、黑曲霉菌、绿色木霉菌的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(pda)分别接种至单独的250ml马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)，于28℃有氧条件下150rpm/min摇瓶培养5天，作为活化发酵液。再从各霉菌的活化发酵液取50ml，分别接种至1l马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)进行扩大培养，于28℃有氧条件下150rpm/min摇瓶培养5天，得到各霉菌的发酵液。
43.(3)按照重量份数，取2份米曲霉菌、3份黑曲霉菌、4份绿色木霉菌的上述发酵液，与步骤(1)所得的沉香木粉混合，加入61份水后搅拌均匀，于28℃密闭条件下发酵5天，期间每天搅拌2次，获得发酵沉香物料。
44.(4)将发酵沉香物料转移到萃取釜，通入超临界co2流体，进行第一次超临界流体萃取，萃取温度为40℃，萃取压力为25mpa，萃取时间为3h；收集产物，得到萃取物a和发酵沉香物料渣。
45.(5)将发酵沉香物料渣转移到萃取釜，加入10倍重量95％的乙醇溶液，在45℃下进行第二次萃取，收集产物，得到萃取物b和发酵沉香物料渣。
46.(6)萃取物b过滤后真空减压回收溶剂，合并萃取物a，得到沉香精油；沉香精油提取得率为6.17％。
47.优选地，上述的沉香复方精油，主要由以下质量份数的原料制备得到，具体包括以下步骤：
48.檀香3份、麝香2份、水牛角2份、红花2份、牛黄1份、三七2份、乳香2份、没药1份、血竭1份、丁香油2份、罗勒油2份、桉叶油2份、茶树油2份、冰片2份、樟脑2份、薄荷脑3份、酒精5份。
49.按照相应比例混合，干燥、研磨、粉碎成颗粒大小控制在0.5mm，采用超临界co2流体萃取法，提取得到檀香麝香复合精油。
50.将上述各种精油按所需配比备齐，将沉香精油、檀香麝香复合精油放入搅拌器中混合，置于30℃，搅拌速度为250r/min条件下，搅拌60min，搅拌混合均匀后，分装、密封即成，最终得到沉香复方精油。
51.本发明将沉香木经复合霉菌发酵后，可以将沉香精油的提取率提高47.5％，并且使得沉香复方精油的香气比单方沉香精油更能让大部分人群接受和喜爱。同时甄选中药材(檀香、麝香、水牛角、红花、牛黄、三七、乳香、没药、血竭、丁香油、罗勒油、桉叶油、茶树油、冰片、樟脑、薄荷脑、酒精)进行复配组合，使香味更加协调、活性成分浸出更为充分，因而使
得其安神助眠、抗疲劳的功效更好。
52.本发明的沉香复方精油不含人工合成香精、不添加防腐剂、不含引起过敏的化学成分，成分安全，不易导致过敏现象，长期使用也不会对人体产生不良影响。
53.实施例3
54.一种沉香滴丸的制备方法，包括如下步骤：
55.(1)按照重量份数，取40份沉香木进行粉碎处理的沉香木粉，颗粒大小控制在1mm，置于塑料圆桶中。
56.(2)从已纯化的米曲霉菌、黑曲霉菌、绿色木霉菌的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(pda)分别接种至单独的250ml马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)，于35℃有氧条件下120rpm/min摇瓶培养6天，作为活化发酵液。再从各霉菌的活化发酵液取100ml，分别接种至1l马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)进行扩大培养，于35℃有氧条件下120rpm/min摇瓶培养6天，得到各霉菌的发酵液。
57.(3)按照重量份数，取1份米曲霉菌、2份黑曲霉菌、3份绿色木霉菌的上述发酵液，与步骤(1)所得的沉香木粉混合，加入54份水后搅拌均匀，于25℃密闭条件下发酵5天，期间每天搅拌2次，获得发酵沉香物料。
