谷胱甘肽前体的组合物、制剂、制备方法及用途与流程

谷胱甘肽前体的组合物、制剂、制备方法及用途
1.本技术要求申请日为2021/8/10的中国专利申请2021109158434，发明名称为“谷胱甘肽前体的组合物、制剂、制备方法及用途”的优先权。本技术引用上述中国专利申请的全文。
技术领域
2.本发明涉及一种谷胱甘肽前体的组合物、制剂、制备方法及用途。


背景技术：

3.随着现代社会竞争日益激烈和工业废气的排放，越来越多的人出现了疲劳虚弱、肝功能下降、睡眠不佳、情绪不稳、记忆力减退等多种亚健康表现。亚健康状态的起因、机制、以及预防和控制措施的有效性研究，均与自由基作用机制和生物抗氧化干预、抗氧化效果以及免疫力密切相关。
4.其中，肝脏的主要功能是参与物质代谢、生物转化(解毒与灭活〉、凝血物质的生成和清除、胆汁的生成与排出。肝脏有丰富的单核吞噬细胞，在特异和非特异免疫中具有重要的作用。
5.现有技术中报道了一系列在提高免疫力、抗氧化、保肝和护肝方面的研究：
6.wo2020174339a1公开了一种抗氧化剂组合物，用于增加受试者体内的维生素水平并减少其氧化损伤，该组合物包含一种活性剂，该活性剂包含虎杖甙和乙酰半胱氨酸。
7.cn1829453a公开了一种治疗或预防感染及提高免疫力的组合物，包含硒化合物(如硒酵母复合物)、谷胱甘肽前体(如乙酰半胱氨酸)、碱度提高组分、硫源等。
8.cn103479833b公开了一种用于保肝的组合物，它是由下述原料制备而成：奶蓟提取物、绿茶提取物、巴西莓提取物、α-硫辛酸、n-乙酰-l-半胱氨酸。本发明将奶蓟提取物、绿茶提取物、巴西莓提取物、α-硫辛酸和n-乙酰-l-半胱氨酸组合使用，具有明显的保肝作用，可用于治疗和/或预防急性肝损伤和慢性肝损伤。
9.cn100584327c公开了一种用于治疗肝病的药物组合物，其包含乙酰半胱氨酸或其药物学上可接受的盐和至少一种治疗肝病的药物的组合物，其中治疗肝病的药物选自：苦参素、硫普罗宁或甘草酸单铵。该药物组合物具有良好的保肝作用，可以在综合治疗的基础上用于肝衰竭早期治疗。
10.由上述现有技术可知，目前的药物作用较为单一，要么仅能够用于提高免疫力，要么治肝或者护肝，难以满足亚健康群体的综合需求，也即护肝、提高免疫力和抗氧化等多项需求。


技术实现要素：

11.本发明要解决的技术问题是克服现有技术中的药物作用单一、无法满足亚健康群体的综合性需求，而提供一种谷胱甘肽前体的组合物、制剂、制备方法及用途。采用该谷胱甘肽前体的组合物制得制剂能够达到护肝、抗氧化和免疫的多重功效。
12.本发明是通过下述方案解决上述技术问题的：
13.本发明提供了一种谷胱甘肽前体的组合物，其包括如下组分：含硒化合物、谷胱甘肽前体和含锌化合物。
14.本发明中，较佳地，以重量份数计，所述谷胱甘肽前体的组合物包括如下组分：含硒化合物5-50份，谷胱甘肽前体200-1200份，含锌化合物20-105份。
15.本发明中，所述含硒化合物是指含硒组分，不因化合物的常规定义对其产生限制。
16.本发明中，所述含硒化合物较佳地包括亚硒酸钠、l-硒-甲基硒代半胱氨酸和富硒酵母中的一种或者多种，所述含硒化合物更佳地为富硒酵母。
17.本发明中，以重量份计，所述含硒化合物的用量较佳地为20-50份，更佳地为30-50份，例如45份。
18.本发明中，所述含硒化合物的粒径较佳地为40-120目，更佳地为60-80目。
19.本发明中，所述谷胱甘肽前体较佳地包括半胱氨酸和/或n-乙酰半胱氨酸，所述谷胱甘肽前体更佳地为n-乙酰半胱氨酸。
20.本发明中，以重量份计，所述谷胱甘肽前体的用量较佳地为400-1200份，例如450、495、515、525、650或700份，更佳地为600-800份。
21.本发明中，所述谷胱甘肽前体的粒径较佳地为10-140目，更佳地为20-80目，例如40或60目。
22.本发明中，所述含锌化合物较佳地包括葡萄糖酸锌、硫酸锌、柠檬酸锌、氧化锌和乳酸锌中的一种或者多种，所述含锌化合物更佳地为葡萄糖酸锌。
23.本发明中，以重量份计，所述含锌化合物的用量较佳地为30-105份，例如50份，更佳地为70-105份。
24.本发明中，所述含锌化合物的粒径较佳地为40-120目，更佳地为60-80目。
25.本发明中，较佳地，所述谷胱甘肽前体的组合物包括n-乙酰半胱氨酸或半胱氨酸500-700份，富硒酵母或l-硒-甲基硒代半胱氨酸5-30份，乳酸锌或葡萄糖酸锌20-70份。
26.在本发明一较佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括富硒酵母、n-乙酰半胱氨酸和葡萄糖酸锌。
27.在本发明一更佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物由富硒酵母、n-乙酰半胱氨酸和葡萄糖酸锌组成。
28.在本发明一更佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括富硒酵母25-35份、n-乙酰半胱氨酸500-700份和葡萄糖酸锌60-80份。
