一种静电纺复合纳米纤维材料及其制备方法和应用

1.本发明属于生物医用高分子材料领域，具体涉及一种静电纺复合纳米纤维材料及其制备方法和应用。


背景技术：

2.细菌感染是威胁人类健康的重大问题，细菌耐药性的增加更是为医疗保健带来了巨大的经济负担。因此，研究和开发具有抗菌性能的新型生物医学材料对临床意义重大。抗生素、纳米粒子和金属离子等多种抗菌剂已被开发出来，以有效治疗各种细菌感染。纳米银(agnps)因其广谱抗菌活性和对各种细菌、病毒和真菌的强大抗菌效果而备受关注(adv healthc mater. 2018, 7(13), e1701503)。agnps的主要通过溶解释放ag

，释放的ag

可增加细菌细胞膜的通透性，产生活性氧，最终导致细菌裂解和死亡。然而，过量使用agnps会导致人体的银毒性，如胃肠道紊乱、痉挛，甚至致命死亡。此外，裸露的agnps在与细菌接触时容易聚集，导致抗菌活性降低甚至消除。为了通过增加ag

释放量来提高agnps的抗菌活性，研究人员将agnps制备成不同尺寸、形状和表面涂层等，但效果并不理想。
3.近年来，光热转化材料的研究取得了显著的进展。值得注意的是，近红外(700-1000nm)对组织穿透较深，副作用小，适合临床使用。黑磷(bp)作为二维材料家族中的一颗新星，凭借优越的近红外(nir)照射光吸收和光热转换能力(adv sci, 2020, 7(19), 2001431)，在光热治疗中得到了广泛的应用。在近红外照射下，bp可以将光能转化为热能，从而加速分子(如ag

)的运动，既实现了ag

的可控长期释放，又达到了增强低浓度agnps抗菌性能的目的。同时，bp在人体内容易被生物降解为无毒的磷酸盐离子，具有良好的生物相容性。
4.聚己内酯(pcl)是一种来源于可再生植物资源的热塑性聚脂材料，其具有良好的生物可降解性，生物相容性，和抗拉强度及延展度等，从而被广泛应用于生物医学材料领域。通过静电纺丝技术制备得到的单纯聚己内酯膜具有类似细胞外基质的仿生结构，为了赋予其更优异的性能，需要将其作为载体添加功能性的分子基团等，才可能制备得到更具有实用性和功能性的新型材料。目前纳米银、黑磷和聚己内酯在生物医学材料学领域内的应用还未得到充分的发挥，且有关制备静电纺聚己内酯/纳米银/黑磷复合纳米纤维的报道还未见到。