58.(4)将发酵沉香物料转移到萃取釜，通入超临界co2流体，进行第一次超临界流体萃取，萃取温度为35℃，萃取压力为25mpa，萃取时间为2h；收集产物，得到萃取物a和发酵沉香物料渣。
59.(5)将发酵沉香物料渣转移到萃取釜，加入6倍重量95％的乙醇溶液，在40℃下进行第二次萃取，收集产物，得到萃取物b和发酵沉香物料渣。
60.(6)萃取物b过滤后真空减压回收溶剂，合并萃取物a，得到沉香精油；沉香精油提取得率为5.53％。
61.(7)将所得的沉香精油用β-环糊精包合后，与聚乙二醇等制成滴丸剂。其滴丸剂入口即有浓郁的木质醇香，无苦辛刺激感。
62.本发明所得的沉香精油在口感和香气上较好，能赋予沉香直接口服剂型愉悦的体感，并具有增强免疫力的功能。
63.本发明的沉香滴丸不含人工合成香精、不添加防腐剂、不含引起过敏的化学成分，成分安全，不易导致过敏现象，长期使用也不会对人体产生不良影响。
64.实施例4
65.一种保护心血管的天香胶囊的制备方法，包括如下步骤：
66.按重量计，包含沉香20份、天麻40份、丹参40份。
67.(1)按照重量份数，取20份沉香木进行粉碎处理的沉香木粉，颗粒大小控制在1mm，置于塑料圆桶中。
68.(2)从已纯化的米曲霉菌、黑曲霉菌、绿色木霉菌的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(pda)分别接种至单独的250ml马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)，于30℃有氧条件下100rpm/min摇瓶培养7天，作为活化发酵液。再从各霉菌的活化发酵液取75ml，分别接种至1l马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)进行扩大培养，于30℃有氧条件下100rpm/min摇瓶培养7天，得到各霉菌的发酵液。
69.(3)按照重量份数，取1份米曲霉菌、1份黑曲霉菌、6份绿色木霉菌的上述发酵液，
与步骤(1)所得的沉香木粉混合，加入72份水后搅拌均匀，于25℃密闭条件下发酵5天，期间每天搅拌2次，获得发酵沉香物料。
70.(4)将发酵沉香物料全部转移到萃取容器内，加入3倍重量纯净水，在85℃水浴提取2h，得到沉香精油；沉香精油提取得率为5.41％。
71.(5)将所得的沉香精油用β-环糊精包合后，得到沉香精油粉。
72.(6)按照重量份数，选取天麻40份、丹参40份，加6倍重量的水煎煮3次，每次1小时，将滤液浓缩成浸膏。
73.(7)将上述浸膏在90℃真空干燥，研磨、粉碎，得到的天参药粉，颗粒大小控制在100目。
74.(8)将所述沉香精油粉、天参药粉，加入辅料(微晶纤维素)，混合均匀后，装入胶囊中，最终制成天香胶囊。
75.简述各原料药材的药理功效：
76.沉香：味辛、苦，性微温。具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘之功效。主要用于胸腹胀闷疼痛，胃寒呕吐呃逆，呼吸困难等肾虚气逆的症状治疗。现代研究表明，沉香主要含倍半萜类、色酮类、芳香族类、脂肪酸类等成分，具有抗菌、镇静、解痉、镇痛、抗炎、增强免疫力等药理作用。
77.天麻：别名定风草、赤箭，天麻味甘，性平，归肝经。具有息风止痉、平抑肝阳、祛风通络之功效。现代药理研究表明，天麻及其提取物，如天麻素、香草醇和天麻多糖等，具有镇静、降血脂、降血压、降血糖、保护血管、抗抑郁、抗惊厥、抗氧化、提升免疫力等作用。
78.丹参：性微寒、味苦、归心、肝经。具有活血养血、通络止痛之效。丹参的主要成分为丹参酚酸、丹参醌和丹参酮。临床研究表明，丹参有效降血脂、改善血液循环，减轻氧化应激损伤，减少炎症反应，从而对血管内皮细胞具有保护作用。
79.本发明基于中医药预防和治疗心血管病的机理，药食同源选材，日常食补，养身健体。有效缓解心血管疾病引起的胸闷、气短，呼吸困难，心慌、心悸，头痛、头晕，肢体酸软乏力等症状，并增强机体免疫力。