29.在本发明一更佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括富硒酵母30份、n-乙酰半胱氨酸600份和葡萄糖酸锌70份。
30.在本发明一更佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括富硒酵母45份、n-乙酰半胱氨酸600份和葡萄糖酸锌50份。
31.在本发明一较佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括富硒酵母、n-乙酰半胱氨酸和乳酸锌。
32.在本发明一更佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括富硒酵母50份、n-乙酰半胱氨酸495份和乳酸锌105份。
33.在本发明一较佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括亚硒酸钠、半胱氨酸
和氧化锌。
34.在本发明一更佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括亚硒酸钠30份、半胱氨酸525份和氧化锌105份。
35.在本发明一较佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括亚硒酸钠、半胱氨酸和硫酸锌。
36.在本发明一更佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括亚硒酸钠50份、半胱氨酸515份和硫酸锌105份。
37.在本发明一更佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括亚硒酸钠50份、乙酰半胱氨酸450份和硫酸锌105份。
38.在本发明一较佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括l-硒-甲基硒代半胱氨酸、半胱氨酸和葡萄糖酸锌。
39.在本发明一更佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括l-硒-甲基硒代半胱氨酸5份、半胱氨酸650份和葡萄糖酸锌50份。
40.在本发明一较佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括l-硒-甲基硒代半胱氨酸、n-乙酰半胱氨酸和乳酸锌。
41.在本发明一更佳实施例中，所述谷胱甘肽前体的组合物包括l-硒-甲基硒代半胱氨酸5份、n-乙酰半胱氨酸700份和乳酸锌20份。
42.本发明中，所述谷胱甘肽前体的组合物较佳地还包括组分a，所述组分a包括维生素、牛磺酸、脂肪酸、蛋白质、益生菌、多肽、硫辛酸、辅酶q10、精氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸、谷氨酰胺、异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸和组氨酸中的一种或者多种。
43.其中，较佳地，以重量份计，所述组分a的含量为1-60份，例如40份。
44.本发明中，较佳地，所述谷胱甘肽前体的组合物还包括矫味剂。
45.其中，较佳地，以重量份计，所述矫味剂的含量为10-30份，例如15份或20份。
46.其中，所述矫味剂的粒径较佳地为40-120目，更佳地为40-60目。
47.其中，较佳地，所述矫味剂包括绿茶香精、甜橙香精和蓝莓香精中的一种或多种。
48.当所述矫味剂为绿茶香精时，以重量份计，所述绿茶香精的含量较佳地为10-20份，例如15份。
49.当所述矫味剂为甜橙香精时，以重量份计，所述甜橙香精的含量较佳地为10-30份，例如20份。
50.当所述矫味剂为蓝莓香精时，以重量份计，所述蓝莓香精的含量较佳地为10-30份，例如20份。
51.本发明中，所述组分a和矫味剂的重量份数是相对于所述谷胱甘肽前体的组合物中各组分的重量份数而言。
52.本发明还提供一种上述谷胱甘肽前体的组合物的制备方法，其包括如下步骤：将上述各组分混合即可。
53.本发明还提供一种上述谷胱甘肽前体的组合物在制备用于保肝、抗氧化和免疫药物中作为药物活性成分的用途。
54.本发明还提供一种药物制剂，其原料包含上述谷胱甘肽前体的组合物。
55.本发明中，所述药物制剂可为本领域常规的剂型，例如粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊
剂、口服液剂、干悬剂或者其它药用剂型，较佳地为胶囊剂。
56.本发明中，所述药物制剂的原料还可包括本领域常规添加量的添加剂，例如稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂和填充剂中的一种或多种。所述稀释剂可为羧甲淀粉钠。所述粘合剂可为聚维酮。所述填充剂可为微晶纤维素。所述润滑剂可为硬脂酸镁。所述助流剂可为二氧化硅和/或滑石粉。滑石粉食用过量或长期食用很容易导致牙龈出血或口腔溃疡，故较佳的助流剂为二氧化硅。