技术实现要素：

5.针对现有技术中存在的问题和不足，本发明的目的在于提供一种静电纺复合纳米纤维材料及其制备方法和应用。
6.基于上述目的，本发明采用如下技术方案：本发明第一方面提供了一种复合纳米纤维材料的制备方法，包括如下步骤：将纳米银、黑磷加入溶剂中孵育后得到纳米银/黑磷共混液；再将纳米银/黑磷共混液与载体溶液共混得到纺丝液；最后将纺丝液进行纺丝处理得到复合纳米纤维材料。
7.优选地，所述纳米银/黑磷共混液中纳米银的质量百分比浓度为0.2wt%-4wt%。
8.更加优选地，所述纳米银的粒径为15-20nm。
9.优选地，所述纳米银/黑磷共混液中黑磷的质量百分比浓度为0.01wt%-5wt%。
10.更加优选地，所述黑磷为二维黑磷纳米片。
11.更加优选地，所述纳米银与黑磷的质量比为1∶（1-1.2）。
12.优选地，所述载体溶液是将载体溶于载体溶剂中制备而成；所述载体为聚己内酯、聚乳酸或聚羟基乙酸；所述载体溶液中载体的质量分数为8%-12%。更加优选地，当载体为聚己内酯时，所述聚己内酯溶液中聚己内酯的质量分数为8%-12%。
13.优选地，所述纳米银/黑磷共混液与载体溶液的体积比为（0.1-1）∶（8-10）。
14.优选地，所述溶剂为六氟异丙醇、二氯甲烷或三氯甲烷；所述载体溶剂中为六氟异丙醇、二氯甲烷或三氯甲烷。更加优选地，所述纳米银/黑磷共混液中溶剂与载体溶剂种类相同。
15.优选地，所述孵育处理为搅拌和/或超声处理；孵育处理的搅拌速率为1000-1500rpm，搅拌时间为24-72h；孵育处理的超声时间为5-20min。进一步地，所述孵育处理是为了使纳米银均匀分散在黑磷纳米片上。
16.更加优选地，所述纳米银/黑磷共混液与载体溶液共混方式为搅拌或超声处理；共混处理的搅拌速率为1000-1500rpm，搅拌时间为12-48h。
17.更加优选地，所述纺丝处理的工艺参数为：接收器转速为0-3000rpm，接收距离10-20cm，喷射速率为0.5-1ml/h，电压为15-20kv。
18.本发明第二方面提供了所述制备方法制备的复合纳米纤维材料。
19.本发明第三方面提供了所述复合纳米纤维材料在医用材料中的应用。优选地，所述医用材料包括医用支架材料如伤口敷料材料。
20.更加优选地，当所述复合纳米纤维材料与nir联用且应用于与血液接触的场景时，为保证医疗器材溶血性能的要求，制备所述复合纳米纤维材料时得到的纺丝液中，纳米银的质量百分比浓度为0.02wt%-0.3wt%。
21.与现有技术相比，本发明的有益效果如下：（1）本发明以黑磷为纳米银材料的改性剂，以聚己内酯为载体，静电纺丝后得到聚己内酯/纳米银/黑磷复合纳米纤维。在其中一项实施例中，本发明制备的聚己内酯/纳米银/黑磷复合纳米纤维细胞毒性较低，血液相容性良好，抗菌性能优异。因此，本发明聚己内酯/纳米银/黑磷复合纳米纤维可作为新型医用抗菌支架材料，在医用材料领域以及临床上具有很好的应用前景。
22.（2）本发明加入具有高粘附性和高比表面积的黑磷，可以吸附纳米银，不仅解决了纳米银易聚集的缺点，保留了黑磷和纳米银的生物活性，同时由于黑磷在近红外照射下的光热转化性能，将光能转化为热能从而加速纳米银或ag