80.本发明所得的沉香精油在口感和香气上较好，能赋予沉香口服剂型愉悦的体感，复配甄选的中药材，协同增效，起到保护心血管的良好效用。
81.实施例5
82.一种防癌的香芝胶囊的制备方法，包括如下步骤：
83.按重量计，包含沉香30份、牛樟芝30份、云芝20份、灵芝20份。
84.(1)按照重量份数，取30份沉香木进行粉碎处理的沉香木粉，颗粒大小控制在0.5mm，置于塑料圆桶中。
85.(2)从已纯化的米曲霉菌、黑曲霉菌、绿色木霉菌的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(pda)分别接种至单独的250ml马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)，于25℃有氧条件下150rpm/min摇瓶培养7天，作为活化发酵液。再从各霉菌的活化发酵液取75ml，分别接种至1l马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)进行扩大培养，于25℃有氧条件下150rpm/min摇瓶培养7天，得到各霉菌的发酵液。
86.(3)按照重量份数，取2份米曲霉菌、3份黑曲霉菌、6份绿色木霉菌的上述发酵液，与步骤(1)所得的沉香木粉混合，加入59份水后搅拌均匀，于30℃密闭条件下发酵5天，期间
每天搅拌2次，获得发酵沉香物料。
87.(4)将发酵沉香物料转移到萃取釜，通入超临界co2流体，进行第一次超临界流体萃取，萃取温度为30℃，萃取压力为30mpa，萃取时间为2.5h；收集产物，得到萃取物a和发酵沉香物料渣。
88.(5)将发酵沉香物料渣转移到萃取釜，加入10倍重量95％的乙醇溶液，在50℃下进行第二次萃取，收集产物，得到萃取物b和发酵沉香物料渣。
89.(6)萃取物b过滤后真空减压回收溶剂，合并萃取物a，得到沉香精油；沉香精油提取得率为6.08％。
90.(7)将所得的沉香精油用β-环糊精包合后，得到沉香精油粉。
91.(8)按照重量份数，选取牛樟芝30份、云芝20份、灵芝20份，加10倍重量的水煎煮3次，每次2小时，将滤液浓缩成浸膏。
92.(9)将上述浸膏在85℃真空干燥，研磨、粉碎，得到的三芝药粉，颗粒大小控制在100目。
93.(10)将所述沉香精油粉、三芝药粉，加入辅料(微晶纤维素)，混合均匀后，装入胶囊中，最终制成香芝胶囊。
94.简述各原料药材的药理功效：
95.沉香：味辛、苦，性微温。具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘之功效。主要用于胸腹胀闷疼痛，胃寒呕吐呃逆，呼吸困难等肾虚气逆的症状治疗。现代研究表明，沉香主要含倍半萜类、色酮类、芳香族类、脂肪酸类等成分，具有抗菌、镇静、解痉、镇痛、抗炎、增强免疫力等药理作用。
96.牛樟芝：一种珍稀药用伞菌，又名樟芝、樟菇、牛樟菇、红樟芝、神明菇等，赋有“森林中的红宝石”、“药中之王”的美誉。在抗癌、免疫调节、保肝、治疗心血管疾病和神经损伤等多项功能之中，抗肿瘤能力远近闻名。研究表明，牛樟芝中的三萜、泛醌、琥珀酸、马来酸、多糖等化合物均具有显著的抗肿瘤作用。
97.云芝：云芝又名彩文云芝、多色云芝、云芝蘑、千层蘑等，味甘、平，归心、脾、肝、肾经，是天然的免疫调节剂。现代研究和应用表明，其主要活性成分云芝多糖和云芝糖肽，不仅具有免疫调节和保肝利胆作用，还具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、降血脂、益气解毒和镇痛等作用。
98.灵芝：灵芝性平，味苦，主胸中结，益气补中。具有免疫调节、保肝护肝、抗肿瘤及治疗心血管疾病等功效，其中灵芝的抗肿瘤功效最为人关注。现代临床实践证实，灵芝的活性成分(灵芝多糖、三萜类及其他微量成分)，主要通过对肿瘤细胞的直接毒性、抗氧化作用、抑制肿瘤新生血管生成、对b淋巴细胞的影响等众多途径及机制实现抗肿瘤作用。