57.其中，当所述药物制剂包括所述润滑剂时，以重量份计，所述润滑剂的含量较佳地为3-8份，例如3.75份、4.5份、5.5份、5.63份、6.5份或者7.5份。
58.其中，当所述药物制剂包括所述助流剂时，以重量份计，所述助流剂的含量较佳地为10-20份，例如15份。
59.其中，当所述药物制剂包括所述填充剂时，较佳地，以重量份计，所述填充剂的含量为1-100份，例如1.25-37.5份或2.5-22.5份，再例如7.5份、8.5份、9.37份、12.5份、14.5份、17.5份、22份、27.5或者30.5份。所述填充剂的粒径较佳地为40-120目，更佳地为60-80目。
60.其中，当所述药物制剂包括所述稀释剂时，以重量份计，所述稀释剂的含量较佳地为1-40份，例如5份。
61.其中，当所述药物制剂包括所述粘合剂时，以重量份计，所述粘合剂的含量较佳地为1-30份，例如5份。
62.在本发明一较佳实施例中，所述药物制剂为胶囊剂，所述胶囊剂的原料还包括润滑剂、助流剂、矫味剂和填充剂。
63.其中，以重量份计，所述润滑剂的含量较佳地为3-8份，例如3.75份、5.63份或者7.5份。
64.其中，以重量份计，所述助流剂的含量较佳地为10-20份，例如15份。
65.其中，以重量份计，较佳地，所述填充剂的含量为1-100份，例如1.25-37.5份或2.5-22.5份，再例如7.5份、12.5份、22份或者17.5份。所述填充剂的粒径较佳地为40-120目，更佳地为60-80目。
66.其中，所述胶囊剂中胶囊壳的体积根据最终制得的胶囊剂的净重确定，例如净重0.75g/粒的胶囊中，胶囊壳的体积为0.95ml。
67.其中，较佳地，所述胶囊剂按如下制备方法制得：将所述谷胱甘肽前体、所述含锌化合物、所述含硒化合物、所述矫味剂、所述润滑剂、所述助流剂和所述填充剂的混合粉末灌装胶囊即得。
68.更佳地，所述胶囊剂按如下制备方法制得：将所述n-乙酰半胱氨酸、所述葡萄糖酸锌、所述富硒酵母、所述绿茶香精、所述硬脂酸镁、所述二氧化硅和所述微晶纤维素的混合粉末灌装胶囊即得。
69.其中，较佳地，所述胶囊剂按如下制备方法制得：将所述含锌化合物、所述含硒化合物、所述矫味剂和所述填充剂的第一混合粉与所述谷胱甘肽前体的混合粉末混合，得第二混合粉，再将第二混合粉与所述润滑剂、所述助流剂混合得总混合粉，再将总混合粉灌装胶囊即得。
70.在得到所述第一混合粉之前，较佳地，所述含锌化合物和所述含硒化合物过60-80
目筛。对于含锌化合物与含硒化合物来说，所述葡萄糖酸锌和所述富硒酵母在过60目筛时，过筛率相对较高，为98％以上，且较容易通过筛网，过筛时间短；而在过80目筛时，过筛率相对较低，为96％以上，且较容易通过筛网，过筛时间长。在得到所述第一混合粉之前，较佳地，所述填充剂过60-80目筛。在得到所述第一混合粉之前，较佳地，所述矫味剂过40-60目筛。
71.在得到所述第二混合粉之前，所述谷胱甘肽前体较佳地过20-80目筛，更佳地过40-80目筛。
72.更佳地，所述胶囊剂按如下制备方法制得：将所述葡萄糖酸锌、所述富硒酵母、所述绿茶香精和所述微晶纤维素的第一混合粉与所述n-乙酰半胱氨酸的混合粉末混合，得第二混合粉，再将第二混合粉与所述硬脂酸镁、所述二氧化硅混合得总混合粉，再将总混合粉灌装胶囊即得。
73.在本发明一较佳实施例中，所述药物制剂为片剂，所述片剂的原料还包括润滑剂、助流剂、矫味剂和填充剂。
74.其中，以重量份计，所述润滑剂的含量较佳地为3-8份，例如3.75份、4.5份、5.5份、5.63份、6.5份或者7.5份。
75.其中，以重量份计，所述助流剂的含量较佳地为10-20份，例如15份。
76.其中，以重量份计，较佳地，所述填充剂的含量为1-100份，例如2.5-30.5份，再例如8.5份、9.37份或者14.5份。所述填充剂的粒径较佳地为40-120目，更佳地为60-80目。
77.其中，较佳地，所述片剂按如下制备方法制得：将所述谷胱甘肽前体、所述含锌化合物、所述含硒化合物、所述矫味剂、所述润滑剂、所述助流剂和所述填充剂的混合粉末压片即得。
78.更佳地，所述片剂按如下制备方法制得：将所述含锌化合物、所述含硒化合物、所述矫味剂和所述填充剂的第一混合粉与所述谷胱甘肽前体的混合粉末混合，得第二混合粉，再将第二混合粉与所述润滑剂、所述助流剂混合得总混合粉，再将总混合粉压片即得。
79.在得到所述第一混合粉之前，较佳地，所述含锌化合物和所述含硒化合物过60-80目筛。
80.在得到所述第一混合粉之前，较佳地，所述填充剂过60-80目筛。
81.在得到所述第一混合粉之前，较佳地，所述矫味剂过40-60目筛。
82.在得到所述第二混合粉之前，所述谷胱甘肽前体较佳地过20-80目筛，更佳地过40-80目筛。
83.其中，所述片剂的净重可按本领域常规的片剂的净重，例如净重为0.75g/片。