的运动，既实现了纳米银或ag

的可控长期释放，又达到了增强低浓度agnps抗菌、促细胞生长等性能的目的。在其中一项实施例中，本发明聚己内酯/纳米银/黑磷复合纳米纤维联合nir照射比聚己内酯/纳米银复合纳米纤维表现出优异的光热转化性能，纳米银释放率高出约28%，对促进细胞生长有积极作用，更良好的血液相容性，更优异的抑菌性能，更优异的伤口愈合与治疗效果。
23.（3）本发明可以通过改变纳米银、黑磷与聚己内酯的浓度，纳米银/黑磷共混液与
聚己内酯溶液的配比，还可以通过改变静电纺丝过程中的电压、距离、溶液流速、接收器转速等参数，从而控制聚己内酯/纳米银/黑磷复合纳米纤维材料的结构和性能。本发明制备工艺简单、成本低廉，适合工业化生产。
附图说明
24.图1为本发明实施例1制备的bp纳米片的tem图和hrtem图，其中，a为tem图，b为hrtem图；图2为本发明实施例1和对比例1-2纳米纤维样品的表面结构扫描电镜图；图3为本发明实施例1复合纳米纤维样品的eds能谱分析电镜图，其中，c为碳元素，o为氧元素，ag为银元素，p为磷元素，merge为c、o、ag和p元素总图；图4为本发明实施例1和对比例1-2纳米纤维样品的光热成像图和温度曲线图，其中，a为光热成像图，b为温度曲线图；图5为本发明实施例1和对比例2复合纳米纤维样品未在nir照射下和在nir照射下的纳米银释放率随时间变化的曲线图，其中，a为未经nir照射，b为经nir照射；图6为本发明实施例1和对比例1-2纳米纤维样品的细胞毒性实验结果统计图，图中b.c.为空白对照，pcl为对比例1样品，pcl/agnps为对比例2样品，pcl/agnps/bp为未进行nir照射的实施例1样品，pcl/agnps/bp nir为进行nir照射的实施例1样品；图7为本发明实施例1和对比例1-2纳米纤维样品与细菌孵育后的lb平板菌落图，图中b.c.为空白对照，pcl为对比例1样品，pcl/agnps为对比例2样品，pcl/agnps/bp为未进行nir照射的实施例1样品，pcl/agnps/bp nir为进行nir照射的实施例1样品；图8为本发明小鼠皮肤缺损模型的创面愈合过程以及创面抑菌效果，其中，a为第0d、5d、10d、15d时用数码相机拍摄的创面图像，b为治疗后第15天时创面处细菌在lb平板上的菌落图，c为第5d、10d、15d时创面愈合率，d为治疗后第15天时对创面处细菌的抑菌率；图中b.c.为未处理组，nir为仅进行nir照射，pcl/agnps为对比例2样品，pcl/agnps/bp为未进行nir照射的实施例1样品，pcl/agnps/bp nir为进行nir照射的实施例1样品；图9为本发明实施例1和对比例2纳米纤维样品处理后第15天的再生皮肤组织的h&e染色图和masson染色图，表皮厚度统计图，以及胶原蛋白密度统计图，其中，a为h&e染色图，b为masson染色图，c为表皮厚度统计图，d为胶原蛋白密度统计图；图中b.c.为未处理组，nir为仅进行nir照射，pcl/agnps为对比例2样品，pcl/agnps/bp为未进行nir照射的实施例1样品，pcl/agnps/bp nir为进行nir照射的实施例1样品；图10为本发明实施例1和对比例2纳米纤维样品处理后第15天小鼠各器官组织切片he染色结果，图中b.c.为未处理组，nir为仅进行nir照射，pcl/agnps为对比例2样品，pcl/agnps/bp为未进行nir照射的实施例1样品，pcl/agnps/bp nir为进行nir照射的实施例1样品；图11为本发明实施例1和对比例2纳米纤维样品处理后第15天小鼠肝功能指标和肾功能指标结果统计图，图中b.c.为未处理组，nir为仅进行nir照射，pcl/agnps为对比例2样品，pcl/agnps/bp为未进行nir照射的实施例1样品，pcl/agnps/bp nir为进行nir照射的实施例1样品。
具体实施方式