99.本发明基于中医药预防和治疗癌症的机制，药食同源选材，协同增效，防癌抗癌；作为日常食补，养身健体，并增强机体免疫力。
100.本发明所得的沉香精油在口感和香气上较好，能赋予沉香口服剂型愉悦的体感，复配甄选的中药材，协同增效，起到防癌抗癌的良好效用。
101.对比例1
102.根据实施例1的沉香精油的制备方法，改变条件，具体为：
103.采取常规的沉香木粉直接进行沉香精油的萃取制备。
104.(1)按照重量份数，取30份沉香木进行粉碎处理的沉香木粉，颗粒大小控制在0.5mm，置于塑料圆桶中。
105.(2)将处理好的沉香物料转移到萃取釜，通入超临界co2流体，进行第一次超临界流体萃取，萃取温度为45℃，萃取压力为30mpa，萃取时间为2.5h；收集产物，得到萃取物a和发酵沉香物料渣。
106.(3)将发酵沉香物料渣转移到萃取釜，加入8倍重量95％的乙醇溶液，在45℃下进行第二次萃取，收集产物，得到萃取物b和发酵沉香物料渣。
107.(4)萃取物b过滤后真空减压回收溶剂，合并萃取物a，得到沉香精油；沉香精油提取得率为4.71％。
108.依据上述实施例和对比例的沉香精油制备方法，在同一批沉香原料下，分别统计各种制备方法得到的沉香精油提取率(沉香精油提取率％＝沉香精油质量g/沉香原料质量g
×
100％)，并记录沉香精油的色泽、风味、口感。
109.结果如下表所示：
[0110][0111]
由此可见，通过对沉香木粉进行复合霉菌发酵，并采用超临界co2流体萃取的制备方法，有效提升沉香精油的提取率。较于对比例1采用沉香木粉直接萃取法，实施例1先进行前期沉香木粉发酵后萃取，沉香精油的提取率显著提升，同时保证沉香精油所含的有效成分含量高，品质纯正且稳定，色泽佳，口感优越。
[0112]
复合霉菌发酵液和沉香木粉不只是简单的组合关系，只有将复合霉菌发酵液和沉香置于特定的条件下，经过适宜的发酵后，所得沉香精油的有效物质的活性才能得到较大的提升，口感和风味才能得到明显的改善。
[0113]
对比例2
[0114]
根据实施例2的沉香复方精油的制备方法，改变条件，具体为：
[0115]
按重量计，仅包含沉香精油100份。
[0116]
(1)按照重量份数，取30份沉香木进行粉碎处理的沉香木粉，颗粒大小控制在1mm，置于塑料圆桶中。
[0117]
(2)从已纯化的米曲霉菌、黑曲霉菌、绿色木霉菌的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(pda)分别接种至单独的250ml马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)，于28℃有氧条件下150rpm/min摇瓶培养5天，作为活化发酵液。再从各霉菌的活化发酵液取50ml，分别接种至1l马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)进行扩大培养，于28℃有氧条件下150rpm/min摇瓶培养5天，得到各霉菌的发酵液。
[0118]
(3)按照重量份数，取2份米曲霉菌、3份黑曲霉菌、4份绿色木霉菌的上述发酵液，与步骤(1)所得的沉香木粉混合，加入61份水后搅拌均匀，于28℃密闭条件下发酵5天，期间每天搅拌2次，获得发酵沉香物料。
[0119]
(4)将发酵沉香物料转移到萃取釜，通入超临界co2流体，进行第一次超临界流体
萃取，萃取温度为40℃，萃取压力为25mpa，萃取时间为3h；收集产物，得到萃取物a和发酵沉香物料渣。
[0120]
(5)将发酵沉香物料渣转移到萃取釜，加入10倍重量95％的乙醇溶液，在45℃下进行第二次萃取，收集产物，得到萃取物b和发酵沉香物料渣。
[0121]
(6)萃取物b过滤后真空减压回收溶剂，合并萃取物a，得到沉香精油；沉香精油提取得率为6.17％。分装、密封，最终得到沉香单方精油。
[0122]