84.其中，所述片剂的硬度可为本领域常规，例如硬度为100-160n。
85.所述压片的步骤可按照片剂的净重和硬度进行。
86.本发明中，“重量份”反映了各组分之间的用量关系，并不以此限定组分的具体用量，本领域技术人员可根据用量关系适当调节具体的用量。
87.本发明还提供一种如前所述的谷胱甘肽前体的组合物或如前所述的药物制剂在保肝、抗氧化和增强免疫力中的用途。
88.在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
89.本发明所用试剂和原料均市售可得。
90.本发明的积极进步效果在于：
91.(1)将谷胱甘肽前体、含锌化合物和含硒化合物协同配合使用，具有护肝、抗氧化、增强免疫力的效果，尤其是n-乙酰半胱氨酸、葡萄糖酸锌和富硒酵母的协同配合效果更优异；
92.(2)在本发明较佳的实施例中，添加绿茶香精作为矫味剂，能掩盖谷胱甘肽前体原料的不良气味，并带有绿茶香气，使服用者易于吞咽，服用感良好；
93.(3)在本发明较佳的实施例中，胶囊剂制备工艺简单，服用后内容物在消化道易分散、溶出，吸收率较好；胶囊壳防护药物不受空气中氧、光线的作用，从而提高其稳定性；
94.(4)本技术的谷胱甘肽前体的组合物的混合后得到的粉末，混合均匀性好、流动性好、且便于灌装胶囊的灌装。
附图说明
95.图1为实施例28中各组谷胱甘肽前体组合物护肝功效实验的病理组织学检查图片，其中，a-i分别对应的是：a：空白对照组肝脏(油红o染色
×
200)；b：模型对照组肝脏(油红o染色
×
200)；c：实验组1肝脏(油红o染色
×
200)；d：实验组2肝脏(油红o染色
×
200)；e：实验组3肝脏(油红o染色
×
200)；f：实验组4肝脏(油红o染色
×
200)；g：实验组5肝脏(油红o染色
×
200)；h：实验组6肝脏(油红o染色
×
200)；i：实验组7肝脏(油红o染色
×
200)。
具体实施方式
96.下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
97.下述实施例中的样品编号仅为了便于描述，不对具体的样品进行限定。
98.休止角的测定，下述实施例中的休止角均按照如下方式进行测定：
99.将铁圈固定于铁架台上，漏斗置于铁圈内，把培养皿倒放在漏斗正下方，调整培养皿使其中心圆点与漏斗垂直，将物料从漏斗缓慢加入，一直加到培养皿的边缘均有物料流下时，停止加料，用直尺测量物料堆积高度h，再测量培养皿的直径r。
100.计算公式：tanα＝2h
÷
rα＝arctanα；
101.物料的休止角越小，摩擦力越小，流动性越好，小于30
°
时流动性最好，小于40
°
时可用于工业生产。
102.富硒酵母购自安琪酵母股份有限公司，葡萄糖酸锌购自郑州瑞普生物工程有限公司。
103.实施例1-4制备n-乙酰半胱氨酸的组合物
104.原料及用量：n-乙酰半胱氨酸600g，葡萄糖酸锌70g，富硒酵母30g。
105.制备工艺：除实施例1中不对n-乙酰半胱氨酸进行粉碎、直接进行过筛之外，其他实施例均将下述组分分别粉碎、再按照表1进行过筛得各粉末；再按照上述用量称取各粉末，混合即得n-乙酰半胱氨酸的组合物。
106.在实施例1-4中各取三个样品进行组合物休止角和相对标准偏差(rsd)的测试，测
试结果如下表1所示。
107.表1
[0108][0109]
由表1实验结果可知，随着粉碎粒度的降低，混合粉的休止角逐渐增大，表明混合粉的流动性逐渐变差；n-乙酰半胱氨酸未粉碎(20目)时，混合粉的流动性最好，但是由于葡萄糖酸锌、富硒酵母预处理均为过60目筛，粒度差异较大，若n-乙酰半胱氨酸不粉碎，在机械化胶囊灌装过程中容易出现样品分层、含量不均匀的情况。
[0110]
实施例5-7胶囊剂的制备
[0111]
原料及用量：n-乙酰半胱氨酸600g，葡萄糖酸锌70g，富硒酵母30g，绿茶香精15g，微晶纤维素17.5g，二氧化硅10g，硬脂酸镁7.5g。
[0112]
制备方法：
[0113]
(1)将上述各组分分别粉碎，将n-乙酰半胱氨酸和绿茶香精过40目筛，以及葡萄糖酸锌、富硒酵母、微晶纤维素分别过60目筛，得各粉末，备用；
[0114]
(2)按上述用量称取步骤(1)中制得的粉末；
[0115]
(3)先将葡萄糖酸锌粉末、富硒酵母粉末、绿茶香精粉末、微晶纤维素粉末混合10min，得第一混合粉；再将第一混合粉与n-乙酰半胱氨酸粉末按照表2中的时间混合t分钟，得到第二混合粉；再将第二混合粉与二氧化硅、硬脂酸镁混合10min，得总混合粉；
[0116]
(4)灌装胶囊：按照净重0.75g/粒，将总混合粉灌装胶囊，即可；其中空心胶囊壳的体积为0.95ml(胶囊壳的选择详见下文)；
[0117]
(5)包装：除去胶囊表面的粉末、挑选除去不合格产品，并用聚乙烯瓶装瓶。
[0118]
表2
[0119]
[0120]
对实施例5-7各取6个样品，检测每个样品中的硒含量，计算各实施例的rsd值，具体结果如表2所示。