25.为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下通过实施例结合附图，对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
26.需要说明的是，在不冲突的情况下，本技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本技术。
27.实施例1本技术实施例先提供一种黑磷（bp）纳米片，其制备方法为：在电化学体系中，采用bp晶体作为阳极，铂作为阴极，并将两个电极完全浸入含有六氟磷酸四丁基铵的碳酸丙烯(pc)溶液中；在体系中施加-5v电压完成分层后，将剥落的bp片迅速转移到离心管中；然后将无水丙酮加入bp片中分散均匀，以5000r/min离心10min收集bp纳米片，再用水和乙醇洗涤，去除电解质和杂质；收集上述bp纳米片备用。
28.对本实施例制备的bp纳米片进行透射电镜(tem)分析，结果如图1所示。从图1中a可以看出，合成的bp纳米片约为4-5μm，具有典型的多层结构。图1中b的晶格为0.25
±
0.02nm，说明合成的bp纳米片是含有少量磷酸烯层的二维纳米材料，结果表明我们成功制备得到了bp纳米片。
29.本发明实施例提供一种静电纺聚己内酯/纳米银/黑磷复合纳米纤维，其制备方法包括如下步骤：（1）将聚己内酯颗粒溶于六氟异丙醇中，室温搅拌均匀后得到10wt%的聚己内酯溶液。
30.（2）将0.05g本实施例制备的黑磷纳米片和0.05g纳米银（粒径为15-20nm）加入1ml六氟异丙醇中，1500rpm搅拌24h，超声处理15min后得到纳米银/黑磷共混液，所述黑磷纳米片和纳米银的质量百分比浓度均为3wt%。
31.（3）将步骤（1）得到的聚己内酯溶液与步骤（2）得到的纳米银/黑磷共混液按体积比9∶1共混，1500rpm搅拌24h后得到聚己内酯/纳米银/黑磷纺丝液。
32.（4）将步骤（3）得到的聚己内酯/纳米银/黑磷纺丝液装至5ml注射器中，调整接收器转速为600rpm，溶液流速为0.5ml/h，收集距离为12cm，同时启动高压电源进行静电纺丝，设置电压为15kv，纺丝结束后得到聚己内酯/纳米银/黑磷复合纳米纤维膜，记为pcl/agnps/bp。
33.实施例2一种静电纺聚己内酯/纳米银/黑磷复合纳米纤维内容与实施例1的内容基本相同，其不同之处在于：步骤（1）中得到12wt%的聚己内酯溶液；步骤（2）的六氟异丙醇中黑磷纳米片加入量为0.079g，纳米银加入量为0.065g，所述黑磷纳米片的质量百分比浓度为5wt%，所述纳米银的质量百分比浓度为4wt%；步骤（3）中聚己内酯溶液与纳米银/黑磷共混体积比为10∶1。
34.实施例3一种静电纺聚己内酯/纳米银/黑磷复合纳米纤维内容与实施例1的内容基本相同，其不同之处在于：步骤（1）中得到8wt%的聚己内酯溶液；步骤（3）中聚己内酯溶液与纳米银/黑磷共混体积比为8∶1。
35.对比例1一种聚己内酯纳米纤维内容与实施例1的内容基本相同，其不同之处在于：不进行黑磷纳米片的制备，不进行步骤（2）和步骤（3）的制备；直接将步骤（1）得到的聚己内酯溶液作为纺丝液加入步骤（4）的注射器中进行静电纺丝处理，得到聚己内酯纳米纤维膜，记为pcl。
36.对比例2一种聚己内酯/纳米银复合纳米纤维内容与实施例1的内容基本相同，其不同之处在于：不进行黑磷纳米片的制备；步骤（2）中六氟异丙醇中不加入黑磷，搅拌后直接得到纳米银分散液；所述纳米银分散液中纳米银的质量百分比浓度为3wt%；步骤（3）中将步骤（1）得到的聚己内酯溶液与步骤（2）得到的纳米银分散液共混，得到聚己内酯/纳米银纺丝液；步骤（4）中将聚己内酯/纳米银纺丝液加入注射器中进行静电纺丝处理，得到聚己内酯/纳米银复合纳米纤维膜，记为pcl/agnps。
37.对实施例1和对比例1-2制备的纳米纤维膜进行sem电镜扫描，结果如图2所示。从图2可以看出，3种纳米纤维膜微观状态下均呈现出类似于细胞外基质的纤维网状结构，而且pcl/agnps和pcl/agnps/bp复合纳米纤维表面可以清晰地观察到agnps，表明agnps被成功加载到复合纳米纤维内部，但pcl/agnps中出现了明显的纳米银团聚现象，且分布不均匀。此外，对3种纳米纤维的直径进行了分析后发现，随着纳米银和黑磷的加入，纤维直径变粗。
