NGR偶联物及其用途的制作方法

技术特征：
1.一种偶联物，其包含：第一肽序列cngrcg(seq id no:1)，其与蛋白质的n末端连接；化合物x，其与所述肽的n末端连接。2.如权利要求1所述的偶联物，其能够识别cd13。3.如权利要求1或2所述的偶联物，其中，所述蛋白质是细胞因子，优选具有抗肿瘤活性的细胞因子，更优选选自下组的细胞因子：肿瘤坏死因子(tnf)，优选tnf-α或tnf-β，tnf相关的凋亡诱导配体(trail)，内皮单核细胞激活多肽ii(emap-ii)，il12，干扰素γ(ifnγ)和干扰素α(ifnα)。4.如前述权利要求中任一项所述的偶联物，其中，所述化合物x选自第二肽。5.如前述权利要求中任一项所述的偶联物，其中，所述化合物x是具有1-200个氨基酸残基的第二肽，优选1、2或3个氨基酸残基。6.如权利要求5所述的偶联物，其中，所述第二肽由下述组成：丝氨酸残基或任何具有短侧链的氨基酸，优选甘氨酸或丙氨酸，包含所述偶联物在真核细胞中表达和分泌时被去除的前导序列或iegr(seq id no:2)序列的氨基酸序列，优选ompt前导序列或α交配因子分泌信号肽。7.如权利要求6所述的偶联物，其中，所述第二肽由丝氨酸组成并且所述细胞因子是tnf，优选其中tnf是人tnf-α。8.如前述权利要求中任一项所述的偶联物，其中，所述偶联物包含用于化学或酶促裂解所述化合物x和所述肽之间的键(x-c键)的位点，优选其中所述x-c键的裂解能够用氨肽酶或内切蛋白酶实现，优选用氨肽酶n(cd13)或蛋白酶，优选因子xa。9.一种编码权利要求1-8中任一项所述的偶联物的核酸。10.一种载体，优选质粒或病毒载体，更优选用于基因治疗，其包含权利要求9所述的核酸。11.一种纳米颗粒，其包含权利要求1-8中任一项所述的偶联物，优选地，所述偶联物吸附在金纳米颗粒的表面。12.一种组合产品，其包含权利要求1-8中任一项所述的偶联物或权利要求9所述的核酸或权利要求10所述的载体或权利要求11所述的纳米颗粒和至少一种抗肿瘤剂，优选地是化疗剂和/或免疫调节剂和/或免疫细胞，优选地，所述化疗剂是多柔比星、美法仑、替莫唑胺、吉西他滨、紫杉醇、顺铂、长春新碱或长春瑞滨，优选地，所述免疫调节剂是抗癌疫苗或免疫检查点阻断剂，例如抗pd1或抗pdl1或抗ctla4抗体；优选地，所述免疫细胞是淋巴细胞或遗传修饰的t淋巴细胞，例如car-t细胞或tcr重定向的t细胞或nk细胞；优选地，其他抗肿瘤剂包含抗体和化疗剂，如r-chop:利妥昔单抗、环磷酰胺、长春新碱、多柔比星、泼尼松龙。13.如权利要求12所述的组合，其中，其包含权利要求1-8中任一项所述的偶联物或权利要求9所述的核酸或权利要求10所述的载体或权利要求11所述的纳米颗粒和至少一种抗肿瘤剂，其中所述试剂是多柔比星。14.如权利要求12所述的组合，其中，其包含权利要求1-8中任一项所述的偶联物或权利要求9所述的核酸或权利要求10所述的载体或权利要求11所述的纳米颗粒和至少一种抗肿瘤剂，其中所述试剂是美法仑。15.如权利要求1-8中任一项所述的偶联物或权利要求9所述的核酸或权利要求10所述
的载体或权利要求11所述的纳米颗粒或权利要求12-14中任一项所述的组合产品，用于医药用途。16.如权利要求1-8中任一项所述的偶联物或权利要求9所述的核酸或权利要求10所述的载体或权利要求11所述的纳米颗粒或权利要求12-14中任一项所述的组合产品，用于治疗肿瘤，优选实体瘤，更优选淋巴瘤，优选cns原发性弥漫性大b细胞淋巴瘤(pcnsl)，脑肿瘤，例如，神经胶质瘤，星形细胞瘤，胶质母细胞瘤，弥漫性内生脑桥神经胶质瘤，肉瘤，黑素瘤口腔或皮肤鳞状细胞癌，肝细胞癌，头颈癌，胃食管癌，结直肠癌，胰腺癌，卵巢癌，肺癌，例如，sclc，nsclc，间皮瘤，宫颈癌，乳腺癌，肾癌，尿路上皮癌或其转移。17.如权利要求13所述的组合，用于治疗胶质母细胞瘤。18.如权利要求14所述的组合，用于治疗淋巴瘤。19.一种药物组合物，其包含有效量的权利要求1-8中任一项所述的偶联物或权利要求9所述的核酸或权利要求10所述的载体或权利要求12-14中任一项所述的组合产品或权利要求11所述的纳米颗粒11，以及至少一种药学上可接受的运载体和/或赋形剂。20.一种产生包含与蛋白质的n末端连接的序列cngrcg(seq id no:1)的均质偶联物的方法，所述方法包括：-在原核或真核细胞，优选大肠杆菌细胞和枯草芽孢杆菌中表达权利要求8所定义的偶联物；-化学或酶促裂解x-c键，优选使用氨肽酶、内切蛋白酶或蛋白酶。21.一种产生包含与蛋白质的n末端连接的序列cngrcg(seq id no:1)的均质偶联物的方法，其包括在不能乙酰化α-氨基或修饰cn序列的宿主中进行dna表达，所述宿主优选为真核细胞。22.如权利要求21所述的方法，其中，所述真核细胞选自下组：cho细胞、小鼠骨髓瘤ns0衍生的细胞和昆虫细胞，例如sf 21。23.一种产生包含与蛋白质的n末端连接的序列cngrcg(seq id no:1)的均质偶联物的方法，所述方法包括：-表达还包含前导序列的所述偶联物，所述前导序列在真核细胞或植物或动物中，优选在巴斯德毕赤酵母细胞、cho细胞或杆状病毒昆虫细胞系统中表达时被去除；-分泌所述偶联物。24.一种纯化权利要求1-8中任一项所述的偶联物的方法，其包括以下步骤：-裂解表达偶联物的细胞以获得裂解物；-由所述裂解物获得可溶部分；-硫酸铵沉淀可溶部分，去除沉淀物质并回收可溶部分，-用较高浓度的硫酸铵沉淀可溶部分，-溶解不溶部分，i.疏水层析，ii.离子交换层析，iii.变性条件下的凝胶过滤层析，iv.复性，和v.凝胶过滤层析。

技术总结
本发明涉及包含与蛋白质的N末端连接的第一肽序列CNGRCG(SEQ IDNO:1)和与所述肽的N末端连接的化合物X的偶联物以及相关医药用途。端连接的化合物X的偶联物以及相关医药用途。


技术研发人员：F
受保护的技术使用者：圣拉斐尔医院有限公司
技术研发日：2021.03.19
技术公布日：2023/2/13