[0121]
从表2可以看出，当物料混合10min时，6个取样点的硒含量的rsd值为4.23％，小于5％，表明物料混合10min时已混合均匀。若需大量生产，为保证大批量生产时物料能够混匀，可将混合时间定为20min。
[0122]
其中，步骤(3)中胶囊剂的胶囊壳的选择过程为：
[0123]
以实施例6为例，对实施例6制得的混合粉进行松装密度和振实密度测试。
[0124]
松装密度测试：取洁净、干燥的100ml量筒，置于天平上，将天平读数归零；将实施例6制得的混合粉松缓地转入量筒中至50ml刻度处，读取体积，并称量样品的重量，重复测定三次(样品1-3)，计算密度，求平均值；结果见表3；
[0125]
振实密度测定方法：将上述盛有样品的量筒放在台面上(铺有约5mm厚的布)，由2cm左右的高度自坠到台面上，反复此操作约100次，读取体积，计算密度，结果见表3。
[0126]
表3
[0127][0128]
根据实施例6的配方，将胶囊制剂的规格为0.75g/粒，同时根据所测的松装密度及振实密度，计算出所需空心胶囊的体积范围为0.725～1.007ml；查询资料，0#空心胶囊壳的体积为0.68ml，00﹟空心胶囊壳的体积为0.95ml，因此选择00﹟空心胶囊进行灌装。
[0129]
实施例8-9胶囊剂的制备
[0130]
n-乙酰半胱氨酸600g，葡萄糖酸锌70g，富硒酵母30g，绿茶香精15g，硬脂酸镁7.5g，微晶纤维素7.5-17.5g(微晶纤维素补充总重量至750g)二氧化硅和微晶纤维素的用量如下表所示，其他制备工艺与实施例6保持一致；每个实施例取3个样品，所测总混合粉休止角、rsd如下表4所示。
[0131]
表4
[0132][0133]
由表4实验结果可知，总混合粉的休止角无明显差异。
[0134]
实施例10-11胶囊剂的制备
[0135]
用全自动胶囊机进行胶囊灌装预实验，运行一段时间后，出现设备运行卡顿的情况，停机取下填充杆观察，发现有大量物料粘附填充杆上，且较难清理；物料粘附填充杆造成了填充杆与模具孔壁的摩擦力增大，以至于出现设备运行卡顿的情况。为了减少胶囊灌装过程中填充杆粘附物料及降低物料与模具孔壁之间的摩擦力，使胶囊灌装顺利进行，在
原料中添加润滑剂硬脂酸镁，硬脂酸镁的添加量如表5所示(微晶纤维素补充总重量至750g)，其他条件与制备工艺与实施例6保持一致，实验结果如表5所示。
[0136]
表5
[0137]
编号硬脂酸镁用量(g)填充杆及模具孔壁物料粘附情况实施例103.75填充杆和模具孔壁具有明显的物料粘连现象实施例115.63填充杆和模具孔壁极少量物料粘连实施例67.5填充杆和模具孔壁无明显物料粘连
[0138]
实施例12-19胶囊剂的制备
[0139]
由于n-乙酰半胱氨酸原料具有强烈的类似蒜的臭气，其气味可引起咳呛、恶心、呕吐、口臭等，易使服用者产生不适，在原料混合粉中加入适宜的矫味剂，掩盖n-乙酰半胱氨酸原料的不良气味；矫味剂的种类以及用量按照表6所示添加(微晶纤维素补充总重量至750g)，其他条件与实施例6保持一致。
[0140]
表6
[0141][0142][0143]
由表6实验结果可知，绿茶香精的掩味效果整体优于甜橙香精和蓝莓香精，甜橙香精在用量为30g时才具有明显的掩味效果，而绿茶香精在用量为15g时就能完全遮盖乙酰半胱氨酸的气味。
[0144]
实施例20(片剂)
[0145]
一种具有护肝、抗氧化、增强免疫力的谷胱甘肽前体组合物，其组分包括：半胱氨酸525g、氧化锌105g、亚硒酸钠30g、甜橙香精30g、硬脂酸镁4.5g、微晶纤维素30.5g、二氧化硅20g、羧甲淀粉钠5g。
[0146]
片剂制备方法：
[0147]
(1)将半胱氨酸和矫味剂过40目筛，以及氧化锌、亚硒酸钠、微晶纤维素分别过60目筛，得各粉末，备用；
[0148]
(2)按上述组分重量称取步骤(1)中制得的粉末；
[0149]
(3)先将氧化锌粉末、亚硒酸钠粉末、矫味剂粉末、微晶纤维素粉末混合10min，得
第一混合粉；再将第一混合粉与半胱氨酸粉末混合10min，得到第二混合粉；再将第二混合粉与二氧化硅、硬脂酸镁混合10min，得总混合粉；
[0150]
(4)压片：按照净重0.75g/片压片，片剂硬度控制100-160n。
[0151]
实施例21(片剂)
[0152]
一种具有护肝、抗氧化、增强免疫力的谷胱甘肽前体组合物，其组分包括：半胱氨酸650g、葡萄糖酸锌50g、l-硒-甲基硒代半胱氨酸5g、蓝莓香精10g、硬脂酸镁6.5g、微晶纤维素8.5g、二氧化硅15g、聚维酮5g。
[0153]
片剂的制备方法同实施例20。
[0154]
实施例22(片剂)
[0155]
一种具有护肝、抗氧化、增强免疫力的谷胱甘肽前体组合物，其组分包括：n-乙酰半胱氨酸600、葡萄糖酸锌50、富硒酵母45、绿茶香精20、硬脂酸镁5.5、微晶纤维素14.5、二氧化硅15。
[0156]
片剂的制备方法同实施例20。
[0157]
实施例23(片剂)
[0158]