38.为进一步验证黑磷是否加载到复合纤维内部，我们进行了eds能谱分析，结果如图3所示。如图3所示，碳元素、氧元素、银元素、磷元素在pcl/agnps/bp复合纳米纤维上分布良好，表明agnps和bp等功能组分被成功组装到复合纳米纤维内部。
39.性能测试：1、光热转换性能测试（1）实验方法先将实施例1和对比例1-2制备的纳米纤维样品剪成1
×
1cm大小的片状；然后在功率密度为0.8 w/cm2的808 nm nir激光照射下，对上述样品进行5min的照射；再使用光热成像仪获取样品的光热成像图像，并记录各组温度变化获取样品的温度曲线图像，以评估样品的光热转换性能。结果如图4所示。
40.（2）实验结果从图4a可以看出，经nir照射后，pcl样品温度几乎未发生改变；pcl/agnps样品温度随照射时间的延长先升高后逐步稳定，但幅度不大；而pcl/agnps/bp样品温度随着时间的延长逐渐升高，且变化较为显著。具体从图4b也可以看出，经nir照射后，pcl样品一直处于约27.27
°
c左右，pcl/agnps的温度先升高后稳定在35.07
°
c，而pcl/agnps/bp样品温度可达到40.70
°
c。因此，经nir照射后，虽然纳米银也具有一定的光热转换效率，但其转化效率明显低于黑磷，而pcl/agnps/bp样品温度远高于pcl样品，这表明pcl/agnps/bp纳米纤维材料能够将光能转化为热能，进而赋予pcl/agnps/bp复合纳米纤维优异的光热转化性能。
41.2、纳米银释放率测试（1）实验方法将实施例1和对比例2制备的复合纳米纤维样品剪成1
×
1cm大小的片状；然后将样
品放置在10ml离心管内，每管添加5ml pbs，并保持在每分钟50转的转速下晃动；最后在预定的时间间隔内，从各组各收集1.0mlpbs溶液进行质谱分析，然后再将1.0ml新鲜pbs补入离心管中，使管内保持5mlpbs。其中，实验分为4组：pcl/agnps组、pcl/agnps/bp组、pcl/agnps nir组和pcl/agnps/bp nir组，nir照射采用功率密度为0.8w/cm2的808nm激光每天照射10min。结果如图5所示。
42.（2）实验结果从图5可以看出，在未使用nir照射时，pcl/agnps组和pcl/agnps/bp组的纳米银释放率差不多，分别为59.25
±
2.46%和61.63
±
2.27%。当施加nir照射后，pcl/agnps nir组为66.84
±
6.95。值得注意的是，pcl/agnps/bp nir组达到89.46
±
2.05%，比nir照射前高出约28%。该结果表明pcl/agnps/bp复合纳米纤维在近红外照射下，内部的黑磷成分将光能转化为热能，从而加速纳米银的运动，既实现了纳米银的长期释放的可控性，又能达到增强低浓度agnps抗菌性能的目的。
43.3、细胞毒性测试（1）实验方法将实施例1和和对比例1-2制备的纳米纤维样品剪成1
×
1cm大小的片状，并在紫外光下进行灭菌处理，备用；将l929细胞消化制备细胞悬液，然后将细胞接种到96孔板中，放入培养箱培养，24h后，吸出原培养基，每孔分别加入上述已灭菌的样品；在1、2、3d时，每孔分别加入cck-8试剂，再孵育3h显色；测定450 nm处的od值以评估样品的细胞毒性。其中，实验分为5组：b.c.组（未处理组），pcl组，pcl/agnps组，pcl/agnps/bp组和pcl/agnps/bp nir组，nir照射采用功率密度为0.8w/cm2的808nm激光每天照射10min。结果如图6所示。
44.（2）实验结果从图6可以看出，在第1天时，各实验组细胞活性与对照组不存在差异。在第2天时，与pcl相比，pcl/agnps/bp nir组对l929的增殖有显著的刺激作用，表明在nir照射下，实施例1复合纳米纤维中缓慢释放的纳米银或ag