为了进一步证明本发明的优点，本发明提供实施例2与对比例2的效果验证数据。
[0123]
①
采用小鼠戊巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期与睡眠时间对实施例2与对比例2的改善睡眠效果进行研究。
[0124]
选取spf级昆明雄性小鼠，随机分组，每组10只。除正常对照组外均采用腹腔注射pcpa造成动物失眠模型，每只小鼠按照300mg/kg的用量，用弱碱性生理盐水配制成混悬液备用。空白对照组、模型组雾化吸入蒸馏水、实施例2组雾化吸入实施例2所述的沉香复方精油、对比例2组雾化吸入对比例2所述的沉香单方精油。连续7天，每次30min，每次用量100μl。第7天，所有组小鼠分别雾化吸入对应物质后，腹腔注射戊巴比妥溶液(50mg/kg)，提起小鼠尾巴，将小鼠平放于垫板上后，继续雾化给药。以腹腔注射时间到小鼠翻正反射消失为睡眠潜伏期，翻正反射持续时间为睡眠时间。记录睡眠潜伏期时间和睡眠时间。
[0125]
不同组沉香精油对小鼠睡眠时间的影响
[0126][0127][0128]
由上述试验可知，实施例2及对比例2与空白对照组相比，睡眠时间有所增加、睡眠潜伏期有所降低，表明其具有一定的改善睡眠的效果。实施例2与对比例2表明，本发明的沉香复方精油比沉香单方精油的改善睡眠的效果更好，说明本发明所用的制备方法能提高沉香复方精油的改善睡眠的效果。
[0129]
②
实施例2与对比例2的香味人群接受度调查
[0130]
请100名有经验的专业人员组成评价小组，对实施例2与对比例2所述的沉香复方精油香味进行评价，评价结果如下：
[0131]
人群对不同精油香味接受度人数统计表
[0132]
组别满意一般不满意实施例2组80164对比例2组482428
[0133]
人群对不同沉香复方精油的接受度试验表明，对比例2未加入中药材组合促使沉香的香味品质提升，因此实施例2的沉香复方精油的接受程度更高。说明本发明所用的制备方法能提高沉香复方精油的芳香物质的协调性，使人舒缓身心疲劳、安神助眠。
[0134]
对比例3
[0135]
根据实施例3的沉香滴丸的制备方法，改变条件，具体为：
[0136]
(1)按照重量份数，取40份沉香木进行粉碎处理的沉香木粉，颗粒大小控制在1mm，置于塑料圆桶中。
[0137]
(2)按照重量份数，加入60份水与步骤(1)所得的沉香木粉混合后搅拌均匀，于25℃密闭条件下发酵5天，期间每天搅拌2次，获得发酵沉香物料。
[0138]
(3)将发酵沉香物料转移到萃取釜，通入超临界co2流体，进行第一次超临界流体萃取，萃取温度为35℃，萃取压力为25mpa，萃取时间为2h；收集产物，得到萃取物a和发酵沉香物料渣。
[0139]
(4)将发酵沉香物料渣转移到萃取釜，加入6倍重量95％的乙醇溶液，在40℃下进行第二次萃取，收集产物，得到萃取物b和发酵沉香物料渣。
[0140]
(5)萃取物b过滤后真空减压回收溶剂，合并萃取物a，得到沉香精油；沉香精油提取得率为4.94％。
[0141]
(6)将所得的沉香精油用β-环糊精包合后，与聚乙二醇等制成滴丸剂。其滴丸剂入口的木质醇香较为一般，有较明显的苦辛刺激感。
[0142]
为了更好地说明本发明的优点，实施例3与对比例3皆进行了动物试验和人体试验。
[0143]
动物试验
[0144]
选取20只spf级c57bl/6淋巴瘤模型的雄性小鼠，鼠龄在10～15周，平均体重20g，随机分为4组：对照组按0.4ml/只/天生理盐水灌胃；阳性对照(环磷酰胺ctx)按0.4mg/只/天溶于生理盐水灌胃，实施例3与对比例3制得的沉香滴丸按0.4mg/只/天溶于生理盐水灌胃。3周后，将小鼠处死，取出肿瘤，计算肿瘤细胞的增殖抑制率。肿瘤测量采用游标卡尺，v(肿瘤体积)＝π/6
×
l(长径)
×
w(短径)；肿瘤细胞的增殖抑制率％＝v(对照组小鼠肿瘤的平均体积-各组组小鼠肿瘤的平均体积)/v对照组小鼠肿瘤的平均体积)
×
100％，每组结果如下表所示：