一种具有护肝、抗氧化、增强免疫力的谷胱甘肽前体组合物，其组分包括：n-乙酰半胱氨酸495g、乳酸锌105g、富硒酵母50g、绿茶香精20g、硬脂酸美5.63g、微晶纤维素9.37g、二氧化硅20g、牛磺酸40g、羧甲淀粉钠5g。
[0159]
片剂的制备方法同实施例20。
[0160]
实施例24(胶囊)
[0161]
一种具有护肝、抗氧化、增强免疫力的谷胱甘肽前体组合物，其组分包括：n-乙酰半胱氨酸700g、乳酸锌20g、l-硒-甲基硒代半胱氨酸5g、甜橙香精10g、硬脂酸镁3.75g、微晶纤维素1.25g、二氧化硅10g。
[0162]
胶囊的制备方法同实施例5。
[0163]
实施例25(胶囊)
[0164]
一种具有护肝、抗氧化、增强免疫力的谷胱甘肽前体组合物，其组分包括：半胱氨酸515g、硫酸锌105g、亚硒酸钠50g、蓝莓香精30g、硬脂酸镁8g、微晶纤维素22g、二氧化硅20g。
[0165]
胶囊的制备方法同实施例5。
[0166]
实施例26(胶囊)
[0167]
一种具有护肝、抗氧化、增强免疫力的谷胱甘肽前体组合物，其组分包括：n-乙酰半胱氨酸450g、硫酸锌105g、亚硒酸钠50g、绿茶香精20g、硬脂酸镁7.5g、微晶纤维素37.5g、二氧化硅20g、鸟氨酸60g。
[0168]
胶囊的制备方法同实施例5。
[0169]
实施例27
[0170]
下述测试为分别对实施例6制得的总混合粉和胶囊剂进行性能测试
[0171]
(1)总混合粉的相关性质测试
[0172]
①
均匀性：
[0173]
将总混合粉所在料斗的上、中、下三个位置各取2个样，共取6个样，检测所取样品中的硒含量，计算6个样品含量的rsd值，以此为指标评价物料总混合粉是否混合均匀，实验
结果见表7。
[0174]
表7
[0175][0176]
由实验结果可见，总混合粉的硒含量rsd值为2.34％，小于5％，表明实施例6中总混合粉不同取样点的样品硒含量差异较小，可以说明总混合粉混合均匀。
[0177]
②
休止角测定：
[0178]
在总混合粉中取适量的三等份样品，测定休止角，实验结果见表8。
[0179]
表8
[0180][0181]
由表8实验结果可见，总混合粉的休止角为38.2
°
，小于40
°
，流动性能够满足机械化灌装胶囊。
[0182]
(2)胶囊剂的填充性验证
[0183]
将制备好的总混合粉用全自动胶囊填充机以空心胶囊壳(体积为0.95ml)进行灌装，灌装完成后，按照《中华人民共和国药典》2020版四部通则胶囊剂项下装量差异检查法检查装量差异，其装量差异范围为-2.79％～5.77％，符合胶囊剂的相关要求，表明该配方、工艺可行，验证结果如表9所示。
[0184]
表9
[0185][0186]
(3)胶囊剂稳定性探究
[0187]
将裸放样品及瓶装样品的影响因素试验考察，分别于第0、10天取样，观察样品在高温(60℃)、高湿(90％
±
5％rh)、强光(4500lx
±
500lx)下外观内容物性状变化情况，结果
见表10。
[0188]
表10
[0189][0190][0191]
注：
“‑‑”
表示未检测。
[0192]
从表10可以看出，高温条件下，裸放样品囊壳变脆、内容物有轻微结块现象，并且样品n-乙酰半胱氨酸含量较0天差异较大；高湿条件下，裸放样品囊壳质地变软、内容物有吸湿现象，性状较0天相比变化较大；而瓶装样品在高温、高湿条件下，样品的性状、崩解时限、n-乙酰半胱氨酸含量较0天相比均未发生明显变化。强光照射条件下，裸放样品和瓶装样品的性状、崩解时限及n-乙酰半胱氨酸含量均较0天相比均未发生明显变化。说明本品在直接接触空气状态下，对高温、高湿较为敏感，经聚乙烯塑料瓶包装后，稳定性良好。
[0193]
实施例28
[0194]
针对以下实验组进行辅助护肝、抗氧化以及免疫功效实验。
[0195]
实验组1(对比例1)：n-乙酰半胱氨酸600g。
[0196]
实验组2(对比例2)：n-乙酰半胱氨酸600g、葡萄糖酸锌70g组成。
[0197]
实验组3(对比例3)：n-乙酰半胱氨酸600g、富硒酵母30g组成。
[0198]
实验组4(实施例26)：n-乙酰半胱氨酸450g、硫酸锌105g、亚硒酸钠50g。
[0199]
实验组5(实施例24)：n-乙酰半胱氨酸700g、l-硒-甲基硒代半胱氨酸5g和乳酸锌20g。
[0200]
实验组6(实施例5)：n-乙酰半胱氨酸600g、富硒酵母30g和葡萄糖酸锌70g。
[0201]
实验组7(实施例21)：半胱氨酸650g、葡萄糖酸锌50g、l-硒-甲基硒代半胱氨酸5g。
[0202]
下述功效实验数据处理均采用spss软件，通过anova方式，采用邓肯多重差异分析(duncan’s multiplerange test)对不同实验组效果的差异性在p＜0.05水平上进行数据分析。同列数据的每组之间的显著性差异情况采用上标字母来表示。同列数据各组的上标字母不同表示差异显著(p＜0.05)，同列数据各组含有至少1个相同字母则表示差异不显著(p＞0.05)。例如：同列中，上标字母分别为d和为cd的两组不具有显著差异，而上标字母分别为d和上标字母为bc的两组具有显著差异，并且以数值最大的组标记上标字母a，相对于上标字母为a的组，上标字母分别为b，c，d的组与上标字母为a的组的差异性依次增大。