达到合适的浓度后，可促进细胞生长。同时，温度升高产生的热刺激效应，也对细胞生长具有促进作用。因此，生物活性分子纳米银或ag

与热刺激协同作用共同促进l929细胞的生长。第3天时，pcl/agnps和pcl/agnps/bp组也显著促进l929细胞的生长，其原因可能为，随着时间的延长，复合膜中释放的银离子浓度达到了能够促进细胞生长的浓度。且与pcl/agnps/bp组相比，pcl/agnps/bp nir组效果更加明显，表明纳米银或ag

与热刺激的联合能够促进细胞更好地生长。综上所述，结果表明pcl/agnps/bp复合纳米纤维具有良好的生物相容性，且与nir的协同作用能够促进细胞的进一步生长。
45.4、溶血测试（1）实验方法将实施例1和对比例1-2制备的纳米纤维样品剪成1
×
1cm大小的片状，使用生理盐水清洗3遍后加入含有10ml生理盐水的离心管内，放置在37
°
c中30min，备用；从新西兰兔心脏中获取全血，将其与生理盐水按1∶1.25的比例混匀，然后将稀释的全血加入到上述离心管内；温育30min后，经1500rpm转速离心10min，通过紫外分光光度计测量545nm处的吸光度值，计算溶血率；其中，实验分为6组：pcl组，pcl/agnps组，pcl/agnps/bp组，pcl/agnps/bp nir组，生理盐水作为阴性对照，去离子水作为阳性对照。结果如表1所示。
46.（2）实验结果表1 实施例1和对比例1-2样品溶血率数据从上表可以看出，pcl/agnps/bp样品和pcl样品的溶血率均小于5%，表明本发明制备的纳米纤维样品不会引起红细胞的破裂，表明该纳米纤维具有良好的血液相容性，符合医疗器材溶血性能的要求。
47.5、抑菌活性测试（1）实验方法将实施例1和对比例1-2制备的纳米纤维样品剪成1
×
1cm大小的片状；然后将pcl、pcl/agnps和pcl/agnps/bp样品与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（mrsa）悬浮液（1
×
108cfu/ml）共孵育5h；最后将得到的菌液接种在luria-bertani (lb)培养皿上，37
°
c孵育16-24h后，采集不同组lb培养皿的图像，得到检测样品的抑菌活性；其中，实验分为5组：b.c.组，pcl组，pcl/agnps组，pcl/agnps/bp组和pcl/agnps/bp nir组。结果如图7所示。
48.（2）实验结果从图7可以看出，pcl所形成的菌落数与b.c.相似，表明纯聚己内酯纳米纤维样品不具有抗菌的功能；pcl/agnps和pcl/agnps/bp所形成的菌落数差不多，且明显低于b.c.和pcl。然而，pcl/agnps/bp复合纳米纤维样品在nir的照射下，进一步提升了pcl/agnps/bp复合纳米纤维样品的抗菌性能。其原因可能是因为，在nir照射下，一方面pcl/agnps/bp复合纳米纤维能够释放出大量ag