[0145][0146]
由此可知，实施例3制得的沉香滴丸，其抗肿瘤效果明显优于对比例3。关键在于沉香木与复合霉菌的共同发酵，提升沉香精油纯度与品质。
[0147]
人体试验
[0148]
案例1
[0149]
李先生，男，45岁，白天工作繁忙，应酬众多，夜间失眠又头痛，平时行动过快容易胸闷气喘，心跳加速，体力疲乏。从2020年2月开始，每天3次，每次1～2粒(按实施例3制得的沉香滴丸)，6个月后，明显感到体力充沛，行动不如以前乏力，睡眠质量改善，注意力集中，头痛次数减少。另外滴丸口感甘醇温和，无辛涩气味。
[0150]
案例2
[0151]
陈小姐，女，31岁，上班族经常加班，出差容易水土不服、肠胃不适，而且热爱轻断食，营养不良，免疫力低下。从2021年5月开始，每天2次，每次1粒(按实施例3制得的沉香滴
丸)，3个月后，明显感到肠胃舒畅，食欲变好，体力有所提升，精神抖擞，脸色红润，心情愉悦。另外滴丸口感浓郁醇香，无辛涩气味。
[0152]
案例3
[0153]
梁女士，女，50岁，身体免疫力较差，长期贫血，换季容易感冒，日常久站或久坐后出现腿脚酸软无力；秋冬则手脚冰冷，夜间小腿伴随抽筋。从2020年10月开始，每天2次，每次2粒(按对比例3制得的沉香滴丸)，5个月后，手脚酸软、双腿抽筋的症状偶尔缓解；但滴丸口感苦涩，难以吞咽。
[0154]
案例4
[0155]
林先生，男，33岁，经常感冒、咳嗽，口干舌燥，容易口腔溃疡、牙龈肿痛，皮肤容易过敏湿疹。从2021年7月开始，每天2次，每次1粒(按对比例3制得的沉香滴丸)，2个月后，口干舌燥的情况得以缓解，其余体感不明显。但滴丸口感苦辛味重，难以吞咽。
[0156]
从上述实施例与对比例的分析可知，实施例3制得的沉香滴丸无论是体验效果或品味口感都略胜一筹。关键在于沉香木与复合霉菌的共同发酵，不仅提高沉香精油的提取率，而且所含的有效成分含量高，色泽佳，气味优越。后续制成可口服的沉香滴丸等制剂，提升滴丸的功效与品质。
[0157]
对比例4
[0158]
根据实施例4的天香胶囊的制备方法，改变原料复配的条件，具体为：
[0159]
(1)按照重量份数，取20份沉香木进行粉碎处理的沉香木粉，颗粒大小控制在0.5mm，置于塑料圆桶中。
[0160]
(2)从已纯化的米曲霉菌、黑曲霉菌、绿色木霉菌的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(pda)分别接种至单独的250ml马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)，于30℃有氧条件下100rpm/min摇瓶培养7天，作为活化发酵液。再从各霉菌的活化发酵液取75ml，分别接种至1l马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)进行扩大培养，于30℃有氧条件下100rpm/min摇瓶培养7天，得到各霉菌的发酵液。
[0161]
(3)按照重量份数，取1份米曲霉菌、1份黑曲霉菌、6份绿色木霉菌的上述发酵液，与步骤(1)所得的沉香木粉混合，加入72份水后搅拌均匀，于25℃密闭条件下发酵5天，期间每天搅拌2次，获得发酵沉香物料。
[0162]
(4)将发酵沉香物料全部转移到萃取容器内，加入3倍重量纯净水，在85℃水浴提取2h，得到沉香精油；沉香精油提取得率为5.41％。
[0163]
(5)将所得的沉香精油用β-环糊精包合后，得到沉香精油粉。
[0164]
(6)将上述沉香精油粉，加入辅料(微晶纤维素)，混合均匀后，装入胶囊中，最终制成简易版沉香胶囊。
[0165]
为了更好地说明本发明的优点，下面列举出本发明的典型案例：
[0166]