[0203]
1.谷胱甘肽前体组合物具有护肝的功效实验
[0204]
本试验通过检测肝脏过氧化脂质含量(mda)、还原性谷胱甘肽(gsh)和甘油三酯
(tg)三项指标以及病理组织学研究本发明组合物对酒精性肝损伤的辅助保护作用(其中，mda和tg含量越低、gsh含量越高，说明护肝效果越好)。若肝脏mda、还原型gsh和tg三项指标阳性，或肝脏mda、还原型gsh和tg三项指标中任两项指标阳性和病理组织学检查结果阳性，可判定该组合物对酒精性肝损伤具有辅助保护作用。
[0205]
受试动物：5-6周龄spf级昆明种雄鼠，体重18-22g，湖北省实验动物研究中心提供[合格证号：scxk(鄂)2020-0018]。
[0206]
实验方法：取小鼠117只，随机分成9组，分别为空白对照组、模型对照组、实验组1-7(试样配方参见上述实验组1-7的配方)，每组13只。
[0207]
空白对照组和模型对照组给予蒸馏水，各实验组按配方给予相应的受试物(各受试物中乙酰半胱氨酸或半胱氨酸剂量均为500mg/kg bw)，灌胃容量为20ml/kg bw。试验第30天，模型组对照组及各实验组一次灌胃给予50％乙醇14ml/kg.bw，空白对照组给予等容量的蒸馏水，禁食16小时。称重后颈椎脱臼处死动物。
[0208]
1.1肝脏匀浆中mda、还原性gsh、tg的含量
[0209]
取0.5g肝脏加生理盐水制备肝匀浆后进行mda、还原型gsh和tg的检测。mda、还原型gsh的检测方法及计算方法均参照南京建成生物工程研究所的试剂盒说明，tg由贝克曼au680型全自动生化分析仪检测。测定结果见表11。
[0210]
表11各组小鼠肝匀浆中mda、还原性gsh、tg含量
[0211][0212]
实验结果：与空白对照组比较，模型对照组动物肝匀浆mda、tg升高，还原型gsh降低(p《0.05)，说明本次实验模型成功。与模型对照组比较，各受试物组mda含量均降低、gsh含量增高(p《0.05)；实验组1、4-7的实验组tg降低(p《0.05)，并且实验组6与实验组1差异显著(p《0.05)。
[0213]
1.2肝脏组织病理学
[0214]
病理观察材料：将各组动物肝脏从肝左叶中部做横切面取材，冰冻切片，苏丹ⅲ染
色。在光学显微镜下观察肝细胞损伤程度。
[0215]
评价方法和评分标准：镜检，从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化，用40倍物镜连续观察整个组织切片。主要观察脂滴在肝脏的分布、范围和面积。
[0216]
分别记录每个视野中的各种病变所占视野的面积，累计所观察视野的病变总分。
[0217]
评分依据：肝细胞内脂滴散在，稀少(0分)；含脂滴的肝细胞不超过1/4(1分)；含脂滴的肝细胞不超过1/2(2分)；含脂滴的肝细胞不超过3/4(3分)；肝组织几乎被脂滴替代(4分)
[0218]
测试结果见表12。
[0219]
表12谷胱甘肽前体组合物对小鼠肝脏病理组织学的影响
[0220][0221]
试验结果：模型对照组与空白对照组比较，肝脏脂肪细胞变性评分在统计学上有显著性差异(p《0.01)，该动物试验模型成立，成功复制出了实验小鼠酒精性肝损伤模型。实验组1、实验组4-7与模型组相比较，肝细胞脂肪变性程度减轻，统计学上有显著性差异(p＜0.05)。各组病理组织学检查图片见附图1(其中，图1中a-i分别对应的是：a：空白对照组肝脏(油红o染色
×
200)；b：模型对照组肝脏(油红o染色
×
200)；c：实验组1肝脏(油红o染色
×
200)；d：实验组2肝脏(油红o染色
×
200)；e：实验组3肝脏(油红o染色
×
200)；f：实验组4肝脏(油红o染色
×
200)；g：实验组5肝脏(油红o染色
×
200)；h：实验组6肝脏(油红o染色
×
200)；i：实验组7肝脏(油红o染色
×
200)。
[0222]
综上，根据《保健食品检验与评价技术规范(2003版)》对酒精性肝损伤具有辅助保护作用的判定原则，实验组1、实验组4-7对酒精性肝损伤具有辅助保护作用。
[0223]
2.谷胱甘肽前体组合物抗氧化的功效实验
[0224]
本试验通过检测mda、蛋白质羰基、抗氧化酶活性(gsh-px或sod)、还原性gsh含量四项指标研究该组合物抗氧化作用。若所述四项指标中三项指标阳性，则可判定该组合物
具有抗氧化功效。
[0225]
受试动物：10月龄以上spf级昆明种雄鼠，体重40-60g，湖北省实验动物研究中心提供[合格证号：scxk(鄂)2020-0018]。
[0226]
试验方法：取小鼠104只，随机分成8组，分别为阴性对照组、实验组1-7(即试样配方采用前述实验组1-7的配方)，每组13只。
[0227]