，有效地抑制细菌生长；另一方面，bp强大的光热效应引起的局部温度升高增加了细菌的通透性，对抑制细菌生长具有积极作用。
49.6、建立感染性全层皮肤缺损模型（1）实验方法将实施例1和对比例2制备的纳米纤维样品剪成直径为1cm大小的圆片状，并在紫外光下进行灭菌处理，备用。然后使用balb/c小鼠建立感染性全层皮肤缺损模型，具体为：将小鼠麻醉后在每只小鼠背部制造直径1cm的全层切口，再在每个伤口上加入mrsa悬浮液。24h后，将相应样品覆盖在伤口处。在第0、5、10和15天，对各组小鼠皮肤的伤口面积进行记录分析。并在第15天时，获取各组小鼠的再生皮肤，一方面用生理盐水清洗再生皮肤，然后将各组清洗过皮肤的生理盐水等量添加到lb培养皿上，培养16-24h后，采集不同组lb培养皿的图像。另一方面，将获取的各组皮肤使用多聚甲醛固定后，进行h&e，masson，cd68和il-10染色，观察皮肤修复情况。其中，实验分为5组：b.c.组（未处理组），nir组，pcl/agnps组，pcl/agnps/bp组和pcl/agnps/bp nir组，nir照射采用功率密度为0.8 w/cm2的808 nm激光
每天照射10min。结果如图8所示。
50.（2）实验结果从图8可以看出，随着术后时间的增加，各组的创面面积逐渐减小。其中，pcl/agnps/bp nir组各个时间点创面愈合效果均显著高于其他各组。在第3天，b.c.组创面面积最大，并持续到第5天，这与临床感染创面难以愈合并经常继续扩大的事实相一致。第10天，pcl/agnps/bp nir组创面愈合面积明显高于其他组(图8c)。第15天，b.c.组创面仍有较大未愈合部分，nir组、pcl/agnps组、pcl/agnps/bp组创面大小接近并低于b.c.组，而pcl/agnps/bp nir组创面几乎完全愈合。同时，在第15天，使用lb板对治疗后伤口处的细菌数量进行量化(如图8中b和d所示)，结果显示，b.c.组伤口处存留大量的细菌；nir照射组细菌数量与b.c.组差不多；pcl/agnps组和pcl/agnps/bp组的抑菌率可达到80%左右，表明从样品中释放的银能够显著抑制细菌生长；pcl/agnps/bp nir组的细菌抑制效果最明显，该结果也与抑菌活性测试结果相一致。进一步表明pcl/agnps/bp联合nir照射具有优异的抗菌性能，能够为皮肤再生提供良好的微环境。
51.从图9中a和b可以观察出第15天的再生皮肤组织表皮厚度和胶原蛋白沉积情况。其中，如图9中a所示，h&e染色全扫描结果显示，pcl/agnps/bp nir组再上皮化效果最好，然后依次为pcl/agnps/bp组、pcl/agnps组、nir组和b.c.组，其中，pcl/agnps/bp nir组皮肤组织已经出现真皮组织和血管、毛囊等皮肤附属物，其余各组仅再生上皮和真皮的基本结构。从图9中c可以看出，pcl/agnps/bp nir组的表皮最厚，为192.64
±
41.09μm；b.c、nir、pcl/agnps、pcl/agnps/bp组的表皮厚度分别为50
±
9.82、77
±
14.21、86.02
±
21.06和125.28
±
26.82μm。从图9中b可以看出，pcl/agnps/bp nir处理的再生肉芽组织中胶原纤维密度更大、更厚、排列最好，其次为pcl/agnps/bp组、pcl/agnps组、nir组和b.c.组。从图9中d的统计分析结果显示，pcl/agnps/bp nir组的胶原密度显著高于其他各组。因此，该结果表明pcl/agnps/bp复合纳米纤维材料具有较好的促感染性伤口愈合与治疗效果，与nir照射连用时能起到进一步的促进作用。
52.7、生物安全性评价（1）实验方法第15天，获取建立感染性全层皮肤缺损模型的各组小鼠的脑、心、肝、脾、肺、肾等脏器；采用he染色法评价其体内组织相容性；同时采集新鲜全血，检测各组小鼠肝功能和肾功能指标。结果如图10和图11所示。
53.（2）实验结果生物安全对于生物材料的应用非常重要。取各组小鼠脏器标本及新鲜血浆进行he染色及生化处理。从图10可以看出，与b.c.比较，实验组未见明显病理现象。从图11可以看出，各组小鼠谷丙转氨酶(alt)、天冬氨酸转氨酶(ast)、碱性磷酸酶(alp)、γ-谷氨酰转肽酶(ggt)、白蛋白(alb)、总胆红素(tbil)、直接胆红素(dbil)、总胆红酸(tba)等肝功能指标和血尿素氮(bun)、肌酐(crea)、尿素(尿素)等肾功能指标均在正常范围内。结果表明，pcl/agnps/bp复合纳米纤维材料应用于小鼠皮肤伤口处理模型时不会引起明显的毒副作用，具有生物安全性，在未来临床转化中表现出不错的潜力。
54.综上所述，本发明有效克服了现有技术中的不足，且具高度产业利用价值。上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的
普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。