我们在本地医院挑选了100名自愿受试者，皆确诊为心血管疾病患者，伴有呼吸困难、咳嗽、心悸、少尿、水肿、胸闷、头痛、头昏或眩晕，昏厥和抽搐，上腹胀痛、恶心、呕吐、咳血等一种或多种症状。试验组50名，服用实施例4所得的天香胶囊，每天2次，每次2粒，用温水送服；对比组50名，服用对比例4所得的简易版沉香胶囊，每天2次，每次2粒，用温水送服。服用2个月为1个疗程。疗效情况判定准则：1)痊愈为试用本品后，患有的不适症完全消失；2)好转为试用本品后，患有的不适症部分消失或有所缓解；3)无效为试用本品后，患有的不
适症并未消失或减轻。
[0167]
我们对试验数据进行统计和整理分析，具体结果如下表：
[0168][0169]
本发明天香胶囊对缓解心血管疾病引发的不适症、保护心血管的效果显著。经临床证实，总有效率达88％，痊愈率接近50％，且在服用期间，未出现任何不良反应及副作用，同时使患者提高免疫力，强身健体。从上述实施例4与对比例4的数据可见，关键在于沉香木与复合霉菌的共同发酵，提高了沉香精油的提取率；而且本发明各中药的复配组方，能够相辅相成，协同增效。
[0170]
对比例5
[0171]
根据实施例5的香芝胶囊的制备方法，改变原料复配的条件，具体为：
[0172]
(1)按照重量份数，取30份沉香木进行粉碎处理的沉香木粉，颗粒大小控制在0.5mm，置于塑料圆桶中。
[0173]
(2)从已纯化的米曲霉菌、黑曲霉菌、绿色木霉菌的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(pda)分别接种至单独的250ml马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)，于25℃有氧条件下150rpm/min摇瓶培养7天，作为活化发酵液。再从各霉菌的活化发酵液取75ml，分别接种至1l马铃薯-葡萄糖液体培养基(pdb)进行扩大培养，于25℃有氧条件下150rpm/min摇瓶培养7天，得到各霉菌的发酵液。
[0174]
(3)按照重量份数，取2份米曲霉菌、3份黑曲霉菌、6份绿色木霉菌的上述发酵液，与步骤(1)所得的沉香木粉混合，加入59份水后搅拌均匀，于30℃密闭条件下发酵5天，期间每天搅拌2次，获得发酵沉香物料。
[0175]
(4)将发酵沉香物料转移到萃取釜，通入超临界co2流体，进行第一次超临界流体萃取，萃取温度为30℃，萃取压力为30mpa，萃取时间为2.5h；收集产物，得到萃取物a和发酵沉香物料渣。
[0176]
(5)将发酵沉香物料渣转移到萃取釜，加入10倍重量95％的乙醇溶液，在50℃下进行第二次萃取，收集产物，得到萃取物b和发酵沉香物料渣。
[0177]
(6)萃取物b过滤后真空减压回收溶剂，合并萃取物a，得到沉香精油；沉香精油提取得率为6.08％。
[0178]
(7)将所得的沉香精油用β-环糊精包合后，得到沉香精油粉。
[0179]
(8)将上述沉香精油粉，加入辅料(微晶纤维素)，混合均匀后，装入胶囊中，最终制成简易版香芝胶囊。
[0180]
为了更好地说明本发明的优点，下面列举出本发明的典型案例：
[0181]
我们在本地医院随机挑选了200名自愿受试者，确诊为胃癌、肝癌、肺癌的其中一种。试验组100名，服用实施例5所得的香芝胶囊，每天3次，每次2粒，用温水送服；对比组100名，服用对比例5所得的简易版香芝胶囊，每天3次，每次2粒，用温水送服。服用3个月为1个疗程。疗效情况判定准则：1)基本痊愈为试用本品后，肿瘤由内而外逐渐坏死，并消失；2)好
转为试用本品后，肿瘤部分坏死，密度降低；3)无效为试用本品后，未有好转的迹象。
[0182]
我们对试验数据进行统计和整理分析，具体结果如下表：
[0183][0184]
本发明香芝胶囊对防癌抗癌的效果显著。经临床证实，总有效率达79％，痊愈率可达41％，且在服用期间，未出现任何不良反应及副作用，同时使患者提高免疫力，强身健体。从上述实施例与对比例的数据可见，本发明各中药的复配组方，能够相辅相成，协同增效。
[0185]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。