空白对照组给予蒸馏水，各实验组给予相应的受试物(各受试物中乙酰半胱氨酸或半胱氨酸剂量均为500mg/kg bw)，灌胃容量为20ml/kg bw。各组动物连续灌胃30天后，进行内眦取血，制备溶血液分别检测mda含量及谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)活力；处死动物，取肝脏作匀浆，制备10％的肝匀浆做还原性gsh和蛋白质羰基测定，制备1％的肝匀浆进行超氧化物歧化酶(sod)活力测定。各检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。测试结果见表13。
[0228]
表13谷胱甘肽前体组合物对mda、蛋白质羰基、sod、gsh-px和gsh的影响
[0229][0230]
试验结果：各实验组均能明显减少老龄小鼠2％溶血液中mda含量(p《0.05)；实验组3-7能明显降低10％肝匀浆中蛋白质羰基含量(p《0.05)；实验组6能明显升高老龄小鼠1％肝匀浆中sod活性(p《0.05)；实验组1及实验组4-7能明显升高10％肝匀浆中还原性gsh含量(p《0.05)。根据判定原则实验组4-7具有抗氧化功效。
[0231]
3.谷胱甘肽前体组合物的有助于增强免疫力的功效实验
[0232]
本实验从细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、nk细胞活性四个方面研究该组合物对小鼠免疫系统的作用。若四个方面任2个方面结果阳性，该组合物具有有助于增强免疫力作用。
[0233]
受试动物：4周龄spf级昆明种雄性小鼠，体重18-22g，湖北省实验动物研究中心提供[合格证号：scxk(鄂)2020-0018]。
[0234]
试验方法：取小鼠400只，随机分为5批，每批80只，分别进行体重和脏器/体重比值
测定、细胞免疫功能测定、体液免疫功能测定、单核-巨噬细胞功能和nk细胞活性5组免疫试验。每组免疫试验80只小鼠分为8组，每组10只，分别为阴性对照组、实验组1-7，阴性对照组给予蒸馏水，各实验组给予相应的受试物(各受试物中乙酰半胱氨酸或半胱氨酸剂量均为500mg/kg bw)，灌胃容量为20ml/kg bw。
[0235]
末次给样后1h称小鼠体重，然后参照《保健食品检验与评价技术规范(2003版)》免疫功能检测的程序，分别测定下列各项免疫指标：cona诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖转化功能、迟发型变态反应、抗体生成细胞数、血清溶血素水平、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、碳廓清能力以及nk细胞活性。
[0236]
3.1体液免疫功能测定
[0237]
表14小鼠抗体生成细胞数和溶血素水平检测(n＝10)
[0238][0239]
结果表明各实验组溶血空斑数和抗体积数均高于对照组，实验组1、4-7与对照组相比差异显著(p＜0.05)，并且实验组5、6的溶血空斑数和抗体积数均高于实验组1，差异显著(p＜0.05)。
[0240]
3.2单核-巨噬细胞功能
[0241]
表15小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验和碳廓清试验(n＝10)
[0242]
[0243][0244]
由表15可知，各实验组小鼠巨噬细胞吞噬指数和吞噬率高于对照组，经方差分析，组间有显著差异，实验组1、4-7与对照组相比，差异显著(p＜0.05)，并且实验组6与实验组1相比，差异显著(p＜0.05)。
[0245]
根据细胞免疫(cona诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖转化功能、迟发型变态反应)、nk细胞活性的实验数据，经统计学分析各实验组与阴性对照组相比无显著差异。
[0246]
综上，根据《保健食品检验与评价技术规范(2003版)》有助于增强免疫力的结果判定原则，在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核—巨噬细胞功能、nk细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，实验组1、4-7配方组合物具有有助于增强免疫力的功效。
[0247]
综合上述功效实验，实验组4-7均能实现护肝、抗氧化、增强免疫力的功效，其中，实验组6在护肝功效方面(mda降低、还原性gsh含量提升、tg含量降低、肝脏病理组织学)、抗氧化方面的(mda降低、蛋白质羰基降低、sod和gsh提升)，增强免疫方面(体液免疫功能和单核-巨噬细胞)均效果显著，综合各项指标而言，实验组6的效果最佳。
[0248]
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改，但这些变更和修改均落入本发明的保护范围。